2次克隆转基因山羊的重构胚发育分析

为了提高体细胞核移植生产转基因克隆山羊的效率,本研究针对2次克隆转基因山羊的重构胚发育情况进行了比较分析。首先,剖宫产从35日龄奶山羊胎儿中分离培养原代胎儿成纤维细胞,分别电转染BLYZ和Blac乳腺特异性表达载体,500mg/L G418筛选、PCR检测以获得转基因细胞株。然后,以此转基因细胞株作为供核细胞用于山羊体细胞核移植。最后,剖宫产获取转基因胎儿克隆细胞系,以此作为供核细胞进行2次克隆生产转基因山羊,并比较分析重构胚发育情况。结果显示:共获得74株LYZ转基因细胞,62株hα-LA转基因细胞;通过第1轮体细胞核移植后,BLYZ和Blac载体的重构卵融合率分别为79.4%(235/296),77.0%(221/287),2~4细胞发育率分别为35.7%(84/235)和33.0%(73/221),移植受体妊娠率分别为38.5%(5/13)和36.4%(4/11);2次克隆后,BLYZ和Blac载体的重构卵融合率分别为90.1%(118/131),87.6%(127/145),2~4细胞发育率分别为66.9%(79/118)和68.5%(87/127),移植受体妊娠率分别为58.3%(7/12)和61.5%(8/13)。以上结果表明,2次克隆的转基因山羊重构胚融合率、发育率和移植受体妊娠率均明显高于传统的体细胞核移植,这为今后高效生产转基因山羊和转基因动物的遗传育种奠定基础。