SH2B3基因在髓系肿瘤中的突变位点及频率分析

目的:分析SH2B接头蛋白3(SH2B3)基因在髓系肿瘤中的突变位点及频率。方法:回顾性分析2017年11月至2022年11月首都医科大学宣武医院血液内科髓系肿瘤相关基因靶向DNA测序结果,筛选出携带SH2B3基因突变的患者,收集患者人口学资料及临床资料,分析SH2B3基因突变类型、突变位点、发生频率、共突变基因以及与疾病间的关系。结果:测序结果来自1005例患者,有19例患者检测到SH2B3基因突变,其中错义突变18例(94.74%),无义突变1例(5.26%),10例患者同时伴发其他突变(52.63%),突变等位基因频率(VAF)分布于0.03-0.66;发生频率最高的突变为p.Ile568Thr(5/19,26.32%),平均VAF为0.49,涉及1例MDS/MPN-RS(伴SF3B1突变)、1例MDS-U(伴SF3B1突变)、1例再生障碍性贫血伴PNH克隆(伴PIGA和KMT2A突变)、2例MDS-MLD(其中1例伴SETBP1突变);其余突变包括2例p.Ala567Thr(10.53%),p.Arg566Trp、p.Glu533Lys、p.Met437Arg、p.Arg425Cys、p.Glu314Lys、p.Arg308*、p.Gln294Glu、p.Arg282Gln、p.Arg175Gln、p.Gly86Cys、p.His55Asn和p.Gln54Pro各1例。结论:SH2B3基因在髓系肿瘤中突变位点分布较广,重现性低,其中p.Ile568Thr突变发生率较高,常与其他疾病特征性突变共存。

miR-181a靶向Bcl-2调控氧糖剥夺/再灌注模型诱导的SH-SY5Y神经细胞凋亡

目的皮层是响应脑缺血缺氧最为敏感的组织之一,基于前期深度测序技术,我们筛选获得响应脑缺血缺氧应激的皮层区目标基因miR-181a及Bcl-2。本研究旨在SH-SY5Y细胞株氧糖剥夺/复糖复氧模型验证二者靶向调控关系及功能,明确miR-181a—Bcl-2调控网络在OGD/R诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法采用线栓法构建大鼠缺血缺氧再灌注损伤模型,脑切片TTC染色及行为学评分法评估模型。应用qRT-PCR及Western Blot验证目标基因的表达。生物信息学分析miR-181a与Bcl-2的靶向结合位点并比对结合位点的保守性,双荧光素酶报告基因实验验证miR-181a与Bcl-2靶向结合的特异性。采用OGD/R细胞模型体外模拟脑缺血再灌注损伤,检测凋亡相关蛋白表达及Hoechst荧光染色评估细胞凋亡。结果大鼠大脑中动脉阻塞后miR-181a、Bcl-2表达变化趋势相反。RNA hybird软件预测miR-181a可结合Bcl-2的3′-UTR区,且结合区域高度保守。双荧光素酶报告基因实验发现,相对于Bcl-23′UTR-WT与mimic-NC共转染组,Bcl-23′UTR-WT与miR-181a mimic共转染后的荧光活性更低(P<0.001),而Bcl-2-Mut与miR-181a mimic共转染组,荧光活性无显著差异(P>0.05)。分别用miR-181a的模拟物及抑制物转染OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞,miR-181a可以抑制Bcl-2 mRNA及其蛋白的表达水平(P<0.001)。过表达miR-181a显著增加了SH-SY5Y细胞的凋亡(P<0.001),而抑制miR-181a表达可使SH-SY5Y细胞凋亡显著降低(P<0.001)。结论miR-181a可靶向结合Bcl-2,下调miR-181a可通过促进Bcl-2的表达进而抑制SH-SY5Y神经细胞OGD/R损伤诱导的细胞凋亡。

SHP2表达变化对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝组织中Akt表达的影响

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达及低表达对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝组织中蛋白激酶B(Akt)的影响。方法选取160只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、AdGFP组、Ad-SHP2组和Ad-shRNA/SHP2组,每组32只。采用腹腔注射CCl4法构建大鼠肝纤维化模型,经大鼠尾静脉分别将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP并携带靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP2注入大鼠体内。各组分别于造模第2、4、6、8周随机选取8只大鼠,留取肝组织标本。采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt的mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平,采用H-E染色法观察各组大鼠肝组织的病理变化,采用Masson三色染色法观察各组大鼠肝组织的胶原沉积情况。结果 靶向SHP2的shRNA及外源性野生型SHP2基因成功导入肝纤维化大鼠体内,并使大鼠肝组织中SHP2呈低表达或过表达。与模型组及Ad-GFP组比较,Ad-SHP2组大鼠的肝纤维化程度加重,而Ad-shRNA/SHP2组大鼠的肝纤维化程度则减轻。在同一造模时间点(第2、4、6、8周)对各组大鼠肝组织中Akt的m RNA和蛋白表达水平,以及p-Akt蛋白表达水平进行比较,结果显示Ad-GFP组、Ad-SHP2组、Ad-shRNA/SHP2组及模型组均显著高于对照组(P均<0.05),而各时间点的Ad-GFP组、Ad-SHP2组、Ad-shRNA/SHP2组及模型组的Akt表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05);与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织中p-Akt表达水平相比较,AdshRNA/SHP2组在各时间点均显著降低(P均<0.05),Ad-SHP2组在各时间点均显著升高(P均<0.05),模型组与Ad-GFP组的p-Akt表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 在CCl4诱导的大鼠肝纤维化病程中,肝组织中SHP2过表达可通过促进Akt磷酸化增强Akt的活性,而肝组织中SHP2低表达则可通过抑制Akt磷酸化减弱Akt的活性。

非小细胞肺癌组织中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2的表达及临床意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中TP酶激活蛋白SH3功能结合蛋白2(G3BP2)的表达情况,分析G3BP2对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法收集NSCLC患者120例,腺癌47例,鳞状细胞癌73例。免疫组织化学检测腺癌、鳞状细胞癌组织中G3BP2的表达情况,分析G3BP2表达与患者临床病理特征的关系。蛋白免疫印迹实验和qRT-PCR检测SPC-A-1、16HBE细胞中G3BP2的表达。对NCI-H226、SPC-A-1细胞转染si-NC、si-G3BP2质粒,检测敲低G3BP2对细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果腺癌组织和鳞状细胞癌组织中G3BP2的阳性表达率无统计学差异(P>0.05),G3BP2阳性与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。NCI-H226和SPC-A-1细胞中G3BP2蛋白及mRNA的表达高于16HBE细胞。敲低G3BP2可明显抑制NCI-H226、SPC-A-1细胞的增殖和侵袭并增强细胞凋亡。结论G3BP2在NSCLC组织中的阳性表达与TNM分期、淋巴结转移有关,敲低G3BP2的表达可显著抑制NSCLC的进展。

阿司匹林通过抑制SH2B1/β-catenin增强顺铂对食管鳞癌细胞的化疗敏感性

目的探讨阿司匹林(ASA)是否增强顺铂(DDP)对食管鳞癌(ESCC)的治疗作用及其相关机制。方法培养ESCC细胞,实验分为空白组(DMSO组)、实验组(ASA组,DDP组,ASA+DDP组)。CCK8检测ASA和DDP单用或联用对ESCC细胞(Eca-109、Kyse30、TE-10)活性的影响,Annexin-V-FITC/PI检测ASA和DDP单用或联用对ESCC细胞凋亡的影响;转染PHY-LVOE1.6-SH2B1上调Eca-109细胞SH2B1的表达水平,CCK8及细胞划痕实验检测过表达SH2B1对Eca-109细胞活性及迁移的影响,免疫荧光及Western blot检测Eca-109细胞内SH2B1、β-catenin及其相关通路关键分子(GSK-3β、CyclinD1、TCF-4)蛋白变化。结果给予5mmol/L ASA处理后,与空白组相比Eca-109、Kyse30、TE-10细胞活性及凋亡率均无明显差异(Ps>0.05);与DDP5组相比,ASA5+DDP5组3株细胞活性最低(t=3.49,P<0.05;t=2.80,P<0.05;t=3.10,P<0.05)、凋亡率最高(t=11.44,P<0.05;t=11.68,P<0.05;t=12.24,P<0.05),差异具有统计学差异。DDP(5μmol/L)联合梯度ASA(0、5、10mmol/L)处理Eca-109细胞,SH2B1的表达量随ASA浓度上升而下降(F=54.0,P<0.05)。与SH2B1组相比,ASA(10mmol/L)和DDP(5μmol/L)联合处理后,Eca-109细胞SH2B1(t=2.62,P<0.05)、GSK-3β(t=0.96,P<0.05)、CyclinD1(t=1.25,P<0.05)、TCF-4(t=1.98,P<0.05)蛋白表达下降;与Vector组相比,过表达SH2B1,Eca-109细胞活性及迁移能力增强(Ps<0.05),β-catenin表达量及入核增加(t=2.52,P<0.05),GSK-3β(t=2.50,P<0.05)、CyclinD1(t=1.49,P<0.05)、TCF-4(t=2.62,P<0.05)表达增加;可部分逆转ASA和DDP联用处理所带来的上述蛋白抑制作用。结论ASA通过抑制SH2B1/β-catenin信号通路在一定程度上增强ESCC细胞对DDP的化疗敏感性,协同DDP可以抑制细胞活性及促进细胞凋亡。

肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达水平及其临床预后意义

目的分析肺癌患者癌组织中含SH2结构域的Ⅱ型5’肌醇磷酸酶2(SHIP2)、Pleckstrin2(PLEK2)蛋白表达水平及其临床预后意义。方法收集97例肺癌患者的癌组织标本及其癌旁组织(距肿瘤边缘4 cm处)标本。应用免疫组织化学染色法检测所有标本组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达水平。采用χ^(2)检验分析肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达与临床病理特征的关系,多因素Cox回归分析影响肺癌患者预后的相关因素。结果癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白高表达率均明显高于癌旁组织(61.86%vs 30.93%,63.92%vs 32.99%;P<0.05)。SHIP2、PLEK2蛋白表达与肺癌患者的TNM分期、淋巴结转移存在显著关系(P<0.05)。SHIP2高表达、低表达组患者3年生存率分别为31.67%(19/60)、59.46%(22/37),PLEK2高表达、低表达组患者3年生存率分别为33.87%(21/62)、57.14%(20/35),SHIP2、PLEK2高表达、低表达组3年生存率比较均存在差异(P<0.05)。单因素分析结果显示:TNMⅢ期、淋巴结转移、SHIP2高表达、PLEK2高表达肺癌患者3年生存时间均明显缩短(P<0.05)。多因素Cox分析结果显示,TNMⅢ期、淋巴结转移、SHIP2高表达、PLEK2高表达均为影响肺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论肺癌患者癌组织中SHIP2、PLEK2蛋白表达均为高表达,并与肺癌TNM分期、淋巴结转移有关,SHIP2高表达、PLEK2高表达的肺癌患者预后较差,二者有望作为评价肺癌患者预后的生物标志物。

SHIP2、EGFL7表达与肺癌患者临床病理参数及预后的关系

目的探讨肺癌组织含SH2结构域的Ⅱ型肌醇5’-磷酸酶(SHIP2)、类表皮生长因子域7(EGFL7)表达与肺癌患者临床病理参数及预后的关系。方法回顾性收集湖州市第一人民医院2019年1-12月收治的76例肺癌患者,均以免疫组织化学SP法检测组织中SHIP2、EGFL7蛋白的表达情况,采用Kaplan-Meier法和多变量Cox回归分析SHIP2、EGFL7与肺癌患者预后的关系。结果肺癌组织中SHIP2、EGFL7蛋白高表达率均高于癌旁组织(均P<0.05);SHIP2、EGFL7高表达与低表达组TNM分期、淋巴结转移差异均有统计学意义(均P<0.05);SHIP2、EGFL7高表达组3年生存率均低于低表达组(均P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、SHIP2及EGFL7高表达均为影响肺癌患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论肺癌患者癌组织中SHIP2、EGFL7均为高表达,并与TNM分期及淋巴结转移有关,是影响预后的独立危险因素。

SH3BGRL对胃癌细胞增殖、迁移的影响

目的探讨SH3结构域结合富含谷氨酸的蛋白质(SH3 binding glutamic acid-rich protein like,SH3BGRL)对胃癌细胞增殖、迁移能力的影响及其作用机制。方法基于TCGA、GTEx及GEO数据库,通过生物信息学分析SH3BGRL在胃癌组织及正常胃黏膜上皮组织中的表达情况;通过HPA数据库获取SH3BGRL蛋白在胃癌组织及正常胃黏膜上皮组织中的表达图谱;并基于TCGA数据库的SH3BGRL表达水平进行高、低表达分组,分析其对胃癌患者预后、免疫细胞浸润和免疫治疗的影响。通过临床标本IHC染色观察SH3BGRL蛋白在胃癌中的表达情况;采用RT-qPCR检测SH3BGRL在胃癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达水平。将胃癌HGC-27及NCI-N87细胞进行siRNA转染分为si-NC组(转染阴性对照组)、si-SH3BGRL组(沉默SH3BGRL组),并通过RT-qPCR及Western blot验证是否转染成功。采用CCK-8及Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力,随后诱导THP-1单核细胞分化为M0巨噬细胞,并将分化后的M0巨噬细胞和转染后的胃癌细胞进行共培养,采用RT-qPCR及细胞免疫荧光检测共培养之后M2巨噬细胞标志物的改变,并采用RT-qPCR检测SH3BGRL沉默胃癌细胞中CSF1的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,与正常胃黏膜上皮组织相比,SH3BGRL在胃癌组织中表达上调(均P<0.01),且SH3BGRL高表达者总生存期和无进展生存期比SH3BGRL低表达的患者短(均P<0.01)。SH3BGRL高表达者M2巨噬细胞浸润比例更高,与免疫治疗低应答率相关(均P<0.01)。IHC染色结果表明,SH3BGRL蛋白在胃癌组织中表达上调(P<0.001)。与GES-1细胞相比,SH3BGRL在胃癌HGC-27及NCI-N87细胞中的mRNA表达水平均显著上调(均P<0.01)。与si-NC组相比,沉默SH3BGRL后HGC-27和NCI-N87细胞的增殖能力明显下降(均P<0.01),HGC-27细胞迁移能力显著下降(P<0.01)。M0巨噬细胞与沉默SH3BGRL的HGC-27及NCI-N87共培养后,M2巨噬细胞标志物CD163、CD206及Arg1均下调(均P<0.01)。在HGC-27及NCIN87细胞中沉默SH3BGRL后,NF-κB信号通路的靶基因CSF1显著下调(均P<0.01)。结论SH3BGRL在胃癌中表达上调,沉默SH3BGRL能抑制胃癌细胞增殖和迁移,其机制可能与抑制M2巨噬细胞极化进而形成免疫抑制肿瘤微环境有关。

SH3TC2促进结直肠癌的发生与进展——基于生信分析

目的:基于TCGA和GTEx样本数据信息挖掘在结直肠癌中异常表达且与预后相关的基因,以期提高其诊疗效果和改善预后生存。方法:利用GEPIA 2.0可视化分析平台对公共数据库中癌及癌旁1034个组织标本数据进行差异表达和预后生存相关mRNA筛选,使用FunRich软件通过韦恩图筛选共同差异基因并进行GO和KEGG富集分析,再通过GEPIA2.0和UALCAN数据库进行关键差异基因的表达和预后验证;接着通过TIMER2.0数据库探索关键基因的表达水平与免疫细胞浸润的相关性;最后通过STRING数据库在线进一步分析关键基因的蛋白相互作用网络。结果:共筛选到11106个差异表达基因(结肠癌5337个,直肠癌5769个),与二者预后OS及DFS相关的500个基因取交集,筛选出BGLAP、COQ2、CRLF1、PREX2、SH3TC2、PTPRM、ZNF154、HOXA4等8个表达差异基因且与预后生存DFS相关。验证后发现BGLAP、COQ2、CRLF1、PREX2、PTPRM、ZNF154、HOXA4可能在癌症的不同阶段发挥促癌、抑癌的双重功能;仅SH3TC2在结直肠癌中高表达(P<0.01),而预后生存分析表明高表达患者预后DFS显著更短(P<0.01),与预后OS无统计学差异(P>0.05);其表达水平与肿瘤免疫浸润评估显示结肠癌与CD4+T细胞浸润相关性,最高仅0.124(P=0.013),直肠癌中与免疫细胞浸润相关性无统计学意义(P>0.05);STRING数据库分析提示SH3TC2与SBF2、LITAF、MTMR2、MTMR2、GDAP1等蛋白相互作用可能性较大。结论:SH3TC2在结直肠癌中高表达,且高表达患者预后DFS更短,有可能是结直肠癌新的潜在诊断和预后DFS判断的标志物;SH3TC2表达水平在结直肠癌中与免疫细胞浸润相关性较弱。

含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的:探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响。方法:健康雄性SD大鼠160只被随机分为五组(对照组、模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP组),每组32只。除对照组(腹腔注射0.9%氯化钠溶液)外,其余四组构建四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,并将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP及靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP自大鼠尾静脉分别注射入Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠,各组分别于造模第2、4、6、8周选取8只大鼠留取肝组织标本。采用HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;采用Masson三色染色检测大鼠肝组织胶原沉积;采用实时荧光定量PCR检测大鼠肝组织SHP2、ERK1 mRNA表达;采用免疫组织化学染色检测SHP2蛋白表达;采用Western blot检测ERK1和p-ERK1蛋白表达。结果:大鼠肝纤维化模型成功构建,在各造模时间点,与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织胶原沉积比较,Ad-SHP2组均加重,而Ad-shRNA/SHP2组均减轻。导入野生型SHP2基因后大鼠肝组织的SHP2 mRNA及蛋白表达明显升高(均P<0.05),而导入靶向SHP2的shRNA后大鼠肝组织的SHP2 mRNA及蛋白表达明显降低(均P<0.05)。在各造模时间点(第2、4、6、8周),模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠肝组织ERK1 mRNA及蛋白表达以及p-ERK1蛋白表达高于对照组(均P<0.05),但上述四组大鼠肝组织的ERK1 mRNA及蛋白表达差异无统计学意义(均P>0.05);而在各时间点与模型组及Ad-GFP组大鼠肝组织p-ERK1蛋白表达比较,Ad-SHP2组升高(均P<0.05),Ad-shRNA/SHP2组降低(均P<0.05),模型组与Ad-GFP组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大鼠纤维化肝组织中SHP2过表达可通过促进ERK1/2磷酸化增强ERK1/2活性,而SHP2低表达则可通过抑制ERK1/2磷酸化降低ERK1/2活性。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2/Akt信号通路对6-羟基多巴胺处理的SH-SY5Y细胞模型的作用及分子机制

目的探讨调控哺乳动物雷帕霉素蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系是否具有保护作用,并阐明其分子作用机制。方法经维甲酸(RA)处理的SH-SY5Y细胞分别给予6-OHDA、mTORC2信号通路抑制剂PP242和激动剂A-443654,通过免疫荧光染色观察各组细胞数目的变化;提取细胞总蛋白进行Western blotting和免疫共沉淀(CoIP)实验,明确mTORC2信号通路关键蛋白的表达水平及其相互作用;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。同时制备SH-SY5Y与Bv-2细胞系共培养的帕金森病(PD)模型,运用MTT及ELISA方法检测各组细胞活力及培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素β(IL-1β)的含量。结果6-OHDA损伤的PD细胞模型组酪氨酸羟化酶(TH)/增殖细胞核抗原(PCNA)/Hochest-、TH/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)-单标或双标阳性细胞数较正常组明显减少,凋亡率升高;Rictor、p-Akt、发育及DNA损伤反应调节蛋白1(REDD1)的表达均上升,且Rictor与p-Akt或REDD1存在相互作用;共培养模型中细胞活力明显降低且上清液中TNF-α和IL-β含量上升。A-443654组随着上述蛋白表达的进一步上调,细胞存活和凋亡以及炎性因子水平均有明显改善,而PP242组则呈现相反的变化。结论A-443654通过使Akt磷酸化而激活mTORC2信号通路,引起Rictor和REDD1蛋白的表达增加,继而提高细胞存活率并降低凋亡率,促进SH-SY5Y细胞的增殖分化,改善了6-OHDA引起的细胞损伤以及抑制了炎症因子的释放。

四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织中SHP2表达与在体肝星状细胞活化及增殖的关系

目的探讨四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法构建大鼠肝纤维化模型,Masson三色及HE染色检测大鼠肝组织的病理组织学变化,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及SHP2表达,SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP2表达。结果与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达积分光密度值(IOD)(0.09±0.01)相比,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达IOD(0.13±0.01、0.18±0.01、0.24±0.02、0.28±0.02)显著增加(P<0.05),并随着造模时间延长逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP2阳性表达IOD(0.23±0.01、0.27±0.01、0.30±0.01、0.33±0.01)较对照组(0.19±0.01)显著增加(P<0.05),且逐渐升高(P<0.05)。SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测显示,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织中表达SHP2的活化HSC占总的活化HSC的百分比(54%±3%、62%±2%、73%±4%、86%±3%)逐渐升高(P<0.05)。结论在四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型中,肝组织及在体HSC的SHP2表达与在体HSC的活化及增殖呈显著正相关。

miR-484通过SORBS2/MEK-ERK通路调控乳腺癌细胞增殖、转移和自噬

为了分析miR-484在乳腺癌组织和细胞中的表达情况,研究miR-484在乳腺癌细胞增殖、转移和自噬过程中的作用机制,首先,采用GEO数据库分析乳腺癌组织中差异表达miRNA谱,并用实时荧光定量PCR在临床乳腺癌组织及其配对的癌旁组织中检测miR-484的表达情况;其次,利用miR-484模拟物、抑制剂检测miR-484对MCF-7乳腺癌细胞增殖、转移和自噬能力的影响;再次,预测miR-484的调控基因并进行验证,同时构建Sorbin和SH3结构域包含蛋白2(Sorbin and SH3 domain-containing protein 2,SORBS2)过表达载体,检测SORBS2对乳腺癌细胞增殖、转移和自噬能力的影响;最后,用Western-blot分析miR-484调控下MCF-7细胞中丝裂原活化的胞外信号调节激酶(mitogen-activated extracellular signal-regulated kinase,MEK)/p-MEK和胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/p-ERK的蛋白质含量变化。结果显示,miR-484在乳腺癌组织及细胞中高表达,具有提高乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力以及降低乳腺癌细胞自噬能力的作用;而且,miR-484可通过下调SORBS2并激活MEK/ERK通路参与乳腺癌的发生发展。

TiB_2-Cu基复合材料SHS工艺的正交优化

利用SHS技术制备了性能优良的TiB2 40 %Cu基复合材料。SHS工艺参数主要包括压坯相对密度、压坯轴向压力、预压力、延迟时间、高压压力、高温保压时间等 ,对这些参数和材料性能之间的关系进行了探讨。为了研究不同的延迟时间、高压压力和高温保压时间对材料致密度的影响 ,设计了一个三因素、三水平的正交试验。结果表明 ,TiB2 40 %Cu基复合材料的SHS最佳工艺参数为压坯相对密度为 5 9.0 %,压坯轴向压力为 1 3 5MPa,预压力为 1 8MPa ,延迟时间为 7s ,高压压力为 3 6 0MPa ,高温保压时间为 1 0s。

电针对中枢Stat5敲除所致肥胖小鼠瘦素水平和下丘脑Kctd15、Sh2b1 mRNA的影响

目的观察电针对中枢Stat5条件性敲除Stat5Nestin-Cre（Stat5NKO）肥胖小鼠下丘脑Kctd15、Sh2b1基因表达的影响。方法 20只肥胖的Stat5NKO小鼠随机分为肥胖组和电针组,每组10只;10只Stat5fl/fl小鼠作为正常组。其中电针组选取单侧后三里、内庭穴进行针刺治疗,每日1次,双侧交替进行,每次30min,韩氏电针仪频率2/15Hz,疏密波,6d为1个疗程,共治疗4个疗程。运用ELISA法检测血清中瘦素（Leptin）含量,qPCR技术检测下丘脑中肥胖相关基因Kctd15、Sh2b1mRNA的表达。结果与正常组小鼠比较,肥胖组小鼠体质量明显增加（P〈0.01）伴随血清Leptin含量升高（P〈0.05）,下丘脑Leptin水平下降（P〈0.05）,同时下丘脑Kctd15、Sh2b1mRNA表达下调（P〈0.05～0.01）;与肥胖组小鼠比较,电针组小鼠的体质量明显下降（P〈0.01）,血清Leptin含量降低（P〈0.01）,且下丘脑Leptin水平回升（P〈0.01）,Kctd15、Sh2b1mRNA表达水平上调（P〈0.01）。结论电针可能通过调节Leptin水平并促进Kctd15、Sh2b1表达,实现对Stat5NKO小鼠的减肥效应。

SHS反应喷涂TiC-TiB2复相陶瓷涂层的热力学分析与实验

基于SHS反应火焰喷涂技术,在钢基表面制备了TiC-TiB2复相陶瓷涂层.通过对SHS火焰喷涂陶瓷涂层反应体系的设计和其热力学计算,给出了SHS反应火焰喷涂TiC-TiB2复相陶瓷涂层的最佳配系.研究得出,当Ti,B4C和C组成的反应体系按14:3:5摩尔比配制时,SHS反应易实现点火,反应绝热温度高,反应速度快,反应产物为TiC0.7N0 3与TiB2二相构成的共晶体,但其特有的共晶层状结构不明显,为交叉复相结构,陶瓷涂层较致密,机械性能较好,陶瓷与钢基体的结合强度可达27.5 MPa,显微硬度HV达15 270 MPa,耐磨性良好.

SH2-B在结肠癌组织中表达及临床意义

目的探讨SH2-B在结肠癌癌变过程中的演变规律,分析SH2-B表达与结肠癌临床分期的关系,分析SH2-B表达与结肠癌转移的关系。方法免疫组织化学方法检测69例结肠癌组织、27例结肠腺瘤组织、29例结肠息肉组织中SH2-B蛋白的表达。69例结肠癌患者Ⅰ期11例、Ⅱ期22例、Ⅲ期19例、Ⅳ期17例,其中无转移34例,淋巴节转移35例。结果免疫组织化学检测结果显示,SH2-B蛋白在结肠息肉组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织中的表达呈浆-核型,以胞浆为主。结肠息肉患者SH2-B阳性率为31%(9/29),结肠腺瘤患者SH2-B阳性率为52%(14/27),结肠癌患者SH2-B阳性率为93%(27/29)。结肠癌组织中SH2-B的阳性细胞率(0.64±0.26)明显高于结肠腺瘤组织(0.26±0.27)和结肠息肉组织(0.12±0.21)(P<0.001),结肠腺瘤组织中阳性细胞表达率明显高于结肠息肉组织(P<0.05)。结肠癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期强阳性率分别为18.2%(2/11)、45.4%(10/22)、57.9%(11/19)和82.3%(14/17)。转移组和非转移组强阳性率为45.7%(16/35)和23.5%(8/34),转移组SH2-B强阳性率显著高于无转移组(P<0.05)。结论 SH2-B过表达可能参与了结肠癌癌变过程,可能是结肠癌变的早期事件。SH2-B表达与结肠临床分期有关。SH2-B可能参与了结肠癌转移,SH2-B高表达与结肠癌转移呈正相关。

接头蛋白SH2B1在食管癌中的表达及意义

目的:研究接头蛋白SH2B1在食管癌组织中的表达水平及其临床病理意义。方法:选取120例食管癌患者手术切除的标本中的食管癌组织、癌旁组织及正常组织,分别采用免疫组织化学SABC法及Western印迹检测SH2B1的表达水平,同时分析SH2B1在食管癌组织中的表达水平与临床病理特征的关系。采用RT-PCR和Western印迹检测SH2B1在食管癌细胞株TE-1,Eca-109和正常人食管上皮细胞株HEEC中的表达水平。结果:SH2B1蛋白在食管正常组织、癌旁组织、癌组织中表达逐步增强(P<0.05),并且SH2B1蛋白在食管癌组织中的表达水平与食管癌患者的肿瘤浸润程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05),而与性别、年龄、饮酒与否、肿瘤类型、分化程度均无明显相关(P>0.05);SH2B1在食管癌细胞株TE-1,Eca-109和正常人食管上皮细胞株HEEC中均表达,但在食管癌细胞株TE-1,Eca-109中均较正常人食管上皮细胞株HEEC中表达明显增高(P<0.05)。结论:SH2B1在人类食管癌中过量表达,并可能与食管癌侵袭和转移密切相关。

哮喘小鼠肺内及内脏感觉传入系统SH2-Bβ的表达

目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统（C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角）的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用.方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只.利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7～T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法（Western blotting）检测肺及C7～T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子（NGF）的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析.结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组（0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029）（P＜0.01）.Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7～T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±0.022.NGF在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关（r=0.651,P＜0.01）.结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7～T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子.

基于S2SH和SOA科技查新管理平台的设计

针对查新工作存在的一些管理问题,提出了一种基于SOA(service-oriented architecture)架构的ExtJS和S2SH(Struts2+Spring+Hibernate)的整合框架。在此基础上设计了一个开放、松耦合的查新工作管理平台,包括功能体系和数据模型。采用Web服务的技术实现该科技查新管理平台,能够辅助查新业务有序开展,对提高查新业务的效率和加强查新业务的管理有明显作用。