用核磁共振二维谱确定芫花素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖基(2→1)-O-α-L-吡喃鼠李糖苷的双糖结构

[目的]确定一种黄酮双糖苷中双糖的结构。[方法]用1H-1HCOSY-45、HSQC和HMBC谱确定双糖的联接位置。[结果]鼠李糖联连在葡萄糖的2位上(1→2)。[结论]采用核磁共振二维谱能明确该双糖的1H,13C核的化学位移归属。

高圣草素-7-O-β-D-芹糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷与血清白蛋白相互作用研究

在模拟人体生理条件下,应用紫外吸收光谱、荧光光谱和同步荧光光谱法研究高圣草素-7-O-β-D-芹糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(HAG)与牛血清白蛋白(BSA)及人血清白蛋白(HSA)的结合作用。结果表明:HAG对BSA和HSA的内源荧光均有显著的猝灭作用,且猝灭机理主要为静态猝灭。HAG与BSA和HSA的结合常数K分别为3.03×104L.mol-1和6.22×104L.mol-1,结合位点数n分别为0.858和0.911,结合距离r分别为2.88 nm和3.09 nm,其作用力以氢键和范德华力为主。利用同步荧光技术考察了HAG对BSA和HSA构象的影响。

基于高效指纹图谱和网络药理学的琥珀消石颗粒质量标志物预测

目的:基于高效指纹图谱和网络药理学预测琥珀消石颗粒(HXG)中质量标志物(Q-Marker)。方法:构建HXG的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱检测手段,指认共有峰和归属;应用网络药理学技术构建HXG的“成分-靶点-通路”网络图,预测其潜在Q-Marker。结果:HXG的指纹图谱结果共指认出5个共有峰;网络药理学确定了5种关键组成、35个潜在核心靶点和6条重要通路,初步预测槲皮素-3-O-(2G-α-L-鼠李糖基)-芸香糖苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、β-蜕皮甾酮、槲皮素、山柰素为HXG潜在的Q-Marker。结论:通过高效指纹图谱和网络药理学分析预测了HXG中的Q-Marker,方法科学并且可重复,为HXG的质量标准提供依据,也为今后系统研究其作用机制提供研究基础。

RP-HPLC法测定中药合欢皮中木脂素苷的含量

目的:建立中药合欢皮中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-B-D-呋喃芹糖基-(1→2)-B-D-吡喃葡萄糖苷的 RP-HPLC 含量测定方法,考察了10个地区的商品药材中木脂素苷的含量。方法:高效液相色谱法,色谱柱为 Phenomenex PRODI-GY ODS(3)(100,250mm×4.60 mm,5μm),流动相:乙腈-0.04%磷酸水溶液(18:82),流速为1.0 mL·min^(-1),分析时间30 min。检测波长204 nm,进样体积:20μL。结果:(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷进样量与峰面积呈良好的线性关系,线性范围为:0.06～1.06μg,r=0.9998(n=5);回收率为96.1%～100%(n=9)。结论:本方法首次测定了全国10个地区的商品药材中(-)-丁香树脂酚-4-O-B-D-呋喃芹糖基-(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量,该方法快速,简便,重复性好。

基于Keap1/Nrf2/HO-1通路汉黄芩素7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷体外抗氧化应激作用研究

目的探讨汉黄芩素7-O-β-D-乙基葡萄糖醛酸苷(WODE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)的抗氧化应激作用及机制。方法MTS法检测WODE(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0、160.0μmol·L^(−1))对RAW264.7细胞活力的影响;体外培养RAW264.7细胞,WODE(10、20、40μmol·L^(−1))或地塞米松(1μmol·L^(−1),阳性药)预处理1 h,再给予LPS刺激24 h(造模过程不再加药),对照组不加LPS和受试物,模型组只给予LPS刺激;荧光探针检测胞内活性氧(ROS)水平;Griess反应测定细胞上清液中NO生成量;ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的分泌;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞内诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、醌氧化还原酶1(NQO-1)、超氧化物歧化酶-1(SOD-1)的mRNA表达水平;Western blotting法检测细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平;免疫荧光染色法检测细胞内Kelch ECH相关蛋白1(Keap1)表达水平。结果与对照组比较,WODE浓度小于40μmol·L^(−1)时,细胞存活率没有明显变化;浓度大于80μmol·L^(−1)时,细胞存活率下降,但未见统计学差异。与模型组比较,WODE 10、20、40μmol·L^(−1)组ROS水平显著降低(P<0.01);20、40μmol·L^(−1)组NO释放显著降低(P<0.05、0.01);40μmol·L^(−1)组iNOS mRNA表达水平显著降低(P<0.01);10、20、40μmol·L^(−1)组COX-2和20、40μmol·L^(−1)组IL-1βmRNA表达水平显著降低(P<0.05、0.01);10、20、40μmol·L^(−1)组TNF-α和IL-6的释放受到显著抑制(P<0.01);10、20、40μmol·L^(−1)组NQO-1 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),40μmol·L^(−1)组SOD-1 mRNA表达水平显著升高(P<0.01);10、20、40μmol·L^(−1)组Keap1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);10、20、40μmol·L^(−1)组HO-1蛋白和mRNA表达水平显著提高(P<0.05、0.01);20、40μmol·L^(−1)组Nrf2蛋白和40μmol·L^(−1)组Nrf2 mRNA表达水平显著增加(P<0.01)。结论WODE对LPS诱导的RAW264.7细胞的氧化应激具有抑制作用,其作用机制可能与调控Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关。

高效液相色谱法测定大鼠血浆中牡荆素-2″-O-鼠李糖苷浓度及药动学研究

目的:建立测定大鼠血浆中牡荆素-2″-O-鼠李糖苷(VOR)浓度的HPLC法,研究体内的药动学过程。方法:血浆样品加内标物橙皮苷,以甲醇沉淀蛋白;采用Diamonsil ODS C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.1%甲酸(20:80)为流动相,流速为1.0mL.min-1;检测波长为270nm。柱温:室温;进样量:20μL。结果:最低检测限为0.04022μg.mL-1,线性范围0.1070～21.41μg.mL-1,平均提取回收率(n=6)为97.9%,日内、日间精密度试验的RSD分别小于7.4%和8.5%;大鼠静脉注射VOR15,30,60mg.kg-13个剂量后,发现VOR的AUC0?90与给药量之比呈线性关系,测得消除半衰期(t1/2β)、系统清除率(CL)及表观分布容积(Vc)无显著性差异。结论:建立的测定大鼠体内VOR含量的HPLC方法简单、专属性强,适用于VOR在大鼠体内的药代动力学研究。

射干叶中黄酮碳苷类化合物的药理作用研究进展

本课题组在对海南产射干叶的化学成分进行研究时,得到了5种已知的黄酮碳苷类化合物,分别是:当药素、2-″O-鼠李糖基当药素、异牡荆素和2-″O-鼠李糖基异牡荆素、芒果素。其中前二者含量很高。本论文对这五种化合物的药理作用进行了综述。

HPLC-DAD及HPLC-MS研究干燥工艺对中药粗榧化学成分的影响

用高效液相色谱-二极管阵列检测器及高效液相色谱-质谱联用技术,发现常压及减压干燥能使粗榧提取物中两个主要的化合物（1号峰和2号峰）发生降解。减压干燥后两个化合物分别减少了20.2%和45.6%,常压干燥后,两个化合物均检测不到。与干燥前相比,减压干燥和常压干燥使3号峰面积分别增加了1.90倍和5.74倍。1-3号峰均具有特征性的黄酮化合物的两个紫外吸收带（240-280 nm和300-400 nm）,被推测为黄酮化合物,质谱研究推测1-2号峰发生了苷键断裂生成3号峰。用AB-8大孔吸附树脂,葡聚糖凝胶LH-20,反相硅胶（ODS）柱色谱分离纯化得到1-3号峰的3个化合物,对其进行了红外和核磁测定,鉴定出芹菜素-5-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖苷和芹菜素-5-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→4）-6″-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷两个黄酮苷,干燥过程使它们苷键断裂生成了苷元芹菜素（3号峰）。

山楂叶总黄酮在大鼠体内的药动学研究

目的建立HPLC同时测定大鼠血浆中山楂叶总黄酮(HLF)的两个主要有效成分4″-O-牡荆素葡萄糖苷(GLV)和2″-O-牡荆素鼠李糖苷(RHV)的浓度,并用此方法对HLF在大鼠体内的药动学进行研究。方法大鼠尾静脉注射HLF,于不同时间点断尾取血,甲醇直接沉淀蛋白,HPLC测定GLV和RHV的血药浓度。色谱柱为DiamonsilTMC18(4.6mm×200mm,5μm),流动相为四氢呋喃-甲醇-乙腈-0.5%冰醋酸(19.4∶1∶1∶78.6),检测波长为330nm。结果样品中GLV和RHV被成功分离,线性范围分别为0.23~138.42mg.L-1(r=0.9990)和0.36~218.49mg.L-1(r=0.9995)。在测定浓度范围内,GLV和RHV的日内精密度(n=5)分别为0.69%~3.91%和0.51%~3.89%;日间精密度(n=5)分别为1.09%~5.03%和1.45%~2.16%;平均方法回收率(n=5)分别为(96.70±5.29)%^(102.20±1.15)%和(96.39±1.44)%^(103.64±2.23)%;平均提取回收率(n=5)分别为(92.68±2.19)%^(95.74±1.19)%和(93.45±1.85)%^(99.26±2.85)%。结论该分析方法简便快速,专属灵敏,精密度和回收率高,可满足药动学研究需要。静注HLF10~40mg.kg-1,GLV和RHV在大鼠体内药动学特征相似,均符合三室开放药动学模型。

糖尿病的前沿治疗药物与治疗方案

近年来,随着社会的快速发展及人们生活方式的急剧变化,糖尿病患病率逐年上升,2型糖尿病逐渐向青壮年甚至青少年蔓延。传统口服降糖药与胰岛素治疗不能阻止糖尿病病程进展,如血糖长期控制不佳,糖尿病急、慢性并发症相继出现,严重影响健康并为患者带来巨大经济负担。因此,糖尿病的治疗需要引起全社会重视,并采取相应的干预措施。该文着重综述糖尿病新型治疗药物和方案,包括二肽基肽酶-4(DPP4)抑制药、单片复方制剂、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动药、钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制药、胰淀素类似物、多巴胺受体激动药、胆汁酸螯合剂、减重手术,以及胰腺干细胞移植。

炮制前后王不留行中3种黄酮苷在大鼠体内药动学的变化

目的考察炮制前后王不留行中3种黄酮苷在大鼠体内药动学的变化。方法大鼠分别灌胃给予生品、炮制品提取液(0.01 mL/g),于5、10、20、30、45 min及1、2、4、8、12、24 h采血,UPLC-MS/MS法测定王不留行黄酮苷、肥皂草苷、异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷血药浓度,计算主要药动学参数。结果炮制后,王不留行黄酮苷MRT_(0~24 h)、t_(1/2)缩短(P<0.05);异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷C_(max)、AUC_(0~24 h)升高(P<0.05),MRT_(0~24 h)、t_(1/2)缩短(P<0.05);肥皂草苷MRT_(0~24 h)缩短(P<0.05)。结论炮制后,王不留行中异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷含量增加。在服用相同剂量提取物时,异牡荆素-2″-O-阿拉伯糖苷暴露量增加,并且该成分及王不留行黄酮苷、肥皂草苷的消除加快。

HPLC法同时测定枳实总黄酮苷提取物中3个香豆素类成分含量

目的:建立高效液相色谱法同时测定枳实总黄酮苷提取物中伞形花内酯7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、5,7-二羟基香豆素、马尔敏3个香豆素类成分的含量。方法:采用YMC-PackODS-A色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,检测波长325nm,流速1.0mL/min,柱温30℃。结果:伞形花内酯7-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、5,7-二羟基香豆素、马尔敏质量浓度分别在0.09～9.73μg/m L(r=0.9999,n=6)、2.08～31.25μg/mL(r=0.9994,n=6)、0.04～1.26μg/mL(r=0.9991,n=6)范围内线性关系良好,方法的平均加样回收率(n=6)分别为99.5%(RSD=1.4%)、97.9%(RSD=1.3%)、99.9%(RSD=1.7%)。10批次枳实总黄酮苷提取物中上述3个成分的含量范围分别为0.003%～0.030%,0.020%～0.049%,0.003%～0.004%。结论:所建立的方法专属性强,准确可靠,为枳实总黄酮苷提取物的质量控制提供了科学的依据。

多药耐药相关蛋白2对汉黄芩素及其主要Ⅱ相代谢产物药动学特征的影响

目的 研究多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)对汉黄芩素及其主要Ⅱ相代谢产物药动学特征的影响。方法 FVB野生型和MRP2-/-小鼠ig汉黄芩素β-环糊精包合物后,于不同时间点眼眶取血。采用超高效液相色谱-质谱联用技术检测汉黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素-7-O-硫酸酯的血药浓度,采用DAS 2.0软件以非房室模型计算药动学参数。结果 3个成分的线性关系良好,准确度、精密度、稳定性、回收率等符合要求。汉黄芩素主要以Ⅱ相代谢产物汉黄芩苷和汉黄芩素-7-O-硫酸酯存在,均在30 min内达到最大血药浓度。汉黄芩苷的达峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC0~t)最高,汉黄芩素-7-O-硫酸酯次之,汉黄芩素最低。与FVB野生型组比较,MRP22-/-组汉黄芩苷和汉黄芩素-7-O-硫酸酯的Cmax和AUC0~t显著增加(P<0.05、0.01)。结论 MRP2介导了汉黄芩苷和汉黄芩素-7-O-硫酸酯的外排过程,显著影响汉黄芩素的体内处置过程。

藏药甘青乌头化学成分研究

目的对甘青乌头Aconitum tanguticum抗炎活性部位中的化学成分进行研究,以阐明其清热解毒的药效物质基础。方法采用脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的炎症模型,以NO释放量为评价指标考察甘青乌头各部位的抗炎活性,确定活性部位,然后采用多种现代色谱技术对活性部位的化学成分进行分离纯化,经过光谱技术以及与文献值比对的方法鉴定化合物结构。结果甘青乌头乙醇提取物上大孔吸附树脂后的30%乙醇洗脱部位抗炎活性最好,从该部位中共分离鉴定了13个化合物,分别是香草酸(1)、七聚己内酰胺(2)、榜嘎苷D(3)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-(1→2)-[β-D-葡萄糖基-(1→3)-α-L-(4-O-反式-对香豆酰基鼠李糖基)-(1→6)]-β-D-甘露糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(4)、山柰酚-3-O-[α-L-鼠李糖基-(1→6)-β-D-甘露糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(5)、4-二羟基苯乙氧基-8-O-β-D-[6-O-(4-O-β-D-吡喃葡萄糖基)-阿魏酰基]-吡喃葡萄糖苷(6)、榜嘎苷C(7)、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖基-(1→2)-[α-L-鼠李糖基-(1→6)]-β-D-甘露糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(8)、槲皮素3-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-β-D-甘露糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(9)、榜嘎苷A(10)、2-甲氧基-4-羧基-苯基-O-β-D-[6-O-(4-O-β-D-吡喃葡萄糖基)-阿魏酰基]-吡喃葡萄糖苷(11)、槲皮素-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃半乳糖基]-7-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖苷(12)、槲皮素-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-(4-O-反式-咖啡酰基)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃半乳糖基]-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(13)。结论化合物11~13为新化合物,分别命名为榜嘎酸A、榜嘎苷E、榜嘎苷F;化合物8为首次从甘青乌头中分离得到,研究结果不仅部分阐明了甘青乌头清热解毒的药效物质基础,而且丰富了天然产物的结构类型。

Licraside激活FXR缓解胆汁淤积的药理学研究

目的 研究异甘草素-4′-O-芹糖(1→2)葡萄糖苷(licraside)干预缓解胆汁淤积的分子作用机制。方法 用慢病毒沉默人肝癌HepG2细胞中法尼醇X受体(FXR),记为siFXR-HepG2细胞。将HepG2细胞和siFXR-HepG2细胞均分为正常组、模型组和实验组。模型组和实验组均给予胆红素+丙磺舒诱导高胆酸盐高胆红素模型;然后,正常组和模型组均不进行任何处理,实验组给予80μmol·L^(-1)licraside干预24 h。考察各组细胞的细胞活力及总胆汁酸(TBA)、胆红素等生化指标的含量,用蛋白质印迹法考察各组细胞FXR、胆酸盐输出泵(BSEP)等蛋白的表达水平。结果 HepG2细胞中正常组、模型组和实验组及siFXR-HepG2细胞中正常组、模型组和实验组的细胞活力分别为(100.00±17.15)%、(39.41±2.91)%、(70.79±3.74)%、(81.41±5.12)%、(33.49±2.69)%和(44.08±4.82)%,TBA水平分别为(7.98±5.87)、(46.18±10.93)、(9.25±7.20)、(11.18±3.36)、(38.28±5.12)和(34.79±5.39)μmol·L^(-1),总胆红素水平分别为(5.21±3.27)、(40.29±24.88)、(5.21±2.64)、(12.00±4.64)、(56.36±14.85)和(15.39±5.56)μmol·L^(-1),FXR蛋白相对表达水平分别为1.00±0.10、0.81±0.07、1.11±0.09、0.10±0.02、0.12±0.02和0.10±0.04,BSEP蛋白相对表达水平分别为1.00±0.17、0.81±0.02、0.88±0.03、0.70±0.09、0.49±0.07和0.60±0.10。HepG2细胞中实验组的上述指标和模型组相比,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.01,P<0.05);除TBA外,siFXR-HepG2细胞中实验组的上述指标和模型组相比,在统计学上差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.01)。结论 Licraside可以有效降低高胆酸盐高胆红素细胞的生化指标水平,这种作用是通过激动FXR的蛋白表达后,增加胆酸盐外排,减少胆汁酸的合成,达到缓解胆汁淤积的作用。

射干叶中黄酮碳苷的分离纯化与结构鉴定

运用HP20型大孔吸附树脂、聚酰胺柱色谱、Sephadex-LH20型葡聚糖凝胶柱色谱和YMC制备型高效液相色谱柱(ODS)等色谱方法,从海南产射干叶中分离了4种黄酮碳苷.采用UV,1 H NMR,13 C NMR,MS等波谱学方法,结合熔点测定、盐酸-镁粉反应、三氯化铝显色反应等物理和化学方法,鉴定了它们的结构.4种黄酮碳苷分别为化合物Ⅰ:2″-O-鼠李糖基异牡荆素;化合物Ⅱ:2″-O-鼠李糖基当药素;化合物Ⅲ:异牡荆素;化合物Ⅳ:当药素.4种化合物均为首次从鸢尾科植物中分离.

薏苡素-2-羟丙基-β-环糊精包合物冻干粉的制备和表征

目的:制备薏苡素-2-羟丙基-β-环糊精(coixol-2-HP-β-CD)包合物冻干粉,增强薏苡素水溶性。方法:以溶剂搅拌-冷冻干燥法制备coixol-2-HP-β-CD包合物;通过扫描电镜、红外光谱、差示扫描量热和X-射线衍射分析对包合物进行表征;HPLC测定包合物中薏苡素含量;透析袋扩散法进行体外释药考察。结果:制备的薏苡素-2-HP-β-CD包合物为水易溶性产品;HPLC测定包合物中薏苡素含量的回归方程为Y=108 096X-48 927(R^2=0. 999 5),线性关系及专属性、精密度、稳定性和加样回收率良好,包合物产品得率82. 7%、包合物产品含薏苡素4. 83%、包合率为86. 38%;同样条件下,薏苡素-2-HP-β-CD包合物中薏苡素累积释药率比薏苡素单体的溶出提高2. 6倍。结论:2-HP-β-CD对薏苡素的包合使其水溶性倍增,口服溶出程度和溶出速率的增加必将提高其生物利用度,可为薏苡素-2-HP-β-CD包合物冻干粉制剂的药动学、药效学实验及临床应用提供参考。

格氏泽兰中的7种吉马烷内酯格氏泽兰素A～F和2α-乙酸基表郁金香酯

在研究菊科植物中具有生物活性的萜类成分的过程中,对日本德岛和北海道采集的格氏泽兰(Eupatorium glehni)样品进行了研究。从该植物甲醇提取物中溶于乙酸乙酯的部分中分离出4种新的吉马烷内酯(1～4),均在C-8位含不饱和酯。

东紫苏的化学成分研究

目的研究东紫苏全草的化学成分。方法采用硅胶柱色谱及薄层色谱进行分离纯化,根据理化性质及各种光谱技术进行结构鉴定。结果从其乙醇提取物中分离得到5个化合物,其结构鉴定为穗花杉双酮(Ⅰ)、β-胡萝卜苷(Ⅱ)、迷迭香酸(Ⅲ)、2-羟甲基-5-甲氧基苯基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)、2-羟甲基-5-甲氧基苯基-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅴ)。结论化合物Ⅴ为新化合物,命名为东紫苏素A(bod in ierine A),Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ为首次从香薷属植物中分离得到。