白藜芦醇通过阻断JAK激酶2/信号转导及转录活化因子3信号通路抑制食管癌细胞增殖和迁移并诱导其凋亡的作用研究

目的探究白藜芦醇对人食管癌细胞增殖、凋亡、迁移及JAK激酶2/信号转导及转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路的调控作用。方法2021年7月至2022年7月,体外培养人食管癌OE19细胞,将细胞分为对照组(不做干预)和实验组(15、30、60、90和120μmol/L白藜芦醇干预24 h)进行预实验,根据细胞计数试剂盒(CCK-8)预实验结果,筛选有显著作用且细胞活力高于50%的30、60、90μmol/L白藜芦醇进行后续的实验,后续实验又分为对照组(不做干预)、30、60、90μmol/L白藜芦醇组(30、60和90μmol/L白藜芦醇)和30μmol/L白藜芦醇+抑制剂组(30μmol/L白藜芦醇+10μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490),干预24 h。用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、Hoechst 33258染色、Transwell、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)及蛋白质印迹法对细胞增殖率、凋亡情况、迁移数及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、胱天蛋白酶-3(caspase-3)和JAK2/STAT3相关因子表达水平进行分析。结果不同浓度实验组的细胞活力与对照组相比逐渐降低,其中30、60、90和120μmol/L白藜芦醇差异有统计学意义(P<0.05),但120μmol/L白藜芦醇组细胞活力低于50%,所以本研究选择30、60和90μmol/L白藜芦醇继续后续实验;60μmol/L白藜芦醇组细胞增殖率(41.49±5.06)%、迁移细胞数(36.67±2.52)个显著低于对照组(53.34±1.99)%、(58.00±2.00)个,凋亡细胞数(7.67±1.53)个显著高于对照组(2.50±0.71)个,且cyclin D1、p-JAK2和p-STAT3表达量也低于对照组,caspase-3 mRNA和蛋白表达水平高于对照组(P<0.05);30、90μmol/L白藜芦醇组以上各指标与对照组比较同样如此。与30μmol/L白藜芦醇组相比,30μmol/L白藜芦醇+抑制剂组以上各指标变化更显著(P<0.05)。结论白藜芦醇可通过抑制JAK2/STAT3通路抑制人食管癌OE19细胞的增殖和迁移并诱导凋亡。

JAK2/STAT3信号转导通路与男性不育IVF-ET/ICSI-ET妊娠结局的关系及预测价值

目的分析Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号转导通路与男性不育体外受精-胚胎移植/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF-ET/ICSI-ET)妊娠结局的关系及预测价值。方法选取2022年10月至2023年10月成都市锦江区妇幼保健院收治的105例男性不育患者作为研究对象,根据IVF-ET/ICSI-ET临床妊娠结局分为成功组(n=79)和未成功组(n=26)。比较两组基线资料、JAK2/STAT3信号转导通路指标,采用Logistic回归模型分析患者IVF-ET/ICSI-ET结局,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析其预测价值。结果未成功组前向运动精子总数、正常形态精子百分率均低于成功组(P<0.05)。未成功组JAK2、STAT3蛋白表达量均低于成功组(P<0.05)。前向运动精子总数、正常形态精子百分率、JAK2、STAT3均为男性不育患者IVF-ET/ICSI-ET结局成功的保护因素(P<0.05)。ROC曲线显示,联合预测因子预测男性不育患者IVF-ET/ICSI-ET结局成功的曲线下面积大于各协变量(P<0.05)。结论前向运动精子总数、正常形态精子百分率、JAK2和STAT3与男性不育IVF-ET/ICSI-ET临床妊娠结局密切相关,且联合预测效能较高。

PIM1基因对急性髓系白血病U937细胞增殖、凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的:探讨PIM1基因对急性髓系白血病(AML)U937细胞增殖、凋亡的影响,以及对JAK2/STAT3通路的调控作用。方法:收集初诊成人AML患者和单纯缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞,荧光定量PCR检测PIM1 mRNA表达。将AML细胞系U937细胞分为:U937组(U937细胞正常培养)、Si-PIM1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、Si-NC组(U937细胞转染不含PIM1 mRNA的低表达腺病毒载体)、CoA1组(U937细胞中加入浓度为20μmol/L的JAK2激活剂CoA1)、Si-PIM1+CoA1组(U937细胞转染含PIM1 mRNA低表达的腺病毒载体并加入浓度为20μmol/L的CoA1)。培养24 h。荧光定量PCR和蛋白印迹法检测U937细胞PIM1 mRNA和蛋白、JAK2/STAT3通路、细胞周期、凋亡相关蛋白表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率。结果:AML患者骨髓单个核细胞中PIM1 mRNA表达水平高于单纯缺铁性贫血患者(P<0.05)。与U937组相比,Si-PIM1组细胞PIM1 mRNA和蛋白、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、Cyclin D1、CDK2蛋白、细胞增殖活性、S期比例、G2/M期比例降低(均P<0.05),p27、Caspase-3蛋白、G0/G1期、凋亡率升高(均P<0.05),而CoA1组上述指标的变化情况与Si-PIM1组正好相反,CoA1可逆转Si-PIM1对U937细胞的作用效果。U937组、Si-PIM1+CoA1组、Si-NC组U937细胞上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:敲低PIM1基因表达可抑制U937细胞增殖、促进凋亡,缓解ALM进程,且上述作用可能与抑制JAK2/STAT3通路活化有关。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨升清降浊制动颗粒对多发性抽动症模型大鼠的作用及机制

[目的]基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路探讨升清降浊制动颗粒对多发性抽动症(TS)模型大鼠的作用及机制。[方法]将SD大鼠分为对照组、TS组、升清降浊制动颗粒低剂量组(0.645 mg/kg)、升清降浊制动颗粒高剂量组(2.58 mg/kg)、氟哌啶醇组(200μg/kg)、Coumermycin A1(JAK2通路激活剂)组(4 mg/kg)、升清降浊制动颗粒高剂量+Coumermycin A1组(2.58 mg/kg+4 mg/kg),每组12只。除对照组外,其他组大鼠均需构建TS模型。建模成功后,进行给药处理,给药每日1次,持续21 d。检测大鼠运动行为评分、刻板行为评分变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6水平及纹状体中多巴胺(DA)、多巴胺转运蛋白(DAT)、多巴胺D2受体(DRD2)含量;DNA缺口末端标记法(TUNEL)染色检测大鼠纹状体中神经元凋亡;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠纹状体中p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。[结果]与对照组比较,TS组大鼠运动行为评分、刻板行为评分、IL-1β、TNF-α、IL-6水平、DRD2含量、神经元凋亡率、p-JAK2、pSTAT3蛋白表达升高,DA、DAT含量降低(P<0.05)。与TS组比较,升清降浊制动颗粒低剂量组、升清降浊制动颗粒高剂量组、氟哌啶醇组大鼠运动行为评分、刻板行为评分、IL-1β、TNF-α、IL-6水平、DRD2含量、神经元凋亡率、pJAK2、p-STAT3蛋白表达降低,DA、DAT含量升高(P<0.05)。与TS组比较,Coumermycin A1组大鼠运动行为评分、刻板行为评分、IL-1β、TNF-α、IL-6水平、DRD2含量、神经元凋亡率、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高,DA、DAT含量降低(P<0.05)。Coumermycin A1减弱了高剂量升清降浊制动颗粒对TS模型大鼠的保护作用。[结论]升清降浊制动颗粒可抑制TS大鼠神经炎症、神经元凋亡及促进DA平衡,该机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

苦参素通过JAK2/STAT3通路抑制心肌缺血再灌注大鼠炎症反应

目的:探讨苦参素对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠炎症反应的影响,并以Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活子3(STAT3)通路为切入点探讨其可能的作用机制。方法:将144只大鼠按随机数字表法分为6组:假手术组、模型组、维拉帕米(6 mg/kg)组和苦参素低剂量(25 mg/kg)、中剂量(50 mg/kg)、高剂量(100 mg/kg)组,每组24只。造模前7 d开始每日1次腹腔注射给药。末次给药30 min后,通过阻断左冠状动脉前降支30 min构建MIR大鼠模型。再灌注24 h后,观察心电图ST段变化,通过生物机能系统测定左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压最大升高速率(+dp/dt_(max))和最大下降速率(-dp/dt_(max));分光光度法检测血浆心肌酶[肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)]活性;通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、苏木素-伊红(HE)染色观察心肌梗死率和心肌组织病变;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测心肌组织炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)]含量;蛋白质印迹法(Western Blot)检测JAK2/STAT3通路蛋白和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达。结果:苦参素预处理可明显降低MIR大鼠心电图ST段高度、LVEDP、心肌梗死率、血浆CK-MB、LDH活性、心肌组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量及磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3表达比值和HMGB1相对表达量,可明显升高LVSP、+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max),差异均有统计学意义(P<0.05)。苦参素上述作用具有一定的剂量依赖性,苦参素高剂量组作用最强。除+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)外,苦参素高剂量组对其他指标的作用均优于维拉帕米组(P<0.05)。结论:苦参素可能通过抑制JAK2/STAT3通路活化而减轻MIR大鼠炎症反应,对MIR大鼠心脏功能起保护作用。

芒柄花素调节JAK2/STAT3信号通路对妊娠高血压大鼠的治疗作用

目的:探讨芒柄花素(FMN)对妊娠高血压(PIH)大鼠的治疗作用及可能机制。方法:将妊娠大鼠分为正常组(Normal组,生理盐水)、PIH组(生理盐水)、FMN组[40 mg/(kg·d)FMN]、Janus激酶2(JAK2)抑制剂组[AG490组,5 mg/(kg·d)AG490]、FMN+JAK2抑制剂组[FMN+AG490组,40 mg/(kg·d)FMN+5 mg/(kg·d)AG490],每组12只。除Normal组外,其余各组大鼠连续4 d皮下注射125 mg/(kg·d)L-精氨酸甲酯构建PIH模型。观察大鼠尾静脉压、24 h尿蛋白含量,血清血管内皮因子[内皮素1(ET-1)、一氧化氮(NO)]、炎性因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)]、心肌损伤指标[肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]、肾损伤指标[血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)]水平,心肌、肾组织病理学变化及心肌、肾组织中氧化应激指标[丙二醛(MDA)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)]和JAK2/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白(JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3)表达。结果:给药结束后,与Normal组比较,PIH组大鼠尾静脉压、24 h尿蛋白含量升高,血清ET-1、TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI、BUN、SCr水平及心肌、肾组织中MDA含量和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高(P<0.05),血清NO水平和心肌、肾组织中T-SOD活性降低(P<0.05),且心肌、肾组织存在明显的病理损伤。与PIH组比较,FMN组、AG490组和FMN+AG490组大鼠尾静脉压、24 h尿蛋白含量降低,血清ET-1、TNF-α、IL-6、CK-MB、cTnI、BUN、SCr水平及心肌、肾组织中MDA含量和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值降低(P<0.05),血清NO水平和心肌、肾组织中T-SOD活性升高(P<0.05),且心肌、肾组织病理损伤均有所改善;其中FMN+AG490组上述指标变化均显著优于FMN组、AG490组。结论:FMN可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路,减轻心肌、肾组织中氧化应激和全身炎症反应,改善血管内皮舒缩功能,降低血压,减轻PIH大鼠心肌、肾组织损伤。

花青素调节JAK2/STAT3信号通路对自身免疫性心肌炎大鼠Th17/Treg平衡的影响

目的:探讨花青素对自身免疫性心肌炎(AE)大鼠T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡及Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法:将60只SD大鼠分为对照(NC)组、模型(Model)组、花青素组(50 mg/kg花青素)、STAT3激活剂Colivelin组(1 mg/kg Colivelin)、花青素+Colivelin组(50 mg/kg花青素+1 mg/kg Colivelin),每组12只。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清炎性因子水平;苏木素-伊红(HE)染色检测心肌病理变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测脾脏维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)、叉头蛋白p3(Foxp3)mRNA表达情况;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测心肌JAK2/STAT3通路相关蛋白表达。结果:Model组心肌明显坏死和水肿,大量炎性细胞浸润;花青素组心肌无明显的坏死和细胞肿胀;Colivelin组心肌损伤加重;与花青素组相比,花青素+Colivelin组大鼠炎性细胞浸润现象增加。与NC组相比,Model组白细胞介素(IL)-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率及磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3、磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2比例明显升高(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、Foxp3 mRNA水平明显下降(P<0.05);与Model组比较,花青素组IL-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率以及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2比例明显下降(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、Foxp3 mRNA水平明显升高(P<0.05);Colivelin组对应指标呈相反趋势(P<0.05);与花青素组相比,花青素+Colivelin组IL-17、IL-23水平、RORγt mRNA水平、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、心肌细胞凋亡率及p-STAT3/STAT3、p-JAK2/JAK2比例明显升高(P<0.05),IL-10、IL-4水平、Treg细胞水平、脾脏Foxp3 mRNA水平明显下降(P<0.05)。结论:花青素可能通过抑制JAK2/STAT3通路,恢复Th17/Treg平衡,实现对AE大鼠心肌的保护作用。

从Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3信号通路探讨牛磺酸对Aβ_(25-35)所致神经干细胞损伤的保护作用

目的探讨牛磺酸对Aβ_(25-35)损伤神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的保护作用,并初步阐明其作用机制。方法该研究自2019年3—11月通过Aβ_(25-35)损伤实验室提取的神经干细胞模型,探讨牛磺酸和Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)的作用关系。从出生48 h内的C57BL/6乳鼠海马区提取NSCs,以25µmol/L浓度Aβ_(25-35)诱导NSCs,建立体外阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样NSCs模型(AD-NSCs),并利用不同浓度的牛磺酸共同孵育,分为对照组、模型组(25µmol/L)、Aβ_(25-35)+牛磺酸5 mmol组、Aβ_(25-35)+牛磺酸10 mmol组、Aβ_(25-35)+牛磺酸15 mmol组及Aβ_(25-35)+牛磺酸20 mmol组,共六组。利用CCK-8法检测各组NSCs活力,细胞成球率、EDU染色检测各组NSCs增殖能力;免疫荧光染色检测各组NSCs分化能力;Real-time PCR检测凋亡相关基因B淋巴细胞瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及胱天蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达情况;蛋白质印迹法检测总-Janus激酶2(t-JAK2)、总-信号转导和转录激活因子3(t-STAT3)、磷酸化JAK2(p-JAK2)及p-STAT3蛋白表达情况。结果与对照组(100.00%)相比,模型组NSCs活力[(61.25±6.36)%]显著降低;细胞球半径长度及增殖比例显著降低;NSCs向神经元分化比例降低;Bax/Bcl-2比值及caspase-3 mRNA表达显著升高;p-JAK2及pSTAT3蛋白表达显著升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组[(61.25±6.36)%]相比,牛磺酸各浓度[(74.82±5.14)%、(81.58±7.03)%、(74.32±8.27)%、(69.33±4.36)%]均显著改善AD-NSCs活力;显著增加细胞球半径长度并促进其增殖;显著促进AD-NSCs向神经元分化;显著降低Bax/Bcl-2比值及caspase-3 mRNA表达;此外,牛磺酸还能够抑制pJAK2及p-STAT3蛋白表达,上述指标与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论牛磺酸对Aβ_(25-35)所致的神经干细胞损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

黄芩苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞凋亡及Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录启动因子3(STAT3)信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组(不做干预)、LPS组(1μg/mL LPS)和LPS+5、10、20、40μmol/L黄芩苷组(1μg/mL LPS+5、10、20、40μmol/L黄芩苷);酶联免疫吸附试验(ELISA)和活细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]表达水平和细胞活力,筛选出最适浓度黄芩苷后,再次分组:对照组、LPS组、LPS+10μmol/L黄芩苷组、LPS+AG490组、LPS+10μmol/L黄芩苷+AG490组和LPS+10μmol/L黄芩苷+colivelin组。用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst33258染色法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测细胞增殖、凋亡、mRNA[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)]表达及相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平显著升高,24和48 h细胞活力显著降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+10、20和40μmol/L黄芩苷组炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低(P<0.05),干预24 h LPS+10μmol/L黄芩苷组细胞活力显著升高(P<0.05),选择干预24 h的LPS+10μmol/L黄芩苷组进一步实验。与对照组相比,LPS组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA及蛋白表达、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+10μmol/L黄芩苷组和LPS+AG490组显著逆转了上述指标的变化(P<0.05);与LPS+10μmol/L黄芩苷组相比,加入JAK2/STAT3通路抑制剂后,上述指标变化更为显著(P<0.05),LPS+10μmol/L黄芩苷+colivelin组则与LPS+10μmol/L黄芩苷+AG490组结果相反(P<0.05)。结论 黄芩苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡及炎症,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关。

人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能、Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路的影响。方法卵清蛋白致敏建立过敏性哮喘大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分成模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(25 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(50 mg/kg),每组14只。取14只健康大鼠设为对照组,各组腹腔注射相应药物处理14 d。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、免疫球蛋白(Ig)E水平,苏木素-伊红染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分,分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和Western印迹法测定大鼠肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平。结果对照组肺组织结构正常,未观察到病理学改变;模型组肺组织出现肺泡壁充血和炎性细胞浸润的明显病理变化;地塞米松组、人参皂苷Rb1高剂量组肺组织损伤的严重程度明显减轻,炎性细胞浸润明显被抑制;人参皂苷Rb1低剂量组肺组织仍可见炎症反应,但较模型组程度轻。与对照组比较,模型组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,IFN-γ水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,地塞米松组、人参皂苷Rb1低、高剂量组血清IL-4、TNF-α、IgE水平、肺损伤评分、肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平明显降低,IFN-γ水平明显升高(P<0.05);人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化明显优于人参皂苷Rb1低剂量组(P<0.05);地塞米松组和人参皂苷Rb1高剂量组上述指标水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠具有治疗作用,可改善过敏性哮喘大鼠肺损伤,减轻炎症反应,提高免疫功能,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路的激活有关。

17β-雌二醇对子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞ERK1/2信号转导通路活化的影响

目的研究17β-雌二醇（17β-E2）对子宫内膜异位症（内异症）患者在位子宫内膜间质细胞胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路活化的影响,探讨ERK1/2信号转导通路在介导雌激素促进内异症发生发展中的作用。方法体外分离培养内异症患者在位子宫内膜间质细胞。用1×10^-6mol/L 17β-E2处理子宫内膜间质细胞不同时间（0~120 min）,然后用MTT法和免疫印迹法（Western blot）检测子宫内膜间质细胞的活性和ERK1/2的活化情况,检测出子宫内膜间质细胞活性最强的时间点。用Western blot和MTT法分别检测不同浓度ERK1/2抑制剂PD98059对1×10^-6mol/L 17β-E2作用20 min后子宫内膜间质细胞活性及ERK1/2活性的变化。结果 1×10^-6mol/L的17β-E2作用20 min时,子宫内膜间质细胞的活性最强,ERK1/2活化在17-βE2作用10 min后出现,在20 min时达高峰;随着PD98059作用浓度的增加,ERK1/2活化水平逐渐下降,浓度为50μmol/L时已被完全阻断;随着PD98059作用浓度的增加,子宫内膜间质细胞活性逐渐下降,在50μmol/L和100μmol/L时,活性最低,但此时仍高于空白对照组。结论 17β-E2增强子宫内膜间质细胞的活性可能与17β-E2通过非转录机制,迅速激活子宫内膜间质细胞的ERK1/2信号转导通路有关。

ERK1/2信号转导通路对骨髓基质细胞条件培养液诱导大鼠中脑神经干细胞分化作用的影响

目的:探讨ERK1/2信号转导通路在骨髓基质细胞条件培养液(BMSCs-CM)诱导大鼠中脑神经干细胞(NSCs)分化中的作用。方法:将神经干细胞球种植干预先包被多聚赖氨酸的35 mm的培养皿中.神经干细胞球约30 min后贴壁.自然分化组将培养液换为含2%B27的neurobasal培养液,对照组换为BMSCs-CM.抑制剂组将培养液换为含有信号转导通路抑制剂PD98059(5μmol/L)的BMSCs-CM.7 d后采用免疫荧光染色方法观察NSCs后代细胞中神经元和星形胶质细胞的数量比例与形态差别。结果:用成年大鼠BMSCs-CM体外培养新生大鼠中脑NSCs.自然分化组NSCs分化的神经元为(15.7±10.3)%[低干对照组的(51.17±10.30)%.P<0.05],星形胶质细胞为(66.9±14.8)%[明显高于对照组的(23.26±5.60)%.P<0.05]。而抑制剂组神经元所占比例为(39.48±7.29)%[明显低于对照组.P<0.01].星形胶质细胞的比例为(31.01±8.96)%[明显高干对照组,P<0.01]。结论:BMSCs-CM可以提高神经干细胞分化为神经元的比例.并且同时降低了其分化为星形胶质细胞的比例,这两种作用很可能是通过ERK1/2信号转导通路实现的。

ERK1/2信号转导通路在宫颈癌发病中的作用

细胞外信号调节激酶（ERK）是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成员之一,该酶被激活后,在细胞生长、发育、分裂、死亡及恶性转化等过程中发挥作用。由E RK1/2介导的信号转导通路接受来自细胞内外的各种丝裂原刺激和应激,激活ERK1/2底物,调控细胞增殖、凋亡与侵袭。为了揭示宫颈癌发生发展的分子学机制，探讨宫颈癌的有效防治方法，研究者从ERK1／2信号转导通路途径对宫颈癌做了大量研究。

PPARγ激动剂吡格列酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后JAK2/STAT3信号转导通路的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(peroxisome proliferators activated receptor gamma,PPARγ)激动剂吡格列酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对大鼠内源性酪氨酸激酶2(janus kinase2,JAK2)/信号转导子和转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号转导通路的影响,并对其作用机制进行探讨。方法采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。分为假手术组、缺血再灌注组、生理盐水干预组、吡格列酮干预组。分别采用神经功能评分法观察大鼠行为学评分的变化,HE染色观察大鼠脑组织损伤情况变化,western-blotting观察大鼠缺血半暗带区P-JAK2、P-STAT3表达的改变。结果PPARγ激动剂能够减少缺血再灌注损伤大鼠行为学评分,假手术组:0,模型组:(2.3±0.98),生理盐水干预组:(2.4±0.99),吡格列酮15 mg/kg组:(1.5±0.69)(P<0.05);减轻脑细胞坏死程度;降低缺血半暗带区P-JAK2、P-STAT3的表达,两种蛋白分别为假手术组:0、0,模型组:(0.89±0.06)、(0.27±0.03),生理盐水干预组:(0.88±0.05)、(0.28±0.04),吡格列酮15 mg/kg组:(0.23±0.04)、(0.10±0.02)(P<0.05)。结论PPARγ激动剂对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制与下调JAK2/STAT3信号转导通路有关。

JAK2/STAT3信号转导通路在大鼠急性脊髓损伤中对细胞凋亡的调控作用

目的研究P-JAK2(磷酸化Janus激酶2)、P-STAT3(磷酸化信号转导和转录激活子3)以及Caspase-3(半胱氨酸蛋白酶-3)在大鼠急性脊髓损伤(acute spinal cord injury,ASCI)中的表达变化,并探讨相互作用。方法采用健康成年雄性SD大鼠90只,体重225～275g,分为对照组(n=30)、脊髓损伤组(n=30)和AG-490(JAK2酶抑制剂)+脊髓损伤组(n=30),随机分到4h、12h、24h、72h和168h各个亚组(n=6)。应用Allen’s重物坠落法并加改良制作大鼠急性脊髓损伤模型,对照组只切除椎板不损伤脊髓。术后在相应时间点处死,HE染色观察组织形态结构,免疫组织化学检测P-JAK2、P-STAT3、Caspase-3的表达变化。结果成功建立大鼠ASCI模型并获得满意脊髓组织标本。HE染色示脊髓组织损伤严重阶段出现在ASCI后72h,而不是损伤即刻。免疫组织化学检测显示对照组大鼠脊髓组织中P-JAK2、P-STAT3、Caspase-3阳性细胞较少,在脊髓损伤组各个时间点P-JAK2、P-STAT3、Caspase-3的表达量明显高于对照组(P<0.01)。P-JAK2、P-STAT3在脊髓损伤后4h迅速上升,12h达峰值,而后逐渐下降,168h仍有表达。Caspase-3在脊髓损伤后4h迅速上升,72h达峰值,而后下降。AG-490+脊髓损伤组P-JAK2、P-STAT3、Caspase-3的阳性表达低于脊髓损伤组(P<0.01),但峰值不变。结论 ASCI可异常激活JAK2/STAT3信号转到通路,它可能对继发性脊髓损伤中细胞凋亡有着重要调控作用。

淡豆豉异黄酮对增殖血管平滑肌细胞JAK2/STAT3信号转导通路的影响

目的探讨淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及Janus激酶2-细胞信号转导及转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法检测VSMC增殖活性;RT-PCR法检测AngⅡ1型受体(angiotensin Ⅱreceptor1,AT1R)mRNA表达;Westernblot法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白JAK2,STAT3及其磷酸化表达水平。结果100、200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,并明显下调AT1R mRNA表达水平;200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显下调磷酸化JAK2、磷酸化STAT3的表达。结论淡豆豉异黄酮可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,其机制可能与下调AT1R表达,阻断JAK2/STAT3信号通路的磷酸化有关。

丁苯酞氯化钠注射液联合胞磷胆碱钠注射液对老年脑梗死患者神经功能及JAK2/STAT3信号转导通路的影响

目的:探讨丁苯酞氯化钠注射液联合胞磷胆碱钠注射液对老年脑梗死(cerebral infarction,CI)患者神经功能及JAK2/STAT3信号转导通路的影响。方法:选取2017年3月至2019年5月中国人民解放军联勤保障部队第九○九医院收治的老年CI患者60例,采用简单随机化分组方法分为观察组和对照组,每组30例。两组患者均给予常规治疗,在此基础上,对照组患者给予胞磷胆碱钠注射液治疗,观察组患者给予丁苯酞氯化钠注射液联合胞磷胆碱钠注射液治疗。观察两组患者临床疗效,治疗前后神经功能[美国国立卫生院卒中神经功能缺损评分量表(national institutes of health stroke scale,NIHSS)评分]、日常生活能力(Barthel指数)及血液流变学指标变化,血清脑源性神经营养因子(BDNF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)及JAK2/STAT3信号转导通路相关蛋白表达水平。结果:观察组患者的总有效率为90.00%(27/30),明显高于对照组的66.67%(20/30),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者NIHSS评分明显低于对照组,Barthel指数明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者血浆黏度、全血黏度、血小板聚集率及纤维蛋白原水平明显低于对照组,血清BDNF、NGF、GSH-Px及T-AOC水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者JAK2、P-JAK2及P-STAT3表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:丁苯酞氯化钠注射液联合胞磷胆碱钠注射液治疗老年CI的疗效显著,能有效改善患者神经功能,提高日常生活能力,可能与该方案能进一步改善血液流变学、缓解氧化应激反应及提高脑保护效果有关。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响

目的基于Janus激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路,探讨对叶百部总生物碱对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响。方法将人结肠癌HT-29细胞分为55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组进行实验,另设仅添加培养基的空白组(含细胞)。除空白组外,其他组给予相应浓度的对叶百部总生物碱进行干预。干预24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测各组细胞增殖抑制率;干预48 h后,采用Hoechst 33258染色法观察各组细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用Western blot检测各组细胞JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的蛋白表达水平。结果与空白组比较,各浓度组细胞增殖抑制率增加;经Hoechst 33258染色后在各浓度组中可观察到典型的细胞凋亡形态改变,凋亡细胞数及细胞凋亡率均增加(均P<0.05);流式细胞术检测结果显示150μg/mL组和250μg/mL组细胞凋亡率增加(均P<0.05)。与空白组比较,各浓度组的p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平均下调(均P<0.05)。55μg/mL组、150μg/mL组和250μg/mL组的细胞增殖抑制率、凋亡细胞数及细胞凋亡率依次增加,p-JAK2蛋白和p-STAT3蛋白表达水平依次降低(均P<0.05)。结论对叶百部总生物碱可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的活化,来抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并促进其凋亡。

柚皮苷调节JAK2/STAT3信号通路对急性缺血性脑梗死大鼠神经损伤的影响

目的:观察柚皮苷通过调节蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路对急性缺血性脑梗死大鼠神经损伤的影响。方法:将60只大鼠分为对照组、假手术组、模型组、模型+生理盐水组、模型+柚皮苷组和模型+柚皮苷+白细胞介素(IL)-6组,每组10只大鼠。采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立急性缺血性脑梗死模型。术后24 h对神经功能进行评分,测定脑梗死面积,观察脑组织病理形态;干/湿法检测脑水肿;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测JAK2/STAT3信号通路蛋白及Bax、Bcl-2蛋白表达;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测脑细胞凋亡;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氧化应激因子[过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)]和炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-6]。结果:与对照组和假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、水肿指数升高,脑梗死面积增加,细胞排列紊乱,细胞间隙变宽,细胞空泡增多,细胞变性,细胞染色不均匀,变性细胞指数(DCI)、Bax、凋亡指数(AI)表达、Bax/Bcl-2比值、MDA含量、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、磷酸化JAK2(p-JAK2)、磷酸化STAT3(p-STAT3)表达升高,凋亡细胞呈深褐色,Bcl-2表达、CAT、SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05);与模型组和模型+生理盐水组比较,模型+柚皮苷组大鼠神经功能缺损评分、水肿指数降低,脑梗死面积减小,细胞排列有序,细胞间隙少,细胞空泡少,细胞变性和细胞染色不均有所缓解,DCI、Bax、AI表达、Bax/Bcl-2比值、MDA含量、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、p-JAK2、p-STAT3表达减少,深褐色凋亡细胞较少,Bcl-2表达、CAT、SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05);与模型+柚皮苷组比较,模型+柚皮苷+IL-6组大鼠神经功能缺损评分、水肿指数升高,脑梗死面积增加,细胞排列紊乱,细胞间隙和空泡增多,细胞变性且染色不均,DCI、Bax、AI表达、Bax/Bcl-2比值、MDA含量、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、p-JAK2、p-STAT3表达升高,深褐色凋亡细胞增多,Bcl-2表达、CAT、SOD和GSH-Px活性降低(P<0.05)。结论:柚皮苷对急性缺血性脑梗死大鼠神经损伤有保护作用,其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路及氧化应激、炎症和细胞凋亡有关。

JAK2/STAT3信号通路在白藜芦醇抗肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的:探讨JAK2/STAT 3信号通路在白藜芦醇抗肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法:健康雄性SD大鼠40只随机分为4组,假手术对照(SC)组、肝脏缺血再灌注(HIR)组、白藜芦醇处理(Res+HIR)组、JAK2/STAT 3通路阻断剂AG490(Res+AG490+HIR)组。建立急性肝脏缺血再灌注损伤模型,于再灌注6h后收集动物血液和肝脏标本。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(AKP)及炎症因子IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β的变化。肝脏组织HE染色,光镜下观察肝组织形态学变化。结果:与HIR组相比,Res+HIR组大鼠肝组织病理学变化明显改善,血清中反映肝脏功能学的指标ALT、AST及AKP的浓度明显降低,同时血清中抗炎因子IL-10和TGF-β含量升高,而促炎因子IL-6和TNF-α含量降低;使用JAK2/STAT 3通路阻断剂AG490后,肝组织病理学改变明显,ALT、AST及AKP的浓度明显升高,IL-10和TGF-β含量降低,而IL-6和TNF-α含量明显升高。结论:白藜芦醇对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用可能是通过激活JAK2/STAT 3信号通路,改变再灌注过程中炎性反应实现的。