四川某猪场猪2型链球菌病的监测及综合防控

猪链球菌病主要是由猪链球菌感染引起的一种常见的猪传染病,不仅给养猪业造成严重经济损失,也给公共卫生和食品安全带来威胁,危害人们健康。对四川某猪场猪群猪链球菌感染情况进行监测,抽取环境样品10份、猪唾液拭子20份进行PCR检测、细菌分离鉴定、染色镜检、药敏实验等,检出猪链球菌2型菌株核酸阳性14份,含环境拭子5份,猪唾液拭子9份。根据药敏实验结果用青霉素对猪群进行治疗,有效控制了猪群进一步感染的趋势。

湖北省猪2型链球菌的分布及耐药性分析

为了明确湖北省猪2型链球菌的分布,为猪链球菌病的防控提供依据,从湖北武汉等10个地区的29个县(市、区)的48份发病猪样品中分离出猪链球菌34株,并从中鉴定出猪2型链球菌16株,占全部分离链球菌的47.1%,16株猪2型链球菌分布于10个地区的15个县(市、区)。分离菌株的药敏试验结果显示,16株猪2型链球菌对头孢呋辛、头孢曲松、阿莫西林和氨苄西林100%敏感,对卡那霉素、四环素、阿米卡星、庆大霉素和磺胺异[口恶]唑全部耐药,16株分离菌株耐药全部在7种以上。

四川猪2型链球菌病的PCR检测

2005年7月中下旬,四川资阳等地人、猪陆续发生一种发病急、死亡快、高度散发的疾病。从病死猪组织中分离出19株链球菌,设计合成3对引物,分别对分离菌株进行了猪链球菌16SrRNA、CPS2J、MRP基因片段扩增,有15株菌3个基因的扩增结果均为阳性,表明此次疫情的病原为猪2型链球菌。

四川猪2型链球菌病的诊断及综合防治

2005年6/7月四川资阳等地相继发生不明原因的猪源人畜共患病,从41份猪病料中成功分离到19株菌,并通过ATB试条快速鉴定、玻片凝集试验、动物试验、链球菌16SrRNA、CPS2J、MRP三个基因片段的扩增,确诊为猪2型链球菌病。4菌株的药敏试验结果为:对头孢氨苄、羧苄青霉素、氨苄西林、磺胺甲基异恶唑和环丙沙星高度敏感。通过迅速制定和实施猪2型链球菌病综合防控措施,疫情迅速得到了控制,并形成了一套行之有效的防控经验。

猪2型链球菌毒力因子分析

2005年夏四川资阳．内江等地发生的人-猪链球菌感染事件给社会所带来的极大危害为世人所瞩目，文中对引致患者发病和死亡的病原菌-猪2型链球菌的毒力因子进行了分析．

四川主要养猪地区猪2型链球菌血清流行病学调查

为了解近年来四川主要养猪地区猪群猪2型链球菌(S.suis 2)的流行情况,本研究利用ELISA抗体检测试剂盒对来自四川地区15个市(区)526份猪血清样品进行S.suis 2血清流行病学调查。四川地区猪群血清调查的总阳性检出率为40.30%(212/526);按地区分析,15个市(区)S.suis 2检出阳性率的地区占86.67%(13/15),其中阳性检出率超过50%地区占46.67%(7/15),宜宾地区的阳性检出率高达78.57%(11/14);按猪场分析,四川地区猪场S.suis 2阳性检出率高达76.74%(33/43),其中规模化猪场阳性检出率较高,为81.81%(18/22);在母猪、保育猪和育肥猪的猪群血清中,种母猪阳性检出率最高,为76.28%(74/97);并且夏季的阳性检出率最高,为46.81%(110/235)。研究表明S.suis 2在四川主要养猪地区普遍存在,并且在部分养猪区域、规模化猪场及种母猪猪群中存在较大的流行风险。本研究对四川主要养猪地区S.suis 2的流行和预防提供了调查依据。

猪2型链球菌安徽分离株的毒力基因、溶血性及耐药性分析

目的了解猪2型链球菌（S.suis 2）安徽分离株的毒力基因分布特征以及溶血性和耐药性。方法对19株S.suis 2安徽分离株,采用PCR方法检测cps2J、mrp、epf、sly4种毒力基因,PA法和micro-ELISA法检测溶血类型和溶血价,K-B法检测对25种抗生素的敏感性。结果 11株毒力基因型为cps2J＋/mrp＋/epf＋/sly＋,占总菌株的57.9%,为毒力优势基因型;19株均呈α或β溶血,溶血价为1∶4~1∶128;对利福平、头孢他啶、氟苯尼考、头孢唑啉的敏感率较高,平均为84.2%,对强力霉素、四环素、杆菌肽和磺胺异恶唑的耐药率较高,平均为82.9%,且对该4种抗生素的多重耐药率为63.2%。结论安徽猪群中流行的S.suis 2毒力基因的分布特征与国内相似,与国外存在一定差异,CPS、MRP、EPF和SLY是重要的毒力因子;S.suis 2的溶血类型与其SLY有关,但sly基因的不完整性并不一定改变S.suis 2的溶血性;S.suis 2安徽分离株的多重耐药性严重,耐药谱与其他地区存在一定差异。

广东省1株猪2型链球菌的分离鉴定及部分生物学特性研究

为确诊引起广东省某规模化猪场保育仔猪发生死亡的病因,本试验采集病猪肝脏、脾脏、心脏、脑、关节液和淋巴结等病料进行细菌分离,并对分离菌株进行纯化培养、菌落形态观察、革兰氏染色、形态学观察、生化试验,用血清型特异性引物进行PCR扩增,并进行毒力基因检测、药敏试验、生长曲线测定及动物试验。结果显示,分离菌株在成牛血清琼脂平板上呈圆形、灰白色、表面光滑、边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阳性球菌,呈链状排列。该菌株的生化试验结果符合链球菌的特征,PCR扩增结果显示猪链球菌保守基因片段(gdh和gapdh)和猪2型链球菌特异的cps2J基因片段均为阳性,表明该分离菌株为猪2型链球菌。毒力基因检测结果表明,该菌株毒力因子基因型为gdh^(+)/gapdh^(+)/epf^(+)/mrp^(+)/sly+/orf2^(+)/fbps^(+)。分离菌株用营养肉汤培养6 h达到对数生长期,培养10 h的菌液D 600 nm值为0.310。药敏试验结果表明,该菌株对青霉素、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸钾等药物敏感,但对强力霉素耐药。动物试验结果表明,感染分离株的BALB/c小鼠未出现死亡且无明显临床症状,毒力较低。本研究为该猪场链球菌病的防控提供了重要参考信息。

猪源2型链球菌福建株cps2j基因PCR检测及序列分析

设计并合成一对扩增2型猪链球菌cps基因的特异性引物,以猪2型链球菌福建株(SS2PFJ07)DNA为模板,筛选最佳反应条件,建立检测cps2j基因的PCR方法,并对PCR扩增产物进行序列测定和同源性比较分析。结果如下:应用该方法对猪2型链球菌福建株和标准阳性株进行扩增,均获得与预期大小一致的675bp特异性目的片段,而对8株非2型猪链球菌的扩增结果均呈阴性;敏感性测定最低可检出100cfu细菌量或50pg细菌DNA;SS2PFJ07cps2j基因部分核苷酸及其推导的氨基酸序列与猪链球菌2型不同菌株的同源性分别达98.7%～100%和97.8%～100%。上述结果表明建立并优化的猪2型链球菌cps2j基因的PCR检测方法敏感性好、特异性高,能用于2型猪链球菌的分子流行病学调查和快速检测;序列分析表明猪2型链球菌福建株与国内外8株标准株之间同源性高、亲缘关系密切。

猪2型链球菌病的防控

猪2型链球菌病是由猪2型链球菌引起的以猪的脑膜炎以及败血症为特征的人畜共患病。对猪2型链球菌病的病原、流行病学特点、临诊症状、病理变化、诊断及防控措施作一介绍,以期为有效防控该病提供参考。

猪2型链球菌病防治技术规范

1范围本标准规定了猪2型链球菌病防治技术的猪场建设与设施、猪场管理、免疫、诊断、检疫、监测、疫情报告、疫情处置、人员防护、消毒及无害化处理技术等内容。本标准适用于四川省境内的一切从事生猪饲养、屠宰、运输和生猪产品加工、储藏、销售、运输,以及从事动物防疫活动的单位和个人。

一起猪2型链球菌的分离鉴定及诊疗

【目的】为诊断某猪场生猪发生急性死亡的原因,为2型猪链球菌的诊断与治疗提供科学的参考依据。【方法】采集病死猪组织器官病料按常规方法进行细菌的分离鉴定、PCR分型检测及药敏分析。【结果】从病死猪的内脏器官及脑组织中分离到1株G+细菌,与猪链球菌的生化特征一致,PCR分型检测为2型猪链球菌。药敏试验结果显示,该分离菌株对头孢哌酮、头孢克肟、头孢噻肟、米诺环素、万古霉素、壮观霉素等药物高度敏感,对头孢西丁、头孢拉定、氟苯尼考、阿莫西林、等药物中度敏感,对链霉素、左氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素等药物低度敏感或者耐药。【结论】检测结果表明2型猪链球菌是引起猪发生急性死亡的主要原因,可用高敏药物进行救治。

2型猪链球菌天津分离株的鉴定及其遗传特征分析

为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定其生长曲线、并按照文献方法进行溶血性试验、黏附/侵入试验和对小鼠的致病性试验,分析该SS2分离株特性。结果显示,TJS75菌株经TSB培养6 h~15 h可达对数生长期,对绵羊血红细胞(RBC)具有崩解效果,可黏附并侵入PK-15细胞(黏附率和侵袭率分别为5.16%和7.90%),且感染TJS75株的BALB/c小鼠出现不同程度的行动迟缓、呼吸急促、精神萎靡和神经症状等,经测定其LD50为2.15×107cfu/mL。进一步采用高通量测序,并预测其毒力基因,分析该菌株的遗传特征,结果显示,TJS75菌株基因组全长2368195 bp,GC含量40.88%,含有2299个编码基因,其中有1822、1830和1077个基因分别注释于GO、COG和KEGG数据库,携带的16S r RNA基因序列与国内分离的SS强毒株98HAH33和05ZYH33的亲缘性较近,毒力基因的预测结果显示该菌株携带499种毒力相关基因(编码173种毒力相关因子),依据功能分类,这些毒力基因参与SS2的黏附和侵袭、溶血、促进铁转运、自溶酶的合成、降解胶原酶、唾液酸的合成等。本研究首次分离到携带MRP毒力因子的ST25型SS2,为深入开展SS2 TJS75株的致病机制研究提供了科学依据。

优化培养基组分提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数的研究

【目的】以猪链球菌2型NT15B菌株为研究对象,通过优化发酵培养基组分提高菌株活菌数,降低生产成本,为猪链球菌2型NT15B菌株的高密度培养及猪链球菌病疫苗的大规模生产和推广提供参考。【方法】试验以培养的猪链球菌2型NT15B菌株最高活菌数为筛选指标,通过单因素试验筛选菌株发酵培养基中碳源、氮源(有机氮源和无机氮源)、无机盐金属离子、磷酸缓冲液的最佳组分及浓度,并根据单因素筛选结果选择碳源浓度、有机氮源总浓度、有机氮源比例、磷酸盐缓冲液浓度4个因素各3个水平设计正交试验,并进一步进行多因素的筛选与验证。【结果】猪链球菌2型NT15B菌株发酵培养基最优条件为6.0 g/L蔗糖、1.0 g/L尿素、10 g/L酵母提取物YE7与20 g/L酵母蛋白胨Nucel 887混合氮源,1.0 g/L NaCl、9.58 g/L K2HPO_(4)·3H_(2)O、1.09 g/L KH_(2)PO_(4)、1 mmol/L MgSO_(4)·7H_(2)O、0.3 g/L L-抗坏血酸。采用此最优组合,摇瓶培养猪链球菌2型NT15B活菌数最高达80.83×10^(8)CFU/mL,较优化前提高256.08%。【结论】优化后的培养基能有效提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数,降低了生产成本,为发酵罐水平的优化提供参考。

2型猪链球菌pnp基因缺失株与回补株的构建及其生物学特性的研究

为研究2型猪链球菌(SS2) pnp基因的生物学功能,本研究通过基因无痕操作技术构建SS2 05ZYH33pnp基因缺失株Δpnp以及回补株CΔpnp,经PCR和测序鉴定结果表明,正确构建了pnp基因无痕缺失株和回补株。将05ZYH33、Δpnp以及CΔpnp分别在不同温度(28℃、37℃、42℃)培养后测定OD_(600nm)值,绘制各菌株的生长曲线;利用革兰氏染色后经镜检及透射电镜观察各菌株的形态结构;通过滴定微孔平板结晶紫法检测各菌株的生物被膜形成能力;采用接触法分析各菌株的溶血特性;于含不同抗生素的THB平板上培养各菌株,分析各菌株的药物敏感性;于氧化条件与酸性条件下培养各菌株,通过统计存活率评价各菌株的氧化耐受与酸耐受能力。结果显示,缺失株的生长速率明显低于野生株和回补株,且在冷应激条件下的生存能力下降;与野生株和回补株相比,缺失株细胞壁肽聚糖层的结构更加松散、溶血能力下降、生物被膜形成能力下降、对不同类型抗生素的敏感性增强、抗氧化与抗酸能力均下降。上述结果表明pnp基因是SS2的一个重要调节因子,参与调节细菌对外界环境变化的适应能力。本研究为科学防控猪链球菌病以及研发新型抗菌药物奠定基础。

赣州市2株人感染猪链球菌2型的毒力基因及多位点序列分型分析

目的 探解赣州市人源猪链球菌的毒力基因携带情况及其多位点序列分型(MLST)型别,从分子水平上为制定相应的防控对策提供科学依据。方法 对近年当地分离自病人的2株临床分离株进行菌株鉴定、菌种特异性基因(16S rRNA)及主要毒力基因(cps2J、mrp、sly、ef、gapdh)的PCR检测、MLST检测和药敏试验。结果 2株临床分离株菌株鉴定和猪链球菌种特异性基因鉴定均为2型猪链球菌,主要毒力基因检测和MLST结果分别为:cps2J+mrp+sly+gapdh+ef+、ST7型和cps2J+mrp-sly+gapdh+ef+、ST1型。结论 赣州市人源2型猪链球菌具有较强致病性。MLST分别归属ST7和ST1型,均为我国人源猪链球菌流行的主要型别,其中ST1基因型为赣州市首次发现。

致脑膜炎猪链球菌2型的分子分型鉴定及其生物学特性

旨在了解猪源致脑膜炎猪链球菌2型的分子分型和致病性及其生物学特性。本研究从患病猪的脑组织中分离到1株猪链球菌PX0923,通过电镜观察、16S rRNA基因测序、多重PCR、PCR-RFLP和多位点序列分析(MLST)等方法对其进行血清型和分子分型鉴定,毒力基因、生物被膜形成能力、耐药基因检测、小鼠感染试验、抗生素和中药药敏试验分析分离株PX0923的致病性和药物敏感性。结果表明,分离菌株PX0923为革兰阳性菌,电镜下可见连续排列成链状的卵圆形菌体;PCR和16S rRNA基因系统发育树分析确定其属于猪链球菌2型;序列分型为ST7,与ST1型猪链球菌聚为一支;携带epf+/mrp+/sly+/gapdh+/fbps+/orf2+/sao+7种毒力基因,呈现α型溶血活性;感染小鼠可导致小鼠肺、脾和肝等多个器官不同程度的病变,出现了小鼠脑膜炎等与病猪类似的临床症状;半数致死量(LD50)为1.08×10^(9)CFU/小鼠,提示PX0923可引起小鼠脑膜炎。分离菌株对庆大霉素、卡那霉素、新霉素、阿米卡星等12种药物耐药,携带耐药基因:aadA1和bla-TEM,对中药全蝎和三七敏感。本研究分离到猪源猪链球菌PX0923为血清2型,MLST分型为ST7,其携带多种毒力基因和耐药基因,感染小鼠可引起脑膜炎等多组织损伤;对多种抗生素和中药全蝎、三七敏感。研究结果为猪链球菌的流行和溯源分析提供了分子生物学基础,对致脑膜炎猪链球菌感染的防控提供参考依据。

基于响应面分析的高抗原活性猪链球菌2型疫苗培养基的研制与效果评价研究

试验旨在研制具有高抗原活性的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)疫苗培养基。研究以SS2 CVCC60615株为试验对象,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和响应面分析得到SS2疫苗培养基。培养基发酵验证结果显示,SS2疫苗培养基菌液最大活菌数为1.09×10^(9) CFU/mL,是TSB培养基最大活菌数的2.41倍。测定SS2不同时间点的抗原活性发现,在SS2发酵培养过程中当活菌数达到最大值后的1~3 h内细菌的抗原活性最高。小鼠感染试验表明,SS2抗原活性最高时制备的灭活疫苗与商品化灭活疫苗相比具有更高的免疫球蛋白G(IgG)抗体效价和疫苗保护率。研究表明,采用研制得到的高抗原活性SS2疫苗培养基制备的灭活疫苗具有IgG抗体效价高、免疫保护力强的优点。