来自Staphylococcus aureus N315的2-脱氧-D-核糖5-磷酸醛缩酶的工程菌构建、表达纯化与性质鉴定

利用基因挖掘在数据库中发现一种来自Staphylococcus aureus N315的潜在DERA(SaDERA),将其基因密码子优化后实现了在大肠杆菌中的表达,重组酶经纯化后研究了其催化性质。结果表明:构建的工程菌具有较高的可溶表达量(占总蛋白的70%),通过简单的一步纯化即可得到电泳纯的酶;SaDERA是一种同源二聚体的酶(5.7×104),其最适反应条件是pH 7.7和45℃;SaDERA具有良好的碱耐受性,在pH 11.0、25℃的条件下温浴24 h后仍有93%的残余活力;SaDERA具有良好的乙醛耐受性,在0.3 mol/L乙醛浓度、25℃下,30 min内保持了70%以上的残余活力;乙醛连续自缩合产物被纯化并鉴定,所得产品为两次缩合产物。

LC-MS/MS法测定2-脱氧-D-核糖中的甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的含量

目的建立LC-MS/MS法检测2-脱氧-D-核糖中基因毒性杂质甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的方法。方法选用C18色谱柱（以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇-水（体积比30∶70）为流动相,流速为1.0 m L·min-1,分流比为30%,柱温为40℃,进样量为10μL。采用APCI离子源检测扫描方式负离子模式检测。结果甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯质量浓度在20～200μg·L-1内与峰面积线性关系良好,甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的检测限为4μg·L-1,定量限为10μg·L-1,甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的回收率分别为104.8%（RSD=7.93%,n=9）和101.0%（RSD=5.97%,n=9）。结论本方法灵敏、专属性强,适用于2-脱氧-D-核糖中基因毒性杂质甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的检测。

2-脱氧-D-核糖合成研究

以葡萄糖和熟石灰为主要原料生产2-脱氧-D-核糖，经过对文献数据的改进，收率超过了文献数据，且质量超过了欧美水平。

核苷类药物中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸的合成

2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸是酶法合成核苷类药物的重要中间体,以往的化学合成法立体选择性不高,笔者以α/β混合构型的1-氯-3′,5′-二(O-对氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖为原料,采用结晶诱导不对称转化技术,合成了单一构型的2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸盐,HPLC测定其α构型含量为96.8%,总收率82.14%.考察了反应物投料比,反应时间,反应温度等因素的影响,得到了较佳工艺条件为:投料摩尔比为1∶3,-5～0℃下结晶诱导反应23h然后在含有3%环己胺的甲醇溶液中,45℃下反应36h脱除保护基.该工艺反应条件温和、操作简单、产物立体选择性好且收率高,是经济价值较高的合成路线.

重组胸苷磷酸化酶在大肠杆菌中的表达和1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺的生成

研究了大肠杆菌BL21(DE3)中重组胸苷磷酸化酶的最佳诱导表达条件及1-(2-脱氧-β-D-呋喃核糖基)-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(1)的最佳生成条件。菌体培养3.5h时加入8mmol/L乳糖诱导6h后,胸苷磷酸化酶的酶活力为2.14×104u/mg湿菌体。5%湿菌体在pH7.0的0.1mol/L Tris-HCl缓冲液中与底物胸苷、1,2,4-三唑-3-甲酰胺于50℃反应5h后,所得1的转化率大于90%。

1-乙酰基-3,5-二对氯苯甲酰基-2-脱氧-α,β-D-呋喃核糖苷的合成

1-乙酰基-3,5-二对氯苯甲酰基-2-脱氧-α,-βD-呋喃核糖苷是重要的医药中间体。以2-脱氧-D-核糖为原料,经柱色谱柱分离出α体和β体。优化条件为:从甲基-3,5-二对氯苯甲酰基-2-脱氧-α,-βD-呋喃核糖苷合成1-乙酰基-3,5-二对氯苯甲酰基-2-脱氧-α,-βD-呋喃核糖苷的过程中,n(甲基-3,5-二对氯苯甲酰基-2-脱氧-α,-βD-呋喃核糖苷):n(乙酐)为1∶4.4,反应中浓硫酸加入量为2mL,滴加浓硫酸时溶液温度为-2°C,水解温度为6°C,产率可达84.14%。然后运用1H NMR和熔点测定两种方法对分离出的α体和β体进行了表征。

2-脱氧-D核糖的新合成方法研究

以D-核糖为原料,先将D核糖的一位用甲氧基保护,后用硅叉试剂将3,4位进行保护,后将二位进行碘代再氢化,实现二位脱氧,最后脱除保护基经过5步反应实现2-脱氧-D-核糖的合成,总收率达41.8%

N-氯苯基-2-脱氧-α-D-吡喃核糖亚胺的合成及其晶体结构

在水与甲醇的混合体系中,2-脱氧-D-核糖与氯代苯胺反应立体选择性地合成了三种N-氯苯基-2-脱氧-α-D-吡喃核糖亚胺(化合物1,2,3),它们的结构经过1HNMR和13CNMR的表征.将单一构型的N-对氯苯基-2-脱氧-α-D-吡喃核糖亚胺(1)溶于氘代DMSO加入几滴重水,1HNMR和13CNMR分析显示1异构化为四种构型的混合物.培养了化合物1,2,3的单晶,并用X射线衍射法测定了它们的晶体结构.对晶体结构进行分析,对反应形成单一构型产物的原因进行了探讨.并提出了1异构化过程的机理.

酶法合成2'-脱氧-5-氟尿苷的研究

以化学合成的2-脱氧核糖-1-磷酸二环己胺盐和5-氟尿嘧啶为底物,在芽孢杆菌核苷磷酸化酶的作用下合成产物2'-脱氧-5-氟尿苷。考察了诱导剂种类及浓度对菌体核苷磷酸化酶活力的影响,同时又考察了底物比例、底物浓度、菌体量、反应温度、缓冲液浓度及p H值等参数,得到最佳的条件为核糖浓度35 mmol/L,5-氟尿嘧啶为105 mmol/L,磷酸钾缓冲液45 mmol/L(p H 8.0),游离芽孢杆菌12%(湿重)在55℃下反应3 h,转化率可达79.36%,产量可达6.83 g/L。采用该法合成2'-脱氧-5-氟尿苷,反应条件温和,同时能够一定程度地解决酶法合成脱氧核苷中脱氧核糖供体来源少、价格高的问题,具有一定的工业化价值。

山海绵Mycale parishi化学成分研究

对采自南中国海的山海绵Mycaleparishi化学成分进行研究 ,从中分离鉴定了 3个生物碱 :5 甲基 1 (2 脱氧 β D 呋喃核糖 ) 2 ,4 (1H) 嘧啶二酮 (Ⅰ )、尿嘧啶 (Ⅱ )、N 2 羟基 1 羟甲基 3 十七烯基 二十五脂肪酸酰胺(Ⅲ ) ,其中化合物Ⅲ未见文献报道。

网胰藻Hydroclathrus clathratus的化学成分研究

报道从中国南海网胰藻Hydroclathrusclathratus中分离得到 3个单体化合物 ,经过MS ,IR ,1HNMR ,13 CNMR (DEPT) ,HMQC和HMBC等波谱技术鉴定为 :( 6R ,7aS) 6 羟基 4,4,7a 三甲基 2 ,4,5 ,6,7,7a 六氢苯并呋喃 2 酮 ( 1) ,1 ( 2 脱氧 β D 呋喃核糖 ) 5 甲基 1,2 ,3 ,4 四氢嘧啶 2 ,4 二酮 ( 2 ) ,尿嘧啶 ( 3 ) ,并通过X射线单晶衍射实验确定化合物 1的立体结构 ,其中化合物 1是首次从自然界中分离得到 .

浅谈地西他滨的优化合成工艺

地西他滨是一种比较独特地药物,他可以对一种比较少见的白血病进行治疗。通常临床上使用的一些其他的治疗药物对于癌症的治疗效果都不太明显,而地西他滨的出现使得这一种罕见的白血病患者重获希望。最近的一些研究发现地西他滨进入人体后可以通过磷酸化作用,最终使得DNA甲基化得到抑制从而对癌症进行控制。对于传统的地西他滨合成工艺来说,不仅操作复杂成本高且效益还比较低。本文通过对传统的合成工艺进行优化,提出新的比较有实际价值的合成工艺。它主要是采用比较低廉的物质并对传统的工艺流程进行简化,使得这一优化的合成工艺更具效益和发展前景。