建立检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2的mRNA相对表达水平的RT-qPCR方法

目的本研究旨在建立一种实时荧光定量PCR方法,用于检测猕猴三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate-binding cassette transporter protein G2,ABCG2)mRNA的基因转录水平。方法使用NCBI上GenBank数据库猕猴(Macaca mulatta)的ABCG2核苷酸序列号NM_001032919.1及内参GAPDH核苷酸序列号NM_001195426.1,借助Primer premier 5.0软件设计PCR引物。提取猕猴新鲜肾组织的总RNA,并反转录合成cDNA。接着,利用PCR引物进行实时荧光定量PCR扩增,并根据反应体系中荧光的变化情况定量分析ABCG2的mRNA相对表达水平。结果PCR产物测序结果显示,扩增的ABCG2和GAPDH核苷酸序列与NCBI上猕猴的序列同源性分别为90.91%和91.14%。ABCG2和GAPDH的扩增效率均达到80%~120%,实时荧光定量PCR标准曲线的熔解曲线为单峰,R2接近1。结论本研究建立的检测猕猴ABCG2 mRNA实时荧光定量检测方法,为研究高尿酸血症的发病机制以及新药开发奠定基础。

2-甲硫基三磷酸腺苷对心力衰竭兔心室电生理的影响

目的观察2-甲硫基三磷酸腺苷(2-MeS ATP)对充血性心力衰竭(CHF)心室电生理的影响。方法 45只雄性新西兰大耳白兔分为对照组、CHF组和2-MeS ATP组。CHF组和2-MeS ATP组均行CHF模型制备。CHF模型制备是经兔耳缘静脉注射异丙肾上腺素(每天每公斤体重0.3 mg,连续注射3周)诱导。喂养6个月后。记录在体心脏左心室单相动作电位(MAP)和程控以及短阵快速刺激方法观察静息膜电位(RMP)、动作电位幅度(APA)、最大上升速率(V_(max))、复极化到20%和50%以及90%时程(APD_(20)、APD_(50)、APD_(90))以及有效不应期(ERP)和室性心律失常诱发率等指标。2-MeS ATP组于CHF免静脉滴注2-MeS ATP(10 mg/kg)20 min,然后维持静脉滴注过程中完成上述指标检测。酶解法分离各组单个心室肌细胞全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞瞬时外向钾电流(I_(to)),以各自指令电位为横坐标,相对应的电流密度为纵坐标,绘制电流-电压(I-V)曲线。2-MeS ATP组分离单个心室肌细胞后用含有2-MeS ATP(25μmol/L)的细胞外液灌流CHF心室肌细胞10 min完成上述试验。结果最后各组均入选10只兔。与对照组比较,CHF组RMP和APA明显降低,V_(max)减慢,APD均显著延长(P均<0.05);与CHF组比较,2-MeS ATP组RMP和APA增加,V_(max)增快,各APD都显著缩短(P均<0.05)。CHF组较对照组ERP显著延长,与APD_(90)的比值严重降低,诱发室性心律失常的刺激周长(BCL)明显增加,室性心律失常的诱发率上升,持续时间更长(P均<0.01);而2-MeS ATP组较CHF组ERP明显缩短,和APD_(90)的比值显著增加,被诱发室性心律失常的BCL严重缩短,室性心律失常的诱发率和持续时间均降低(P均<0.01)。与CHF组比较,2-MeS ATP组I_(to)的电流密度增加,当钳制电位为+50 mV时,2-MeS ATP能够使I_(to)的电流密度由CHF组的(7.94±3.53)pA/pF增加到(11.79±4.51)pA/pF(P<0.01),2-MeS ATP组较CHF组心室肌细胞I_(to)的I-V曲线明显上抬,接近对照组。结论 2-MeSATP可以使CHF心肌APD缩短,室性心律失常的易感性降低,起到抗CHF后室性心律失常作用。

三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2与痛风病关联的病理机制研究进展

痛风病是指与高尿酸血症、尿酸盐沉积(关节、肾脏)等尿酸代谢紊乱密切相关的进展性代谢疾病,根据其病理进展特点和临床表现,其病程可分为高尿酸血症阶段、尿酸盐沉积阶段、痛风性炎症阶段。三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)是高通量的尿酸转运体,既参与了机体尿酸外排的肠-肾途径,又与痛风性炎症密切相关。通过切入ABCG2,对痛风病病理机制研究进展进行综述,以期为临床痛风病的深入研究及防治提供新的见解。

金属有机框架Cu@Sc-MOF纳米酶对5'-三磷酸腺苷的比色/荧光检测

通过溶剂热法制备了一种铜/钪金属有机框架(Cu@Sc-MOF)纳米酶,在H2O2存在下,Cu@Sc-MOF可催化氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)得到蓝色氧化产物oxTMB,并在652 nm处产生特征吸收峰。同样,Cu@Sc-MOF也可氧化邻苯二胺(OPD)生成2-氨基吩嗪(DAP),并在570 nm产生特征荧光发射峰(激发波长为390 nm)。由于5’-三磷酸腺苷(ATP)与Cu2+络合,抑制了Cu@Sc-MOF的催化活性,使得652 nm处的吸光度和570 nm处的荧光强度减弱,基于Cu@Sc-MOF的类过氧化物酶活性,构建了一种用于检测ATP的比色/荧光双模式光谱法。比色和荧光分析法的线性范围分别为2.50~40.00μmol/L和1.00~22.50μmol/L,检出限(LOD)分别为0.60和0.27μmol/L。将上述比色/荧光双模式分析法用于肝癌细胞HepG2细胞裂解液中ATP的检测,加标回收率分别为92.0%~101%和93.2%~97.9%,具有良好的应用前景。

癫痫132例外周血三磷酸腺苷结合盒转运子A7、髓样细胞触发受体2的水平及临床意义

目的探究癫痫病人外周血中三磷酸腺苷结合盒转运子A7(ABCA7)、髓样细胞触发受体2(TREM2)的表达水平及与认知功能的关系。方法选取商丘市中心医院2017年6月至2021年7月收治的132例癫痫病人为研究对象,根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)得分将癫痫病人分为两组,认知功能正常组(MoCA≥26分,60例)和认知功能障碍组(MoCA 0~25分,72例)。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清ABCA7、TREM2水平;Spearman法分析相关性、logistic回归分析影响因素、受试者操作特征曲线(ROC曲线)评估预测价值。结果相较于认知功能正常组,认知功能障碍组血清ABCA7[(1.17±0.26)μg/L比(1.53±0.37)μg/L]水平升高,TREM2[(25.14±3.47)ng/L比(20.58±2.52)ng/L]水平降低(t=6.34、8.73,P<0.05)。认知功能障碍病人血清ABCA7水平与MoCA评分呈负相关(r=−0.55,P<0.001),血清TREM2水平与MoCA评分呈正相关(r=0.56,P<0.001)。TREM2、发作持续时间、病程、ABCA7是癫痫病人发生认知功能障碍的影响因素。血清ABCA7、TREM2水平单独及联合预测癫痫病人认知功能障碍的曲线下面积分别为0.79、0.84、0.93,血清ABCA7、TREM2水平联合预测的曲线下面积明显高于二者单独预测(P<0.05)。结论癫痫病人血清中ABCA7的表达水平显著升高,TREM2表达水平显著降低,均为癫痫病人发生认知功能障碍的影响因素,与癫痫病人的认知功能密切相关。

2-甲硫基三磷酸腺苷可抑制兔慢性心力衰竭引起的室性心律失常

目的 观察嘌呤核苷酸受体（P2XR）激动剂2-甲硫基三磷酸腺苷（2-MeSATP）对慢性心力衰竭（心衰）引起的室性心律失常的影响,并探讨其机制.方法 健康成年雄性新西兰大耳白兔分为对照组（n=12）、慢性心衰组（心衰组,n=12）和慢性心衰2-MeSATP干预组（2-MeSATP组,n=12）.经兔耳缘静脉注射异丙肾上腺素（0.3 mg·kg-1·d-1）连续3周,后继续喂养6个月,建立兔慢性心衰模型.记录在体心脏左心室单相动作电位（MAP）和短阵快速刺激方法观察心脏电生理指标改变和室性心律失常的诱发情况.酶解法分离单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术和激光扫描共聚焦显微镜加Fluo-3/AM荧光染色技术分别观察心室肌细胞瞬时外向钾电流（Ito）和心肌细胞内Ca2＋荧光强度变化.结果 建模兔出现严重的临床症状,超声心动图各指标[左心室射血分数（LVEF）、左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室短轴缩短率（LVFS）],心电图,Masson心室肌组织染色结果均提示慢性心衰模型建立成功.2-MeSATP组兔动作电位幅度（APA）高于心衰组,动作电位最大上升速率（MaxdV/dt）较心衰组快,动作电位复极化恢复到20％、50％、90％的时程均短于心衰组,P均＜0.01.经短阵快速刺激,2-MeSATP组兔诱发心衰后室性心律失常的刺激周长和持续时间均较心衰组短,诱发率较心衰组低（P均＜0.05）.在电压钳制下,2-MeSATP组兔心室肌细胞Ito密度较心衰组大（P＜0.01）,当钳制电位为＋50 mV时,2-MeSATP组兔Ito的电流密度较心衰组大[（11.79±4.51） pA/pF比（7.94±3.53）pA/pF,P＜0.01],电流-电压曲线明显上抬接近对照组.2-MeSATP组兔心室肌细胞内游离Ca2＋浓度较心衰组高[（1 291.98±123.31） μmol/L比（793.59±114.65） μmol/L,P＜0.01].结论 2-MeSATP与P2XR结合后可缩短慢性心衰兔心肌动作电位时程,加快心率,改善心功能,降低室性心律失常的易感性,从而起到抗慢性心衰所致室性心律失常的作用.其机制可能与2-MeSATP可增加慢性心衰兔心肌细胞Ito密度,促进肌浆网对Ca2＋摄取,保持胞浆内Ca2＋交换动态平衡有关.

环状RNA-胞裂蛋白2/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1分子轴在重症急性胰腺炎中的作用及机制研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-胞裂蛋白2(SEPT2)/miR-150-5p/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)分子轴在重症急性胰腺炎(SAP)中的作用及机制。方法选取2019年12月至2021年12月赣南医学院第一附属医院收治的46例SAP患者作为重症组;并选取本院同期收治的41例轻症急性胰腺炎(MAP)患者作为轻症组;另选取本院同期35名健康体检者作为对照组。3组均采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定血清circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量,采用急性生理和慢性健康评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评估病情严重程度;采用重组慢病毒包装合成有效感染序列sh-SEPT2(干扰组)与过表达序列oe-SEPT2(过表达组)建立动物模型,采用酶联免疫吸附试验测定大鼠生化指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、D乳酸及二胺氧化酶(DAO)],采用RT-PCR及Western blot法检测大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1及细胞凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9 mRNA表达。比较3组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分,采用Pearson相关性分析SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分的相关性;比较干扰组与过表达组大鼠苏木精-伊红染色法(HE)结果、肠黏膜损伤评分、炎症因子水平及cir-cRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1和Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量。结果重症组circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1基因表达量及APACHEⅡ评分均高于轻症组和对照组,且轻症组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性结果显示,SAP患者PARP-1与circRNA-SEPT2、miR-150-5p及APACHEⅡ评分均呈正相关(r>0,P<0.05)。干扰组HE染色下胰岛细胞界限清晰,胰岛丰富,胞浆丰富,形态完整;过表达组大鼠胰岛细胞界限不清,胰岛数量较少,细胞形态不规则,细胞体积较大,边缘不齐;干扰组胰腺损伤评分为(2.58±0.16)分,低于过表达组的(3.95±0.53)分,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组IL-1β、IL-18、TNF-α、D乳酸及DAO水平均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组大鼠circRNA-SEPT2、miR-150-5p、PARP-1 mRNA表达及细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达量均低于过表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PARP-1通过靶向作用于circRNA-SEPT2/miR-150-5p参与SAP的发生与发展,抑制circRNA-SEPT2表达,可减轻SAP肠黏膜屏障损伤,能为SAP治疗提供新的靶点。

转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2 shRNA的人骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡能力观察

目的观察转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)shRNA的骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡的变化。方法以qRT-PCR法和Western blotting法分别检测人骨肉瘤细胞(U2-OS、MG-63、SaOS-2)和人正常成骨细胞(h FOB1.19)中ATAD2 mRNA、蛋白。在U2-OS细胞中转染ATAD2 shRNA慢病毒载体,采用qRT-PCR法和Western blotting法检测转染效果,CCK8方法检测细胞增殖变化,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数目,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-Caspase-3)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK2)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(C-Caspase-9)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白。结果骨肉瘤细胞中ATAD2 mRNA、蛋白表达水平高于正常成骨细胞(P均<0.05)。ATAD2 shRNA慢病毒载体转染后的骨肉瘤细胞中ATAD2表达水平下降(P<0.05)。转染ATAD2 shRNA后的骨肉瘤细胞增殖能力和克隆形成能力均降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达升高,CDK2、CyclinD1蛋白表达降低(P均<0.05)。结论转染ATAD2 shRNA可抑制U2-OS细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

微小RNA-218-5p靶向三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员基因对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究微小RNA(microRNA,miR)-218-5p靶向调控三磷酸腺苷结合盒超家族G家族第2个成员(ATP-binding cassette sub-family G member 2,ABCG2)基因对Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:运用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)与Western blot检测Tca-8113细胞和NOK细胞中miR-218-5p和ABCG2的表达。通过双荧光素酶报告基因实验检测miR-218-5p和ABCG2靶向关系。用脂质体法将miR-218-5p mimic、ABCG2小干扰RNA(interfering RNA,siRNA)、miR-218-5p mimic+pcDNA-ABCG2分别转染至Tca-8113细胞中,噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)法、Transwell法检测Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭。结果:与NOK细胞比较,Tca-8113细胞miR-218-5p呈显著低表达,ABCG2呈显著高表达(P<0.05)。过表达miR-218-5p、抑制ABCG2均可抑制Tca-8113细胞的增殖和迁移(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-218-5p与ABCG2的靶向结合关系。过表达ABCG2可逆转上调miR-218-5p对Tca-8113细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:上调miR-218-5p的表达可靶向调控ABCG2,抑制Tca-8113细胞的增殖、迁移和侵袭,将可为口腔鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

三磷酸腺苷酶家族蛋白-2在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的通过实验分析骨肉瘤患者样本中三磷酸腺苷酶家族蛋白-2(ATAD-2)的表达情况以及对临床诊断和治疗的意义。方法收集骨肉瘤样本以及骨肉瘤周围组织的样本,各50例,检测ATAD-2表达情况。结果骨肉瘤样本中的ATAD-2的mRNA的表达量高于骨肉瘤周围组织的样本。结论临床上发现某些组织疑似骨肉瘤且三磷酸腺苷酶家族蛋白-2表达程度较高时,可考虑患骨肉瘤的可能性较大。

基于三磷酸腺苷-L-半胱氨酸功能化纳米银比色法检测水中痕量Hg^(2+)

基于L-半胱氨酸(L-Cys)和三磷酸腺苷(ATP)功能化的纳米银(AgNPs)建立了一种检测环境水样中Hg^(2+)的比色方法。L-Cys和ATP共同修饰的AgNPs(ATP-L-Cys-AgNPs),在水溶液中分散性良好,经紫外-可见光谱扫描显示在386 nm处有强吸收峰。在pH 9.5条件下,Hg^(2+)可与ATP-L-Cys-AgNPs发生配位反应,导致功能化AgNPs聚集,溶液由亮黄色转变为紫色,在554 nm处出现新的吸收峰,同时伴随着386 nm处吸收值下降。在最佳实验条件下,体系386 nm和554 nm处吸光度比值A386nm/A554nm的变化与Hg^(2+)浓度在1.3×10^(-7)~1.0×10^(-6)mol·L^(-1)范围内成线性关系,线性回归方程为ΔA386nm/A554nm=0.39c(0.1μmol·L^(-1))+0.86,相关系数r=0.9982,检出限为4.0×10-8 mol·L^(-1)。该方法简便、快捷、准确,可用于环境水样中Hg^(2+)含量的检测。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2在肺癌A549和SPC-A-1细胞株中的表达及其意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在肺癌细胞株A549和SPC—A-1中的表达及其意义。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测两种肺癌细胞株中该基因的表达，应用流式细胞仪检测该蛋白的表达。结果ABCG2基因与蛋白在肺腺癌细胞株A549和SPC—A-1中均有表达，且A549的表达高于SPC—A-1。结论ABCG2可能参与肺癌耐药，可能也与肺癌的发生、发展有密切相关。

乙醇和锌离子对爪蟾卵母细胞表达的5′-三磷酸腺苷门控P2X3受体的影响

目的探讨乙醇和锌离子(Zn^(2+))对爪蟾卵母细胞表达的重组P2X3受体的影响。方法使用双极电压钳技术检测乙醇和Zn^(2+)对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的5′-三磷酸腺苷(ATP)门控电流的影响。实验共分3组,第1组研究不同浓度乙醇对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的ATP电流的影响,存在或不存在乙醇的情况下,P2X3受体的ATP量-效曲线;第2组研究不同浓度Zn^(2+)对爪蟾卵母细胞表达的P2X3受体介导的ATP电流的影响,存在或不存在Zn^(2+)的情况下,P2X3受体的ATP量-效曲线;第3组研究乙醇和Zn^(2+)共同作用于爪蟾卵母细胞表达的ATP门控P2X3受体的影响。结果乙醇(5~200 mmol/L)可逆性地增强了爪蟾卵母细胞中表达的P2X3受体的ATP门控功能,乙醇以变构的方式增强ATP效应,乙醇不会改变Hill系数或ATP最大效应(E_(max))。Zn^(2+)(1~300μmol/L)可逆性地增强了爪蟾卵母细胞中表达的P2X3受体的ATP门控功能,乙醇和Zn^(2+)联合应用导致协同作用。乙醇增强了Zn^(2+)对P2X3受体介导的ATP门控电流的最大效应,这表明乙醇和Zn^(2+)作用于不同的位点。结论乙醇和Zn^(2+)可能作用于P2X3受体上的不同位点,但乙醇在P2X受体上起作用的机制和位点尚未明确,后续研究可以使用嵌合方法和定点突变来识别和分析P2X受体中乙醇潜在的作用位点。

细胞外三磷酸腺苷在细胞膜物质转运中的作用机制与2型糖尿病和肿瘤的病因研究

2型糖尿病（type 2 diabeteses mellitus，T2DM）和肿瘤（tumor）都与胰岛素抵抗相关。T2DM的发病机制归为胰岛素抵抗（insulin resistance，IR），但引起胰岛素抵抗的机制不明。胰岛素抵抗也是肿瘤发病的重要病理学基础之一，肿瘤患者常伴有糖耐量的异常，而糖耐量异常者的肿瘤发病率增高。并且T2DM患者的纤维母细胞在体外实验条件下进行的葡萄糖摄取与正常对照并没有明显的差异，而机体细胞的外部环境有无改变值得研究。

腺苷三磷酸对人外周血单个核细胞hBD-2表达的影响及其分子机制探讨

目的观察腺苷三磷酸(ATP)体外刺激对人外周血单个核细胞(PBMCs)人β防御素2(hBD-2)表达的影响,并通过白细胞介素1β(IL-1β)变化探讨其分子机制,为ATP提高机体抗感染能力并应用于临床提供依据。方法取健康志愿者外周血,分离PBMCs并配成细胞悬液。将PBMCs分为六组,空白组不处理,0、25、50、100、200μmol/L ATP组分别加入HBSS液和25、50、100、200μmol/L ATP 100μL,分别于培养12、24 h时收集培养上清液,采用双抗体夹心ELISA法检测上清液中的hBD-2、IL-1β。结果与空白组和0μmol/L ATP组比较,不同浓度ATP组处理的PBMCs培养上清液hBD-2、IL-1β水平不同程度的升高(P均<0.01);除空白组与0μmol/L ATP组外,其余各组培养24 h时PBMCs培养上清液hBD-2、IL-1β水平均高于同组培养12 h(P均<0.01)。经ATP作用12、24 h时,PBMCs培养上清液中hBD-2与IL-1β水平均呈正相关(r分别为0.494、0.725,P均<0.01)。结论ATP可诱导人PBMCs中hBD-2表达上调,且hBD-2与IL-1β表达变化一致;这提示ATP诱导的hBD-2表达与IL-1β密切相关,两者可能互相影响。

三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2基因在食管癌中的表达及意义

目的探讨三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporer G2,ABCG2)基因在食管癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测44例原发性食管癌患者的癌组织、癌旁组织(距离癌2cm)及食管切缘正常黏膜(距离癌5cm以上)ABCG2的mRNA表达。结果ABCG2在食管癌原发灶组织中有较高程度的表达,其表达量为0.77±0.11,而正常食管黏膜中的表达量为0.66±0.12;其在食管癌中的表达显著高于正常黏膜(P<0.01)。ABCG2在低分化鳞癌中的表达显著高于中-高分化鳞癌(P<0.05)。食管癌中ABCG2在年龄和性别间表达无显著性差异(P>0.05)。结论ABCG2在食管癌组织中高表达可能在某种程度上参与了食管癌原发性耐药及化疗中多药耐药的形成。其可作为一种新的引起多药耐药的分子,指导临床上食管癌的化疗。

高、低表达三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2的人鼻咽癌耐药细胞生物学特性差异研究

目的探讨高表达与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(简写作ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的生物学差异,分析两种细胞的耐药特点。方法分离ABCG2High和ABCG2Low细胞,检测其体外克隆形成率并分析细胞周期。流式细胞术(FCM)检测两种细胞传代前及传至第5代时ABCG2阳性表达率的差异。RT-PCR检测耐药基因ABCG2、Bcl-2、MDR1、MRP、MGMT的mRNA表达差异。MTT法检测两种细胞在1～14d的吸光度,绘制生长曲线;检测两种细胞对氟尿嘧啶、顺铂、长春新碱、卡铂、表阿霉素、柔红霉素、紫杉醇、丝裂霉素等化疗药物耐药性的差异。结果ABCG2High和ABCG2Low细胞在7d内的克隆形成率分别为25.24%±1.18%和16.28%±1.11%。FCM分析显示,ABCG2High的S期细胞占41.5%,ABCG2Low的G1/M0期细胞占63.9%。FCM分离后,ABCG2的表达率在ABCG2High细胞为98%,在ABCG2Low细胞为2%;两种细胞传至第5代,ABCG2在前者的表达率降低为75%,在后者升高至20%。RT-PCR显示,ABCG2mRNA在ABCG2High细胞中的表达明显高于ABCG2Low细胞,其他耐药基因在两种细胞中的表达无差异。生长曲线显示,ABCG2High细胞早期生长速度较ABCG2Low细胞快,后期生长速度逐渐减慢。耐药谱分析表明,ABCG2High细胞对8种抗肿瘤药物的IC50值高于ABCG2Low细胞两倍以上,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论ABCG2High细胞是一种快周期细胞,而ABCG2Low细胞为慢周期细胞,前者更具有多药耐药的特点,可用于ABCG2介导的鼻咽癌细胞非经典多药耐药的研究。

腺苷三磷酸处理对鲜切黄瓜的保鲜作用

为研究腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)处理对鲜切黄瓜保鲜的作用及总酚和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)等活性成分含量的影响,本实验将鲜切黄瓜分别在0(对照)、0.8、1.2、1.6 mmol/L和2.0 mmol/L的ATP溶液中浸泡10 min,测定其在10℃、72 h贮藏期间品质指标及总酚和GABA含量,以确定适宜的ATP处理浓度,借此进一步研究适宜浓度ATP处理调控总酚和GABA积累的机制。结果表明,与对照组相比,ATP处理能保持鲜切黄瓜较好的色泽和较低的菌落总数,延缓硬度和抗坏血酸含量的下降,促进总酚和GABA的积累,其中1.6 mmol/L ATP处理效果最好。进一步研究表明,与对照组相比,1.6 mmol/L ATP处理可明显提高苯丙氨酸解氨酶、4-香豆酸辅酶A连接酶、肉桂酸羟化酶、谷氨酸脱羧酶、二胺氧化酶、多胺氧化酶和4-氨基丁醛脱氢酶的活力,促进酚类物质的合成及谷氨酸和多胺分解生成GABA,提高总酚和GABA含量。综上,ATP处理不仅能延缓鲜切黄瓜品质下降,还能提高总酚和GABA含量,从而提高其抗氧化活性和营养价值。

原发性痛风性关节炎患者外周血单个核细胞三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2变化情况及其意义研究

背景痛风不断攀升的高发病率已经成为重大的公共健康问题。三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(ABCG2)在尿酸代谢中的重要作用已经得到广泛关注,成为近年来研究的热点。因此,针对ABCG2的研究有利于发现痛风发病的分子生物学机制,为痛风的诊断、治疗提供新的思路。目的观察原发性痛风性关节炎患者外周血单个核细胞(PBMCs) ABCG2表达水平的变化情况,探究ABCG2在原发性痛风性关节炎中可能的作用。方法选取2016年6月—2017年2月于川北医学院附属医院风湿免疫科门诊就诊及住院的男性原发性痛风性关节炎患者(GA组)82例,其中急性期痛风(AGA亚组)和间歇期痛风(IGA亚组)患者各41例。依据患者血尿酸水平进一步分为血尿酸<420μmol/L痛风亚组(NUA亚组)31例、血尿酸≥420μmol/L痛风亚组(HUA亚组)51例。另选取同期川北医学院附属医院体检中心的男性健康体检者(HC组)46例。检测患者血尿酸水平、肌酐水平、胱抑素C(Cys-C)水平、红细胞沉降率(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平;采用RT-qPCR、Western blotting法分别检测受试者PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平。结果 GA组PBMCs ABCG2 mRNA表达水平高于HC组(P<0.05)。IGA亚组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平高于AGA亚组(P<0.05);HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平低于IGA亚组(P<0.05);AGA亚组与HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HUA亚组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平高于NUA亚组(P<0.05);HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平低于HUA亚组(P<0.05);NUA亚组与HC组PBMCs ABCG2 mRNA及蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。男性原发性痛风性关节炎患者ABCG2 mRNA表达水平与血尿酸水平呈正相关(r=0.235,P=0.033),与肌酐水平、Cys-C水平呈负相关(r值分别为-0.227、-0.229,P值分别为0.044和0.043),与ESR、hs-CRP水平无直线相关关系(r值分别为-0.181、0.027,P值分别为0.112、0.824)。结论 ABCG2在原发性痛风性关节炎患者PBMCs中高表达,并参与尿酸的转运,但未发现其与原发性痛风性关节炎的炎症过程相关;且肾功能异常的原发性痛风性关节炎患者的PBMCs ABCG2表达下调。