20E调控家蚕BmFoxL2-2的分子机制及斜纹夜蛾SlFoxL2-2在精巢中的表达分析

【目的】本研究旨在阐明蜕皮激素20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)调节家蚕Bombyx mori转录因子基因BmFoxL2-2表达的分子机制,并分析FoxL2-2在斜纹夜蛾Spodoptera litura精巢中的表达模式。【方法】PCR扩增家蚕5龄幼虫精巢基因组中BmFoxL2-2起始密码子上游约2500 bp的启动子序列,通过生物信息学分析预测其潜在的顺式作用元件(cis-regulatory elements,CREs);分别将pEGFP-BmBRC-Z1,pEGFP-BmBRC-Z2,pEGFP-BmBRC-Z4转录因子表达质粒和pGL3-BmFoxL2-2质粒共转染家蚕BmN细胞,通过双荧光素酶活性实验检测BmBRC蛋白对BmFoxL2-2启动子活性的影响;利用1μmol/L 20E处理BmN细胞4 h时,通过qRT-PCR检测BmFoxL2-2的表达量,检测BmBrc-z1和BmBrc-z4的表达量作为对照;通过qRT-PCR检测BmBrc-z1和BmBrc-z4在家蚕不同发育阶段(幼虫、预蛹、蛹和成虫)精巢中及5龄幼虫和3日龄蛹精巢与卵巢中的表达量;通过生物信息学在斜纹夜蛾基因组数据库鉴定了SlFoxL2-2,利用qRT-PCR检测SlFoxL2-2在斜纹夜蛾6龄幼虫和成虫的精巢与卵巢、6龄幼虫不同组织(脂肪体、中肠、血淋巴、头、表皮和精巢)、不同发育阶段精巢以及6龄幼虫精巢、精子和精巢膜中的表达量。【结果】获得家蚕BmFoxL2-2(Gene ID:101735653)起始密码子上游2500 bp启动子序列,并在序列中预测到13个潜在的BRC蛋白CRE。BmBRC-Z1和BmBRC-Z4可显著上调BmFoxL2-2启动子活性;20E处理BmN细胞4 h时,BmN细胞中BmFoxL2-2,BmBrc-z1和BmBrc-z4的表达量比对照组的显著上调;BmBrc-z1和BmBrc-z4在家蚕幼虫、预蛹、蛹和成虫精巢中均有表达,在5龄幼虫及3日龄蛹精巢中的表达量显著高于卵巢中的。斜纹夜蛾SlFoxL2-2在精巢中有高水平表达,且在精巢和精子中的表达量显著高于在精巢膜中的,可能SlFoxL2-2与精巢发育和精子发生相关。【结论】20E可通过家蚕转录因子BmBRC-Z1和BmBRC-Z4上调BmFoxL2-2的表达,FoxL2-2在调节精巢发育和精子发生中的功能在鳞翅目昆虫中可能是保守的。

(ZrCa)_(x)Y_(2-2x)W_(3)O_(12)固溶体吸水性及热膨胀性能研究

采用固相烧结法制备出(ZrCa)_(x)Y_(2-2x)W_(3)O_(12)(x=0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0)固溶体,并利用XRD、拉曼光谱、热分析及热膨胀仪对材料的结构、吸水性及热膨胀性进行研究。结果表明,随着(ZrCa)^(6+)含量的增加,固溶体的吸水性明显降低,结晶水释放后,该系列固溶体的热膨胀系数呈规律性变化。当x=0.6时,(ZrCa)_(0.6)Y_(0.8)W_(3)O_(12)为近零膨胀,且其线性热膨胀系数a_l为2.79×10^(-7) K^(-1)(453~1 000 K)。

响应面法优化屎肠球菌T2-2产γ-氨基丁酸的发酵条件

从传统腌制芥菜中筛选获得高产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的屎肠球菌T2-2为研究对象,通过单因素实验和响应面法优化菌株发酵条件,提高GABA产量。结果表明:屎肠球菌T2-2产GABA最佳发酵条件为:温度30℃,屎肠球菌T2-2添加量7.50%,L-谷氨酸钠添加量18.93 g/L,pH 6.0,时间1 d,此时菌体生长量为0.338,酶活为3.177μg/mL,GABA产量为1.190 mg/mL,较优化前提高63.01%。本研究为提高乳酸菌产GABA含量提供一定的理论依据。

lncRNA DYNLRB2-2与消化系统肿瘤的相关性研究

探讨lncRNA DYNLRB2-2在食管癌、肝癌、结直肠癌细胞中的表达,以其为消化系统肿瘤的基因分子精准诊断和治疗提供新思路。通过培养人的消化系统肿瘤细胞(食管癌细胞、肝癌细胞、结直肠癌细胞)及正常对照细胞,从肿瘤细胞及其对应的正常细胞中提取RNA后反转录,并通过qRTPCR检测lncRNA DYNLRB2-2在每组细胞中的对应表达量,以验证其在三种消化系统肿瘤细胞与正常细胞中是否存在表达差异,并通过统计结果推断lncRNA DYNLRB2-2对消化系统肿瘤的发生发展是否具有一定的影响。实验结果显示,消化系统肿瘤细胞中lncRNA DYNLRB2-2基因的表达量明显高于对照细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。lncRNA DYNLRB2-2在食管癌、肝癌、结直肠癌患者中表达量的升高,提示其可能促进消化系统肿瘤的发生发展。

一种用于PROTOS 2-2(MAX)接装纸胶带架的设计

为解决PROTOS 2-2(MAX)在生产新版玉溪和谐卷烟时接装纸搭接不上的问题,我们根据PROTOS 2-2的机器情况设计发明了一种接装纸搭接的胶带架,使新版玉溪和谐的接装纸可以顺利搭接。

江西相山铀矿田CUSD2-2孔成像光谱编录与蚀变分带研究

岩心成像光谱扫描与编录将是数字化时代地质调查和矿产资源勘查的新一代技术,通过相山铀矿田CUSD2-2孔中的应用,改进岩心成像光谱编录中的数据预处理流程及方法,并结合地质分析合理确定端元光谱和蚀变带。在CUSD2-2孔岩心成像光谱编录中,提取了长波云母、短波云母、绿泥石+云母、赤铁矿、方解石和蒙脱石共6种光谱端元,根据矿物学原理和相山铀矿田蚀变特征,认为长波云母为水云母(伊利石)化,短波云母应为绢云母(白云母)化,绿泥石+云母主要为绿泥石化;在已识别的6类热液蚀变中,赤铁矿化主要受岩石破碎带控制,其余5种蚀变受岩性和断裂破碎带双重控制。整个钻孔从上到下可分为浅部(0~980 m)中度碱性蚀变,中部(980~1230 m)原生岩石及深部(1230~2600 m)弱酸-碱耦合蚀变3个蚀变带;由于CUSD2-2孔位于两条NNE向断裂夹持部位,深部弱酸-碱耦合蚀变带的发现表明该区深部存在热液作用,进一步认为其邻区可能存在更强的酸性蚀变和伴生较好铀矿化。

宁夏枸杞根际土壤链霉菌Ⅱ-2-2-2的基因组测序和次级代谢产物分析

目的 分析链霉菌Ⅱ-2-2-2基因序列,挖掘潜在次级代谢能力生物合成基因簇。方法 采用IlluminaHiSeq+PacBio测序技术获得链霉菌Ⅱ-2-2-2的基因组草图序列,经antiSMASH(v6.0.1)平台分析次级代谢产物合成基因簇,采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术对发酵液进行网络化分析。结果 自宁夏枸杞须根附近的土壤中分离得到一株菌株Ⅱ-2-2-2,经鉴定其与缺乏研究的Streptomycesacrimycini CSSP430 16S rRNA基因序列的相似度达99.64%。其基因组草图序列4 409 970 bp,G+C含量占66.43%,3974个蛋白质编码基因,10个rRNA操纵子和72个tRNA。Anti SMASH分析基因序列至少包含5条次级代谢产物合成基因簇,可能编码线性含唑肽类、核糖体合成和翻译后修饰的肽、非核糖体肽、聚酮类和萜类化合物。获得82个正负模式的离子,并将二级碎片离子在全球天然产物交互分子网络平台进行聚类分析和数据库搜索,发现了24个化学结构。结论 链霉菌Ⅱ-2-2-2具有丰富的次级代谢能力并可能成为研究和开发新抗生素的重要资源。

LncRNA PKD2-2-3对肺腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响

背景与目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)在肺腺癌患者中异常表达,与肿瘤的发生、发展和化疗耐药密切相关。本研究旨在探讨lncRNA蛋白激酶D2(lncRNA PKD2-2-3)在肺腺癌发生、发展过程中发挥的生物学功能,验证lncRNA PKD2-2-3对肺腺癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。方法:基于Affymetrix人类基因芯片转录组阵列2(Affymetrix?GeneChip Human Transcriptome Array 2.0,HTA2.0)分析3对肺腺癌组织及癌旁组织,寻找在肺腺癌组织中高表达的lncRNA,其中lncRNA PKD2-2-3的表达差异最大。利用基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中GSE19188和GSE30219的数据分析lncRNA PKD2-2-3在肺腺癌组织中的表达和对患者预后的影响。通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lncRNA PKD2-2-3在细胞系(HBE、A549、PC9)中的表达情况。在A549和PC9两种细胞系中使用siRNA干扰技术敲低lncRNA PKD2-2-3的表达,通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验和克隆形成实验检测lncRNA PKD2-2-3表达对肺腺癌细胞增殖和克隆形成能力的影响;划痕实验和transwell实验分别检测lncRNA PKD2-2-3表达对肺腺癌细胞迁移和侵袭的影响。蛋白质印迹法(Western blot)检测敲低lncRNA PKD2-2-3表达后对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平的影响。皮下移植瘤模型探究lncRNA PKD2-2-3在体内对肺腺癌细胞增殖的影响。结果:LncRNA PKD2-2-3在肺腺癌组织中呈高表达,且高表达的患者预后较差。对比正常气管上皮永生化细胞HBE,lncRNA PKD2-2-3在肺腺癌细胞系A549和PC9中高表达,敲低lncRNA PKD2-2-3的表达抑制肺腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。Western blot结果显示,敲低lnc RNA PKD2-2-3后,E-cadherin表达水平升高,N-cadherin表达水平降低。皮下移植瘤实验表明,在体内lncRNA PKD2-2-3敲低后抑制肺腺癌的生长。结论:lncRNA PKD2-2-3在肺腺癌组织中上调表达,且与患者的不良预后相关,lncRNA PKD2-2-3的高表达促进肺腺癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,体内外实验表明lncRNA PKD2-2-3的表达与肺腺癌的EMT过程密切相关。

假单胞菌O-2-2利用油脂废水生产鼠李糖脂研究

通过摇瓶培养试验,研究了铜绿假单胞菌O-2-2以植物油精炼废水为原料生产鼠李糖脂生物表面活性剂的适宜条件.结果表明以NaNO3为氮源,碳氮比为15,培养基初始pH值为7.5,32℃,250 r/min培养84 h,鼠李糖脂产量最高,达2.14g/L.液-质联用分析结果表明所提取的糖脂由11种同系物组成,都含有1～2个的鼠李糖和1～2个含β-羟基的碳链长度为8～12的饱和或不饱和脂肪酸.该糖脂生物表面活性剂的临界胶束浓度为69.5 mg/L,可将水的表面张力降至29.2 mN/m,并具有良好的耐温耐盐性.

稀土复合固体超强酸SO4^2-／ZrO2-2％Sm2O3催化合成乙酸辛酯

采用共沉淀法制备了稀土复合固体超强酸SO42-/ZrO2-2%Sm2O3催化剂,并对以乙酸和辛醇为原料合成乙酸辛酯的反应条件进行了探索。研究表明,当辛醇与乙酸的摩尔比为1∶2,反应时间为6h,反应温度为120℃,催化剂用量为6%辛醇的质量时,酯化率可达91.73%,选择性高达100%。研究发现,该催化剂可重复使用,并能活化再生。

蔬菜根际细菌R2-2的鉴定及其抑菌活性

从云南昆明市郊蔬菜根际分离细菌,经平板对峙培养筛选出1株抑菌能力较强的菌株R2-2,通过对其进行形态观察、Biolog微生物自动鉴定系鉴定和16S rDNA序列测定及其系统发育学分析,鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。对R2-2与植物病原细菌(甘蓝黑腐病菌、魔芋细菌性软腐病菌、海棠斑点病菌、水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌)和病原真菌(疫霉菌、尖镰孢菌、茄镰孢菌、立枯丝核菌)进行对峙试验,结果显示,R2-2对水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌有较强的抑菌效果,抑菌圈直径分别达6.83 cm和7.03 cm。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为JN648098。

2-2'-二硝基联苄的铁粉还原新工艺研究

研究了 2 -2′-邻二硝基联苄的铁粉还原法 ;并用正交设计方法考虑了溶剂、催化剂、酸、铁粉用量、反应时间等因素对还原效果的影响 ;及后处理中磷酸的用量。

新显色剂1-羟基-2-(5-NO_2-2-吡啶偶氮)-8-氨基-3,6-萘二磺酸与钯的显色反应

探讨了新显色剂 1 羟基 2 ( 5 NO2 2 吡啶偶氮 ) 8 氨基 3,6 萘二磺酸 (简称 5 NO2 PAH)与钯离子显色的适宜条件及其共存离子的影响 ,建立了 5 NO2 PAH测定钯的新显色反应体系。结果表明 ,在pH 2 .0～ 5 .5范围内 ,钯与试剂形成稳定的 1∶1配合物 ,其最大吸收峰位于 71 2nm ,表观摩尔吸光系数εPd=2 .84× 1 0 4 L·mol- 1 ·cm- 1 ,钯的浓度在 0～ 2 0 μg/1 0mL范围内遵守比尔定律。

显色剂1-羟基-2-(5-NO_2-2-吡啶偶氮)-8-氨基-3,6-萘二磺酸与镍显色反应的研究

探讨了显色剂 1 羟基 2 (5 NO2 2 吡啶偶氮 ) 8 氨基 3,6 萘二磺酸 (简称 5 NO2 PAH )与镍离子显色的适宜条件及其共存离子的影响 ,建立了 5 NO2 PAH测定镍的新显色体系。结果表明 ,在 pH 8.5～ 10 .0范围内 ,镍与试剂形成稳定的 1∶2配合物 ,其最大吸收峰位于 6 5 3nm ,表观摩尔吸光系数εNi=1.0 7× 10 5L·mol- 1·cm- 1,镍的浓度在 0～ 5 μg/ 10ml范围内遵守比耳定律。方法用于合金中镍的测定 ,结果满意。

土鳖虫活性组分F2-2体内抗凝药效实验

目的:以PT、APTT、TT、FIB、血小板聚集率及纤溶图参数为指标,评价土鳖虫抗凝组分F2-2的体内抗凝药效。方法:大鼠皮下注射肾上腺素5天造成急性血瘀症模型后,对模型大鼠灌胃给药土鳖虫抗凝组分F2-2,9天后对各指标进行测定。结果:与模型组相比,灌胃给药后的大鼠PT/APTT均延长、FIB含量降低、血小板聚集率与血液最大凝固程度下降,TT则无差异。结论:土鳖虫抗凝组分F2-2有良好的体内抗凝药效,其作用机制尚有待进一步研究。

串联2-2复合材料的介电性和压电性

以ＰＺＴ为陶瓷相，以聚偏二氟乙烯（ＰＶＤＦ）为聚合物相，采用热压法制备了串联２－２型样品。测试了串联２－２型压电复合材料的介电、压电性能。实验结果表明，串联２－２型复合材料的压电应变系数ｄ３３及介电常数ε均较小；在低频，由于界面极化引起的夹层损耗，其介电损耗ｔｇδ则较大。

棘托竹荪子实体水溶性多糖DE2-2的分离纯化和鉴定

棘托竹荪 (DictyophoraechinovolvataZang ,ZhengetHu)子实体干品经热水抽提 ,乙醇沉淀 ,蛋白酶法和Sevag法去蛋白后得粗多糖DE。DE经乙醇分级沉淀得到三个级分DE1、DE2和DE3。DE2经DEAE SephadexA - 2 5柱进一步纯化得到棘托竹荪多糖纯品DE2 - 2。DE2 - 2经高效液相色谱法测定为均一物质。红外扫描表明 ,其具有典型的多糖吸收峰。纸层析和气相色谱分析结果表明 ,DE2 - 2的单糖组成为 :D -葡萄糖、D -甘露糖、D -半乳糖和L -岩藻糖 ,其摩尔比为 8.68∶1.0 0∶1.85∶0 .74 ,分子量约为 84 0 0 0。经测定 ,DE2 - 2具有一定的抑瘤活性 ,其抑瘤率为38.93%。

土鳖虫多肽F2-2的体外药效研究

目的:通过体外试验,考察土鳖虫多肽F2-2的抗凝、抗血小板聚集与舒张血管药效。方法:以凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(FIB)、血小板聚集率、纤溶图参数与离体血管环张力等为指标,评价多肽F2-2是否具有活血化瘀的作用。结果:土鳖虫多肽F2-2具有延长家兔血浆APTT/PT/TT、降低FIB、降低血小板聚集率、延长凝血启动时间并降低最大凝固程度以及增加大鼠离体血管环张力的作用。结论:体外实验表明,多肽F2-2是中药土鳖虫的活性组分,有继续研究的价值。

E2-2基因腺病毒载体的构建及其对EPCs生长、增殖及ID1表达的影响

目的构建转录因子E2-2基因腺病毒载体,观测内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)过表达E2-2基因对DNA结合抑制因子-1(inhibitor of DNA binding/differentiation,ID1)表达的影响。方法分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs。RT-PCR法扩增E2-2基因CDs全长DNA,克隆入载体pTG19-T后,亚克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建pAdTrack/E2-2重组载体,与pAdEasy-1骨架质粒同源重组形成重组病毒pAd/E2-2,经293细胞包装,获具高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。将该病毒感染EPCs,倒置显微镜观测经感染的EPCs的GFP表达情况。CCK-8(cell count kit-8)法检测病毒pAd/E2-2对EPCs生长、增殖的影响。RT-PCR、Western blot分别检测经感染的EPCs中E2-2与ID1基因及其编码蛋白的表达情况,并予以定量分析。结果分离、培养并鉴定到小鼠骨髓EPCs。克隆到2013 bp的E2-2基因,并获得高效感染力的重组pAd/E2-2病毒。CCK-8法检测表明,与对照比较,过表达E2-2的EPCs的生长、增殖速度减慢,48h开始变得尤为明显(P<0.01);RT-PCR、Western blot及定量分析结果显示,E2-2能下调ID1的表达,与对照比较,差异具统计学意义(P<0.01)。结论分离、培养并鉴定小鼠骨髓EPCs,克隆出E2-2基因,证实E2-2能明显抑制EPCs的生长、增殖,并能下调ID1基因的表达。

锂离子电池正极材料Li_3V_(2-2x/3)Mn_x(PO_4)_3的溶胶凝胶法合成和电化学性能

以CH3COOLi·2H2O、V2O5、Mn(CH3COO)2·4H2O、(NH4)2HPO4和蔗糖为原料,采用溶胶–凝胶法合成了掺锰磷酸钒锂/碳(Li3V2-2x/3Mnx(PO4)3/C)复合正极材料,用XRD、XPS、SEM、电化学性能对样品进行了表征.测试结果表明,少量锰的掺杂并未改变Li3V2(PO4)3/C的单斜结构,Li3V1.94Mn0.09(PO4)3中的Mn和V分别以+2和+3价存在,其颗粒类似球形,直径比较均匀且小于200 nm,并表现出良好的电化学性能.在0.1C倍率和3.0～4.8 V电压内,该样品的首次充、放电容量分别为182.1和168.8 mAh/g,放电效率高达92.69%,而且100次循环后,其放电比容量仍是首次放电容量的77.4%.