基于化学发光酶免疫分析法检测花生过敏原Ara h 2

Ara h 2是花生主要过敏原之一,为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法,减少因误食导致花生过敏事件的发生,该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度,建立了一种检测花生过敏原Ara h 2的间接双抗夹心化学发光酶免疫分析法,并对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行评价。该方法的检出限为1.085 ng/mL,线性范围为3.12~200 ng/mL,添加回收率为78.30%~94.39%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好,与其他常见食物过敏原无交叉反应。该方法与相同抗体所建立的间接双抗夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法相比,在灵敏度上表现出一定优势。该研究开发的化学发光酶免疫分析法可对花生食品生产过程中和消费前的Ara h 2过敏原成分检测提供可靠的技术支持。

以极早发型炎性肠病为表型的婴幼儿X连锁淋巴组织增生综合征2型1例并文献复习

报道1例以极早发型炎性肠病为表型的婴幼儿X连锁淋巴组织增生综合征2型患儿的临床资料,并进行文献复习。

钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂治疗心力衰竭的临床综合评价体系构建与实践

目的:建立钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂治疗心力衰竭的临床综合评价体系,并进行实证评价,旨在为其抗心力衰竭的临床价值提供参考。方法:通过文献分析、专家访谈、安全信号挖掘等手段,结合德尔菲法,根据相关文件及指南,围绕药学特性、安全性、有效性、可及性、经济性和其他属性形成SGLT2抑制剂治疗心力衰竭的综合评价体系,并开展多维度的数据整合与分析研判。结果:构建了一套科学、客观、可量化的SGLT2抑制剂抗心力衰竭的临床综合评价体系。对各维度评价结果加权综合分析后,达格列净得分为83.14分,恩格列净为78.36分,艾托格列净为73.70分,卡格列净为70.18分。结论:基于目前的证据,SGLT2抑制剂各品种在心力衰竭治疗中有不同的优势。该评价体系及实证结果可为SGLT2抑制剂用于心力衰竭的临床治疗提供科学、有效、安全、经济的直观证据。

ALG2在口腔鳞状细胞癌中的表达及其预后诊断价值

目的:分析凋亡关联基因2(apoptosis-linked gene-2,ALG2)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cellcarcinoma,OSCC)组织中的表达及其与临床病理特征的相关性、预后诊断价值。方法:实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测ALG2在5对新鲜OSCC组织、癌旁组织及OSCC细胞系、人口腔黏膜角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)中的表达;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测ALG2在128对OSCC组织和癌旁组织中的表达,并分析其表达高低与临床病理特征及预后的相关性;利用TCGA数据库分析ALG2在OSCC组织中的表达及其预后诊断价值。结果:ALG2在OSCC组织和细胞系中的表达明显高于其在癌旁组织和HOK细胞中(P<0.05);ALG2低表达组OSCC患者的总体生存率、无疾病生存率和无进展生存率均显著高于ALG2高表达组(P<0.05);T分期、淋巴结转移、ALG2表达水平均是影响OSCC患者预后的因素(P<0.05),且ALG2表达是OSCC患者预后的一个独立预测因素(P<0.01);ALG2对OSCC可能具有一定的诊断价值[曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.807]。结论:ALG2在OSCC中高表达,且与患者预后不良有关,对OSCC可能具有一定的诊断价值。

钠-葡萄糖耦联转运体2抑制剂对代谢综合征相关代谢紊乱的作用研究进展

代谢综合征是一组复杂的代谢紊乱症候群,其全球发病率不断升高,严重威胁人类的健康,但临床上尚无特效药。钠-葡萄糖耦联转运体2(SGLT2)抑制剂是一种新型口服降糖药物,它不仅可以通过抑制肾脏近曲小管上皮细胞对葡萄糖的重吸收促进尿糖排泄这种非胰岛素依赖方式降低血糖,还可以通过改善胰岛β细胞功能、降低炎症反应、抑制氧化应激来降低血糖。此外,SGLT2抑制剂还可以通过渗透性利尿、增加脂肪代谢以减轻体重;通过抑制交感神经系统过度激活、改善血管功能等作用降低血压;通过增加三酰甘油降解进而改善血脂;通过促进肾脏及肠道尿酸排泄和减少尿酸合成来降低血尿酸。本文就SGLT2抑制剂对代谢综合征相关代谢紊乱的改善作用及其相关调控机制进行综述。

肝细胞癌组织p53凋亡刺激蛋白2表达及临床意义

目的探讨肝细胞癌组织p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)表达及临床意义。方法选取2016年6月至2019年6月在首都医科大学附属北京同仁医院接受手术切除治疗的80例肝细胞癌患者为研究对象,收集所有患者的肝细胞癌组织及癌旁正常组织,比较两种组织ASPP2表达水平;分析肝细胞癌组织ASPP2蛋白表达与临床病理特征、预后以及与X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、p53蛋白表达的关系。结果肝细胞癌组织ASPP2 mRNA表达水平、蛋白高表达率和蛋白表达评分均明显低于癌旁正常组织(均P<0.05)。肝细胞癌组织ASPP2蛋白表达与病理分期、临床分期、脉管浸润等有关(均P<0.05),与性别、年龄、HBV感染、肝硬化、甲胎蛋白水平、肿瘤数量、包膜侵犯等均无关(均P>0.05)。ASPP2蛋白高表达患者累积无病生存率和累积5年总生存率均明显高于ASPP2蛋白低表达患者(均P<0.05)。ASPP2蛋白高表达的肝细胞癌组织XIAP蛋白表达水平明显低于ASPP2蛋白低表达的肝细胞癌组织,而p53蛋白表达水平明显高于ASPP2蛋白低表达的肝细胞癌组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肝细胞癌组织ASPP2低表达与病理进展、预后不良有关,其作用机制可能与调控XIAP、p53有关。

钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂治疗冠心病患者的疗效及作用机制

钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)是近年来上市的一种新型降血糖药,主要通过减少肾脏近曲小管中葡萄糖的重吸收来降低血糖。临床上大量的研究表明,SGLT2i对心血管有额外的益处。现围绕SGLT2i在冠心病的一级预防和二级预防、急性心肌梗死早期、合并心力衰竭的冠心病患者中的疗效及可能的作用机制进行综述。

TiO_(2)/Bi_(2)S_(3)纳米棒交联异质结构增效光电化学性能

利用光电化学分解水技术实现太阳能到氢能的直接转化是解决能源和环境问题最有希望的方法之一。通过自组装溶剂热法将Bi_(2)S_(3)纳米棒与TiO_(2)纳米棒复合,构建了Bi_(2)S_(3)/TiO_(2)纳米棒交联异质结构用作光电催化分解水的光阳极。研究了不同反应温度对其光电性能的影响,其中反应温度为160℃时构建的Bi_(2)S_(3)/TiO_(2)光电极的光电流密度达到0.2 mA/cm^(2),是原始TiO_(2)纳米棒光电极的20倍。

鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用

为建立鸭血管紧张素转换酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)定量检测方法,首先利用纯化的鸭ACE2重组蛋白,成功制备了兔抗鸭ACE2多克隆抗体,间接ELISA法确定抗体效价为1∶800;然后利用制备的鼠抗鸭ACE2多克隆抗体作为捕获抗体,通过戊二醛二步法对兔抗鸭ACE2多克隆抗体进行HRP标记,并将HRP标记的兔抗鸭ACE2多克隆抗体作为检测抗体,纯化获得的鸭ACE2重组蛋白作为标准品,建立鸭ACE2双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对抗体浓度、捕获抗体最适包被条件、孵育条件、封闭条件及显色条件等进行优化;通过Western blot法检测正常白鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织间ACE2表达的变化;利用RT-qPCR方法检测正常鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织中ACE2基因的相对表达量。结果表明:所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测浓度为5 ng·mL^(-1),最佳线性范围为25~1 600 ng·mL^(-1),批内变异系数为1.65%~5.62%,批间变异系数为3.66%~6.81%,可检测出麻鸭各组织中ACE2含量。传染性浆膜炎组白鸭以及健康鸭心脏、肝脏等组织样品ACE2含量或表达存在差异,心脏组织中显著升高或上调;鸭传染性浆膜炎组心脏中ACE2 mRNA水平显著上调,肝脏组织中ACE2 mRNA水平升高不明显。采用该ELISA方法对不同畜(大鼠、猪、羊)、禽(鸭、鸡、鹅)的不同组织中ACE2进行了定量测定,证实该方法在不同畜禽上存在较大种属差异,仅适用于家禽ACE2的定量检测。综上,该研究成功建立了鸭ACE2检测的双抗体夹心ELISA方法,可用于禽类样品中ACE2的快速定量检测。

猪肉中2-(三氟甲基)吩噻嗪的Ic-ELISA检测

为了快速检测猪肉中的镇静剂2-(三氟甲基)吩噻嗪(2-(trifluoromethyl)phenothiazine,TFPTZ),分别用偶氮苯甲酸法、混合酸酐法合成了半抗原、完全抗原,通过免疫新西兰大耳白兔获得了多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫方法(Ic-ELISA)对猪肉中TFPTZ进行了定量分析,实验条件:包被抗原浓度1.25μg/mL,多克隆抗体稀释16000倍,37℃包被3 h,封闭液为质量分数1%的牛血清白蛋白(BSA),TFPTZ稀释液为含体积分数10%的DMSO的PBS,竞争反应60 min.该方法相关系数R^(2)为0.9991,IC_(50)为1.5002μg/L,最低检测限IC_(10)为0.2841μg/L,线性(IC_(20)~IC_(80))为0.4307~5.2252μg/L,与5种TFPTZ结构类似物的交叉反应率小于1.2%,样品添加回收率为93.26%~109.13%,变异系数小于6%,实际样品检测结果与高效液相色谱法测定结果高度一致,表明建立的快速检测猪肉中TFPTZ的Ic-ELISA方法具有良好的准确度,适用于快速检测猪肉中TFPTZ的残留量.

交联淀粉微球对Ni^(2+)的吸附性能研究

以可溶性淀粉为原料,N,N′-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,采用反相悬浮聚合得到了一种交联淀粉微球(CSM),利用扫描电镜、红外光谱仪和X射线衍射仪对其结构进行表征。研究了在不同温度下CSM对Ni2+的静态吸附行为,并根据吸附等温线研究了吸附热力学性质,结果表明:在308～328K和研究的浓度范围内,CSM对Ni2+吸附行为符合Freundlich方程;CSM吸附Ni2+的吸附焓变ΔH、吸附自由能变ΔG、吸附熵变ΔS均为负值,表明吸附是一个自发的、放热的熵减小过程,适当降低温度有利于吸附。热力学性质分析结果表明CSM主要通过物理吸附方式吸附Ni2+。

充血性心力衰竭患者尿液水通道蛋白-2的临床检测

目的 :探讨充血性心力衰竭 ( CHF)患者尿液水通道蛋白 -2 ( aquaporin-2 ,AQP2 )浓度的变化及其与低钠血症的关系。方法 :应用双抗体夹心 ELISA法检测 CHF患者 ( 3 64例 )和健康对照者 ( 82例 )的尿液 AQP2浓度 ,并测定血钠、左室射血分数 ( L VEF)等指标。结果 :CHF患者比对照组尿 AQP2的浓度明显增高 ( P<0 .0 1) ,且 CHF越重( NYHY等级越高、L VEF越小 )及血钠越低 ,尿 AQP2的浓度越高。结论 :CHF患者水潴留及低钠血症越重 ,尿液AQP2排出越多。监测尿液 AQP2浓度 ,为临床防治 CHF及水钠失衡提供了新的检测指标和方法。

胃癌细胞表面α2,3唾液酸糖链结构的检测及意义

目的:检测胃癌组织中能与植物凝集素MAL(Maackia amurensis leukoagglutinin)特异性识别的糖蛋白末端糖链结构α2,3唾液酸残基,探讨这种糖链结构与胃癌患者临床病理学特征之间的关系。方法:采用凝集素组织化学染色法,检测55例胃腺癌组织及40例大肠癌组织(20例结肠癌,20例直肠癌)石蜡标本切片中α2,3唾液酸残基结构,通过对比分析,探讨这种糖链结构在胃癌细胞表面出现的特异性及其意义。通过计算MAL结合阳性率(MI),采用半定量法评价这种糖链结构与胃癌患者临床病理学特征之间的关系。结果:55例胃癌组织均呈现MAL阳性染色,尽管其显色位置及MI有所不同。在胃癌组织中,MAL仅在胃癌区域内有显色,而在癌旁相对正常组织内无显色。且MI与胃癌的侵袭深度显著相关,在T3、T4阶段明显高于T1、T2阶段(P=0.0024)。此外,α2,3唾液酸残基表达量与胃癌的分化程度相关,在低分化的胃癌组织中显著高于高、中分化的胃癌组织(P=0.0323)。另外,α2,3唾液酸残基结构与胃癌患者的年龄及性别无关。而在大肠癌组织中,MAL在癌组织及癌旁相对正常组织内均有显色,正常肠粘膜的吸收细胞及杯状细胞也呈现MAL着色。结论:胃癌细胞表面存在MAL特异性识别与结合的糖蛋白糖链结构α2,3唾液酸残基;这种糖链结构可能是一种有价值的胃癌病理学指标。

新疆维、汉族鼻咽癌患者LMP2A特异性T细胞免疫反应差异性研究

目的：探讨新疆维吾尔族、汉族鼻咽癌患者外周血潜伏膜蛋白2 A（LMP2 A）特异性T细胞免疫反应的差异性。方法选择114例鼻咽癌初治患者（维吾尔族48例，汉族66例）及120例健康志愿者（维吾尔族50例，汉族70例），治疗前抽取肘静脉血，分离外周血单个核细胞，采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测外周血中LMP2 A特异性T细胞（CTL）水平。比较鼻咽癌患者与健康志愿者、维吾尔族患者与维吾尔族健康志愿者、汉族患者与汉族健康志愿者、维吾尔族患者与汉族患者外周血 LMP2 A特异性 CTL频数的差异。结果鼻咽癌患者的外周血 LMP2A特异性CTL水平明显低于健康志愿者（P=0．0316）；维吾尔族鼻咽癌患者和汉族鼻咽癌患者分别与同民族健康志愿者比较，外周血 LMP2 A特异性 CTL频数均低于同民族健康志愿者（P=0．0329，P =0．0479），差异有统计学意义；汉族鼻咽癌的外周血中 LMP2A特异性 CTL水平亦高于维吾尔族鼻咽癌患者，差异有统计学意义（P =0．0227）。结论鼻咽癌患者对于 LMP2A特异性的T细胞免疫反应明显低于健康人群，这可能是 EBV潜伏感染，最终导致鼻咽癌发生的重要原因之一。

基于有限元法的移动2杆柔体机械手动力学仿真

研究了移动2杆柔体机械手动力学问题。该移动机械手由弹性-阻尼悬架轮式移动载体和2杆柔体机械手组成,并假定移动载体以恒线速度通过不规则路面。综合采用经典有限元法并引入中间单元坐标系和浮动坐标法,以回避由单元刚体运动所导致的弹性构件非零应变,从而精确描述机械手弹性变形与参考运动间的动力学耦合问题。综合利用拉格朗日原理和牛顿-欧拉方程并在笛卡儿坐标系下,以简洁的矩阵、矢量形式构建了该系统的完整动力学模型。采用数值方法给出了该动力学模型正解的仿真结果。通过与刚-柔体模型、刚体模型仿真结果的比较,证实该柔体系统存在动力学耦合现象及构件弹性振动对系统性能有负面影响。

小麦中T-2毒素酶联免疫吸附测定法(ELISA)

T-2毒素是某些植物致病菌的次生代谢产物,尤其是由镰刀菌(Fusarium sp)引致的麦类、玉米等作物的赤霉病,菌体在一定条件下能产生大量的该类毒素.T-2毒素对人畜的毒性很大,同时,还与某些癌症的发病率有密切的关系.T-2毒素的检测方法,常用的有薄层层析法,气相、液相色谱法以及气-质联用等,这些方法。

乳腺癌病人血清HER-2/neu检测及其临床意义

【目的】本研究分析晚期乳腺癌患者血清HER-2/neu的水平与预后的关系,并探讨其临床意义。【方法】酶联免疫法(ELISA)检测94例晚期乳腺癌患者血清HER-2/neu的浓度,分析血清与组织中HER-2/neu表达的相关性,并分析其与患者预后的关系。【结果】94例晚期乳腺癌患者就诊时的血清HER-2/neu浓度为0.34～275.25μg/L(平均浓度为23.69μg/L)。血清HER-2/neu浓度的高低与化疗的有效性、疾病进展时间的长短无关。晚期乳腺癌患者的血清HER-2/neu浓度与肿瘤组织中HER-2/neu表达强阳性是一致的。【结论】血清HER-2/neu尚不能确立为独立的预后指标,需要更多的病例进行分析。

猪增生性肠病间接ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用

【目的】研制一种检测胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)抗体的间接ELISA试剂盒,为LI的监测和疫苗评价提供工具。【方法】表达并纯化LI的外膜蛋白Omp2,以其为包被抗原建立检测LI抗体的间接ELISA方法,优化ELISA反应条件;用建立的ELISA方法检测稀释的LI阳性血清来评价试剂盒的敏感性,检测其他病原的阳性血清来评价试剂盒的特异性;试制3批试剂盒,制定试剂盒的敏感性和特异性检验标准,测定试剂盒在4℃的保存期;用试制的试剂盒检测LI阴性和阳性质控血清,研究试剂盒的成立条件;通过对不同时间和猪场采集的1 000份临床猪血清样本的检测来评价该试剂盒的实用性;用本试剂盒与进口商品化试剂盒平行检测LI阳性和阴性血清各50份以评价试剂盒的符合率。【结果】成功表达并纯化了Omp2蛋白,蛋白纯度为90.31%,在Western blot试验中可以与LI阳性血清发生反应。ELISA最佳反应条件为:Omp2以200 ng/孔4℃包被12-16 h;血清1﹕50稀释,37℃孵育30 min;羊抗猪Ig G-HRP 1﹕20 000稀释,37℃孵育30 min;TMB底物37℃显色15 min,用0.5 mol·L^(-1)的硫酸终止反应。该试剂盒检测LI阳性血清的最高检出倍数为8,敏感性较好;试剂盒检测E.coli、App、Mhp、SS2、PRRSV、PRV的结果均为阴性,特异性较好。制定了试剂盒的敏感性和特异性检验标准。试剂盒在4℃可保存15个月。试剂盒的成立条件为:阳性标准血清OD_(450nm)≥1.25,阴性标准血清OD_(450nm)<0.3。试制的试剂盒批内、批间重复性试验变异系数均小于10%。与国外商品化ELISA检测试剂盒对比的符合率达86%。用试制的ELISA试剂盒检测1 000份华东部分地区临床猪血清样品,其中LI阳性检出率为59.90%,表明LI在华东地区猪群中普遍存在。【结论】本研究开发的LI间接ELISA抗体检测试剂盒特异性高,灵敏度高,与商品试剂盒符合率高,可用于临床LI抗体的检测。

单克隆抗体双抗体夹心ELISA快速检测肝炎患者血清中TIMP-2

目的建立一种检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的双抗体夹心ELISA法,探讨血清TIMP-2的水平与肝纤维化病程进展程度的关系.方法确定包被TIMP-2单克隆抗体(McAb)和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-2 McAb的最佳工作浓度,建立双抗体夹心ELISA方法.并用于临床初步检测408例肝炎血清TIMP-2水平.结果包被TIMP-2 McAb的最佳工作浓度为2μg/ml,HRP标抗体的最佳工作浓度1:400.该法具有良好的重复性,灵敏度达5 ng/ml,中和抑制率在80%以上,稳定性能好,与国外TIMP-2 ELISA试剂盒进行对比试验,表明两种检测方法有良好的相关性(Y=1.2752X-4.7465,r=0.976).临床检测表明TIMP-2随着病损纤维化程度加重而升高,与正常人血清TIMP-2水平相比差异显著(P＜0.01～0.001).结论该法能够快速检测人血清中TIMP-2浓度,血清TIMP-2可作为定量诊断肝纤维化指标之一.本试验为国内TIMP-2诊断试剂盒的研制和开发提供了科学实验依据.

小麦中T-2毒素的污染调查

采用酶联免疫吸附测定法(ELISA),调查了我国部分地区1990年国产小麦 T-2毒素的污染状况。调查结果表明,在330份样品中,有264份检出 T-2毒素,占样品总数的80%。样品中毒素含量最高达1122.0ppb,平均含量为53.3ppb。在引起食物中毒的48份小麦样品中,检出高含量的 T-2毒素(84.5—1064.4ppb)。我国小麦中 T-2毒素的污染水平与小麦赤霉病的流行密切相关。