己酮可可碱和2-脱氧腺苷提高冷冻复温后精液质量的研究

在光学显微镜下观察和测定了己酮可可碱（PF）和2－脱氧腺苷（2－DA）在体外对冷冻复温后精液精子的活率、活力及其毛细管穿透值的影响。结果显示PF和2－DA均能提高冷冻复温后精子的活率、活力及其毛细管穿透值，其最适浓度分别为4．0mmol／L和2．0mmol／L，与对照组比较均有显著性差异（P＜0．01）。两级间比较，2－DA优于PF（P＜0．01）。提示PF与2－DA合用不具有协同作用，反而有相互抑制作用，认为单独使用2－DA比合用PF效果更好。

体外应用己酮可可碱和2-脱氧腺苷提高冷冻复温后精液质量的研究

本文在光学显微镜下观察和测定了己酮可可碱和２脱氧腺苷在体外对冷冻复温后精液精子的活率、活力及其毛细管穿透值的影响。结果：两者均能提高上述三项参数。其最适浓度分别为４．０ｍｍｏｌ／Ｌ、２．０ｍｍｏｌ／Ｌ，与对照组比较均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。两组间比较，２脱氧腺苷优于己酮可可碱（Ｐ＜０．０１）。

2’-脱氧腺苷的合成

以腺嘌呤(Ⅰ)和1-乙酰氧基-3,5-二(对甲基苯甲酰基)-2-脱氧核糖(Ⅱ)为原料,先将腺嘌呤进行硅醚保护,然后与Ⅱ催化缩合生成带保护基的2’-脱氧腺苷,脱保护基,得到-βD-2’-脱氧腺苷。考察了反应物(Ⅰ)和(Ⅱ)的摩尔比、催化剂的用量及反应温度对2’-脱氧腺苷收率的影响。结果表明,最佳反应条件为:(Ⅰ)∶(Ⅱ)(摩尔比)=1∶1,催化剂用量为0.54%,反应温度为20℃时,2’-脱氧腺苷的总收率可达65%。

2′-脱氧腺苷-5′-磷酸与羟基自由基反应所形成的自由基(英文)

运用可靠的B3LYP/DZP++方法研究了2′-脱氧腺苷-5′-单磷酸(dAMP)与羟基自由基(HO)的反应中所产生的20余种自由基.结果表明,反应的初始产物包括HO加成到dAMP碱基C8、C4位上所形成的羟基加合物自由基,以及dAMP碱基环上氨基的脱氢自由基.而且,反应最初形成的C4位羟基加合物自由基具有脱水产生dAMP碱基环上氨基脱氢自由基的热力学趋势,脱水形成的两种氨基脱氢自由基都是强氧化剂.尽管HO·加成到dAMP碱基C2位上所形成的加成产物比C4位的加成产物更稳定,但dAMP与HO·的氧原子间较强的静电排斥作用却使得HO·难以靠近C2原子,导致C2位的羟基加成产物难以形成.上述结论不但与有关实验结果一致,而且还对一些实验现象作出了合理的解释.

2-氯脱氧腺苷对多药耐药白血病细胞的毒性实验研究

目的 探讨 2 -氯脱氧腺苷 (2 - CDA)对多药耐药白血病细胞 (K5 6 2 / A0 2 )的毒性作用。方法 细胞毒实验采用 MTT法 ,二药合用时细胞毒性作用采用 Chou- Talalay联合指数法分析。结果 2 - CDA对 K5 6 2和K5 6 2 / A0 2的 IC50 分别为 (2 3.9± 2 .4) nmol/ L 和 (137.6± 12 .7) nm ol/ L(P<0 .0 5 )。 2 - CDA与柔红霉素 (DNR)联合应用时 ,对 K5 6 2细胞的联合指数分别是 1.0 ,对 K5 6 2 / A0 2细胞为 5 .1。结论 2 - CDA对敏感白血病细胞具有明显细胞毒性作用。多药耐药白血病细胞对 2 - CDA不敏感。2 - CDA与 DNR联合应用时 ,对敏感白血病细胞的毒性为相加作用 ,对多药耐药白血病细胞的毒性为拮抗作用。

虫草素类似物2’-脱氧腺苷脂质体的制备及表征

虫草素具有多种生物活性,通过与新型药物载体脂质体结合,可解决其临床中的脱氨基作用。2'-脱氧腺苷是虫草素的结构类似物,易制备,具有和虫草素相同的紫外最大吸收波长(259nm),是一种优良的虫草素替代品,研究2'-脱氧腺苷脂质体可为虫草素脂质体的研究提供重要的参考。本文采用逆相蒸发法制得球形、粒径170～350nm、包封率为45%、稳定性良好的2'-脱氧腺苷脂质体。为虫草素脂质体研究提供基础数据。

应用乙酰短杆菌酶法合成2’-脱氧腺苷

胸苷和腺嘌呤在乙酰短杆菌作用下转化成胸腺嘧啶和目标产物2’-脱氧腺苷。50mL的三角瓶装液10mL,40mmol/L的底物,50mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7)进行反应,5%游离乙酰短杆菌在55℃下,经1h转化率就可达到65.6%。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定发酵液中喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定发酵液中喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷含量的方法。发酵液经高速离心、水溶液稀释、微孔过滤后进行HPLC-MS/MS分析测定。选用Waters Atlantis■ T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm)及其保护柱(5 mm×2.1 mm,5μm)进行分离,选择10 mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸)-甲醇(含0.02%甲酸)溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。在电喷雾电离、正离子模式下收集数据,对目标化合物进行定性定量分析。喷司他丁定量离子对为m/z 269.17>153.20,碰撞能为11 V,2′-氨基-2′-脱氧腺苷定量离子对为m/z 267.00>136.10,碰撞能为18 V。采用外标法对喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷定量分析。结果表明,喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷在1.0~250μg/L范围内呈现出良好的线性关系,相关系数(R2)为0.9969~0.9996,相对标准偏差(RSD)为6.51%~8.35%(n=8)。在发酵液样品中进行加标水平为1.0、5.0和25μg/L的添加回收试验(n=6),喷司他丁的回收率为97.94%~104.46%,RSD为3.74%~4.88%;2′-氨基-2′-脱氧腺苷回收率为89.96%~107.21%,RSD为4.81%~13.29%。喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷的检出限为0.003~0.060μg/L,定量限为0.010~0.200μg/L。该文系统性地建立了基于HPLC-MS/MS测定发酵液中喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷的方法,在实际样品检测中,操作简便,准确度高,灵敏快速,有效克服了基质效应对目标化合物的影响,改善了目标化合物的峰形和稳定性,为从微生物发酵液中检测喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷提供了方法学基础和借鉴。

2′-脱氧腺苷-5′-N-[(2S)-2-(3-苯甲酰苯基)-1-氧代丙基]甘氨酸酯的合成

以N-[(2S)-2-(3-苯甲酰苯基)-1-氧代丙基]甘氨酸和2′-脱氧腺苷为原料合成了标题化合物。产物结构经IR、1HNMR、13CNMR和MS确证。实验结果表明,2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)在该反应中是一种较好的缩合试剂。此外发现,N-[(2S)-2-(3-苯甲酰苯基)-1-氧代丙基]甘氨酸乙酯在皂化反应中会消旋。

重组枯草芽孢杆菌全细胞催化高效合成2′-脱氧腺苷

以枯草芽孢杆菌168(简写为BS)为宿主,以脱氧胸苷和腺嘌呤为底物,异源表达组合来源于大肠杆菌(E.coli)的嘧啶核苷磷酸化酶(PyNP)与嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)作为催化酶源,全细胞催化合成2′-脱氧腺苷(dA)。首先,以BS敲除内源性的PNP(由基因deoD编码,Gene ID:940038)后的菌株BS0为出发菌株,经过PyNP1酶(来源于E.coli,Gene ID:948901)与PNP3酶(来源于E.coli,Gene ID:945654)的重组表达得到CW3,再优化PyNP1与PNP3的对核糖体结合位点(RBS)序列得到重组菌株CW3-3,在CW3-3作用下,dA的产量为133.4 g/L,脱氧胸苷的转化率为64.3%;其次,以CW3-3为出发菌株,利用互作短肽构建自组装多酶复合物,经过PyNP1酶N端融合RIAD,PNP3酶C端融合RIDD(其中RIAD和RIDD为互作短肽标签)处理后,PyNP1酶N端融合4个RIAD标签得到重组菌株CW17,在其作用下,dA的产量达到179.6 g/L,显著提升了底物转化率;最后,对重组菌株CW17全细胞催化条件细胞添加质量浓度及催化反应温度进行了优化,在细胞添加质量浓度为150g/L,反应温度50℃条件下,dA的产量达到200.3g/L,脱氧胸苷的转化率为96.6%。

在线固相萃取-HPLC测定4种虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷

该文建立一种同时测定4种虫草类药材(冬虫夏草、蛹虫草、虫草菌丝体和蝉花)中虫草素(3'-脱氧腺苷)和2'-脱氧腺苷含量的在线固相萃取-高效液相色谱分析方法。供试品经ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×12.5 mm,5μm)色谱柱富集,水-甲醇(91∶9)洗脱;ZORBAX SB-AQ(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱分离,流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇(91∶9),检测波长260nm,柱温40℃,流速1.0 m L·min^(-1),分别对4种虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷含量进行检测。结果表明冬虫夏草、虫草菌丝体和蝉花样品中仅检测到2'-脱氧腺苷,蛹虫草样品中仅检测到虫草素,早期报道的在冬虫夏草中检测到的虫草素色谱峰可能是其同分异构体2'-脱氧腺苷色谱峰或以2'-脱氧腺苷为主的与虫草素的共洗脱色谱峰。该方法重复性好,准确度高,分析时间短,可用于虫草类药材中虫草素和2'-脱氧腺苷的分析。

2-氯脱氧腺苷治疗毛细胞白血病长期缓解1例

1病历资料 患者男，59岁。因“乏力、腹胀并脾切除10年，再次乏力2个月”于2006年11月入院。一患者1996年6月因乏力腹胀在当地医院发现脾大，肋下4cm，多次查血常规：

竹叶菜中的核苷类化学成分

目的 :为了开发利用竹叶菜资源 ,对竹叶菜的化学成分进行了研究。方法 :运用硅胶柱层析法分离其化学成分 ,用UV、IR、NMR、MS及X晶体衍射的方法进行结构鉴定。结果 :从甲醇提取物中分离得到 3个核苷类化合物 ,分别鉴定为胸腺嘧啶脱氧核苷 (Ⅰ ) ,腺嘌呤核苷 (Ⅱ ) ,2′ 脱氧腺苷 (Ⅲ )。结论 :首次对竹叶菜的核苷类化学成分进行了报道 。

一测多评法同时测定冬虫夏草中5个核苷类成分的含量

目的:建立一测多评法同时测定冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、2′-脱氧腺苷含量,并验证方法准确性。方法:采用RP-HPLC进行含量测定,使用Agilent ZOBAX SB-AQ C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0~5 min,0%A;5~15 min,0%A→10%A;15~30 min,10%A),流速1.0 m L·min^(-1),柱温30℃,检测波长260 nm,进样量5μL。以腺苷为参照物,建立其对尿苷、肌苷、鸟苷、2′-脱氧腺苷的相对校正因子,并用该校正因子进行尿苷、肌苷、鸟苷、2′-脱氧腺苷的含量计算,实现一测多评;同时采用外标法测定冬虫夏草中5个核苷的含量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果:尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、2′-脱氧腺苷进样量分别在4.945~98.90、1.852~37.04、4.795~95.90、5.175~103.5和1.892~37.84μg·m L-1范围内呈现良好线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为98.3%(RSD=1.6%)、101.3%(RSD=1.3%)、100.6%(RSD=1.1%)、98.8%(RSD=1.4%)和101.1%(RSD=1.7%)。尿苷、肌苷、鸟苷、2′-脱氧腺苷相对于腺苷的相对校正因子分别为1.41、1.90、1.74和0.964;且在不同实验条件下重现性良好(RSD<3.0%);一测多评法的计算结果与外标法实测值之间无显著差异。20批冬虫夏草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和2′-脱氧腺苷的含量范围分别为0.101%~0.210%、0.037%~0.135%、0.066%~0.203%、0.015%~0.102%和0.001 8%~0.013%。结论:建立的一测多评法可作为冬虫夏草中5个核苷类化学成分的含量测定方法。

不同“发汗”条件加工玄参中核苷类成分的含量测定及灰色关联度分析

目的:建立QTRAP-UPLC-MS/MS同时测定玄参中10种核苷类成分含量的方法,分析不同"发汗"加工条件对玄参核苷类成分含量的影响。方法:采用Atlantis T_3色谱柱(2.1 mm×150 mm,3μm),流动相为甲醇-5 mmol·L^(-1)醋酸铵(含0.1%冰醋酸),流速0.4 mL·min^(-1)梯度洗脱,用正离子多反应监测(MRM)模式测定样品中核苷类成分含量;用灰色关联度分析对核苷类成分进行综合评价。结果:玄参中10种核苷类成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r≥0.997 3);平均加样回收率(n=6)为98.7%~101.0%,RSD为0.96%~2.44%。玄参核苷类成分中以鸟苷、尿苷、腺苷、尿嘧啶含量较高;不同"发汗"加工条件对玄参核苷类成分含量具有一定影响,以玄参完整主根、烘箱干燥(35℃)、发汗3 d的"发汗"加工样品中核苷相对关联度质量较优。结论:本法简便、快速、灵敏、准确,为揭示"发汗"加工条件对玄参化学成分的影响及建立规范、标准的玄参"发汗"初加工方法提供基础资料。