黄芪多糖对2型糖尿病KKAy小鼠早期肾脏病理改变的影响

目的:探讨黄芪多糖(APS)对2型糖尿病小鼠(KKAy)早期肾脏病理改变的影响。方法:雌性KKAy小鼠和C57BL/6J小鼠随机分为:糖尿病组(DM,n=8)、糖尿病黄芪多糖治疗组(DA,n=8)、正常对照组(C,n=10)和黄芪多糖对照组(CA,n=10)。定期监测体重、血糖、血胰岛素水平、计算HOMA-IR指数;观察肾小球病理变化。结果:KKAy鼠较C57BL/6J鼠体重、血糖、血胰岛素及HOMA-IR均显著升高(P<0.01)。DM组小鼠肾小球面积较C组增大,系膜基质增加、肾小管管腔扩大、管壁变薄、肾小球基底膜(GBM)增厚、蛋白管型明显。经APS治疗后,以上指标均明显改善(P<0.01)。结论:APS可降低血糖,增强机体对胰岛素敏感性,对2型糖尿病小鼠早期肾脏病理改变具有良好的治疗作用。

糖耐康对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素信号转导的影响

目的:观察糖耐康对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素抵抗及胰岛素信号转导途径中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3-K)、葡萄糖转运子4(GluT4)mRNA表达的影响。方法:将SPF级KKAy小鼠40只按血糖值随机分为模型组、糖耐康高剂量组、糖耐康低剂量组、吡咯列酮组,并选C57bl/6J小鼠为正常对照组,连续灌喂给药60 d。60 d后测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)并计算胰岛素敏感指数(ISI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),游离脂肪酸(FFA)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并对胰岛进行病理学检查。用实时定量RT-PCR法测定小鼠骨骼肌和脂肪组织中PI3-K及GluT4的mRNA的表达。结果:糖耐康高剂量组的FPG、TNF-α水平较模型组显著降低(P<0.05),高,低剂量组PI3-K及GluT4mRNA表达较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01),且糖耐康在一定程度上能够保护胰岛β细胞,延缓β细胞衰竭,对血脂及FFA有降低趋势。结论:通过提高胰岛素信号转导受体后途径中PI3-K的表达,从而改善GluT4的转位是糖耐康改善胰岛素抵抗状态的可能作用机制之一。

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠肝脏IRS-2/PI3K通路的影响

目的研究辛开苦降方对KKay 2型糖尿病(T2DM)小鼠肝脏胰岛素受体底物-2/磷脂酰肌醇3-激酶通路(IRS-2/PI3K)的影响。方法将小鼠随机分为辛开组、苦降组、辛开苦降组、罗格列酮组、模型组。对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只。对照组及模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC)。灌胃给药四周后测血浆葡萄糖(FBG),及胰岛素浓度(FINS),免疫蛋白质印迹法(Western blotting)测定肝组织IRS-2、P-IRS-2(磷酸化胰岛素受体底物-2)、PI3K、PPI3K(磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶)、IRS-3、IRS-4蛋白表达水平,RT-PCR法测定肝组织PI3K、IRS-2、IRS-3、InsR(胰岛素受体)的mRNA表达水平。结果与模型组比较,苦降组、马来酸罗格列酮组血糖明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠胰岛素浓度均降低,IAI均升高(P<0.05)。辛开苦降组、辛开组、苦降组可增强T2DM KKay小鼠IRS-2及其磷酸化形式的蛋白表达(P<0.05),抑制负性调节因子IRS-3、4蛋白表达(P<0.05)。辛开苦降组可以增强PI3K、P-PI3K蛋白表达量及PI3-K mRNA表达(P<0.05)。各给药组间相比,各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论辛开苦降方及其拆方可改善胰岛素抵抗,可能是通过恢复肝脏细胞内正调控和负调控IRS蛋白的平衡实现的。

2型糖尿病KKAy小鼠海马神经元存活信号转导途径的异常及APP17肽对其的改善作用

目的 观察APP17肽对 2型糖尿病KKAy小鼠大脑海马神经元一些信号转导蛋白表达的影响。方法 将KKAy小鼠分为正常对照组 (C组 )、糖尿病组 (DM组 )和APP17肽治疗组 (DM +APP17P组 )。APP17肽皮下注射 ,每周 3次 ,每次 8μg·kg-1。 12wk后将 3组小鼠颈部离断 ,处死 ,冰浴中快速分离海马组织 ,匀浆后 ,用于免疫沉淀并蛋白印迹检测 ,部分快速灌注固定做免疫组化染色和Tunel细胞染色。结果 DM组 pMAPK的表达低于C组和DM +APP17P ;CREB、pCREB、Bax、Bcl 2的表达 3组之间差异无显著性。结论 2型糖尿病KKAy小鼠存在海马胰岛素信号转导通路的异常 ,主要表现为Ras途径和PI3 K两条途径的异常。这种信号转导途径的异常可通过神经元一定程度上的自我调节而改善 ,不出现凋亡状态 ;App17肽作为神经营养因子能激活海马神经元存活信号转导通路上游成分 。

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素敏感性及糖脂代谢的影响

目的:观察辛开苦降方干预初发2型糖尿病(T2DM)KKAy小鼠胰岛素敏感性及糖脂代谢的影响。方法:10周龄雄性初发T2DM KKAy小鼠40只按血糖值随机分为4组:模型组、罗格列酮组、辛开苦降低剂量组、辛开苦降高剂量组。正常对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只。正常组及模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC)灌胃。各组连续灌胃给药四周后取材,测定其空腹血糖(Fasting Plasma glucose,FPG)、血清胰岛素(Fasting Insulin,FINS)、血脂,肝糖原、肝脂质含量。显微镜下观察肝脏组织形态。结果:给药四周后,与正常组相比,模型组胰岛素敏感指数(Insulin Sensitivity Index,ISI)明显降低(P<0.01),FPG、FINS、总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、三酰甘油(Triglyceride,TG)、游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)、肝脏TC、肝脏TG均明显升高(P<0.01),肝糖原含量降低(P<0.01)。与模型组相比,罗格列酮组ISI好转(P<0.01),FPG、FINS、TC、TG、FFA、TG明显降低(P<0.01,P<0.05),肝糖原含量明显增加(P<0.01)。辛开苦降低剂量组及其高剂量组2组FINS、ISI、肝糖原含量均高于模型组(P<0.05,P<0.01),TG水平低于模型组(P<0.05,P<0.01);辛开苦降高剂量还能显著降低FPG、TC水平、FFA水平(P<0.05,P<0.01)。辛开苦降低剂量组还可显著降低肝脏TG水平(P<0.05)。肝脏病理显示:正常组小鼠肝脏结构正常,而模型组小鼠肝脏脂肪变性明显。罗格列酮组小鼠肝脏脂肪变性较模型组有所减轻。辛开苦降低剂量组和辛开苦降高剂量组小鼠肝脂肪变性较模型组有明显改善。结论:辛开苦降方可增加KKAy T2DM小鼠胰岛素敏感性,减轻肝胰岛素抵抗,肝糖原合成增加,从而改善血糖水平,并能降低血及肝脏脂质水平,减轻肝脏脂肪变性,有效保护肝脏组织形态结构。

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKAy小鼠胰腺InR和Bax表达的影响

目的观察辛开苦降方对初发2型糖尿病(T2DM)KKAy小鼠胰腺胰岛素受体(InR)和凋亡相关蛋白Bax表达的影响。方法将10周龄雄性初发T2DM KKAy小鼠40只随机分为模型组、马来酸罗格列酮组、辛开苦降低剂量组、辛开苦降高剂量组,每组10只。选取10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只为对照组。模型组及正常对照组给予等体积蒸馏水,其余组别分别给予相应的药物灌胃。连续灌胃4周后,测定空腹血糖(FPG)、血清胰岛素(FINS)及胰岛素敏感指数(ISI),应用免疫组织化学法检测小鼠胰腺中InR和Bax的蛋白表达。结果与模型组比较,马来酸罗格列酮组、辛开苦降高剂量组FPG明显降低(P<0.05),各给药组小鼠FINS均降低,ISI均升高(P<0.05)。免疫组化染色,与模型组相比,马来酸罗格列酮组、辛开苦降低剂量组、辛开苦降高剂量组InR阳性细胞均有明显恢复,Bax阳性细胞均有明显减少(P<0.01),其中辛开苦降高剂量组与马来酸罗格列酮组相比无差异(P>0.05),与辛开苦降低剂量组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论辛开苦降方可以使初发T2DM KKAy小鼠胰腺中InR的表达增加,Bax表达减少,提示其改善胰岛自身胰岛素抵抗、抑制胰岛细胞凋亡,且疗效与剂量相关。

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠胰岛素抵抗及脂质代谢的影响

目的探讨辛开苦降方干预对初发2型糖尿病(T2DM)KKay小鼠肝胰岛素抵抗及脂质代谢的影响。方法将T2DMKKay小鼠按血糖轻重程度随机分为辛开组、苦降组、辛开苦降组、马来酸罗格列酮组和模型组。选取C57BL/6J小鼠10只作为正常对照组(正常组)。各组连续灌胃给药4周后取材,测定其空腹血糖、血清胰岛素、血脂、肝糖原、肝脂质含量,显微镜下观察肝脏病理形态。结果给药4周后,与模型组比较,苦降组、马来酸罗格列酮组血糖明显降低(P<0.05),而辛开组、辛开苦降组血糖差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠胰岛素浓度均降低,胰岛素敏感指数均升高(P<0.05),但各给药组组间差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,马来酸罗格列酮组CHO、TG、LDL值均降低,苦降组、辛开苦降组TG值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,辛开苦降组肝TG含量降低(P>0.05)。肝脏病理显示:给药4周后,模型组小鼠肝脏结构紊乱,肝细胞胞浆有明显的空泡,肝细胞脂肪变性;各给药组小鼠肝脏结构较模型组完整,肝细胞脂肪变性较模型组轻。结论苦降方可明显降低T2DM KKay小鼠血糖,辛开苦降方可降低血清胰岛素浓度,增强胰岛素敏感性,升高肝糖原含量,降低血脂和肝脂质中TG水平,进而减轻肝胰岛素抵抗,改善T2DM脂代谢紊乱状态。

2型糖尿病Kkay小鼠大血管病变模型的建立

目的建立一种与人类发病过程类似的2型糖尿病大血管病变动物模型。方法选取24只12周龄2型糖尿病Kkay小鼠(尾尖取血测随机血糖≥11.1 mmol/L)作为模型组和12只C57BL/6J纯系小鼠作为正常对照组,两组小鼠都饲以高糖高脂饲料,模型组分别于16、20、24及28周各处死4只,模型组剩余小鼠和正常对照组小鼠于28周后处死,取腹主动脉于光镜下观察血管病变情况。每组实验动物在处死前测随机血糖。结果与正常对照组相比,模型组随机血糖均明显升高(P<0.01);模型组28周后出现大血管病变,表现为腹主动脉内皮细胞结构不清晰,质膜破裂,内弹力膜薄,内皮下层增厚,平滑肌细胞和成纤维细胞大量增殖,可见泡沫细胞。结论 2型糖尿病Kkay小鼠经高脂高糖饲养28周后可诱发大血管病变。

甲基化转移酶抑制剂对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和体重的影响

目的观察甲基化转移酶抑制剂地西他滨对2型糖尿病KKAy小鼠血糖和体重的影响,探讨其可能机制。方法将20只2型糖尿病KKAy小鼠按随机数字表法分为两组,实验组10只使用地西他滨治疗,剂量为15 mg.m-2.d-1,对照组10只使用生理盐水治疗,记录两组治疗前后的血糖、体重。结果治疗结束后,对照组小鼠的血糖和体重均增加(P<0.05),实验组体重增加(P<0.05),而血糖治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后实验组血糖、体重及增加幅度均低于对照组(P<0.05)。结论甲基化转移酶抑制剂能缓解2型糖尿病小鼠血糖和肥胖的恶化,其机制可能与能量代谢通路和胰岛素信号的重要基因发生了去甲基化有关。

自发性2型糖尿病KKAy小鼠心脏结构和功能改变实验研究

目的观察自发性2型糖尿病KKAy小鼠心脏结构和功能的改变及进展,评估其是否为糖尿病心肌病模型,为后续药效实验的开展提供依据。方法取12周龄雄性KKAy小鼠24只作为模型组,取24只C57BL/6J小鼠作为对照组,分别于14,18,22,26周龄按随机原则各组处死6只,测量2组小鼠体重、空腹血糖和心脏功能学指标,HE染色、Masson染色观察2组小鼠心脏病理改变。结果不同周龄模型组小鼠的体重、空腹血糖水平、舒张期左室前壁厚度(LVAWd)和舒张期左室后壁厚度(LVPWd)均明显高于同期对照组(P均<0.05)。不同周龄模型组小鼠的二尖瓣口血流多普勒E/A、二尖瓣环组织多普勒e’/a’均明显低于同期对照组(P均<0.05),且随周龄增长逐渐降低;而E/e’均明显高于同期对照组(P均<0.05),且随周龄增长逐渐增高;2组小鼠各周龄的左心室射血分数(LVEF)比较差异均无统计学意义(P均>0.05),均在正常范围内。心脏组织病理形态学可见模型组心肌细胞排列紊乱、细胞肥大、空泡样变和心肌细胞纤维化,且心肌间质及血管周围胶原纤维的面积均明显大于对照组(P均<0.05)。结论KKAy小鼠在高脂饮食喂养后血糖持续升高,且心室室壁厚度稳定增加,伴持续性心肌纤维化及心脏舒张功能障碍等特征,符合糖尿病心肌病的发病特征,是较为稳定的糖尿病心肌病模型。

X线全身照射对2型糖尿病KKAy小鼠造血免疫系统功能的影响

目的观察X线全身照射对2型糖尿病模型KKAy小鼠的造血免疫系统功能的损伤作用,并与对照C57小鼠进行比较。方法KKAy小鼠,分为对照组和照射组,照射组小鼠经X线全身照射,剂量4Gy,C57小鼠作为对照。照射后15d检测小鼠的外周血常规,流式细胞术检测骨髓中造血祖细胞、造血干细胞和长期造血干细胞的比例,脾中B细胞和T细胞的比例,胸腺中CD4CD8双阳性T细胞、CD4单阳性T细胞和CD8单阳性T细胞的比例。通过粒细胞集落形成能力实验评价小鼠造血祖细胞的功能。结果照射前KKAy小鼠的HSC和LT-HSC的比例低于C57小鼠。4Gy全身照射后,KKAy小鼠的外周血WBC、RBC、PLT、HGB和LYM%分别下降了68.42%、12.17%、8.78%、30.12%、70.84%;骨髓中HPC、HSC和LT-HSC的比例分别下降了34.02%、29.49%、35.74%;脾B细胞和T细胞的比例分别下降了57.85%、58.81%;胸腺CD4CD8双阳性细胞的比例下降了51.70%。KKAy小鼠的骨髓HSC、LT-HSC、外周血RBC和HGB的降低幅度显著低于C57小鼠。结论4Gy全身照射损伤KKAy小鼠的造血免疫系统功能,KKAy小鼠可能比C57小鼠表现出对电离辐射较强的耐受性。

运动联合益生菌干预2型糖尿病大鼠糖脂代谢、氧化应激及骨骼肌卫星细胞成肌分化水平的变化

目的观察运动联合益生菌干预2型糖尿病大鼠糖脂代谢、氧化应激及骨骼肌卫星细胞表达的影响。方法8周龄SPF级SD雄性大鼠60只,随机选择10只大鼠为正常对照组(NC组),造模组大鼠腹腔注射链脲佐菌素,建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(TN组)、运动+糖尿病组(YTN组)、益生菌+糖尿病组(GTN组)、运动+益生菌+糖尿病组(YGTN组),6周的递增负荷有氧跑台运动(第1周跑台速度为15 m/min,持续30 min;第2周跑台速度为15 m/min,持续60 min;第3~6周跑台速度为19.3 m/min,运动时间持续60 min,持续训练到第6周,每周5 d);GTN组和YGTN组在训练前1 h灌胃10.0 mL/(kg·d)的Lactibiane Iki益生菌溶液(浓度为10~7 CFU/mL)。最后,测定大鼠糖脂代谢指标、氧化应激指标及骨骼肌卫星细胞蛋白的表达。结果(1)TN组、YTN组、GTN组和YGTN组大鼠空腹血糖(fasting plasma glucose,FBG)、血清胰岛素(fasting serum insulin,FINS)、糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,HBA1C)和胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance index,HOMA-IR)水平均高于NC组(P<0.01),其中,YGTN组大鼠FBG水平均低于TN组、YTN组、GTN组(P<0.05);YTN组、GTN组和YGTN组大鼠血清FINS水平均与TN组比较均有所下降(P<0.01);YGTN组大鼠血清HBA1C水平均低于TN组、YTN组和GTN组水平(P<0.01);YGTN组大鼠HOMA-IR指数与TN组、YTN组和GTN组比较下降较显著(P<0.01)。结果表明有氧运动联合益生菌干预组大鼠FBG、FINS、HBA1C和HOMA-IR含量下降较明显。(2)TN组大鼠血清总胆固醇(total cholesterol,T-CHO)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平均高于NC组(P<0.05),YGTN组大鼠血清T-CHO、TG、LDL和FFA水平均低于TN组(P<0.05),基本上恢复到NC组的水平。TN组大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL)水平低于NC组(P<0.05),YGTN组大鼠血清HDL水平高于TN组(P<0.05),基本上恢复到NC组水平。结果表明有氧运动联合益生菌干预糖尿病大鼠,可降低糖尿病大鼠血清T-CHO、TG、LDL、FFA含量,提高HDL水平较明显。(3)TN组大鼠血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)和游离8-异前列腺素F2α(8-iso-prostaglandin F2α,8-isoPGF2α)水平均高于NC组(P<0.05或P<0.01),YGTN组大鼠血清MDA和8-isoPGF2α水平均低于TN组(P<0.05或P<0.01);TN组大鼠血清过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平均低于NC组(P<0.01),YGTN组大鼠血清CAT、SOD、GSH-Px和T-AOC水平均高于NC组(P<0.01),但基本上恢复到NC组的水平。(4)TN组大鼠骨骼肌卫星细胞配对盒基因7(paired box gene 7,Pax7)、成肌分化因子(myogenic determination gene,MyoD)、肌细胞生成素(myogenin,MyoG)和生肌因子5(myogenic factor 5,Myf5)蛋白表达均低于NC组(P<0.05或P<0.01),YGTN组大鼠骨骼肌Pax7、MyoD、MyoG和Myf5蛋白表达均高于TN组(P<0.05或P<0.01);基本上恢复到NC组水平。TN组大鼠骨骼肌生成抑制素(myostatin,MSTN)蛋白表达高于NC组(P<0.05),YGTN组大鼠骨骼肌MSTN蛋白表达低于TN组(P<0.05),基本上恢复到NC组水平。结论益生菌和有氧运动具有减轻胰岛素抵抗,改善血脂和氧化激的作用,在改善2型糖尿病大鼠血糖和胰岛素水平具有协同作用。此外,有氧运动联合益生菌干预促进了肌细胞的分化,可能对防止T2DM引起肌肉质量的流失和力量下降以及肌肉组织的并发症发挥一定的作用。

有氧运动干预2型糖尿病大鼠肾功能的变化

背景:2型糖尿病常伴随肾功能障碍,现已有大量研究表明运动能够缓解糖尿病患者代谢紊乱及肾功能损伤。但是关于运动对2型糖尿病患者肾脏保护作用的具体机制,鲜有人报道。目的:探讨有氧运动是否通过抑制转化生长因子β1/Notch1通路改善2型糖尿病大鼠肾功能。方法:将雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,造模成功后再随机分为糖尿病对照组和糖尿病运动组,糖尿病运动组进行8周有氧运动干预。运动结束后取材,采用全自动生化分析仪和ELISA法检测糖脂代谢、肾功能相关指标;通过电镜观察肾皮质细微结构改变;采用ELISA和RT-PCR技术检测大鼠肾脏组织中相关蛋白和基因表达量。结果与结论:①相较于正常对照组,糖尿病对照组大鼠空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油水平及胰岛素抵抗指数显著增加(P<0.05);有氧运动能够显著降低空腹血糖、三酰甘油水平(P<0.05);②相较于正常对照组,糖尿病对照组大鼠尿微量白蛋白、血清尿素氮和血清肌酐水平极显著增加(P<0.01),肾脏基底膜增厚,系膜基质增生,伴一定程度的足突融合,肾脏病变明显;有氧运动能够极显著下调2型糖尿病大鼠尿微量白蛋白、血清尿素氮和血清肌酐的过表达(P<0.01),明显改善糖尿病大鼠肾脏的病理改变;③相较于正常对照组,糖尿病对照组大鼠肾组织转化生长因子β1、Notch1、Jagged1、Hes1蛋白和基因表达量均极显著增加(P<0.01);有氧运动对转化生长因子β1、Notch1及Jagged1蛋白和基因的过表达有极显著的抑制作用(P<0.01),同时也可以显著性地抑制Hes1蛋白的过表达(P<0.05);④综上可知,有氧运动可以保护糖尿病大鼠肾功能,延缓肾的病理进展,这可能是通过抑制转化生长因子β1/Notch1信号通路的过度表达来实现的。

清热益气中药对初发2型糖尿病KKay小鼠胰岛素敏感性的影响

目的观察清热益气中药干预初发2型糖尿病KKay小鼠血糖水平、胰岛素敏感指数的效果及肝脏病理形态变化,探讨中药治疗初发2型糖尿病的作用机制。方法 10周龄雄性初发2型糖尿病KKay小鼠27只按血糖值随机分为模型组、罗格列酮组[0.67 g/(kg.d)]、中药组[8.3 g/(kg.d)]。正常对照组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠9只。各组连续灌胃给药4周后取材,测定其随机血糖、空腹血糖、胰岛素,肝脏切片HE染色观察组织学改变。结果给药4周后,与正常组相比,模型组胰岛素敏感指数明显降低(P<0.01),空腹血糖、随机血糖明显升高(P<0.01),肝脏组织明显脂肪变性。中药组与模型组相比,胰岛素敏感指数高于模型组(P<0.01);空腹血糖值低于模型组(P<0.01);中药组随机血糖值较模型组有下降,但无统计学意义(P>0.05);中药组肝脏结构明显好于模型组。结论清热益气中药可改善初发2型糖尿病KKay小鼠的胰岛素抵抗,增加胰岛素的敏感性从而改善血糖水平,并能有效保护肝脏组织形态结构。

辛开苦降方对初发2型糖尿病KKay小鼠肝脏胰岛素抵抗及IRS-2/PI3K通路的影响（英文）

目的:研究辛开苦降方中药对KKay 2型糖尿病(T2DM)小鼠肝脏胰岛素抵抗及胰岛素受体底物-2/磷脂酰肌醇3-激酶通路(IRS-2/PI3K)的影响,探讨其改善肝胰岛素抵抗(IR)的分子机制。方法:将T2DM KKay小鼠按血糖轻重程度分层随机分为4组,即模型组,辛开苦降组、辛开苦降大剂量组、罗格列酮组。正常组选10周龄雄性C57BL/6J小鼠10只。正常组及模型组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液(CMC)灌胃。各组连续灌胃给药4周后取材,采用葡萄糖氧化酶法测血浆葡萄糖(FPG),放射免疫分析法测血浆胰岛素浓度(FINS),免疫蛋白质印迹法测定肝组织IRS-2、磷酸化胰岛素受体底物-2(p-IRS-2)、PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、胰岛素受体底物-3(IRS-3)、胰岛素受体底物-4(IRS-4)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR法测定肝组织PI3K、IRS-2、IRS-3、胰岛素受体(Ins R)的m RNA表达水平。结果:与正常组相比,模型组胰岛素敏感指数明显降低(P<0.01),FPG、FINS均明显升高(P<0.01)。辛开苦降组及其大剂量组两组FINS、胰岛素敏感指数均高于模型组(P<0.01,P<0.05)。免疫蛋白质印迹结果显示:与正常组相比,模型组小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K蛋白表达均明显减少(P<0.01),IRS-3、IRS-4蛋白表达与正常组比较明显增多(P<0.01)。辛开苦降组和辛开苦降大剂量组与模型组相比,小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K蛋白表达均明显增多(P<0.01,P<0.05),IRS-3、IRS-4蛋白表达明显减少(P<0.05),辛开苦降组和辛开苦降大剂量组两组之间无明显统计学差异。实时荧光定量PCR结果显示:与正常组相比,模型组小鼠肝组织PI3-K、IRS-2、IRS-3及Ins R m RNA表达均降低(P<0.01)。与模型组相比,辛开苦降组PI3K m RNA表达升高(P<0.05)。结论:辛开苦降方可改善KKay T2DM小鼠的IR,增加胰岛素的敏感性,调节KKay小鼠肝脏IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、IRS-3、IRS-4蛋白和PI3K m RNA表达水平,提示调整肝脏的IRS2/PI3K通路相关的蛋白表达可能是辛开苦降方改善KKay T2DM小鼠的IR作用靶点,且单纯加大剂量并对相关蛋白及基因表达影响不大。

磷酸西格列汀改善2型糖尿病KKAy小鼠糖脂代谢及作用机制探讨

目的考察磷酸西格列汀对2型糖尿病KKAy小鼠糖脂代谢的影响并初步探讨可能作用机制。方法 2型糖尿病KKAy雌性小鼠(n=10)随机分为模型组(Mod组)和磷酸西格列汀(Sita,15 mg·kg-1·d-1)治疗组,连续灌胃给药90d。结果 Sita可显著改善糖尿病KKAy小鼠糖脂代谢紊乱。与Mod组相比,Sita治疗组空腹血糖(P<0.05)、血清三酰甘油(P<0.01)、总胆固醇(P<0.01)、高、低密度脂蛋白胆固醇水平(P<0.01,P<0.01)均显著降低,肝三酰甘油含量明显减少(P<0.05);但血胰岛素水平显著增加(P<0.001);Sita治疗组可显著上调肝脏中转录因子叉头蛋白1(Fox O1)的磷酸化蛋白表达水平(P<0.01),并下调其下游糖异生关键酶(G6P,P<0.01)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK,P<0.001)及脂肪酸合成酶(FAS,P<0.001)的蛋白表达。结论磷酸西格列汀改善糖尿病KKAy小鼠的糖脂代谢紊乱,可能与其抑制转录因子Fox O1的活性、调节肝脏糖异生及脂肪酸合成关键酶的表达有关。

自发性2型糖尿病KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱和氯沙坦治疗效应

目的分析糖尿病肾病（DN）发病过程中肾小球miRNA表达谱的变化，观察血管紧张素受体拮抗剂（ARB）氯沙坦对DN肾小球miRNA表达谱的影响，确认在DN发病过程中发挥关键作用的miRNA。方法8周龄KKAy小鼠随机分为氯沙坦治疗组（10mg kg-1·d-1）和非治疗组，C57BL／6小鼠作为正常对照组。于20周龄检测体质量、随机血糖、尿微量白蛋白、尿肌酐，观察肾脏形态改变。应用磁珠灌注法分离肾小球，提取总RNA，应用Affymetri。GeneChipmiRNA芯片，分析KKAy小鼠肾小球microRNA表达谱的变化，以及氯沙坦对microRNA表达谱的影响。结果KKAy小鼠的体质量和血糖较正常对照C57BL／6组小鼠显著升高（均P〈0．05），氯沙坦治疗显著改善2型糖尿病KKAy小鼠的尿白蛋白／肌酐比值[（539．71±100．23）mg／g比（728．00±177．19）mg／g，P〈0．051和肾脏病理损害，而对血糖无影响。miRNA芯片分析结果发现，与正常对照C57BL／6小鼠相比，20周龄KKAy小鼠肾小球内10个miRNA的表达上调；12个miRNA的表达下调。与KKAy非治疗组小鼠相比，20周龄氯沙坦治疗组KKAy小鼠肾小球内共有4个miRNA表达下调，其中miR-503和miR-181d在KKAy非治疗组小鼠肾小球内的表达显著上调，氯沙坦治疗可抑制其过表达。结论miR-503和miR-181d在糖尿病KKAy小鼠肾小球内的表达显著上调，氯沙坦治疗可抑制其在糖尿病状态下的异常表达，可能为糖尿病肾病新的治疗靶点。

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。

运动诱导的Irisin表达改善2型糖尿病大鼠的肾脏损伤

目的探讨Irisin在运动改善2型糖尿病大鼠肾功能中的作用及其可能机制。方法采用随机数表法从40只4~6周龄的雄性SD大鼠中,选取8只作为正常对照组(NC组),剩余大鼠用于构建2型糖尿病疾病模型。将造模成功后的大鼠再次按照随机数表法分为糖尿病模型组(DM组)、糖尿病运动组(DE组)、糖尿病Irisin组(DI组),8只/组。DE组进行8周的跑台运动干预,DI组进行8周的外源性Irisin注射干预。干预结束后取材,试剂盒检测相关生化指标;HE、Masson、PAS染色观察肾脏组织病理学形态;采用Westernblotting检测大鼠肾脏相关蛋白表达水平。结果与NC组相比,DM组大鼠空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯、血肌酐、尿素氮含量升高(P<0.05),血清Irisin含量降低(P<0.05);与DM组相比,DE组与DI组总胆固醇、甘油三酯、血肌酐、尿素氮含量均下降(P<0.05),血清Irisin含量增加(P<0.05)。与NC组相比,DM组大鼠肾脏结构紊乱,胶原纤维沉积严重;而DE组与DI组肾脏结构较DM组大鼠均有不同程度的改善,胶原纤维沉积减少。与NC组相比,DM组大鼠肾脏组织FNDC5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Atg7、Beclin-1、p-AMPK、AMPK、SIRT1蛋白表达水平下降(P<0.05),p62蛋白表达升高(P<0.05)。与DM组相比,DE组与DI组大鼠肾组织FNDC5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Atg7、Beclin-1、p-AMPK、AMPK、SIRT1蛋白表达水平升高(P<0.05),p62蛋白表达下降(P<0.05)。结论运动与外源性Irisin两种方式均对2型糖尿病大鼠的肾脏起到保护作用,其机制可能与Irisin激活肾脏组织中AMPK/SIRT1通路,进而促进肾脏自噬有关。

复方鱼腥草提取物对2型糖尿病大鼠肾脏组织中Sirt1/PGC-1α通路的影响

目的探讨复方鱼腥草提取物(牛蒡子及鱼腥草的挥发油、水提物、醇提物的混合物)对2型糖尿病大鼠肾脏组织中Sirt1/PGC-1α通路的影响。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、罗格列酮组(0.3 mg·kg^(-1))、白藜芦醇组(0.12 g·kg^(-1))及复方鱼腥草提取物组(4.5 g·kg^(-1)),每组10只。采用高糖高脂饲料喂养4周联合小剂量腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ,30 mg·kg^(-1))复制2型糖尿病大鼠模型。检测各组大鼠24 h尿蛋白、24 h尿白蛋白、尿肌酐以及血清肌酐水平,计算肌酐清除率、肾脏指数。采用HE染色法观察肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法检测肾脏组织中Sirt1表达水平;Western Blot法检测大鼠肾皮质中Sirt1、PGC-1α蛋白表达水平。结果与正常组比较,给药4、8周后,模型组大鼠的24 h尿蛋白及尿白蛋白水平、肌酐清除率、肾脏指数均明显升高(P<0.05);肾小球体积明显增大,可见肾间质伴有炎性细胞浸润,系膜区可见明显扩张;免疫组化显示肾脏组织中的Sirt1表达显著下调(P<0.01);肾皮质中Sirt1、PGC-1α蛋白表达均明显下调(P<0.05)。与模型组比较,复方鱼腥草提取物组大鼠的24 h尿蛋白及尿白蛋白水平、肌酐清除率、肾脏指数均明显降低(P<0.05);肾小球增大、系膜增生与基质聚积均有明显改善;免疫组化显示肾脏组织中的Sirt1表达显著上调(P<0.01);肾皮质中Sirt1、PGC-1α蛋白表达均明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论复方鱼腥草提取物对2型糖尿病大鼠的早期肾脏损伤具有保护作用,其机制可能与上调肾皮质中Sirt1/PGC-1α通路有关。