白介素-35在M2型巨噬细胞中的表达及其对前列腺癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探讨白介素(IL)-35在巨噬细胞中的表达及其对前列腺癌(PCa)细胞增殖、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响和机制。方法检测巨噬细胞标记分子CD68、M1型标记分子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β和M2型标记分子CD206、IL-10在人单核/巨噬细胞系THP-1细胞诱导分化后的M0、M1与M2型巨噬细胞中的表达。使用不同类型的巨噬细胞-源条件培养液(CM)处理PCa细胞系PC-3,并将其分为:M0-CM组、M1-CM组、M2-CM组和预先使用IL-35中和抗体(IL-35 NA)干预的M2-CM处理组(M2-CM+IL-35 NA组)。检测各组中PC-3细胞的增殖活力、侵袭、EMT,以及细胞内JAK/STAT信号通路p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3比值的差异。结果与未刺激的THP-1细胞比较,M0、M1和M2型巨噬细胞中CD68 mRNA表达升高(P<0.01);与M0型巨噬细胞比较,TNF-α、IL-1βmRNA在M1型巨噬细胞中升高(P<0.01),而CD206、IL-10 mRNA在M2型巨噬细胞中升高(P<0.01);与M0-CM组比较,M2-CM组PC-3细胞增殖活力、侵袭、EMT和细胞内p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高(P<0.05),M2-CM+IL-35 NA组PC-3细胞的增殖活力、侵袭、EMT和细胞内p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均显著降低(P<0.05),M1-CM组PC-3细胞的增殖活力、侵袭、EMT和细胞内p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均无显著改变(P>0.05);与M2-CM组比较,M1-CM组和M2-CM+IL-35 NA组增殖活力、侵袭、EMT和细胞内p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值降低(P<0.05)。结论M2型巨噬细胞可通过分泌IL-35来促进PC-3细胞的增殖、侵袭和EMT,这可能与IL-35能上调JAK2/STAT3信号通路的活化相关。

蟾毒灵抑制乏氧耐药细胞诱导的M2型巨噬细胞极化逆转结肠癌耐药

目的:在乏氧微环境中探讨蟾毒灵(bufalin,BU)抑制耐药结肠癌细胞诱导M2型巨噬细胞极化对普通结肠癌细胞的作用。方法:培养基中加入氯化钴(cobalt chloride,CoCl 2)模拟乏氧环境,佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导人源单核细胞THP-1分化为M0巨噬细胞。分别采集乏氧条件下耐药结肠癌细胞、普通结肠癌细胞和BU作用于耐药结肠癌细胞的条件培养基(conditioned medium,CM),然后放入M0巨噬细胞中。通过流式细胞术、Realtime PCR、ELISA实验检测M2型巨噬细胞极化标志因子的表达;运用CCK-8和蛋白免疫印迹(western blot,WB)实验检测耐药结肠癌和普通结肠癌条件培养基诱导M2型巨噬细胞极化后的上清对普通结肠癌的作用。结果:在缺氧环境下,与普通结肠癌细胞相比,耐药结肠癌细胞CM促进M2型巨噬细胞标志物IL-10、TGF-β、CD11b、CD206升高(P<0.01,P<0.05)。极化巨噬细胞的上清液增加了普通结肠癌细胞中P-gp和Bcl-2的表达,同时降低了Bax的表达和对奥沙利铂的敏感性。耐药结肠癌细胞经BU处理后,M2型巨噬细胞标志物IL-10、TGF-β、CD11b、CD206表达降低(P<0.01,P<0.05)。此外,P-gp和Bcl-2的表达减少,而Bax的表达增加,导致对OXA的敏感性增加。结论:乏氧条件下,结肠癌耐药细胞CM促进M2型巨噬细胞极化,蟾蜍灵可通过调节M2型巨噬细胞极化过程逆转结肠癌耐药。

蟾毒灵抑制M2型巨噬细胞介导的结直肠癌迁移和上皮间质转化

目的探讨蟾毒灵(BU)抑制M2型巨噬细胞介导结直肠癌转移的作用。方法用佛波酯(PMA)诱导人急性白血病单核细胞(THP-1)分化为M0型巨噬细胞,48h后用含有白细胞介素-4(IL-4)和IL-13的培养基处理M0型巨噬细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、形态学、实时荧光定量(RT-qPCR)实验观察其表面标志物和形态变化,RT-PCR和ELISA实验检测M2型巨噬细胞的表面标志物转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10。通过ELISA实验比较M2型巨噬细胞和结直肠癌细胞HCT116上清液中IL-6分泌水平,通过Transwell实验、划痕实验、RT-qPCR和Western blot实验检测条件培养基对结直肠癌细胞HCT116的的影响。在条件培养基中加入BU后,通过Western blot、Transwell实验、划痕实验、和RT-qPCR实验观察可以HCT116中AKT/PI3K蛋白以及迁移和上皮间质转化能力的变化。结果将THP-1成功诱导成为M2型巨噬细胞。M2型巨噬细胞通过分泌IL-6激活了HCT116中AKT/PI3K蛋白磷酸化,促进了其迁移和上皮间质转化能力。BU可以抑制M2巨噬细胞介导的HCT116迁移和上皮间质转化。结论M2型巨噬细胞释放IL-6激活了结直肠癌细胞AKT/PI3K信号通路,促进了其迁移和上皮间质化。此外,BU可以抑制其促迁移和上皮间质化作用。

胶质母细胞瘤中癌-睾丸抗原OY-TES-1的表达对M2型巨噬细胞极化的影响

目的探讨胶质母细胞瘤(GBM)中癌-睾丸抗原OY-TES-1的表达对M2型巨噬细胞极化的影响。方法体外培养人GBM细胞U251与人外周血单核细胞THP-1,构建稳定下调OY-TES-1的U251稳转株(U251-SH-OY-TES-1组),将转染无关序列的U251作为对照(U251-SH-NC组)。48h后取两组上清液与THP-1细胞共培养,加入U251-SH-NC组上清液的THP-1细胞为SH-NC组,加入U251-SH-OY-TES-1组上清液的THP-1细胞为SH-OY-TES-1组。通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测两组OY-TES-1mRNA和蛋白相对表达量,确定转染效率。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液中人白细胞介素-10(IL-10)、人转化生长因子-β(TGF-β)表达水平。通过流式细胞术检测CD206表达水平。结果RT-qPCR与蛋白免疫印迹法检测结果显示,U251-SH-OY-TES-1组OY-TES-1mRNA和蛋白的相对表达量低于U251-SH-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA结果显示,两组培养液中TGF-β、IL-10水平随培养时间的增加呈上升趋势。第0天、第2天SH-OY-TES-1组培养液中TGF-β水平显著低于SH-NC组(P<0.05),IL-10水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。第4天SH-OY-TES-1组培养液中TGF-β、IL-10水平显著低于SH-NC组(P<0.05)。流式细胞术结果显示,与SH-NC组比较,SH-OY-TES-1组CD206水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论GBM中OY-TES-1高表达能够促进M2型巨噬细胞的极化。

癌相关成纤维细胞与M2型巨噬细胞相互作用促进肿瘤发生发展的研究进展

癌相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境(TME)中主要成分之一。在TME中,肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间或非肿瘤细胞与非肿瘤细胞之间的相互作用能促进肿瘤发生发展。CAF可与多种免疫细胞之间产生相互作用,通过抑制适应性免疫细胞功能,重塑TME中免疫微环境促进肿瘤的发生发展。其中CAF与巨噬细胞相互作用,并诱导巨噬细胞向M2型极化在促进肿瘤发生发展中起到重要作用。

IL-4诱导M2型巨噬细胞极化在慢性肝病中的研究进展

肝脏在血容量调节、营养素代谢、免疫系统和生长信号通路的调控等生理过程中起关键作用,多种因素导致肝脏功能异常,形成急性肝损伤(ALI)、病毒性肝炎、酒精性肝病(ALD)、代谢相关脂肪性肝病、肝纤维化(LF)、肝细胞癌(HCC)等疾病。我国是肝病发生率较高的国家,肝癌在我国的死亡率占第2位,我国肝癌的普遍发展模式为乙型肝炎-肝硬化-肝癌[1-4]。肝癌在早期不易发现,但可以通过早期对慢性肝病治疗,延缓或控制肝癌发展进程,提高患者生存率。巨噬细胞是一种髓系免疫细胞,在机体组织中占据重要位置,它们摄取和降解死亡细胞、碎片和异物,并参与协调炎症发生的过程[5]。巨噬细胞在不同的微环境刺激下可极化为M1型和M2型。M1型巨噬细胞通过分泌促炎因子,推进炎症反应;M2型巨噬细胞通过分泌抗炎因子,参与炎症消退和组织修复。白细胞介素-4(IL-4)的表达在巨噬细胞分化过程中起到了重要作用。本文通过探讨IL-4调节巨噬细胞极化在肝脏疾病中作用,为巨噬细胞分化治疗肝脏疾病提供方向和科学依据。

M2型巨噬细胞在冠心病病态形成中的作用及研究进展

研究表明,免疫细胞与冠状动脉疾病的进展有关,如CD4 T细胞[1]、TregT细胞[2]、中性粒细胞[3]、树突状细胞[4]及巨噬细胞等[5]。巨噬细胞作为人体内固有免疫细胞,根据微环境及刺激因素的不同可极化为经典活化型巨噬细胞(M1型巨噬细胞)和替代活化型巨噬细胞(M2型巨噬细胞)。

M2型巨噬细胞通过分泌白细胞介素-10调控胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的:探讨M2型巨噬细胞通过调控白细胞介素-10(IL-10)表达影响胆囊癌(gallbladder cancer,GBC)细胞增殖、迁移、侵袭的研究。方法:将人单核细胞株THP-1在体外诱导成M2型巨噬细胞,利用RTqPCR检测相应标记物和IL-10的表达情况;利用ELISA检测细胞上清液中IL-10的表达情况。将GBC细胞株NOZ和GBC-SD分组为Control组(无血清培养基)、M2-CM组(M2型巨噬细胞条件培养基)、M2-CM+anti-IL-10组(含IL-10中和抗体的M2-CM)和M2-CM+IgG组(含IL-10同型对照抗体的M2-CM)。采用CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭变化状况,再用Western blot实验检测各组细胞的上皮间质转化标志物(E-cadherin和Vimentin)的表达量。结果:M2型巨噬细胞在体外诱导成功;与诱导前的THP-1相比,IL-10在M2型巨噬细胞内和上清液中表达明显升高(P<0.05);M2型巨噬细胞可促进GBC细胞增殖、迁移和侵袭,以及能抑制E-cadherin表达和促进Vimentin表达,阻断IL-10可抑制M2型巨噬细胞的这一影响(P<0.05)。结论:M2型巨噬细胞可通过分泌IL-10促进GBC细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化。

HTRA3基因对脉络膜新生血管和M2型巨噬细胞极化的影响

目的 探讨HtrA丝氨酸肽酶3(HTRA3)基因对脉络膜新生血管(CNV)和M2型巨噬细胞极化的影响。方法 收集30例湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)患者(wAMD组)和30例同期健康体检者(健康组)的空腹静脉血,通过qRT-PCR检测血清HTRA3 mRNA水平。将RF/6A细胞随机分为对照组、NC-sh组和HTRA3-sh组,使用Lipofectamine2000将NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体分别转染到NC-sh组和HTRA3-sh组RF/6A细胞中,通过qRT-PCR和Western blot检测HTRA3的转染情况。将RF/6A细胞随机分为N组、H组、H+NC-sh组和H+HTRA3-sh组,细胞转染后,N组RF/6A细胞在完全RPMI 1640培养基中进行常氧培养,其他组细胞在添加200 mmol·L^(-1)氯化钴(CoCl_(2))的RPMI 1640培养基中进行低氧培养,使用Matrigel测定小管形成。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CNV组、CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组,每组12只。对照组为未建模的小鼠,其他组为激光诱导的CNV模型小鼠。向CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组小鼠玻璃体内分别注射1μL滴度为1×10^(11)TU·mL^(-1)的NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体。对照组和CNV组小鼠注射PBS。注射后7 d,对小鼠进行荧光素眼底血管造影(FFA)检测和眼球苏木精伊红(HE)染色。通过qRT-PCR检测RF/6A细胞或各组小鼠脉络膜组织中HTRA3、类几丁质酶3样蛋白3(Ym-1)、精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平。通过Western blot检测RF/6A细胞或脉络膜组织中HTRA3、VEGF和细胞核核因子κB(NF-κB) p65的蛋白表达水平。结果 与健康组比较,wAMD组患者的血清HTRA3 mRNA水平升高(t=11.804,P<0.001)。与对照组和NC-sh组比较,HTRA3-sh组RF/6A细胞的HTRA3 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。与N组比较,H组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均增加(均为P<0.05)。与H+NC-sh组比较,H+HTRA3-sh组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均减少(均为P<0.05)。与对照组比较,CNV组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平增加,CNV相对荧光强度升高,Ym-1和Arg-1 mRNA水平升高,iNOS和COX-2 mRNA水平降低,细胞核NF-κB p65蛋白表达水平升高(均为P<0.05)。与CNV+NC-sh组比较,CNV+HTRA3-sh组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平减少,CNV相对荧光强度降低,Ym-1和Arg-1 mRNA水平降低,iNOS和COX-2 mRNA水平升高,细胞核NF-κB p65蛋白表达水平降低(均为P<0.05)。结论 下调HTRA3可抑制CNV形成和M2型巨噬细胞极化,HTRA3可能是防治wAMD的重要潜在靶点。

M2型巨噬细胞来源外泌体对食管癌细胞生长行为及人脐静脉血管内皮细胞血管生成的影响

目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体(Exo)对食管癌细胞生长及人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管生成的影响。方法采用佛波酯(PMA)和白细胞介素(IL)-4将人单核细胞系THP1细胞诱导为M2型巨噬细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测巨噬细胞相关基因肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、重组人精氨酸酶(Arg)1、转化生长因子(TGF)-β及CD206的表达变化;超速离心法分离M2型巨噬细胞来源的Exo,透射电镜观察形态,粒径分析仪检测粒径分布,Western印迹法检测Exo标志蛋白表达;利用PKH67标记Exo后再与食管癌细胞株EC9706共培养,细胞免疫荧光染色检测Exo被EC9706细胞摄取情况;将分离的Exo与EC9706细胞共培养,CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移与侵袭,细胞成管实验检测HUVEC血管生成情况。结果经PMA和IL-4诱导后的细胞内M1型巨噬细胞相关基因TNF-α、IL-6和iNOS的mRNA表达水平显著下调(P<0.05),M2型巨噬细胞相关基因Arg1、TGF-β和CD206的mRNA表达水平均显著上调(P<0.05);分离的颗粒物为直径100 nm的典型球状小囊泡,Exo标志蛋白CD9、CD63和TSG101均高水平表达,由此说明成功分离到M2型巨噬细胞来源的Exo,且该Exo可被EC9706细胞摄取;将EC9706细胞与M2型巨噬细胞来源的Exo共培养后,细胞增殖活性显著升高(P<0.05),EdU阳性细胞数显著增加(P<0.05),细胞的迁移数目与侵袭数目均显著增加(P<0.05),此外,HUVEC的血管生成能力显著提高(P<0.05)。结论M2型巨噬细胞可通过Exo途径促进食管癌细胞的生长,并促进肿瘤血管的形成。

M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎患者牙龈组织中的表达及其临床意义

目的探讨M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子在重度慢性牙周炎(CP)患者牙龈组织中的表达及其临床意义。方法选取2018年10月—2021年6月柳州市人民医院收治的168例CP患者。根据病情严重程度分为轻度组、中度组和重度组,分别有27例、72例和69例。另选取同期该院53例牙龈组织健康者作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测研究对象牙龈组织中M1型巨噬细胞极化相关因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、信号传导及转录激活因子1(STAT1)及M2型巨噬细胞极化相关因子精氨酸酶1(Arg1)、STAT6的表达。分析不同人群牙龈组织中M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子mRNA相对表达量,分析CP患者病情严重程度的影响因素,分析M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子对CP患者病情严重程度的诊断效能。结果轻度组、中度组和重度组牙龈组织中iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量较对照组高,中度组和重度组较轻度组高,重度组较中度组高。轻中度组与重度组性别、年龄、体质量指数、高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、吸烟史、饮酒史、偏侧咀嚼、巴氏刷牙、刷牙≥2次/d、刷牙≥3 min/次、夜磨牙症、血清钙、SBI、PLI比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。重度组TNF-β、IL-10、IL-17及iNOS、STATl、Arg1、STAT6 mRNA相对表达量高于轻中度组。多因素Logistic逐步回归分析结果显示:IL-10[OR=3.873(95%CI:1.594,9.412)]、IL-17[OR=4.267(95%CI:1.756,10.371)]及iNOS[OR=4.092(95%CI:1.684,9.944)]、Arg1[OR=3.651(95%CI:1.502,8.873)]、STAT6[OR=3.644(95%CI:1.499,8.856)]mRNA相对表达量是影响CP患者病情严重程度的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线结果显示,iNOS、Arg1、STAT6 mRNA联合预测CP患者病情严重程度的敏感性、特异性和曲线下面积最高,分别为81.16%(95%CI:0.696,0.892)、90.91(95%CI:0.830,0.955)、0.908(95%CI:0.854,0.963)。结论M1型、M2型巨噬细胞极化相关因子iNOS、Arg1、STAT6与CP患者病情严重程度有关,3者联合评估CP患者病情严重程度效能良好。

NRP1调控M2型巨噬细胞极化介导电离辐射肺纤维化的作用研究

目的:研究神经菌毛蛋白1(NRP1)对电离辐射肺损伤导致纤维化进程的影响,并探讨其与M2型巨噬细胞间的关系。方法:电离辐射肺纤维化(RIPF)组小鼠以6 Gy X射线全胸辐射建立电离辐射肺纤维模型;对照组即正常小鼠;EG00229给药组(EG00229为NRP1拮抗剂)小鼠辐射前7 d小鼠EG00229给药处理。HE、天狼星红、马松染色观察三组小鼠肺组织损伤和纤维化胶原沉积;ELISA检测三组小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-4、TGF-β1炎症因子水平;IHC和RT-PCR检测三组小鼠肺组织中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和NRP1蛋白表达水平;免疫荧光检测三组小鼠肺组织中CD14和M2型巨噬细胞极化标志物精氨酸酶1(Arg1)、抵抗素样分子α(FIZZ1)、几丁质酶3样蛋白1(Ym1)蛋白表达水平。结果:HE染色显示RIPF组小鼠肺部呈现放射性肺纤维化病理形态表现,EG00229给药组小鼠肺组织纤维化损伤有明显改善;与对照组相比,RIPF组小鼠肺组织中Col-Ⅰ、α-SMA和NRP1及TNF-α、IL-4、TGF-β1和CD14表达水平显著升高,EG00229可显著抑制小鼠肺组织中Col-Ⅰ、α-SMA和NRP1以及TNF-α、IL-4、TGF-β1和CD14表达(P<0.05);与对照组相比,RIPF组小鼠肺组织中Arg1、FIZZ1和Ym1表达水平显著升高,EG00229可明显抑制小鼠肺组织中Arg1、FIZZ1和Ym1表达。结论:NRP1可能通过调控M2型巨噬细胞极化促进电离辐射肺纤维化的发生发展。

平喘颗粒调控M2型巨噬细胞极化改善哮喘小鼠气道炎症及气道重塑的实验研究

目的 观察平喘颗粒对哮喘小鼠气道炎症、气道重塑及M2型巨噬细胞极化相关因子的影响。方法 选择30只6~8周雌性BALB/C小鼠随机分为空白组、模型组、平喘颗粒组,采用卵清蛋白和氢氧化铝构建哮喘小鼠模型,给予平喘颗粒进行干预。采用HE和PAS染色检测各组小鼠肺组织病理形态变化;吉姆萨染色计数各组小鼠肺泡灌洗液中总细胞数、嗜酸性粒细胞数、中性粒细胞数、巨噬细胞数;ELISA法检测各组小鼠血清IgE含量及肺泡灌洗液中巨噬细胞M2标记物Arg1、白细胞介素-10(IL-10)的含量;real-time PCR检测各组小鼠肺组织中巨噬细胞M2标记物YM1、MRC1的水平;免疫荧光检测肺组织F4/80与MRC1的表达与共定位。结果 与模型组相比,平喘颗粒组小鼠肺组织炎性细胞浸润情况明显减少,气道黏液及杯状细胞明显减轻。与模型组相比,平喘颗粒组BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞数量、中性粒细胞数量、巨噬细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P <0.05)。平喘颗粒组小鼠血清中IgE水平明显低于模型组,但高于空白组,与模型组及空白组比较差异均有统计学意义(P <0.05)。与模型组相比,平喘颗粒组小鼠BALF中Arg1和IL-10水平明显降低(P <0.05),与空白组比较无明显差异(P> 0.05);平喘颗粒组小鼠肺组织中YM1、MRC1基因表达水平明显降低,比较差异有统计学意义(P <0.05),与空白组比较无明显差异(P> 0.05)。免疫荧光检测各组小鼠肺组织结果显示MRC1与F4/80的表达与共定位荧光强度明显降低。结论 平喘颗粒可以抑制哮喘小鼠气道炎症及气道重塑,其机制可能与本方能够抑制哮喘小鼠M2型巨噬细胞极化的相关因子有关。

Nogo-B促进M2型巨噬细胞极化在卵巢癌细胞增殖、侵袭和血管生成中的作用研究

目的:探究内质网膜蛋白4B(reticulon 4B,Nogo-B)和巨噬细胞M2型极化在卵巢癌增殖、侵袭和血管生成中的作用及其相关机制。方法:收集我院26例卵巢癌患者肿瘤和癌旁组织,通过免疫组化检测Nogo-B蛋白表达。分离肿瘤和癌旁组织巨噬细胞,通过流式细胞术和qRT-PCR检测巨噬细胞CD86、CD206表型比例和Nogo-B表达情况。通过脂质体转染法将si-Nogo-B和si-NC转染至A2780细胞,采用qRT-PCR和Western blot检测细胞Nogo-B、VEGF表达情况,利用CCK8检测细胞增殖活性。将THP-1细胞分为3组并鉴定其Nogo-B表达水平:si-NC-PMA组、si-NC-PMA/IL4组、si-Nogo-B-PMA/IL4组(分别将si-Nogo-B和si-NC转染至THP-1细胞后,使用PMA或PMA/IL4诱导细胞极化)。将各组巨噬细胞与A2780细胞共孵育,通过CCK8检测A2780细胞增殖变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力变化,通过qRT-PCR和Western blot检测细胞VEGF表达变化。结果:与癌旁组织相比,卵巢癌患者肿瘤部位Nogo-B表达增加。肿瘤部位巨噬细胞呈M2型极化,其Nogo-B表达明显提高。si-Nogo-B组与si-NC组相比,A2780细胞的VEGF表达水平和增殖能力没有显著性差异。与si-NC-PMA组相比,si-NC-PMA/IL4组巨噬细胞呈M2型极化,Nogo-B表达提高,与其共孵育后的A2780细胞的增殖、侵袭能力增加,VEGF表达水平提高。与si-NC-PMA/IL4组相比,si-Nogo-B-PMA/IL4组M2型巨噬细胞比例减少,Nogo-B表达降低,与其共孵育后的A2780细胞的增殖、侵袭能力减弱,VEGF表达水平减少。结论:Nogo-B通过促进巨噬细胞向M2型极化,可能诱导卵巢癌增殖、侵袭和血管生成。

M2型巨噬细胞外泌体诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:目前研究表明,M2型巨噬细胞能够促进成骨分化并呈网络状调控,外泌体可携带大量信息参与细胞间的信号传导,M2型巨噬细胞来源外泌体是否能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,有待研究。目的:探究M2型巨噬细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:培养鼠源性巨噬细胞系RAW264.7与鼠骨髓间充质细胞系CP-M131,培养至第3代,应用白细胞介素4诱导巨噬细胞极化为M2型巨噬细胞,从M2型巨噬细胞培养上清中提取外泌体,然后用终质量浓度为0,30,60,90 mg/L的外泌体与骨髓间充质干细胞共培养72 h后收集样本,以及60 mg/L M2型巨噬细胞来源外泌体与骨髓间充质干细胞共培养24,48,72 h后收集样本,Western blot检测骨髓间充质干细胞中成骨相关因子RUNX2和碱性磷酸酶蛋白表达,茜素红染色检测矿物质沉积情况。结果与结论:①成骨相关因子RUNX2及碱性磷酸酶的表达水平与巨噬细胞外泌体质量浓度密切相关,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05),干预72 h RUNX2、碱性磷酸酶表达明显升高(P<0.05);②茜素红实验结果表明,与空白对照组比较,60 mg/L外泌体组钙结节含量较高(P<0.05),干预72 h钙结节含量较高(P<0.05);③结果表明,M2型巨噬细胞分泌的外泌体能够诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。

白术内酯Ⅱ逆转M2型巨噬细胞极化调控PDL1表达抑制A549细胞迁移

探究白术内酯Ⅱ(atractylenolideⅡ,AT-Ⅱ)对M2型巨噬细胞极化与A549细胞迁移能力的影响,并分析其潜在机制。利用PMA将THP-1细胞诱导成M0巨噬细胞,然后加入IL-4和IL-13继续诱导为M2型巨噬细胞。利用Transwell小室将M2型巨噬细胞与A549细胞共培养,分别给予0、2.5、5μmol/L的AT-Ⅱ进行作用。采用MTT实验测定共培养条件下AT-Ⅱ对A549细胞活力的影响;采用Real-time PCR检测M2型巨噬细胞Arg-1的mRNA表达水平;采用ELISA检测共培养体系中TNF-α、IL-1β的含量;采用WB检测A549细胞TLR4、p-p65、NF-κB(p65)、PDL1的蛋白表达水平;采用划痕实验检测A549细胞的迁移能力。结果显示,共培养条件下,与对照组相比,实验组(2.5、5μmol/L)A549细胞活力降低(2.5μmol/L组P>0.05、5μmol/L组P<0.01);M2型巨噬细胞特异性基因Arg-1的mRNA表达水平显著降低(P<0.01);M1型巨噬细胞相关炎性因子TNF-α、IL-1β含量增多但无显著差异(P>0.05);A549细胞TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、p-p65、NF-κB(p65)蛋白表达水平降低(P<0.01);A549细胞PDL1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),A549细胞迁移能力下降。以上结果表明,AT-Ⅱ可以逆转M2型巨噬细胞极化,抑制A549细胞TLR4/NF-κB信号通路降低PDL1的表达水平,从而抑制肺癌细胞的迁移。

岩黄连总生物碱抑制M2型巨噬细胞抗小鼠肝癌实验研究

目的:探讨岩黄连总生物碱能否通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制M2型巨噬细胞发挥抗小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤生长的作用。方法:建立小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤模型,岩黄连总生物碱高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)给药10 d后,称量瘤体及脾脏、胸腺质量,计算脏器系数,HE染色观察肿瘤组织病理学改变,RT-qPCR检测瘤组织M2型巨噬细胞标志物CD206 mRNA表达。体外培养RAW264.7细胞,用IL-4、IL-13(20 ng/mL)诱导细胞M2极化,岩黄连总生物碱高、中、低浓度(25、12.5、6.25μg/mL)干预24 h,流式细胞仪检测CD206阳性表达;RT-qPCR检测CD206、ARG-1、IL-10 mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7细胞内PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果:动物实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中剂量H_(22)肝癌细胞实体瘤的生长受到抑制,脾脏系数与胸腺系数显著升高(P<0.05),HE染色切片中肿瘤细胞浸润数减少,区域坏死肿瘤组织中CD206 mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中浓度组M2型巨噬细胞标志物CD206阳性表达及CD206、ARG-1、IL-10 mRNA和通路PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:岩黄连总生物碱可通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞M2型极化发挥抗小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤生长作用。

M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a促进前列腺癌恶性进展的机制研究

目的:探究M2型巨噬细胞外泌体包裹miR-374a对前列腺癌(prostate cancer,PCa)恶性进展的影响并探讨其分子机制。方法:在成功建立M2型巨噬细胞的基础上,抽提并鉴定其外泌体,检测外泌体中差异表达的miRNA,同时在不同PCa细胞中验证,选取miR-374a进行研究;M2细胞中转染cy3荧光标记的miR-374a与PC3细胞共培养,荧光显微镜观察PC3细胞中cy3荧光表达情况;DU145和PC3细胞中转染miR-374a inhibitor进行增殖、迁移等细胞功能学实验及裸鼠皮下成瘤实验;通过数据库筛选叉头盒转录因子(FOXO1)作为靶基因,通过Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验进行验证;干扰FOXO1后进行细胞功能学实验,观察是否能逆转miR-374a inhibitor对DU145及PC3细胞功能学的影响。结果:成功建立M2细胞并抽提其外泌体,其中miR-374a在M2细胞外泌体中高表达;荧光定量PCR实验结果证明miR-374a在PC3及DU145中表达量显著高于LNCaP,在M2细胞中表达量高于THP-1细胞,PC3细胞与M2细胞共培养后,M2细胞可通过外泌体传递miR-374a至PC3细胞内;敲低PC3和DU145细胞中miR-374a的表达量后显著降低其增殖、迁移能力并促进其凋亡,在PC3中敲低miR-374a表达后裸鼠皮下成瘤体积显著减小;Western blotting、荧光素酶报告基因实验及免疫荧光实验结果证明miR-374a可以直接结合FOXO1,抑制β-catenin入核并抑制PCa细胞EMT;挽救实验结果说明转染si-FOXO1后可逆转miR-374a对PC3和DU145细胞迁移的抑制作用。结论:M2细胞可通过外泌体传递miR-374a进入PCa细胞靶向FOXO1抑制其恶性进展。

LCMT1过表达对M2型巨噬细胞极化的影响

目的:通过慢病毒载体构建亮氨酸羟基甲基转移酶1(LCMT1)过表达THP-1细胞株,探讨LCMT1对THP-1细胞和THP-1源性巨噬细胞M2型极化的调控作用。方法:利用慢病毒技术,构建LCMT1过表达载体。设置blank组、OE-control组和OE-LCMT1组。荧光显微镜观察各组细胞的绿色荧光,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测LCMT1 mRNA和蛋白表达水平以及PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平。将THP-1细胞经100 nmol/L佛波酯(PMA)处理48 h后诱导分化为M0型巨噬细胞;M0型巨噬细胞经20 ng/mL白细胞介素4(IL-4)刺激48 h,诱导分化为M2型巨噬细胞。实时荧光定量PCR检测M2型巨噬细胞极化标志物c型甘露糖受体1(MRC-1)、CC趋化因子配体22(CCL22)、树突状细胞特异性细胞间黏附分子结合非整合素(CD209)的mRNA表达。结果:与blank组相比,OE-control和OE-LCMT1组表达绿色荧光,OE-control组的增殖曲线下降(P<0.001),LCMT1和PP2Ac甲基化相关蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与OE-control组相比,OE-LCMT1组增殖曲线下降(P<0.05),LCMT1和PP2Ac甲基化蛋白表达升高(P<0.05),PPME-1和PP2Ac去甲基化蛋白表达降低(P<0.01),总PP2Ac蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与Blank M0组相比,Blank M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 mRNA水平升高(P<0.05);与OE-control M2组比较,OE-LCMT1 M2组的M2极化标志物MRC-1、CD209、CCL22 mRNA水平降低(P<0.05)。结论:成功构建了LCMT1过表达的THP-1细胞株,LCMT1过表达可抑制THP-1细胞的增殖;维持总PP2Ac蛋白水平,增强PP2Ac甲基化并伴随PPME-1和PP2Ac去甲基化水平降低;下调M2型巨噬细胞极化标志物的表达,抑制M2型巨噬细胞极化。

M2型巨噬细胞在肺纤维化中的相关研究进展

肺纤维化是一种由于细胞外基质过度沉积从而导致肺结构破坏和瘢痕形成的间质性肺疾病。M2型巨噬细胞是一种先天免疫细胞,可以通过分泌多种促纤维化介质调节组织损伤修复,在肺纤维化发病中起着重要作用。该文对M2型巨噬细胞在肺纤维化中的研究进展作一综述。