电针联合人脐带间充质干细胞移植对缺血性脑损伤大鼠血脑屏障及腺苷A2A受体、GSK-3β/β-catenin表达的影响

【目的】观察电针百会、风府、双侧肾俞穴联合人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植对缺血性脑损伤大鼠的脑保护作用及机制。【方法】将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、移植组、联合组,每组10只。除正常组,其他各组大鼠建立脑缺血再灌注损伤模型。在造模结束24 h后,移植组大鼠给予0.5 m L 2×10^(6)个hUC-MSCs细胞悬液一次性尾静脉植入,联合组在移植组治疗基础上,给予电针百会穴、风府穴、双侧肾俞穴,每次30 min,每日1次,连续针刺3周。治疗结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察海马组织病理形态,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察脑组织细胞凋亡情况,免疫荧光法检测脑组织腺苷A2A受体(ADORA2A)表达,免疫组织化学法检测脑组织糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,Western Blot法检测脑组织跨膜蛋白闭锁蛋白(Occludin)、胞质附着蛋白(ZO-1)表达。【结果】与正常组比较,模型组脑组织细胞凋亡率升高,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平升高,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05),HE染色结果显示,模型组海马组织结构明显异常;与模型组比较,移植组和联合组大鼠脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05),海马组织病理程度明显减轻;与移植组比较,联合组脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】电针百会、风府、双侧肾俞穴联合hUC-MSCs可改善缺血性脑损伤大鼠血脑屏障,抑制脑组织ADORA2A、GSK-3β表达,提高β-catenin表达,抑制脑组织细胞凋亡,起到脑保护作用,且作用效果优于单纯hUC-MSCs移植。

血清腺苷脱氨酶、铁蛋白、β2-微球蛋白对淋巴瘤患者病情严重程度判断及相关性分析

目的探讨血清腺苷脱氨酶(ADA)、铁蛋白、β2-微球蛋白(β2-MG)对淋巴瘤患者病情严重程度判断及相关性分析。方法选取2022年1月至2022年6月江西省肿瘤医院收治的60例淋巴瘤患者作为观察组,选取60名同期于江西省肿瘤医院进行健康体检且体检结果正常者作为对照组,针对淋巴瘤患者与正常者的血清腺苷脱氨酶(ADA)、铁蛋白、β2-微球蛋白(β2-MG)进行分析,探究其与淋巴瘤之间的相关性。结果观察组的铁蛋白、血清β2-MG、血清ADA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ~Ⅳ期患者机体铁蛋白、血清β2-MG、血清ADA水平呈现随病程分期逐渐递增的趋势,Ⅳ期最高,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman双变量分析结果显示铁蛋白、血清β2-MG、血清ADA均与淋巴瘤病情严重程度关系密切,三种因素均与淋巴病情严重程度呈正相关,即铁蛋白、血清β2-MG、血清ADA指标越高,淋巴瘤病情越严重,患者的健康情况越差。结论淋巴瘤患者病情越严重,机体铁蛋白、血清β2-MG、血清ADA指标越高,并且该种因素与病情之间存在正相关,能够辅助进行淋巴瘤病情严重程度的诊断,基于其指标水平变化明确患者的预后情况,具有显著的应用价值。

2-氯化腺苷通过调节戊四氮点燃癫痫小鼠脑组织P糖蛋白水平减轻组织脑损伤

目的观察2-氯化腺苷(2-CAdo)对戊四氮(PTZ)点燃癫痫小鼠脑内P糖蛋白(PGP)表达的影响。方法随机将C57BL/6小鼠40只,分为对照组(n=8)、PTZ组(n=16)和2-CAdo组(n=16),PTZ组和2-CAdo组小鼠腹腔注射30 mg/(kg·d)PTZ制备慢性点燃癫痫模型,对照组腹腔注射等量生理盐水,观察小鼠在PTZ点燃过程中癫痫发作情况(点燃率、点燃潜伏时间、发作开始时间和发作持续时间)。癫痫模型成功后,2-CAdo组小鼠连续腹腔注射2-CAdo[0.6 mg/(kg·d)]2周,对照组和PTZ组腹腔注射等量生理盐水。2周后将小鼠全部处死,采用HE染色观察小鼠大脑皮层和海马区的形态,Western blot法检测小鼠大脑皮层和海马中PGP水平,免疫组织化学染色检测PGP在小鼠大脑皮层和海马中的表达和定位。结果癫痫发作时,小鼠表现出全身颤抖、毛发竖起,精神萎靡、食欲不振、冲撞笼栏等异常行为。HE染色结果显示,2-CAdo组小鼠大脑皮层及海马脑组织损伤程度较PTZ组轻。在小鼠大脑皮层中,2-CAdo组PGP蛋白表达量明显低于对照组和PTZ组;而在海马中组织中,2-CAdo组和PTZ组PGP蛋白表达量又显著性高于对照组,尤其以2-CAdo组最为明显。结论 2-CAdo能够减轻癫痫所致的脑组织损伤,并且能下调大脑皮层PGP蛋白表达和上调海马区PGP蛋白的表达。

环状RNA-胞裂蛋白2/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1分子轴在重症急性胰腺炎中的作用及机制研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-胞裂蛋白2(SEPT2)/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)分子轴在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法选取2019年12月至2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的46例SAP患者作为重症组;并选取本院同期收治的41例轻症急性胰腺炎(MAP)患者作为轻症组;另选取本院同期35名健康体检者作为对照组。3组均采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定血清circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量,采用急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评估病情严重程度;采用重组慢病毒包装合成有效感染序列sh-SEPT2(干扰组)与过表达序列oe-SEPT2(过表达组)建立动物模型,采用酶联免疫吸附试验测定大鼠生化指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D乳酸及二胺氧化酶(DAO)],采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1及细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达。比较3组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分,采用Pearson相关性分析SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分的相关性;比较干扰组与过表达组大鼠苏木精-伊红染色法(HE)结果、肠黏膜损伤评分、炎症因子水平及cir-cRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量。结果重症组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分均高于轻症组和对照组,且轻症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分均呈正相关(r>0,P<0.05)。干扰组HE染色下胰岛细胞界限清晰,胰岛丰富,胞浆丰富,形态完整;过表达组大鼠胰岛细胞界限不清,胰岛数量较少,细胞形态不规则,细胞体积较大,边缘不齐;干扰组胰腺损伤评分为(2.58±0.16)分,低于过表达组的(3.95±0.53)分,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组IL-1β、IL-18、TNF-α、D乳酸及DAO水平均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1 mRNA表达及细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARP-1通过靶向作用于circRNA-SEPT2/miR-150-5p参与SAP的发生与发展,抑制circRNA-SEPT2表达,可减轻SAP肠黏膜屏障损伤,能为SAP治疗提供新的靶点。

蝉花中N^(6)-(2-羟乙基)-腺苷提取工艺优化及结构鉴定

在单因素实验基础上,采用响应面法考察液料比、水浴温度、水浴时间对提取物中N6-(2-羟乙基)-腺苷[N^(6)-(2-hydroxyethyl) adenosine,HEA]含量的影响,优化出HEA的最佳提取工艺:以超纯水为溶剂、液料比118∶1、超声时间25 min、水浴温度24℃、水浴时间3.8 h,获得提取物中HEA含量为(0.836±0.030) mg·g^(-1)。采用大孔树脂、酸性氧化铝层析柱和半制备高效液相色谱仪(semi preparative high performance liquid chromatography,SP-HPLC)分离纯化提取液中HEA,采用核磁共振及电喷雾电离质谱(electrospray ionization mass spectrometry,ESI-MS)和核磁共振氢谱(proton nuclear magnetic resonance spectroscopy,^(1)H NMR)鉴定分离出的物质为HEA,经高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)分析其纯度为99.32%。

N^(6)-甲基腺苷结合蛋白YTHDC2在肿瘤中的研究进展

N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是真核生物RNA上最常见的可逆甲基化修饰,可影响相应RNA的加工和降解过程,进而调控细胞的生长、发育、分化和死亡等多种病理生理过程[1]。研究已明确,m^(6)A修饰是由甲基转移酶、去甲基转移酶和甲基结合蛋白(又称“redear”)共同调控的可逆修饰,其中甲基结合蛋白是m^(6)A修饰发挥生物学功能最重要的介导者[2]。

FTO介导m6A修饰的PRKD2调节SIRT1/HIF-1α通路抑制糖尿病肾病足细胞损伤的机制研究

目的探究脂肪含量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)和丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白激酶D2(serine-threonine kinase protein kinase D2,PRKD2)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)进展中的调控作用和调节机制。方法采用35 mmol/L葡萄糖对足细胞(MPC5细胞)进行高糖刺激24h构建DKD体外模型。采用FTO过表达载体(pcDNA-FTO)和PRKD2过表达载体(pcDNA-PRKD2),或空载体(vector)转染高糖诱导的MPC5细胞。通过RT-qPCR检测FTO和PRKD2过表达效率;MeRIP检测PRKD2 mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平;ELISA检测Caspase-3活性、IL-6,TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)分泌量;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot评估FTO和PRKD2蛋白水平,以及SIRT1/HIF-1α通路关键蛋白表达水平;Pearson分析FTO和PRKD2水平的相关性。结果与无高糖诱导对照组比较,高糖诱导的足细胞中FTO蛋白(0.51±0.04 vs 1.00±0.03)和PRKD2蛋白(0.45±0.03 vs 1.01±0.04)水平显著下调,差异具有统计学意义(t=13.17,16.76,均P<0.001)。高糖诱导的足细胞中FTO蛋白水平和PRKD2蛋白水平呈正相关(r2=0.7051,P<0.001)。与vector组相比,pcDNA-FTO组PRKD2 mRNA的m6A水平(0.56±0.09 vs1.01±0.13)降低,PRKD2 mRNA水平(3.16±0.14 vs 1.03±0.02)显著升高,差异具有统计学意义(t=51.37,11.82,均P<0.001)。与control组(IL-6:512.76±61.85 pg/ml,TNF-α:28.17±2.83 pg/ml,MCP-1:157.31±17.69 pg/ml)和vector组(IL-6:498.41±87.51 pg/ml,TNF-α:26.35±5.47 pg/ml,MCP-1:165.52±16.87 pg/ml)比较,pcDNA-PRKD2组IL-6(301.86±21.85 pg/ml),TNF-α(11.06±4.12 pg/ml),MCP-1分泌量(81.45±9.03pg/ml)显著减少,差异具有统计学意义(F=7.51,10.47,61.97,均P<0.01)。与control组(Caspase-3:689.65±79.5U/L,细胞凋亡率:22.31%±2.69%)和vector组(Caspase-3:715.91±113.58 U/L,细胞凋亡率:21.07%±3.28%)比较,pcDNA-PRKD2组Caspase-3活性(437.64±104.76 U/L)和细胞凋亡率(8.41%±3.15%)下降,差异具有统计学意义(F=2.35,79.13,均P<0.01)。与control组(SIRT1:1.01±0.05,HIF-1α:1.03±0.07)和vector组(SIRT1:0.97±0.05,HIF-1α:1.02±0.03)相比,pcDNA-PRKD2组SIRT1蛋白(3.51±0.15)水平升高,HIF-1α蛋白(0.37±0.07)水平降低,差异具有统计学意义(F=31.54,8.31,均P<0.01)。结论FTO介导m6A修饰的PRKD2通过SIRT1/HIF-1α通路抑制高糖诱导的足细胞炎症反应和细胞凋亡。

腺苷A1受体激动剂2-氯化腺苷抑制异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚的作用及机制

目的通过观察腺苷A1受体激动剂2-氯化腺苷(2-CADO)对异丙肾上腺素所致大鼠心肌肥厚的抑制作用及能量代谢的改变,探讨腺苷A1受体激动剂对肥厚心肌能量代谢的调节作用及其可能的作用机制。方法大剂量异丙肾上腺素皮下注射建立大鼠心肌肥厚模型。SD大鼠40只,雌雄不限,分为空白对照组、肥厚模型组、2-CADO组[2-氯化腺苷0.6 mg/(kg.d)腹腔注射]、普萘洛尔组[28 mg/(kg.d)普萘洛尔灌胃],每组10只。造模完毕第2天给药,连续8周。检测大鼠全心质量指数(HMI)、左心质量指数(LVMI);取左心室组织进行Masson染色,观察细胞横径(TDM)改变;碱水解法进行羟脯氨酸(Hyp)含量测定;紫外分光光度法检测心肌组织乳酸(LA)和游离脂肪酸(FFA)含量;激光共聚焦显微镜定量检测线粒体膜电位(MMP)。结果与空白对照组相比,肥厚模型组HMI、LVMI显著上升,心肌组织形态发生肥厚样改变;Hyp、LA和FFA含量显著升高,MMP下降了44%。与肥厚模型组相比,2-CADO组HMI、LVMI下降,TDM明显降低,Hyp、LA和FFA含量显著降低,MMP上升了50%。结论 2-CADO可以抑制异丙肾上腺素导致的心肌肥厚,其机制可能与改善肥厚心肌的能量代谢有关。

老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达变化及与预后的关系

目的 探讨N6-甲基腺苷RNA结合蛋白1(YTHDF1)、E2F8转录因子8(E2F8)蛋白表达与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。方法 选取46例老年乳腺癌患者,术中取癌组织和癌旁组织,用免疫组化染色法检测组织中YTHDF1、E2F8蛋白表达。随访患者并记录随访期间肿瘤复发、转移及死亡时间。用Spearman秩相关分析乳腺癌组织YTHDF1与E2F8蛋白表达的相关性;Kaplan-Meier法分析YTHDF1、E2F8蛋白表达与患者无进展生存预后的关系;Cox回归分析老年乳腺癌患者无进展生存预后的影响因素。结果 乳腺癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05),二者蛋白表达呈正相关(r=0.706,P<0.05)。TNM分期Ⅱ期、肿瘤最大径>2 cm、合并淋巴结转移老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白阳性表达率高于TNM分期Ⅰ期、肿瘤最大径≤2 cm、无淋巴结转移的癌组织(P均<0.05)。32例患者发生肿瘤进展,YTHDF1、E2F8蛋白表达阳性患者5年无进展生存率低于其蛋白表达阴性患者(P均<0.05)。TNM分期Ⅱ期、合并淋巴结转移、YTHDF1蛋白阳性表达、E2F8蛋白阳性表达是老年乳腺癌患者无进展生存预后的独立危险因素(P均<0.05)。结论 老年乳腺癌患者癌组织中YTHDF1、E2F8蛋白高表达,且与老年乳腺癌患者肿瘤TNM分期、肿瘤最大径、淋巴结转移有关,是患者无进展生存预后的独立危险因素。

蛹虫草子实体中N6-(2-羟乙基)-腺苷的分离纯化及抗肿瘤作用

为明确蛹虫草(Cordyceps militaris)核苷类化合物HPLC图谱中未知峰化学成分,运用NKA-II大孔吸附树脂、C-18柱分离纯化和结晶等方法,从蛹虫草子实体水提物中得到了未知峰的结晶粉末,通过1 HNMR,13 CNMR、ESI-MS等波谱分析,鉴定出化合物为N6-(2-羟乙基)-腺苷。该化合物对K562肿瘤细胞具有抑制作用,半数抑制有效浓度为0.1μmol/mL。

2-氯腺苷对大鼠脊髓损伤后脊髓血流量和神经功能的影响

目的 :观察腺苷受体激动剂 2 -氯腺苷对大鼠脊髓损伤后神经功能和脊髓血流量的影响 ,探讨腺苷在继发性脊髓损伤中的作用。 方法 :脊髓腹侧压迫法造成 T1 3 脊髓损伤 ,用激光多普勒血流仪检测损伤前后的脊髓血流量 ,治疗组于伤前 15min蛛网膜下腔注射不同剂量的非特异性腺苷受体激动剂 2 -氯腺苷 (2 - CADO) ,对照组注射同量的生理盐水。伤后 2 4h观察神经功能评分、倾斜平面临界角和组织学变化。 结果 :脊髓损伤后脊髓血流量立即下降 ,而治疗组较对照组显著改善 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。大剂量 (5 0 0μmol/ L )的 2 - CADO能显著改善损伤后的神经功能 ,而小剂量 (5 0μmol/ L )则对脊髓损伤无明显神经保护作用 ,大小剂量的作用有显著差异 (P<0 .0 1)。 结论 :腺苷通过改善脊髓血流量 ,从而对脊髓损伤起保护作用。

异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A和氯化锂对大鼠电休克后学习记忆及海马内谷氨酸含量的影响

目的观察异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A(PP-2A)和氯化锂对电休克(ECT)后嗅球切除抑郁模型大鼠学习记忆和海马内谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法按随机单位组设2个干预因素,即ECT干预(2水平:无处置、施行1疗程ECT)和药物干预(5水平:海马CA1区分别微量注射生理盐水、异丙酚、人参皂苷Rg-1、PP-2A、氯化锂,20 g/L)的所有组合(2×5析因设计)。全部ECT处置结束24 h内开始Morris水迷宫检测,高效液相色谱法检测Glu在海马内的浓度。结果单独使用异丙酚或ECT均可造成学习记忆障碍,而二者联合使用则会缓解ECT后的学习记忆障碍;人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂对学习记忆无明显影响,但与ECT合用则可改善ECT后的学习记忆;ECT干预与药物干预存在交互作用。ECT可明显增加海马中Glu浓度;异丙酚和人参皂苷Rg-1在ECT前后均可减少Glu浓度;且ECT干预与药物干预存在交互作用。PP-2A和氯化锂在ECT前后对Glu浓度无明显影响。结论 ECT可使海马Glu浓度升高,导致学习记忆障碍;异丙酚与人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂均可改善ECT后的学习记忆;前两者与降低海马中Glu浓度有关,后两者与此无关。

VEGF、IL-33、ADA2以及ACE联合检测对胸腔积液性质的诊断价值

目的探讨血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、白细胞介素-33(Interleukin 33,IL-33)、腺苷脱氨酶2(Adenosine Deaminase 2,ADA2)以及血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)联合检测对胸腔积液性质的诊断价值。方法选取2018年1月—2021年1月在大荔县医院行胸腔穿刺抽液的100例胸腔积液患者进行回顾性分析,其中病理诊断为恶性患者58例(恶性组),病理诊断为良性患者42例(良性组),另外选取同期在大荔县医院根据Light诊断标准诊断的20例非胸腔积液患者为对照组,对所有患者的胸腔积液进检测,检测指标为血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-33(IL-33)、腺苷脱氨酶2(ADA2)和血管紧张素转换酶(ACE),分析其表达情况;并分析单独检测这4项指标以及联合检测这4项指标对诊断恶性胸腔积液的效果。结果三组患者胸腔积液中VEGF、IL-33、ADA2和ACE的表达水平比较,其中,检测出VEGF、ADA2、IL-33、ACE在恶性组中具有更高的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。诊断胸腔积液性质使用4项指标联合诊断的效果比各指标单独诊断的效果更高,其中灵敏度、特异度和准确度均升高(P<0.05)。受试者操作特征(ROC)曲线分析显示胸腔积液VEGF、IL-33、ADA2、ACE与4项指标联合检测对恶性胸腔积液的诊断曲线下面积为0.810、0.780、0.760、0.750、0.855。结论良、恶性胸腔积液患者中的VEGF、IL-33、ADA2和ACE水平具有较大的差异,VEGF、IL-33、ADA2和ACE联合检测对胸腔积液性质的诊断价值明显高于单项指标。

腺苷受体激动剂对致痫大鼠海马神经细胞bcl-2,Bax基因表达的影响

目的 观察腺苷A1受体激动剂 2 氯化腺苷 (2 CAdo)对马桑内酯致痫大鼠海马神经细胞bcl 2 ,Bax基因表达的影响。方法 采用马桑内酯诱导癫痫发作模型 ,通过免疫组织化学方法检测bcl 2 ,Bax蛋白来观察大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的动态变化及 2 CAdo对其的影响。结果 海马CA1区癫痫发作后 2 4hbcl 2表达量增多 ,4 8h明显下降 ,72h仅有少量表达 ,7天时其表达量再度升高。而Bax表达则在癫痫发作 2 4h开始增多 ,4 8h显著增多 ,72h表达达高峰 ,之后逐渐减少 ,7天表达量最少。给予 2 CAdo组各相应时间点bcl 2表达量较对照组明显增高 (P<0 .0 5 ) ,Bax表达量较对照组明显减少 (P <0 .0 5 ) ,经统计学处理均有显著性差异。结论 2 CAdo减少癫痫发作后海马神经细胞的凋亡 。

腺苷、白介素-1及茶碱对哮喘患者外周血单核细胞A_2腺苷受体mRNA表达的影响

目的 通过研究腺苷、白介素 (IL ) - 1、茶碱对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMCs)表达 A2 a及A2 b腺苷受体 (A2 a AR及 A2 b AR) m RNA的影响 ,探讨 A2 a AR及 A2 b AR在哮喘发病中的作用 ,为临床使用茶碱提供理论依据。方法 11例正常人及哮喘患者 PBMCs经 Ficoll液分离 ,分对照组、腺苷组、腺苷 +IL- 1组及腺苷 +茶碱4组 ,体外培养 18小时 ,收集细胞 ,采用逆转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)法和图象分析半定量法检测 A2 a AR及 A2 bAR m RNA表达。结果 正常人及哮喘患者各组 PBMCs表达 A2 a AR m RNA无明显差异 (P>0 .0 5 )。哮喘患者PBMCs A2 b AR m RNA表达较正常人增加 (P<0 .0 1) ;腺苷、IL- 1促进哮喘患者 PBMCs表达 A2 b AR m RNA(P<0 .0 5 ) ;茶碱对正常人及哮喘患者 PBMCs表达 A2 b AR m RNA均有抑制作用 (P<0 .0 1)。腺苷及 IL- 1对哮喘患者PBMCs A2 b AR m RNA表达的影响与血清 TIg E水平呈正相关 (P<0 .0 5 ) ,与 FEV1%呈负相关 P<0 .0 5 )。结论 哮喘患者 PBMCs表达 A2 b AR m RNA增加 ,腺苷及 IL- 1促进其表达 ,且与患者机体过敏状态及气道阻塞程度相关 ,茶碱能抑制 A2 b AR m RNA表达 ;腺苷、IL- 1及茶碱对 PBMCs表达 A2 a AR m

塞来昔布对戊四氮点燃腺苷A1受体敲除小鼠癫痫发作及PGP、COX-2表达的影响

目的观察塞来昔布对戊四氮(PTZ)点燃腺苷A1受体敲除小鼠癫痫发作及脑内PGP、COX-2表达的影响,分析COX-2与癫痫发作的关系,探讨COX-2与癫痫耐药性产生的相关性及其可能机制。方法腺苷A1受体敲除小鼠50只。随机分为:对照组,10只,不给予PTZ点燃;非干预组,20只,PTZ点燃前30min腹腔注射等量生理盐水,再分为非干预24h亚组及非干预30d亚组,各10只;干预组,20只,PTZ点燃前30min腹腔注射塞来昔布溶液(10mg/kg),再分为干预24h亚组及干预30d亚组,各10只。观察各组小鼠癫痫发作情况(点燃潜伏时间、发作开始时间、发作持续时间);采用RT-PCR法、免疫荧光组织化学法观察各组(亚组)小鼠大脑皮层和海马PGP、COX-2的表达情况。结果干预组点燃潜伏时间、发作开始时间长于非干预组(均P<0.05),发作持续时间短于非干预组(P<0.05)。点燃后24h,非干预组小鼠大脑皮层和海马PGP、COX-2mRNA及蛋白表达高于对照组(均P<0.05),干预组与对照组比较差异无统计学意义;点燃后30d,两实验组小鼠大脑皮层和海马PGP、COX-2mRNA及蛋白的表达显著高于对照组及24h亚组(均P<0.05);PTZ点燃后同一时间点(点燃后24h、点燃后30d)干预组PGP、COX-2mRNA及蛋白的表达均显著低于非干预组(均P<0.05)。结论 COX-2与难治性癫痫有着密切关系,塞来昔布很可能可减轻难治性癫痫早期痫性发作;同时干预腺苷系统及COX-2炎性反应通路可能成为难治性癫痫新的治疗方向。

雌、孕激素通过腺苷A_(2B)R通路调节JEG-3绒癌细胞系上调MMP-2的表达

目的:观察雌、孕激素对人绒癌细胞系JEG-3腺苷受体表达的影响,探讨它对JEG-3侵袭性的影响。方法:JEG-3细胞在含雌、孕激素环境中培养24h,设MRS1706(A2BR阻断剂)干预组及空白对照组;用明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达,RT-PCR技术检测JEG-3细胞腺苷受体mRNA水平。结果:RT-PCR结果显示,JEG-3细胞表达腺苷A1R、A2AR及A2BR3个亚型,未检测到A3R的表达;雌激素和(或)孕激素处理组A2BRmRNA含量显著高于对照组(P<0.05);明胶酶谱检测发现雌、孕激素联合处理显著上调JEG-3细胞MMP-2的分泌水平(P<0.05),但对MMP-9无显著影响;阻断A2BR信号途径显著下调JEG-3MMP-2表达,并能抑制雌、孕激素对MMP-2的上调效应(P<0.05)。结论:雌孕激素能改变JEG-3绒癌细胞腺苷受体的表达模式,呈A2BR优势表达,A2BR信号通路参与雌孕激素对JEG-3细胞侵袭性的调节。

一种合成2-巯基腺苷的新方法

报道了一种合成重要的核苷药物中间体2-巯基腺苷的新方法。以2,6-二氯嘌呤和四乙酰核糖为原料,经过缩合、氨解得到2-氯腺苷,继而以DMF为溶剂,和商品化的固体Na2S在90℃反应10 h,以3步和77%的总收率得到标题化合物。考查反应溶剂、原料配比及反应规模对收率的影响。该方法避免了传统方法中需要新制Na2S的苛刻条件,原料廉价易得,且反应规模扩大至100 g时,收率没有降低。

细脚棒束孢E3菌株产N^6-(2-羟乙基)腺苷的培养基及前体物筛选

为研究有利于E3菌株产N6-(2-羟乙基)腺苷[N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine,HEA]的培养基组分、前体物及氨基酸,以查氏培养基作为基础培养基,液体静置发酵,分别对碳氮源、无机盐、前体物和氨基酸进行筛选,结果表明:碳、氮源最好的是淀粉和(NH4)2HPO4;无机盐只有钾盐能促进菌株产生HEA,效果最好的是KH2PO4;前体物和氨基酸中腺苷和腺嘌呤促进菌株累积HEA能力相同,精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、组氨酸、色氨酸、L-谷氨酸和丝氨酸等均能促进菌株产HEA,精氨酸效果最好,菌丝体中HEA含量达2068.21±55.34μg/g,HEA产量达13.10±1.48mg/L。

细脚棒束孢E3菌株产N6-(2-羟乙基)腺苷的液体发酵条件优化

以N6-(2-羟乙基)腺苷[N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine,HEA]的产量为评价指标,查氏培养基为基础培养基,分别筛选液体静置发酵的光照、温度、时间、培养基初始pH、装液量和接种量,结果表明:有利于细脚棒束孢(Isaria tenuipes)E3菌株产HEA的发酵条件为黑暗或荧光、黄光,培养温度为25~28℃,培养时间为110d,培养基的初始pH为6.0~7.0,装液量为50%,接种量为2.5%。