2-BFI对EAE小鼠iNOS和COX-2 mRNA表达的影响

目的探讨咪唑啉2受体(I2R)高选择性高亲和力配体2-BFI对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)mRNA表达的影响。方法使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)抗原诱导EAE小鼠模型。采用临床症状评分、病理学检查和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察完全福氏佐剂(CFA)对照组、EAE组和2-BFI干预组小鼠行为学、中枢炎性细胞浸润及iNOS和COX-2mRNA表达变化。结果 2-BFI干预组较EAE组临床症状明显减轻(P<0.01),中枢炎性细胞浸润显著减少(P<0.01),iNOS和COX-2的mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论 I2R高选择性配体2-BFI对EAE小鼠具有一定保护作用,其作用机制可能与降低iNOS和COX-2 mRNA表达有关。

2-BFI对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓内IFN-γ、TNF-α的影响

目的:探讨2-BFI对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内IFN-γ和TNF-α的影响。方法:50只雌性SD大鼠随机分为5组,对照组、EAE组、低、中、高剂量2-BFI干预组,每组10只,采用豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)免疫诱导SD大鼠建立EAE模型,观察每组大鼠发病情况;采用HE染色观察中枢神经系统(CNS)的病理变化,对其炎症浸润程度加以评分;ELISA法测定颈髓IFN-γ和TNF-α含量。结果:中剂量2-BFI组在EAE临床症状和病理学改变差异有统计学意义(P<0.05);中剂量2-BFI组脊髓内IFN-γ和TNF-α下降最为显著(P<0.05)。结论:中剂量2-BFI对EAE大鼠具有神经保护作用,其作用机制可能与抑制了表达有关。

2-BFI对EAE大鼠的脊髓TGF-β和IL-10免疫组化表达的影响

目的探讨2-BFI对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓转化生长因子-β(TGF-β)和白介素-10(IL-10)表达的影响。方法 50只雌性SD大鼠根据随机数字表法随机分为5组:对照组、EAE组、低剂量2-BFI干预组(1.5mg/kg)、中剂量2-BFI干预组(3mg/kg)和高剂量2-BFI干预组(6mg/kg),每组10只,采用豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)免疫诱导SD大鼠建立EAE模型,观察每组大鼠发病情况并进行临床症状评分,采用常规HE染色和LFB髓鞘染色观察中枢神经系统(CNS)的病理变化,免疫组化法检测TGF-β和IL-10表达。结果与EAE组比较,大、中、小剂量2-BFI干预组大鼠EAE发生率下降,临床症状减轻,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润减少,但仅中等剂量2-BFI在EAE临床症状和CNS内炎性细胞浸润方面差异有统计学意义(P<0.05);与EAE组比较,中等剂量2-BFI干预组脊髓中TGF-β和IL-10表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中等剂量2-BFI对EAE大鼠的神经保护作用最佳,其作用推测与上调TGF-β和IL-10的表达有关。

2-BFI对EAE大鼠中枢神经系统内小胶质细胞及MCP-1的影响

目的观察2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉[2-(-2-benzofuranyl)-2-imidazoline,2-BFI]对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠中枢神经系统内小胶质细胞及MCP-1的影响,并探讨其保护EAE大鼠的作用机制。方法 50只雌性SD大鼠随机分为EAE组、2-BFI低剂量组、2-BFI中剂量组、2-BFI高剂量组及对照组,每组10只,采用豚鼠脊髓匀浆免疫诱导SD大鼠建立EAE模型,观察每组大鼠发病情况并进行临床症状评分;采用HE染色和LFB髓鞘染色观察中枢神经系统的病理变化,对其炎症浸润程度加以评分;用免疫组化法测定脑干中激活的小胶质细胞及MCP-1阳性细胞数量。结果与EAE组比较,大、中、小剂量2-BFI干预组大鼠EAE发病率下降,临床症状减轻,潜伏期延长,中枢神经系统内炎性细胞浸润减少,2-BFI中剂量组在EAE临床症状和病理学改变方面差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,与EAE组比较,2-BFI中剂量组的活化的小胶质细胞数及MCP-1阳性细胞数均减少(P<0.05)。结论中剂量2-BFI对EAE大鼠具有神经保护作用,其作用机制可能与2-BFI抑制小胶质细胞的激活,减少MCP-1的表达有关。

不同剂量2-BFI对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的观察不同剂量的2-BFI对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响。方法将60只SD大鼠分为对照组、EAE组和2-BF(I0.75、1.5、3及6 mg/kg)组,采用动物行为学、常规HE染色和LFB髓鞘染色观察大鼠的发病情况与中枢神经系统(CNS)的病理变化。结果 EAE组9只大鼠出现典型的EAE行为学改变,CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失。经2-BFI干预后,大鼠EAE发病率下降,临床症状减轻,潜伏期延长,CNS内炎性细胞浸润减少和髓鞘脱失减轻。但与EAE组比较,仅3 mg/kg 2-BFI在EAE临床症状和CNS内炎性细胞浸润方面差异有统计学意义(<0.05)。结论 3 mg/kg 2-BFI对EAE大鼠有神经保护作用。

2-BFI对氟化钠致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的通过观察神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)线粒体形态、功能及细胞凋亡的发生情况,探究唑啉化合物2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对氟化钠(NaF)诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。方法用不同浓度NaF(0.5、1.0、1.5、2.0、4.0 mmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h,用CCK-8法检测SH-SY5Y细胞增殖能力;用NaF和不同浓度的2-BFI(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L)处理24 h,用CCK-8法检测SH-SY5Y细胞增殖能力。应用透射电镜观察线粒体形态,用ATP检测试剂盒、线粒体红色荧光探针(TMRM)试剂盒检测线粒体功能,用TUNEL染色法检测细胞凋亡的发生情况,用蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果SH-SY5Y细胞存活率随NaF浓度的升高而逐渐下降,选定NaF后续实验浓度为2.0 mmol/L(P<0.01);2-BFI治疗24 h可以提高细胞存活率,在10 mmol/L时,细胞存活率较高,为99.169%,当浓度高于10 mmol/L时细胞存活率随之下降,选定10 mmol/L为2-BFI后续实验浓度。与对照组相比,NaF组线粒体形态改变,ATP水平和线粒体膜电位(Δψm)下降,细胞凋亡率上升,Bcl-2蛋白含量减少,Bax、cleaved caspase-3蛋白表达增高;与NaF组相比,2-BFI给药组线粒体形态改善,ATP水平和Δψm升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白含量升高,Bax、cleaved caspase-3蛋白表达降低。结论2-BFI可以改善SH-SY5Y细胞线粒体形态及功能、减少SH-SY5Y细胞凋亡,从而对氟中毒发挥神经保护作用。

2-BFI对星形胶质细胞糖氧剥夺损伤的保护及抗线粒体凋亡的研究

目的探讨2-BFI对星形胶质细胞糖氧剥夺损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)的保护作用,并从抗线粒体凋亡途径探讨2-BFI抗糖氧剥夺损伤的机制。方法原代培养星形胶质细胞,制成糖氧剥夺损伤模型,分为对照组、OGD组、OGD+2-BFI组,药物组分为0.75、1.5、3.0、6.0、12.0(μg/ml)五个浓度,2-BFI干预后测定细胞活力,选出最佳的药物浓度,以该浓度进一步在细胞水平上研究2-BFI对线粒体膜电位、caspase-3活性、细胞凋亡率的影响。组间比较采用SPSS 17.0进行单因素方差分析。结果各个浓度的2-BFI均能提高糖氧剥夺损伤后的星形胶质细胞存活率,其中以1.5μg/ml的效果最佳;给予浓度为1.5μg/ml 2-BFI干预OGD组能显著提高线粒体膜电位(13.50±5.88,8.48±4.79,P<0.05),抑制caspase-3活性(4.56±0.10,4.85±0.10,P<0.05)、降低细胞凋亡率[(24.6±1.60)%,(46.5±1.10)%,P<0.05]。结论星形胶质细胞糖氧剥夺损伤后,2-BFI具有提高细胞存活率,稳定线粒体膜电位、抑制caspase-3活性,进而降低细胞凋亡率的作用。

2-BFI对大鼠局灶性脑缺血的保护作用以及对Bcl-2表达的影响

目的:观察不同剂量的2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉[2-(2-benzofu-ranyl)-2-im idazoline,2-BFI]对脑缺血的神经保护作用以及对Bcl-2表达的影响。方法:采用线栓法建立大脑中动脉阻塞(MCAO)大鼠脑缺血模型,随机分为假手术组、模型组和2-BFI低、中、高剂量(1.5,3,6 mg.kg-1)组,通过TTC染色、HE染色、电镜、TUNEL染色、免疫组化等方法比较不同剂量的2-BFI对神经功能、梗死体积、脑组织病理、神经元超微结构、凋亡细胞及Bcl-2蛋白表达的影响。结果:2-BFI中剂量能显著减轻神经功能缺损、减小脑梗死体积、减轻脑组织病理损伤和神经元超微结构损伤、减少缺血半暗带凋亡细胞数、上调Bcl-2蛋白的表达,与模型组、2-BFI低剂量组、2-BFI高剂量组比较均有显著性差异。结论:中剂量(3 mg.kg-1)2-BFI对MCAO大鼠的神经保护作用最佳,能显著上调Bcl-2的表达。

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对星形胶质细胞糖氧剥夺损伤的保护及抗脂质过氧化作用

目的:探讨2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对星形胶质细胞糖氧剥夺(oxygen-glucosedeprivation,OGD)损伤的保护作用及脂质过氧化的影响。方法:制成星形胶质细胞糖氧剥夺损伤模型,分为正常对照组、OGD组、OGD+2-BFI干预组(浓度分别为0.75、1.5、3、6和12μg/mL),测定星形胶质细胞存活率,选出抗OGD损伤最佳浓度,以该浓度进一步观察2-BFI对脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量的影响。结果:星形胶质细胞在OGD损伤后,不同浓度的2-BFI均能提高细胞存活率,其中1.5μg/mL的效果最佳;予1.5μg/mL 2-BFI干预OGD组能显著降低MDA含量,增加GSH含量。结论:2-BFI能保护星形胶质细胞OGD损伤,且有抑制脂质过氧化的作用。

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察脑缺血再灌注后2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法:采用线栓法建立SD大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组、模型组和用药组(2-BFI 3 mg/kg)。于再灌注24 h后断头取脑,用免疫组化染色法检测Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:用药组Bcl-2阳性细胞数明显高于模型组(P<0.01),Bax阳性细胞数明显低于模型组(P<0.01)。结论:2-BFI于脑缺血再灌注后立即给药能显著上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达。

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对大鼠脑缺血后神经功能及血管新生的影响

目的:观察2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉[2-(2-benzofu-ranyl)-2-imidazoline,2-BFI]对局灶性脑缺血大鼠神经神经功能恢复和缺血半暗带区新生血管形成的影响。方法:制备SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分为假手术组、2-BFI组和对照组,通过改良神经功能缺损评分(modified Neurological Severity Scores,mNSS)、TTC染色、免疫组化学检测脑内vWF的表达、异硫氰酸荧光素右旋糖酐(FITC-dextran)法行脑微血管灌注成像等研究方法研究2-BFI对神经功能、脑缺血梗死区的体积、内皮细胞及血管新生影响。结果:①2-BFI组的神经功能缺损评分(NSS)有明显改善(P<0.05);②2-BFI组脑梗死体积百分比小于对照组(P<0.05);③2-BFI组阳性细胞数明显高于对照组(P<0.05);④2-BFI组的脑内缺血半暗带区域毛细血管分布较为密集且充盈状态良好,微血管显影面积明显高于对照组(P<0.05)。结论:2-BFI能促进脑缺血大鼠神经功能恢复,促进脑内缺血半暗带区域血管新生,增加微血管血流灌注。

2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉对大鼠心肺复苏后的脑保护作用

目的:观察大鼠心肺复苏后脑能量代谢变化及新型N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂2-(2-苯并呋喃基)-2-咪唑啉(2-BFI)的脑保护作用机制。方法:120只成年雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、常规复苏组和2-BFI组,其中常规复苏组和2-BFI组建立心脏骤停/心肺复苏模型。待自主循环恢复后,2-BFI组股静脉注射2-BFI 3 mg·kg^(-1),假手术组和常规复苏组股静脉注射等量生理盐水。各组分别于0.5,3,6,12,24 h取材,每个时间点8只,采用HPLC法测定组织腺苷酸含量,HE染色观察大脑皮层病理变化,分光光度法测定ATP酶活性。结果:各组间大鼠体质量、肾上腺素用量、平均动脉压(MAP)、胸外按压时间参数等比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与常规复苏组比较,2-BFI组的5’-ATP、EC和TAN于24 h显著升高,5’-AMP显著下降(P<0.05或P<0.01);6,12,24 h的Na^(+)-K^(+)-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性均显著升高(P<0.01)。与0.5 h比较,常规复苏组和2-BFI组24 h的5’-ATP、5’-AMP、TAN、EC差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);12 h和24 h的Na+-K+-ATP酶和Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATP酶活性差异有统计学意义(P<0.01)。假手术组各时间点形态结构清晰,神经细胞无肿胀;常规复苏组在6 h后,脑组织细胞坏死,细胞体积缩小,胶质细胞周围间隙扩大,血管周围有大的空白区域及细胞碎片,结构稀疏,见核固缩、深染等细胞缺血坏死表现;2-BFI组6 h后核周间隙扩大,较少坏死空泡区,胶质细胞轻度水肿。结论:大鼠心肺复苏后存在脑能量代谢障碍,2-BFI能改善脑能量代谢,减轻脑再灌注损伤,具有脑保护作用。

EAE大鼠脑组织咪唑受体变化的研究

目的观察炎性脱髓鞘脑病动物模型(EAE)大鼠脑组织咪唑啉2受体(12R)的变化,探讨12R是否参与了炎性脱髓鞘白质脑病的病理过程。方法将大鼠分为EAE模型组及CFA对照组,EAE模型组通过免疫当天予四足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)-CFA的方式免疫大鼠,后予腹腔注射NS0.4mL每12h一次,于发病高峰期处死。CFA对照组大鼠通过免疫当天予四足垫皮下注射NS-CFA的方式免疫大鼠,后予腹腔注射NS0.4mL每12h1次,连续19d;所有大鼠均予免疫0,48h腹股沟皮下注射百日咳菌苗0.1mL(1×109菌体)。两组大鼠脑组织12R进行饱和结合试验,检测其密度和亲和力变化。结果 CFA对照组大鼠没有发病,EAE组6只大鼠,发病4只。CFA对照组脑组织12R的Kd和Bmax值分别是3.367±0.94nM和162±22.19fmol·mg-1蛋白。EAE组大鼠脑组织12R的Kd和Bmax值分别是5.416±1.153nM和263.0±31.99fmol·mg-1蛋白;与CFA对照组相比,其受体密度明显上调(n=6,P<0.05),而亲和力明显下降(n=6,P<0.01)。结论炎性脱髓鞘脑病模型EAE大鼠脑内12R受体密度上调,亲和力降低。

咪唑啉I2受体生物学功能研究进展

本综述总结归纳了咪唑啉I2受体生物学功能研究的最新进展。咪唑啉I2受体配体是探讨与I2受体有关的药理作用的一种非常有价值的研究工具,大量证据提示咪唑啉I2受体配体本身具有抗伤害感受性作用,并且与镇痛药的联合使用不仅增强镇痛药的抗伤害性感受性作用,还可以减轻长期使用镇痛药产生的耐受性和依赖性等副作用。咪唑啉I2受体配体的另一作用是具有确切的神经保护作用,但其具体机制需要进一步探索及研究。此外,一些研究表明咪唑啉I2受体具有改善阿尔兹海默病、抗抑郁、调节体温等作用。