2-型猪链球菌保护性抗原RfeA的B细胞表位预测

以2-型猪链球菌（SS2）保护性抗原RfeA推定的氨基酸序列为基础,采用Kyte-Doolittle法分析蛋白的亲水性,Emini法预测蛋白的表面可能性,以及Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法对蛋白二级结构中柔性区域的分析,预测SS2保护性抗原RfeA的B细胞表位。结果表明,推测RfeA的B细胞表位位于RfeA蛋白N-端第21~27、53-60、104~117、140~160区域。用多参数预测SS2保护性抗原RfeA的B细胞表位,为实验研究SS2的多表位疫苗奠定基础。

2-型猪链球菌分泌性保护性抗原RfeA的确认

目的确认RTX家族胞外蛋白A(RTX family exoprotein A,RfeA)为2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的分泌蛋白。方法通过生物信息学软件分析RfeA的氨基酸序列,预测RfeA在SS2中的分布;以纯化的RfeA重组蛋白为免疫原免疫小鼠,制备RfeA鼠多抗血清,间接ELISA检测抗血清效价;以制备的RfeA抗血清为一抗,利用ELISA方法分析RfeA在05ZYH33株培养上清中的分布,通过实验证实生物信息学预测的结果。结果生物信息学软件分析RfeA氨基酸序列,预测RfeA为SS2分泌性蛋白;ELISA方法分析发现RfeA存在于05ZYH33株培养上清中,是SS2分泌性蛋白。结论实验研究结果与生物信息学预测一致,RfeA为SS2分泌性蛋白的确定为进一步研究RfeA的功能以及在SS2致病过程中扮演的角色奠定了基础。

2-型猪链球菌保护性抗原ESA的细胞定位及B细胞表位预测

通过生物信息学方法预测2-型猪链球菌（Streptococcus suis serotype 2,SS2）保护性抗原ESA（epidermal surface antigen,ESA）在SS 2中的分布和B细胞表位,为研究SS2的多表位疫苗奠定基础。以ESA推定的氨基酸序列为基础,通过生物信息学软件对ESA进行信号肽、跨膜序列等分析,然后分别以Kyte-Doolittle法、Emini法和Jameson-Wolf法分析蛋白的亲水性、表面可能性以及抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法分析蛋白二级结构中柔性区域,进而预测ESA的B细胞表位。结果表明,ESA为跨膜蛋白,B细胞表位位于N-端第30~35、59~64、178~185、245~253区域。多参数或多个软件联合使用能预测SS2保护性抗原ESA的B细胞表位和细胞定位,为实验研究提供帮助,大大缩减实验时间。

2-型猪链球菌谷氨酸脱氢酶的表达和免疫学活性研究

目的表达2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的谷氨酸脱氢酶(glutamatedehydrogenase,GDH),研究其免疫学活性,探讨其作为疫苗候选分子的可能性。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从SS2临床分离株05ZYH33的基因组DNA中扩增出gdh基因片段,插入表达载体pET-30b(+)中,构建重组表达载体pET30b-gdh。该载体经酶切鉴定和DNA测序鉴定后,转化E.coli Rosetta,IPTG诱导表达,镍离子亲和层析纯化重组蛋白。蛋白免疫印迹(western blot)证实目的蛋白的分子量和免疫反应原性。重组蛋白免疫小鼠后收集多抗血清,间接原位末端标记法(ELISA)检测其效价。结果 PCR扩增的gdh基因长度约为1300碱基对(bp),所构建重组表达载体酶切鉴定无误、测序证实碱基序列100%正确且保持正确读框。IPTG诱导表达,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的14.2%。亲和层析获得目的蛋白,纯度达80%以上。Western blot检测证实该蛋白能与感染SS2的患者血清发生阳性反应。重组蛋白免疫小鼠后血清效价达1∶25600以上。结论成功构建了表达载体pET30b-gdh,可在工程菌E.coli Rosetta中表达;表达蛋白具有良好的免疫学活性。

用生物信息学方法预测2-型猪链球菌保护性抗原IBP的B细胞表位

目的用多参数预测SS2保护性抗原IBP的B细胞表位。方法以2-型猪链球菌(SS2)保护性抗原IBP推定的氨基酸序列为基础,采用Kyte-Doolittle法分析蛋白质的亲水性,Emini法预测蛋白质的表面可能性,Jameson-Wolf法预测蛋白质的抗原指数;辅以Garnier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法对IBP蛋白二级结构中柔性区域的分析,预测IBP的B细胞表位。结果结果表明,推测IBP的B细胞表位位于IBP蛋白N-端第14～18、95～108、133～137、172～179、191～198、205～208区域。结论通过预测SS2保护性抗原IBP的B细胞表位,可望为实验研究SS2的多表位疫苗奠定基础。