重组枯草芽孢杆菌全细胞催化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷

2-O-α-D-甘油葡糖苷是一种在食品、化妆品、保健品及医药领域有着重大应用前景的高附加值产品,但国内仍未实现2-O-α-D-甘油葡糖苷的工业化生产,且鲜有关于2-O-α-D-甘油葡糖苷合成的相关报道。文中旨在开发一种利用食品安全级重组枯草芽孢杆菌全细胞催化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的方法,通过构建一株异源表达肠膜明串珠菌蔗糖磷酸化酶(Sucrose phosphorylase,SPase)的重组枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168/pMA5-gtfA,并将其用作全细胞催化剂合成2-O-α-D-甘油葡糖苷,通过优化培养温度、时间及全细胞转化条件,提高其转化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的产量。结果表明,重组枯草芽孢杆菌B. subtilis 168/pMA5-gtfA在30℃下培养20 h,菌体裂解物酶活力最大达1.43 U/mL,并且在1 mol/L蔗糖、2.5 mol/L甘油、pH 7.0、菌体OD600为40、30℃下全细胞转化反应48h,共生成2-O-α-D-甘油葡糖苷189.3g/L,平均转化速率为15.6mmol/(L·h),蔗糖转化率约为75.1%,是目前报道的利用重组枯草芽孢杆菌催化合成2-O-α-D-甘油葡糖苷的最高产量,这为2-O-α-D-甘油葡糖苷的工业化生产及应用奠定了理论和实验基础。

HPLC法测定养血安神糖浆中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和毛蕊花糖苷的含量

目的:测定养血安神糖浆中毛蕊花糖苷和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。方法:采用HPLC法同时测定毛蕊花糖苷和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。色谱柱:SHISEIDO CAPCELL PAK C_(18)柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-1%乙酸溶液(10:13:77);检测波长:2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯2-O-β-D葡萄糖苷:320 nm、毛蕊花糖苷:334 nm;柱温:35℃;流速:0.8 ml·min^(-1);进样量:10μl结果:2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷:线性范围为0.40μg·ml^(-1)～0.16 mg·ml^(-1),r=0.999 9,平均回收率为100.03%,RSD为1.32%(n=6);毛蕊花糖苷:线性范围为0.40μg·ml^(-1)～0.16 mg·ml^(-1),r=0.999 9,平均回收率为103.96%,RRD为0.82%(n=6)。结论:方法简便、快速、准确,为提高和完善该制剂的质量标准提供了依据。

用核磁共振二维谱确定芫花素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖基(2→1)-O-α-L-吡喃鼠李糖苷的双糖结构

[目的]确定一种黄酮双糖苷中双糖的结构。[方法]用1H-1HCOSY-45、HSQC和HMBC谱确定双糖的联接位置。[结果]鼠李糖联连在葡萄糖的2位上(1→2)。[结论]采用核磁共振二维谱能明确该双糖的1H,13C核的化学位移归属。

何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(STI)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的 研究何首乌水溶性成分 2 ,3,5 ,4′ 四羟基二苯乙烯 2 O β D葡糖苷 (STI)对溶血磷脂酰胆碱 (LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV30 4细胞中血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法 在ECV30 4细胞培养基中加入LPC(2 5mg·L- 1 )或LPC与STI共孵 2 4h ,收集各组条件培养基 ,用基础酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量 ;用原位杂交法、RT PCR及RealtimeRT PCR法检测LPC对内皮细胞VEGFmRNA的表达及STI的影响。结果 ECV30 4细胞暴露于LPC后 ,VEGF蛋白分泌明显增加 ;加入STI后VEGF蛋白含量明显降低 ;LPC可以使ECV30 4中VEGFmRNA的表达明显升高 ,并使VEGF1 6 5mRNA的表达升高 ;STI可剂量依赖性地抑制VEGF1 6 5mRNA的高表达。结论 LPC能诱导ECV30 4细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGFmRNA ,1× 1 0 - 5mol·L- 1STI可抑制LPC的作用 ,降低VEGF的高表达。

血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用

目的探讨血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验在诊断2型糖尿病早期肾损伤中的应用。方法选择2018年1月~2019年6月我院收治的50例2型糖尿病早期肾损伤患者作为为研究组,另选取同时间段收治的50例单纯2型糖尿病患者作为对照1组,另选取同时间段来我院进行常规体检的50例自愿者作为对照2组。三组均接受血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验诊断,并进行比较分析。结果研究组的糖尿病病程长于对照1组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组的血清C肽水平低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的空腹血糖、尿微量白蛋白/肌酐比值水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的糖化血红蛋白、N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶水平均高于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05);对照1组的血清C肽水平低于对照2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在临床检查诊断糖尿病早期肾损伤过程中,应用血清C肽、糖化血红蛋白与N-乙酰β-D-氨基葡糖苷酶联合检验方法可以起到有效作用,能够提供准确检查诊断参考依据,具有重要应用价值。

金露梅中一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取富集及活性研究

本研究采用AB-8大孔吸附树脂、半制备高效液相色谱对金露梅枝叶中槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸提取分离,并通过13 C NMR鉴定其化学结构,最后采用以4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物的酶抑制剂筛选模型检测其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性和类型。结果显示:槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸分布在20%乙醇大孔吸附树脂(AB-8)洗脱液中,采用半制备高效液相色谱和高效液相色谱分离纯化得槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸2481.8 mg,纯度为97.95%。活性检测结果表明,槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷酸对α-葡萄糖苷酶的最大抑制率为94.67%,IC 50为0.259 mmol/L,抑制率显著高于阳性对照药物阿卡波糖,且抑制剂类型为竞争性抑制。

延年康口服液中四羟基二苯乙烯葡萄糖苷的含量测定

目的 :建立延年康口服液中 2 ,3,5 ,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷的含量测定方法。 方法 :采用反相高效液相色谱法 ,Nova PakC1 8(4μm ,1 5 0mm×3.9mm )色谱柱 ,流速 :0 .8mL·min-1 ,乙腈 水 (2 0∶80 )为流动相 ,检测波长为 32 0nm。结果 :2 ,3,5 ,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷的线性范围为0 .0 4 5 6～ 0 .2 736 μg(r =0 .9991 ) ,平均回收率为98.6 9%,RSD为 1 .91 %(n =6 )。结论 :方法简便、快速、准确 ,适合该口服液中 2 ,3,5 ,4’ 四羟基二苯乙烯 2 O β D 葡萄糖苷的含量测定。

HPLC法测定首乌润肠片中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-d-葡糖苷的含量

目的：建立测定首乌润肠片中2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-d-葡糖苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Shimadzu VP—ODS（250mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-水（25：75，F／V），流速为1．0ml／min，柱温为30℃，检测波长为320nm。结果：2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-d-葡糖苷进样量在0．2～5．0μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0．9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2％；平均加样回收率为96．29％，RSD=2．12％（n=6）。结论：该方法操作简便、结果准确、专属性强，可用于首乌润肠片的质量控制。

骨碎补中2个黄酮苷类化合物的NMR研究

从骨碎补(Drynaria fortunei)的乙酸乙酯萃取物中分离得到了2个黄酮苷类化合物,结合其理化性质,并通过ESI-MS,IR,1 H NMR,13 C NMR,1 H-1 H COSY,HSQC,HMBC等多种波谱学方法进行结构鉴定,鉴定化合物1和2分别为山奈酚-3-O-β-D-6″′-乙酰基-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖苷及山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖苷,并对二者的1 H NMR化学位移信号进行了全归属,纠正了文献中C-5和C-9的归属错误.

固相萃取-液相色谱法测定黄芪注射液2个黄烷类化合物的含量

目的:建立黄芪注射液中2个黄烷类化合物的高效液相色谱含量测定方法。方法:采用 Agilent ZORBAX-SB-C_(18)分析柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(43:57);流速:1mL·min^(-1);检测波长:277nm;最佳固相萃取洗脱条件减少了定量分析的杂质干扰。结果:9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(HQ-1),线性范围为0.0888～1.4208μg,相关系数为0.9999;平均回收率为104.4%,RSD=0.4%。2′-羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(HQ-2),线性范围为0.0555～0.888μg,相关系数为0.9999;平均回收率为97.72%,RSD=1.4%。结论:该方法简便、准确、快速,结果可靠,为今后对黄芪注射液的质量控制研究提供了补充依据。

夏枯草中的一个新三萜皂苷

为了研究夏枯草的化学成分,采用柱色谱法分离夏枯草化学成分,从夏枯草中得到1个三萜皂苷(Ⅰ)和1个黄酮苷(Ⅱ),化学及波谱法鉴定化合物I结构为16-氧-17-去甲基-3β,24-二羟基齐墩果-12-烯-3-O-β-D-葡糖醛酸苷;化合物II为刺槐素-7-O-β-D-葡糖苷。化合物Ⅰ为一个新的三萜皂苷,命名为夏枯草新苷A,化合物Ⅱ为首次从夏枯草属植物中分离得到。

鬼针草化学成分的分离和鉴定

目的研究鬼针草的化学成分。方法采用乙醇提取,硅胶柱、聚酰胺柱层析分离纯化,波谱分析鉴定其结构。结果从鬼针草中得到5个化合物:异槲皮苷(Ⅰ),异奥卡宁-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅱ),海生菊苷(Ⅲ),槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅳ),D-甘露醇(Ⅴ)。结论5个化合物中的Ⅳ、Ⅴ是首次从本属植物中得到的。

铁刀木中一个新的色酮苷

目的 研究铁刀木的化学成分。方法 利用硅胶柱色谱和薄层色谱分离铁刀木的化学成分 ,通过理化常数测定和波谱分析等鉴定化合物的结构。结果 从铁刀木树干中分离并鉴定了 5个化合物 ,其结构分别鉴定为 :β 谷甾醇 (I) ,蔗糖 (II) ,正二十八醇 (III) ,2 甲基 5 ( 2′ 羟丙基 ) 7 羟基色酮 2′ O β D 吡喃葡糖苷 (IV) ,3 ,3′ ,4,5′ 四羟基二苯乙烯 (V)。结论 化合物II,III,V为首次从该植物中分得 。

中药大血藤的酚性化合物

目的对中药大血藤干燥藤茎的化学成分进行研究。方法采用现代色谱技术分离化合物,运用现代波谱技术(IR,MS,~1H NMR,^(13)C NMR,~2DNMR)对所得化合物的结构进行鉴定。结果从大血藤的藤茎中分得10个酚类化合物,分别鉴定为1-O-(香草酸)-6-(3″,5″-二-O-甲基-没食子酰基)-β-D-葡糖苷(Ⅰ)、(-)-表儿荣素(Ⅱ)、阿魏酸-对羟基苯乙醇酯(Ⅲ)、3-O-咖啡酰奎宁酸(Ⅳ)、3-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(Ⅴ)、罗布麻宁(Ⅵ)、香草酸(Ⅶ)、原儿茶酸(Ⅷ)、3,4-二羟基-苯乙醇(Ⅸ)、4-羟基-苯乙醇(Ⅹ)。结论化合物Ⅰ为新化合物,化合物Ⅲ～Ⅵ和Ⅷ～Ⅹ为首次从该植物中分得。

石蝉草中的三个新黄酮苷

为了研究石蝉草的化学成分,用色谱法进行分离纯化,从石蝉草的正丁醇萃取部位分离得到3个化合物,根据光谱数据和理化性质进行结构鉴定,分别鉴定为阿拉波亭-4′,7-二甲醚-8-O-β-D-葡糖苷(I)、异高黄芩素-4′-甲醚-8-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-β-D-葡糖苷(II)、异高黄芩素-4′,7-二甲醚-8-O-α-L-阿拉伯糖基(1→4)-β-D-葡糖苷(III)。化合物I,II,III均为新化合物。

小花鬼针草中的苯丙苷类成分及抑制组胺释放活性

目的研究小花鬼针草Bidens parviflora全株的化学成分，并通过组胺抑制实验寻找活性成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20和ODS柱色谱分离化合物，运用1D NMR、2D NMR波谱学方法鉴定了化合物的结构，通过组胺抑制实验测定化合物抗过敏活性。结果分离鉴定了4个苯丙苷类及1个苯甲醇苷成分：4-羟基-3-甲氧基苯丙三醇8-O-β-D-葡萄糖苷（guaiacyl glycerol 8-O—β—D—glucoside Ⅰ）、丁香酚苷（syringin，Ⅱ）、4-烯丙基-2-甲氧基苯酚-O-（6-O-β-D-芹糖基）-β-D-葡萄糖苷[4-allyl-2-methoxyphenol-O-（6-O—β—D—apiofuranosyl）-β-D-glucoside，Ⅲ]、5，7-二羟基色原酮-7-O—β—D-葡萄糖苷（5，7-dihydroxy chromone 7-O-β-D—glucoside，Ⅳ）、苄醇-O-β-D-葡萄糖苷（benzyl alcohol—O—β—D—glucoside，Ⅴ）。化合物Ⅰ～Ⅴ抑制组胺释放，IC50分别为70、61、〉100、52、〉100μg／mL。结论化合物Ⅰ～Ⅴ首次从本植物中分得，Ⅲ为未见文献报道的新化合物，命名为鬼针草酚葡萄糖苷（bidenphenol glucoside）。化合物Ⅰ～Ⅴ具有抑制组胺释放的活性。

大孔吸附树脂法分离制何首乌中的二苯乙烯苷

考察了大孔吸附树脂分离制何首乌中二苯乙烯苷(2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)的工艺参数。以吸附量为考察指标,主要考察了上样浓度、流速、pH对吸附效果的影响,及洗脱液浓度对洗脱效果的影响。结果表明:S-8型树脂对二苯乙烯苷的吸附性能最好,吸附量为40mg/g湿树脂,洗脱率80%,所得产品含量超过60%。

洋金花化学成分的研究(Ⅲ)

目的:研究中药洋金花(Datura metelL.)治疗银屑病有效部位中的化学成分。方法:利用正、反相柱色谱等方法等进行分离,依据理化性质和各种波谱数据进行结构鉴定。结果:从治疗银屑病有效部位中分离并鉴定了3个化合物,分别为对羟基苯甲酸甲酯(methyl-p-hydroxybenzoate)(Ⅰ)、苯甲醇-O-β-D-葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-葡萄糖苷(benzoic alcohol-O-β-D-glucopyranosyl-(1→2)-O-β-D-glucopyranoside)(Ⅱ)和山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-α-L-rhamnopyranoside)(Ⅲ)。结论:化合物Ⅰ和Ⅱ为首次从洋金花中分离得到。