2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物在白及质量控制中的应用研究

目的 建立以2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物为对照的白及质量控制方法。方法 采用ZORBAX Eclipse Plus C18(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,流动相为0.05%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,柱温35℃,体积流量0.15 mL/min,进样体积为2μL,检测波长为220 nm。分别采用对照品法和对照提取物法测定17批白及饮片中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷(2-O-葡萄糖基白及苷)、1-[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(手参苷Ⅰ)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸-2-(6-O-乙酰基)葡萄糖苷(手参苷Ⅲ)、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(白及苷)4个成分的含量,并进行比较。结果 2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物中2-O-葡萄糖基白及苷、手参苷Ⅰ、手参苷Ⅲ、白及苷线性关系良好(r≥0.999 9),进样精密度RSD值在0.001%~0.58%,重复性RSD值在0.27%~0.53%,4种成分的加样回收率在98.42%~101.53%,样品溶液在24 h内各成分稳定性良好。两种方法测定结果进行t检验,P>0.05,说明两种方法无显著差异,两种检测方法结果具备一致性。结论 验证了2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类对照提取物可代替单体对照品的可行性,可应用于白及及其制剂的质量控制研究。

2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类化合物在兰科植物中的分布特点及药理活性

目的主要介绍2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类化合物在兰科植物中的分布特点及其药理活性。方法查阅国内外资料进行综述。结果该类成分主要分布于兰科兰亚科植物中;分离得到该类成分最多的4个属均属于兰科兰族下的兰亚族;其中4个化合物具有药理活性报道。结论该类化合物的分布特点可为此类成分的获得、扩大药用植物资源提供参考。

基于液质联用法对白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类成分的定性定量分析

目的:建立白及中2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类成分的UPLC-ESI-Q/TOF-MS快速识别鉴定方法,以及主成分militarine的UPLC测定方法。方法:液质联用方法采用Waters Acquity UPLC BEH C18(1.7μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱,乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,检测器为高分辨四极杆飞行时间质谱,ESI离子源,MSE(E代表碰撞能量)采集方式,采集质量数范围m/z 100~1000。含量测定采用UPLC法,以乙腈-0.1%磷酸溶液(22:78)为流动相;检测波长为223 nm;柱温:35℃;流速:0.2 mL·min-1。结果:利用建立的白及化学成分数据库,结合2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类成分的诊断离子、准确分子量、质谱碎片及对照品信息,快速分析鉴定21个目标化合物。主成分militarine在19.0590~381.1808μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9986)。加样回收率为100.9%,RSD为1.5%。36批白及中militarine的含量范围是1.5%~4.6%。结论:UPLC-Q/TOF-MS法能快速、准确地鉴定白及中的化学成分,为其药效物质基础研究提供科学依据。建立的UPLC含量测定方法操作简便、准确可靠,可用于白及的质量控制。

HPLC测定不同产地白及药材中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量

目的建立测定不同产地白及药材中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯含量的HPLC方法 ;对其含量采用均数法进行聚类分析。方法采用HPLC法,以Waters SunFire C18(4.6mm×250 mm,5μm)为色谱柱,Diamonsil C18保护柱,以乙腈和水为流动相,梯度洗脱,流速为1mL·min-1,检测波长270 nm,柱温为30℃,测定不同产地白及中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量;对产地和1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯含量之间的关系用系统聚类分析法分析。结果测定17批不同产地的白及药材,1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量差别明显;系统组内平均联接聚类分析结果显示,含量高低有明显的地域性。结论本文建立的含量测定方法简便、准确、重复性好,可用于控制白及药材的质量。

紫金透骨喷雾剂中双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯含量测定

目的:建立紫金透骨喷雾剂中白及药材所含双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量测定方法。方法:采用HPLC法,以Symmetry C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(37∶63),检测波长223 nm,分别进行了精密度、中间精密度、准确度和耐用性等试验。结果:双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯进样浓度在0.027～0.43 g/L范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为97.48%,RSD为1.1%(n=9)。结论:所建立的检测方法简便、准确、耐用,可用于该制剂的质量控制。

LC-MS/MS法同时测定中药白及中militarine、原儿茶酸和咖啡酸的含量

目的:采用Q-TRAP LC-MS/MS测定中药白及中活性成分militarine、原儿茶酸和咖啡酸的含量。方法:采用Supelco Discovery C-18(150 mm×2.1 mm,3μm)色谱柱,以乙腈和水(含体积比0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速为0.25 ml·min-1,AB Sciex 4000 Q-TRAP型质谱仪多重反应监测(MRM)扫描模式对白及对照药材和白及样品分别进行检测。结果:白及对照药材中militarine、原儿茶酸和咖啡酸的含量分别为1.167 5,0.062 6,0.001 0 mg·g-1.白及供试品药材中militarine、原儿茶酸和咖啡酸的含量分别为0.708 8,0.001 1,0.000 4 mg·g-1(n=3)。结论:该方法简便、准确、重现性好,可用于对中药白及中militarine、原儿茶酸和咖啡酸这三个成分进行定量分析。

基于UPLC-Q-TOF/MS技术分析白及中的化学成分

目的通过建立超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)分析方法,快速鉴定白及中的化学成分。方法采用Waters Acquity UPLC BEH C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱,柱温45℃,流速0.4 mL·min^(-1),进样体积1μL;质谱采用电喷雾(ESI)离子源,通过负离子监测模式和全扫描功能,对白及的化学成分进行鉴定。结果通过在线数据库匹配、质谱峰的裂解规律分析并参考相关文献,共鉴定白及中32个化合物,包括2-异丁基苹果酸葡萄糖氧基苄酯类化合物19个,菲类化合物8个,有机酸类化合物2个,糖苷类化合物2个,糖类化合物1个。其中10个化学成分为潜在的新化合物,5个化学成分在白及属中首次报道。结论UPLC-Q-TOF/MS方法能快速、准确地鉴定白及药材中的化学成分,为白及的药效物质基础及质量控制研究提供了科学依据。

多波长HPLC梯度洗脱法同时测定菠白散中4种成分含量

目的建立同时测定菠白散中肉桂酸、1,4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）、二去氢对叶百部碱和氧化对叶百部碱含量的方法, 方法采用多波长高效液相（ HPLC） 梯度洗脱法,Hypersil C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流速0.9 mL·min^-1,流动相A 为甲醇-乙腈（3,,2）,流动相B 为0.1%磷酸溶液,检测波长λ1 =285 nm（肉桂酸）,λ2 = 223 nm（ militarine）,λ3 = 237 nm（ 二去氢对叶百部碱和氧化对叶百部碱）, 结果肉桂酸在0.014 2-0.284 0 μg（r =0.999 2）、militarine 在0.235 6-4.712 0 μg（r =0.999 7）、二去氢对叶百部碱在0.018 8-0.376 0 μg（r =0.999 5）、氧化对叶百部碱在0.027 4-0.548 0 μg（r =0.999 8） 范围内,均呈良好的线性关系,肉桂酸、militarine、二去氢对叶百部碱和氧化对叶百部碱的平均加样回收率分别为96.92%,98.57%,98.06%,97.66%,RSD（n = 6）分别为0.84%,1.23%,1.24%,0.76%, 结论该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为菠白散的含量控制方法。

白及清肺养胃口服液制备工艺的研究

本研究处方中的白及和酸浆采用正交设计实验,以提取时间、溶剂倍量和提取次数作为考察因素,以白及中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)收率、总多糖收率和总固体物为考察指标,筛选出白及口服液的最佳提取工艺参数。

白及药材的HPLC指纹图谱建立及聚类分析

目的:建立白及药材的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并对样品进行聚类。方法:采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18,流动相为0.1%磷酸溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。以1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯为参照,绘制10批药材样品的HPLC图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2004 A版)进行相似度评价,确定共有峰,并采用SPSS 23.0统计软件对其进行聚类分析。结果:10批药材样品的HPLC图谱有15个共有峰,其中9批相似度均大于0.90;经验证,10批药材样品HPLC图谱与对照指纹图谱具有较好的一致性。10批药材样品可聚为3类,S1、S2、S3、S4、S6、S8、S9、S10聚为第1类,S7聚为第2类,S5为第3类。结论:所建HPLC指纹图谱和聚类分析结果可为白及药材的质量控制提供参考。

白及颗粒质量标准研究

目的建立白及颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对白及颗粒中白及药材进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法测定白及药材中指标性成分1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量,色谱柱为Diamonsil Plus C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶78,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为223 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果白及TLC图中特征斑点清晰,阴性对照无干扰。1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯进样量在0.0834~2.5011μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999,n=7);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0%(n=6);平均加样回收率为101.81%,RSD为0.56%(n=6)。结论所建立的方法操作简便,结果准确,稳定性和重复性均较好,可用于白及颗粒的质量控制。

HPLC法测定胃康灵胶囊中militarine的含量

目的:建立高效液相色谱法测定胃康灵胶囊中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)的含量。方法:采用Waters Sun Fire C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液(22∶78)为流动相,检测波长为223 nm,流速为1.0 m L·min^(-1),柱温为35℃。结果:militarine在0.194 4~3.888 6μg范围内峰面积对进样量线性关系良好(r=0.998 4);回收率(n=6)为100.8%(RSD=1.1%)。通过测定白及药材中militarine的含量,拟定胃康灵胶囊中militarine的含量限度。分析测定38家生产企业211批样品,合格率仅31.8%,不同生产企业样品间测定结果差异显著,同一企业不同批次样品间含量亦差异较大,多数企业存在明显违规生产行为。结论:本研究建立的方法简便、准确、重复性好,极大地提高了现行质量标准,可用于胃康灵胶囊中白及的质量控制。

白及药材的HPLC指纹图谱研究

建立白及指纹图谱标准,并对白及药材进行评价。方法 采用高效液相色谱法(HPLC),流动相:乙腈-0.05%磷酸水溶液,波长:280nm,Thermo C18色谱柱,流速:1ml/min。结果 经过方法验证,建立了白及指纹图谱。对24批次的白及药材进行了分析,确认有12个共有峰,其中22批的相似度大于0.90,其余2批(S12、S23)的相似度也高达0.85,表明24批白及样品HPLC图谱均与对照指纹图谱的一致性较好。结论 建立的HPLC指纹图谱能够为白及药材内在质控的进一步研究提供参考依据。

基于HPLC指纹图谱结合化学计量学的白及与黄花白及辨识研究

目的通过指纹图谱结合化学计量学方法对白及Bletilla striata与黄花白及Bletilla ochracea进行辨识研究。方法采用Shim-pack GIST C_(18)-AQ(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈梯度洗脱,检测波长280nm;体积流量1.0 m L/min;柱温30℃;进样量10μL。采用Chem Pattern TM软件对白及、黄花白及的指纹图谱数据进行分析,并对其进行相似度评价;采用SIMCA14.1软件进行主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘判别分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA),对二者进行定性辨识研究。结果在相似度分析中,45批白及的相似度为0.74~0.97,相似度较好,29批黄花白及的相似度为0.44~0.83,部分黄花白及与白及较为相似;聚类分析与PCA分析结果较为一致,部分样品可分为2类;PLS-DA分析分类效果显著,模型参数Q^(2)为0.80,R^(2)Y为0.85,完全能将两者区分开。通过PLS-DA分析结合VIP值筛选出了影响白及与黄花白及质量差异的8个共有峰,对这8个共有峰进行分析,二者之间除15号峰(militarine)峰面积没有显著性差异外(P>0.05),其余7个共有峰峰面积白及均显著小于黄花白及(P<0.01)。结论HPLC指纹图谱结合化学计量学方法能够实现白及与黄花白及的鉴别,可为白及饮片的质量辨识提供参考。

HPLC测定白及中militarine含量

目的：建立白及药材中双[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量测定方法，为其质量控制提供科学依据。方法：采用HPLC直接测定，色谱柱为Symmetry C18柱，保护柱为SecurityGuard C18柱，流动相为甲醇-水（37：63），检测波长223nm。结果：测定了12批不同产地市售的白及药材，双[4-（β-D-吡喃葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯的含量在1．45％～3．32％。结论：该法方便、快速、准确、重复性好，可以控制该药材的质量。

HPLC同时测定白及中3种成分的含量

目的：建立HPLC同时测定白及中红果酸,gymnosideⅠ,militarine 3种成分的含量。方法：采用Waters Symmetry ShieldTMRP18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相乙腈（A）-0.05%磷酸水（B）梯度洗脱（0~10 min,5%~20%A;10~35min,20%~35%A;35~50 min,35%~100%A）,流速1.0 m L·min-1,检测波长225 nm,柱温25℃。结果：3种成分均能达到基线分离,线性关系良好,加样回收率在95%~105%。结论：该方法专属性强,灵敏度高、重复性好、简单易行,可用于同时测定白及药材中红果酸,gymnosideⅠ,militarine 3种成分的含量,可为白及药材的质量控制提供依据。

紫金透骨喷雾剂的质量控制及稳定性考察

目的:建立紫金透骨喷雾剂的质量控制方法并考察其在加速和室温条件下的稳定性。方法:采用薄层色谱法鉴别紫金透骨喷雾剂中的主要药材;采用气相色谱法测定冰片的含量;采用高效液相色谱法测定双[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基-]2-异丁基苹果酸酯的含量。结果:所采用的薄层色谱法均检出了紫金透骨喷雾剂中的主要药材,冰片在0.135 7～0.814 1 mg·mL-1范围内线性良好(r=0.999 9),militarine在0.027 12～0.434 0 mg·mL-1范围内线性良好(r=0.999 9),且3批紫金透骨喷雾剂中试样品经加速试验3个月和长期试验6个月考察,各项指标均符合质量标准要求。结论:所采用的各项方法均能简单、准确的应用于紫金透骨喷雾剂的质量控制中,且本品稳定性良好。

不同炮制方法对白及中militarine及浸出物含量的影响

目的:测定不同炮制方法对白及药材中militarine及浸出物含量的影响。方法:采用直接切片、煮后切片和蒸后切片等方法对白及进行炮制,采用高效液相色谱法及浸出物含量测定法对白及药材中militarine含量和浸出物含量进行测定。结果:白及药材煮制切片militarine含量2.37%,蒸制切片含量3.09%,直接切片含量1.78%;煮制切片浸出物含量17.88%,蒸制切片含量19.51%,直接切片含量17.72%,可见不同炮制方法对白及药材中militarine含量和浸出物含量有一定的影响。结论:从militarine含量和浸出物含量考察,白及的炮制以蒸法为宜。

Militarine改善慢性脑缺血大鼠认知功能障碍及白质损伤的研究

研究1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine)对慢性脑缺血大鼠认知功能障碍及脑白质损伤的影响。采用永久性双侧颈总动脉结扎建立慢性脑缺血大鼠模型。通过Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力;牢固蓝(luxol fast blue,LFB)染色法检测大鼠胼胝体白质髓鞘的变化;Western blot检测大鼠胼胝体髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达;免疫组织荧光技术检测大鼠胼胝体环核苷酸磷酸二酯酶(2',3'-cyclic-nucleotide 3'-phosphodiesterase,CNPase)阳性细胞的改变。结果显示,militarine可改善慢性脑缺血大鼠在水迷宫实验中的表现,在20 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量下大鼠逃避潜伏期、首次穿越原平台位置时间明显缩短,穿越原平台的次数明显增加。同时,胼胝体白质脱髓鞘现象得到明显改善,MBP表达明显上调,CNPase阳性细胞数量明显增加。提示militarine能够改善慢性脑缺血大鼠的认知功能障碍,减轻脑白质缺血性损伤。