皮肤鳞状细胞癌组织微RNA-103a-2-5p、钙黏附蛋白11表达及其临床意义

目的分析皮肤鳞状细胞癌组织中微RNA-103a-2-5p(miR-103a-2-5p)和钙黏附蛋白11(CDH11)的表达水平,探讨二者在临床研究中的意义。方法选取2017年1月至2019年6月宝鸡市人民医院诊治的98例皮肤鳞状细胞癌病人为研究对象,收集病人术中切除的癌组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中miR-103a-2-5p的表达水平。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测CDH11表达水平。TargetScanHuman网站预测miR-103a-2-5p与CDH11的靶向关系;Pearson相关性分析癌组织中miR-103a-2-5p和CDH11水平的关系;Kaplan-Meier生存曲线分析miR-103a-2-5p、CDH11表达与皮肤鳞状细胞癌病人预后的关系;影响皮肤鳞状细胞癌病人预后的因素采用Cox回归分析;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析miR-103a-2-5p和CDH11的表达对皮肤鳞状细胞癌的诊断价值。结果与癌旁正常组织[1.03±0.12,(5.06±1.43)µg/L]相比,皮肤鳞状细胞癌组织miR-103a-2-5p表达水平(1.46±0.38)显著升高(P<0.05),CDH11表达水平[(2.96±0.62)µg/L]明显降低(P<0.05);TargetScanHu-man网址预测miR-103a-2-5p与CDH11间存在结合位点;经Pearson相关性分析,miR-103a-2-5p与CDH11水平呈负相关(P<0.05);两者均与病人病理分级、TNM分期、淋巴结转移、侵袭程度相关(P<0.05);miR-103a-2-5p高表达组和CDH11低表达组复发率显著高于miR-103a-2-5p低表达组和CDH11高表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、miR-103a-2-5p是影响病人预后的危险因素(P<0.05),CDH11是影响病人预后的保护因素(P<0.05);miR-103a-2-5p、CDH11二者联合诊断皮肤鳞状细胞癌的ROC曲线下面积(AUC)为0.836,显著优于其各自单独诊断(P=0.018、0.021)。结论皮肤鳞状细胞癌病人miR-103a-2-5p表达水平升高,CDH11表达水平降低,二者均与病人临床病理特征及预后有密切关系,且二者联合可较好的诊断皮肤鳞状细胞癌。

miR-29b-2-5p通过ABCC1抑制结直肠癌恶性生物学行为的作用机制

目的:探讨miR-29b-2-5p在调节结直肠癌(CRC)恶性生物学行为过程中的分子机制。方法:通过qRT-PCR技术分析CRC组织和细胞系(HCT-116、HT-29、Caco2、SW480和NCM460)中miR-29b-2-5p和ABCC1的转录组表达水平。分别使用细胞计数和Transwell进行评估HT-29细胞的增殖和侵袭能力。使用双荧光素报告系统验证miR-29b-2-5p与ABCC1之间的靶向作用。结果:CRC组织和细胞系中miR-29b-2-5p的表达水平显著低于正常组织(P<0.001),尤其在HT-29细胞系中miR-29b-2-5p的表达水平最为显著降低。过表达miR-29b-2-5p或沉默ABCC1均显著抑制HT-29细胞增殖(P<0.05)与侵袭(P<0.01)。生物信息学预测结果显示,ABCC1的3’UTR区域含有miR-29b-2-5p结合位点。进一步实验表明,miR-29b-2-5p过表达导致ABCC1转录表达水平显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告系统检测结合TCGA公共数据库结果显示,miR-29b-2-5p直接靶向ABCC1 3’UTR区域(P<0.001),并且二者表达水平呈显著负相关(P<0.001)。结论:miR-29b-2-5p通过靶向ABCC1的方式参与调控HT-29细胞的增殖和侵袭,参与CRC的发生发展。

NKX2-5基因多态性联合血清白细胞介素-6、正五聚蛋白3浓度对风湿性心脏病合并心房颤动患者的预测价值

目的探讨NKX2-5基因多态性联合血清白细胞介素(interleukin,IL)-6、正五聚蛋白3(pentraxin 3,PTX3)浓度对风湿性心脏病(rheumatic heart disease,RHD)合并心房颤动(atrial fibrillation,AF)患者的预测价值。方法选取成都医学院第三附属医院2017年1月至2020年12月收治的156例RHD患者作为研究对象,根据患者病程中是否出现AF,分为AF组(81例)和非AF组(75例)。对两组患者NKX2-5基因多态性及血清IL-6、PTX3浓度进行比较分析,采用Logistic回归分析对RHD患者并发AF的危险因素进行分析,并通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析各因素的预测能力。结果AF组患者NKX2-5基因rs251253位点AG型(37.0%vs.18.7%,χ^(2)=6.490,P=0.011)和AA型(11.1%vs.2.7%,χ^(2)=4.237,P=0.040)患者比例明显高于非AF组,差异有统计学意义;AF组患者A等位基因分布频率明显高于非AF组,差异有统计学意义(28.4%vs.13.3%,χ^(2)=14.513,P<0.001)。相对于非AF组患者,AF组患者血清IL-6和PTX3浓度明显升高,差异具有统计学意义[IL-6:(17.00±4.61)ng/L vs.(10.80±4.01)ng/L,t=8.931,P<0.01;PTX3:(2.50±0.67)mg/L vs.(1.23±0.46)mg/L,t=13.695,P<0.01]。二元Logistic回归分析提示,血清IL-6(OR=1.360,95%CI:1.189~1.555)和PTX3(OR=4.896,95%CI:2.237~10.716)浓度升高及NKX2-5基因rs251253位点突变(OR=12.777,95%CI:4.576~35.677)是RHD患者合并AF的独立危险因素。ROC分析结果提示IL-6、PTX3和NKX2-5基因多态性的曲线下面积分别为0.778、0.751和0.723,而三者联合预测概率的曲线下面积为0.902,相较于单个指标显著提升,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论采用CNKX2-5基因多态性联合血清IL-6、PTX3浓度可显著提升对RHD患者合并AF的预测价值,值得临床进一步推广。

基于电路三要素理论的2-5混值/十值计数器研究

通过对2-5混值编码原理、电路三要素理论和N+1值代数理论的分析,定量研究了2-5混值门电路、触发器和带进位/借位的加减法计数器,最后设计了2-5混值/十值译码电路,使计数器输出为十值信号。与以往十值电路的设计方法相比较,此设计方案具有编码效率高、供电电压低等特点。计算机模拟验证了上述理论和依此理论设计的电路的正确性。

外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化

目的:构建人Nkx2-5基因融合绿色荧光蛋白真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,探讨外源性Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化的作用。方法:以真核表达质粒pEFSA-HA-Nkx2-5为模板,PCR扩增得到人Nkx2-5基因,将目的片段亚克隆到pEGFP-N1载体,鉴定正确。将重组质粒pEGFP-N1-Nkx2-5以脂质体法转染P19细胞,G418筛选2周,聚集4d,贴壁培养16d。以免疫细胞化学检测desmin、α-sarcomeric actin和cardiac Troponin T(cTnT)的表达。结果:将Nkx2-5基因正确插入pEGFP-N1载体,外源表达Nkx2-5基因可使P19细胞在无诱导剂、聚集条件下表达desmin、α-sarcomeric actin和cTnT蛋白。结论:成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5,外源表达Nkx2-5基因诱导P19细胞向心肌分化。

Nkx2-5基因诱导P19细胞分化中心肌标志物的表达

目的研究同源框基因Nkx2-5在心肌发生中的作用。方法实验分转染组和未转染组,转染组细胞为稳定表达Nkx2-5的P19细胞,未转染组细胞为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4、8、12、16d,免疫细胞化学检测α横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,α-MHC)、心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)基因的表达。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁的8、12、16d出现表达,表达量有增高趋势;16d与8d比有显著差异(P<0.01);RT-PCR结果显示:转染组GATA-4在贴壁培养的4d有表达,8、12d表达逐渐增多,16d时表达有所下降。α-MHC和ANF在贴壁培养的8d有表达,12d和16d时表达逐渐增多。统计结果表明GATA-4在8、12、16d的表达量与4d比有显著差异(P<0.05或P<0.01),α-MHC在12、16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.05,P<0.01),ANF在16d的表达量与8d比有显著差异(P<0.01),16d表达量与12d比也有显著差异(P<0.01);未转染组结果均为阴性。结论外源表达Nkx2-5基因可诱导P19细胞逐渐表达心肌标志物。

新型三脚架配体1,3,5-三-(n-2-5-二氮杂己烷基)-苯的合成及其Co(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)、Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)配合物稳定性研究

合成了含多胺的三脚架配体 1,3,5 三 (n 2 ,5 二氮杂己烷基 ) 苯 (L) ,在 (2 5 .0± 0 .1)℃ ,I =0 .1mol·dm-3KNO3 溶液中测定了其质子化常数以及配体与二价过渡金属离子Co(Ⅱ )、Ni(Ⅱ )、Cu(Ⅱ )、Zn(Ⅱ )的二元稳定常数 .对配体与不同金属离子的配位能力的比较发现 ,配位情况符合Irving Williams序列 .

基于T门的2-5混值/十值加、减运算电路设计

本文通过对编码技术的研究,提出采用2-5混值编码方案研究十值运算电路;在电路具体实现过程中,借用T运算,设计2-5混值/十值T门;然后,在此基础上,按真值表直接设计2-5混值/十值全加器和全减器的运算电路。最后用PSPICE模拟验证所设计的电路具有正确的逻辑功能。

慢性乙型肝炎病人注射α-干扰素后2-5AS活性动态变化及其临床意义

21例(13例慢性活动型肝炎,8例慢性迁延性肝炎)慢性乙型肝炎用干扰素(IFN)治疗后,研究HBV DNA、DNA聚合酶活力(DNA-P),血清HBeAg水平及末悄血2′,5′A合成酶(2-5AS)的关系。用IFN后2-5AS在3小时内开始上升,12～24小时达高峰。经IFN治疗HBV DNA、DNA-P和HBeAg转阴的患者,其2-5AS活力比不转阴者明显增加,二者有非常显著性差异。结果提示:2-5AS活力可以预测干扰素治疗的疗效、是用作治疗前预测对干扰素应答的一个指标。

3个贵州地方鸡种NKX2-5基因多态性及生物信息学分析

以高脚鸡、威宁鸡、乌蒙乌骨鸡(含白壳蛋鸡和绿壳蛋鸡)3个贵州地方鸡种为研究对象,构建品种DNA池,扩增NKX2-5基因第1外显子全部序列及第2内含子部分序列,采用直接测序法对3个品种(4个群体)的NKX2-5基因进行单核苷酸多态性检测,利用生物信息学软件预测不同多态性位点对NKX2-5基因mRNA二级结构、蛋白质二级结构的影响。结果表明,在3个品种(4个群体)中共检测到G108A、T288C、C400T、T420G和G429A5个SNPs位点,其中,G108A位于非编码区;T288C、C400T位于第1外显子区;T420G和G429A位于内含子区。T288C和C400T均为错义突变,T288C突变导致丝氨酸(Ser)变为脯氨酸(Pro)、C400T突变导致丙氨酸(Ala)变为缬氨酸(Val),SNPs位点对于NKX2-5基因mRNA二级结构、蛋白质二级结构有一定影响。

转录因子NKx2-5表达在大鼠右心室心肌重塑模型的变化

目的:观察增加大鼠右心室压力负荷后,右心室心肌重塑与同源盒转录因子NKx2-5表达的变化。方法:注射野百合碱(MCT)制作大鼠肺动脉高压模型,测量大鼠不同时间点肺动脉压和右心室肥厚指数;采用RT-PCR法和Westernblot分析,分别测定右心室心肌NKx2-5及其下游基因心房利钠因子(ANF)的mRNA及蛋白表达。结果:注射MCT后第14天,右室心肌明显肥厚,NKx2-5与ANF的mRNA及蛋白表达亦明显增加,与其呈明显正相关。结论:右心室壁压力负荷增加可作为原发性刺激,使在心脏胚胎发育早期表达的心脏同源盒基因NKx2-5表达增加,NKx2-5在成熟心肌重塑中可能起作用。

2型糖尿病患者糖类抗原19-9、糖类抗原12-5、细胞角蛋白19片段与糖化血红蛋白A1c水平相关性研究

目的 探讨2型糖尿病患者肿瘤标志物糖类抗原19-9(CA19-9)、糖类抗原12-5(CA12-5)、细胞角蛋白19片段(CY21-1)与糖化血红蛋白A1c(HbA1c)水平的相关性。方法 选取自2021年6月至2021年12月收治的101例2型糖尿病患者为糖尿病组,并选取同期体检人群70例纳入健康组。糖尿病组患者根据其HbA1c水平分为糖尿病A组(6%~8%,n=51)与糖尿病B组(8%~12%,n=50)。比较各组CA19-9、CA12-5及CY21-1等指标水平,分析糖尿病患者血清中肿瘤标志物水平与HbA1c水平的相关性。结果 糖尿病B组CA19-9、CY21-1水平明显高于糖尿病A组与健康组,差异有统计学意义(P<0.05);糖尿病A组与健康组CA19-9、CY21-1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);3组受试者CA12-5水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。皮尔逊相关性分析结果显示,糖尿病患者血清CA19-9、CY21-1水平与HbA1c水平呈明显正相关(P<0.05)。结论 2型糖尿病患者血清CA19-9、CY21-1水平与HbA1c水平存在相关性。

GX2CrNiMoN22-5-3不锈钢的固溶处理工艺研究

在不同的固溶退火温度(980、1010、1040、1070和1100℃)分别保温30 min,冷却方式为水冷。观察其显微组织,测定其显微硬度,测定了经不同固溶处理后在3.5%的NaCl溶液中的Tafel极化曲线。结果表明:随固溶退火温度的升高,铁素体量减少,显微硬度降低;在1070℃时,铁素体和奥氏体相当,显微硬度最小,腐蚀倾向最小。固溶处理最优工艺为1070℃×30 min,水冷。

妊高症患者胎盘MiR-26b和Nkx2-5的表达水平及临床意义

目的探究妊娠高血压疾病患者胎盘micro RNA-26b(MiR-26b)和Nkx2-5的表达水平及临床意义。方法选择2016年3月～2017年10月于笔者医院接受治疗的60例妊高症患者(包括20例妊娠期高血压、20例轻度子痫前期和20例重度子痫前期)为实验组,另选择同期住院的20例健康孕妇作为对照组。实时定量PCR(q RT-PCR)技术检测胎盘组织MiR-26b水平;蛋白质印迹(Western blot)技术检测胎盘组织Nkx2-5水平。结果轻度子痫前期组和重度子痫前期组的新生儿体重及胎盘重量较健康对照组均显著降低(P<0.05)。q RT-PCR结果显示,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组胎盘组织MiR-26b水平较健康对照组均显著升高(P<0.05),且随着病情的加重,MiR-26b水平逐渐上升(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,妊娠期高血压组、轻度子痫前期组和重度子痫前期组胎盘组织Nkx2-5水平较健康对照组均显著降低(P<0.05),且随着病情的加重,MiR-26b水平逐渐降低(P<0.05)。妊高症患者胎盘组织MiR-26b水平与Nkx2-5水平显著呈负相关(P<0.05)。妊高症患者胎盘组织MiR-26b水平与新生儿体重、胎盘重量呈负相关(P<0.05),Nkx2-5水平与新生儿体重、胎盘重量显著呈正相关(P<0.05)。结论妊高症患者胎盘组织中MiR-26b表达上调、Nkx2-5表达下调,且与病情严重程度相关,暗示MiR-26b、Nkx2-5可作为妊高症的独立诊断因子。

纳米金-银加强法对骨髓微环境中Nkx2-5^+细胞定位的实验研究

目的应用包埋前纳米金-银加强法,电镜观察骨髓微环境中Nkx2-5+细胞并进行形态学分析。方法取BALB/c小鼠双后肢胫骨,脱钙后行冰冻切片,利用1.4 nm超微纳金颗粒标记骨髓纵切面Nkx2-5+的细胞,通过银加强使金颗粒增大,Epon 812树脂包埋,常规超薄切片,电镜下观察。结果免疫金颗粒主要标记Nkx2-5+细胞的胞质,极少数胞核也可见到免疫金颗粒。免疫金颗粒标记细胞均为体积较大的骨髓单核细胞,偶见双核细胞。结论包埋前纳米金-银加强法除可应用于神经系统的研究外,也可应用于骨髓微环境中抗原的精确定位。

心脏转录因子Nkx2-5、GATA-4真核表达质粒的构建

目的:构建人类心脏特异性转录因子Nkx2-5、GATA-4的真核表达质粒,探讨Nkx2-5、GATA-4在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法:以质粒人脑c DNA为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2-5、GATA-4编码区序列。将真核表达载体pCDNA 3.1-HA、pCDNA 3.1-flag分别和Nkx2-5、GATA-4的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCDNA 3.1-HA-Nkx2-5、pCDNA 3.1-flag-GATA-4,转化至大肠杆菌,质粒抽提后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果:成功设计引物扩增出Nkx2-5、GATA-4基因编码区约1 kbp及1.3 kbp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2-5、GATA-4基因序列。结论:成功构建了含有Nkx2.5、GATA4的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。

同源盒基因Nkx2-5促进5-氮胞苷诱导的单层P19细胞表达心肌标志物

目的:探讨同源盒基因Nkx2-5基因在5-氮胞苷(5-aza)诱导单层生长的P19细胞向心肌细胞分化中的作用。方法:以稳定表达Nkx2-5的P19细胞为实验组,P19细胞为对照组。两组细胞均单层培养并以5-aza(1μmol/L)诱导,倒置显微镜下观察细胞的生长状态;在诱导后4、8、12、16 d,以RT-PCR检测转录因子GATA-4、α-肌球蛋白重链(α-MHC)和心房利钠多肽(ANP)基因的表达。结果:对照组经5-aza诱导后ANP没有表达;GATA-4在8、12、16 d有表达;α-MHC在12、16 d有表达。实验组5-aza诱导后,GATA-4在诱导4、8、12、16 d有表达;α-MHC和ANP都是在5-aza诱导后的8、12和16 d表达。两组结果比较显示实验组GATA-4和α-MHC基因的表达时间提前;两组除α-MHC在12 d的表达无差异外,其他取材时间点实验组两个基因的表达量与对照组相比均增高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:Nkx2-5促进5-aza诱导的单层生长的P19细胞向心肌分化。

NKX2-5诱导P19细胞向心肌分化的研究

目的探索NKX2-5在心肌分化中的作用和机制。方法实验分转染组和未转染组,转染组为稳定表达NKX2-5的P19细胞,未转染组为P19细胞。两组细胞悬浮培养4d,形成聚集体后贴壁培养,于贴壁培养的4d、8d、12d、16d,免疫荧光双标和Western blot检测横纹肌α肌动蛋白(α-SA)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达;取贴壁培养16d的细胞透射电镜观察细胞超微结构变化。结果转染组α-SA和cTnT两种蛋白在聚集体贴壁4d时没有表达,8d、12d、16d出现表达和共表达。转染组部分细胞出现幼稚的细胞连接和肌丝样结构;未转染组没有发现两种蛋白的表达,电镜观察未发现分化的细胞。结论稳定表达NKX2-5基因的P19细胞可向心肌分化,但不适于作为心脏发育的体外模型。

基于2-5混值编码的十值乘法器

通过对十值逻辑编码技术的研究,发现2-5混值编码方案能有效抑制冗余态,使一位十值信号的编码效率达到100%。提出了2-5混值编码方案,借助T运算,推导出2-5混值/十值T门的逻辑函数表达式及电路结构;根据真值表,利用T门,设计了2-5混值/十值乘法器。在PSP ICE 9.0环境下,采用0.5μm CMOS工艺,对所设计的电路进行计算机模拟,验证了其逻辑功能的正确性。