新试剂1-(2-磷酸基-4-氯苯基)-3-(2-硝基-4-氟苯基-偶氮苯)-三氮烯与汞的显色反应研究

本文研究了在非离子表面性剂Triton X-100存在下,新试剂1-(2-磷酸基-4-氯苯基)-3-(2-硝基-4-氟苯基-偶氮苯)-三氮烯(简称CPDAANF)与汞的显色反应条件。试验表明,在硼砂一氢氧化钠(pH10.26)缓冲介质中,络合物的最大吸收波长为525nm,表观摩尔吸光系数为1.18×105L.mol-1.cm-1。络合物的组成为Hg(Ⅱ):CPDAANF=1∶2,线性范围为10-11μg/25ml。

铁皮石斛HDS基因的克隆与初步表达分析

目的从铁皮石斛Dendrobium officinale中克隆4-羟基-3-甲基-2-E-丁烯基-1-焦磷酸合成酶(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1-yl diphosphate synthase,HDS)基因,在大肠杆菌中诱导融合蛋白,并探究该基因在铁皮石斛不同组织中的表达规律。方法采用RT-PCR和RACE等方法获取铁皮石斛HDS(Do HDS)的c DNA全长,利用相关软件和在线网站进行生物信息学分析,使用Real-Time PCR分析Do HDS在不同组织的表达特征,构建原核表达载体p ET-28a(+)-Do HDS,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。结果成功获得Do HDS的c DNA全长序列,Gen Bank登录号为KJ161312,全长2 666 bp,ORF为2 238 bp,编码745个氨基酸。Do HDS在各组织中均有表达,在茎中表达量最高,为原球茎的5倍;SDS-PAGE结果显示诱导产物为1个相对分子质量(82 700)与理论值相符的融合蛋白。结论克隆了Do HDS的c DNA全长序列,探究其在不同组织中的表达模式,建立了原核表达体系,为后续研究Do HDS的功能提供了一定的理论基础。