81例单纯性先天性心脏病患者NKx 2.5基因突变筛查及关联研究

目的:探讨NKx 2.5基因突变和单核苷酸多态性(SNP)与人类单纯性先天性心脏病(CHD)的关系。方法:应用聚合酶链反应结合脱氧核糖核酸(DNA)测序技术,对81例单纯性CHD患者(包括室间隔缺损组37例,房间隔缺损组17例,圆锥动脉干畸形组18例,动脉导管未闭组5例,主动脉瓣二叶畸形组4例),74例患者一级亲属(一级亲属组)以及52例正常非CHD对照者(正常对照组)的NKx 2.5基因的所有外显子及其侧翼序列进行突变检测,并对SNP位点进行基因分型,分析单个位点的基因型和等位基因频率是否与CHD相关。结果:所有CHD患者、患者一级亲属基因编码均未发现突变,而在NKx 2.5基因外显子1区域内发现1个SNP位点,这个SNP位点位于上游63位碱基63A>G,导致第21位密码子由GAA转变为GAG,碱基替换后仍编码谷氨酸(Glu),属于同义突变(Glu21Glu)。基因型频率和等位基因频率的分布,在房间隔缺损组和正常对照组之间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:NKx 2.5基因突变与我国单纯性CHD之间无明显相关,该基因上的63A>G SNP位点与先天性房间隔缺损之间可能存在相关性。

叶酸缺乏对孕鼠子代心脏中NKx2.5基因表达的影响

目的探讨叶酸缺乏孕鼠子代心脏发育过程中NKx2.5基因和蛋白表达改变。方法成熟雌性36只SD大鼠随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.5 d、孕17.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR检测NKx2.5基因mRNA表达。Western-blotting测GATA-4蛋白表达水平。结果NKx2.5基因mRNA及其蛋白在孕13.5 d、孕17.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论叶酸缺乏影响NKx2.5基因和蛋白表达水平,可能导致心脏发生发育中形态改变,从而造成心脏功能缺陷。

先天性心脏病患者转录因子Nkx2.5基因突变观察

采用聚合酶链反应结合DNA测序技术,对99例先天性心脏病(CHD)患者及90例正常对照者的Nkx2.5基因外显子1进行序列检测。结果显示,3例室间隔缺损、7例房间隔缺损、1例肺动脉瓣狭窄、1例动脉导管未闭患者和3例对照者的Nkx2.5外显子1第239位发生了A-G的突变。认为转录因子Nkx2.5基因突变与中国CHD的发生有一定的关系。

NKX2.5基因修饰骨髓间充质干细胞对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的:以NKX2.5融合绿色荧光蛋白基因(NKX2.5-pEGFP)质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),将基因修饰后MSCs移植入大鼠心肌梗死模型中,评价其对心功能的影响。方法:体外分离培养大鼠MSCs,构建NKX2.5-pEGFP基因质粒,以lipo2000将质粒转染入MSCs。将基因修饰后MSCs植入心肌梗死后10 d的大鼠心肌梗死区(MSCs组,n=20),同时将注射等体积无血清改良依格尔(DMEM)培养液于心肌梗死区的大鼠作为DMEM组(n=20)。移植注射后4周,通过检测左心室射血分数(LEVF)、左室缩短分数(FS)等研究其对心功能的影响。结果:移植4周后,MSCs组大鼠LEVF[(79±4)%]较DMEM组[(47±3)%]显著提高(P<0.01),MSCs组大鼠FS[(48±9)%]较DMEM组[(25±6)%]显著提高(P<0.01)。结论:移植NKX2.5基因修饰后的MSCs能够改善心肌梗死大鼠心功能。

低压脉动电刺激对体外心肌诱导分化过程中GATA-4和NKx2.5基因表达的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌诱导分化过程中,低压脉动电刺激对心肌转录因子GATA-4和Nkx2.5基因表达的影响,探讨电刺激对骨髓间充质干细胞向心肌分化过程的影响及其分子生物学机理。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代MSCs,对照组以10μmol/L5-氮胞苷(5-aza)诱导,电场组诱导后施加1.5V/cm电场刺激,分别于第1、2、3、4周收集细胞,免疫细胞化学法和western blot技术检测troponin I(TnI)表达,RT-PCR法分析GATA-4和Nkx2.5基因的表达。结果诱导后细胞停止生长,并倾向集落化,诱导第2周开始出现TnI阳性细胞,TnI蛋白在诱导后第2周开始表达,第3、4周明显增强。GATA-4和Nkx2.5基因第1周开始表达,第2周增强,第3周达到高峰,持续到第4周。电场刺激组细胞排列更加紧密,诱导后各时间点GATA-4和Nkx2.5基因表达比对照组明显增强。结论脉动电场刺激促进MSCs向心肌细胞的分化过程,GATA-4和Nkx2.5基因可能调节该促进过程。

NKX2.5基因的表观遗传学改变与先天性心脏病的关系

先天性心脏病（简称先心病）是小儿先天畸形中最常见的疾病，虽然现在有先进的医疗技术来诊断和治疗先天性心脏病，但其患病率和致死率仍然很高。先天性心脏病的病因大多数为遗传-环境相互作用的结果．且多为心血管畸形而不伴有其他畸形，包括了全部先心病病例的90％以上。NKX2．5基因是心肌细胞中的关键转录因子之一．在心脏发育过程中起重要的作用，但其在先天性心脏病中的调控机制尚不清楚。

NKX2.5基因突变在先天性心脏病发病机制中的研究进展

NKX2.5/CSX基因的突变造成多种形态的先天性心脏病(congenital heart disease,CHD),是目前研究最多的与心脏发育密切相关的转录因子基因之一。NKX2.5基因的生殖细胞突变,目前已经发现29种,分别为无义突变、错义突变、缺失等,导致NKX2.5蛋白与DNA结合功能下降或失活,在先心病发病中占据重要位置。最近研究发现,在复杂型先心病中存在多种NKX2.5基因的体细胞突变,多个体细胞突变可能在先心病发病中起叠加效应。

先天性心脏病相关转录因子Csx/Nkx2.5基因的研究

先天性心脏病(CHD)是常见的危害儿童健康的先天性疾病。调控心脏发育基因突变是CHD常见原因,同源盒基因Csx/Nkx2.5是心脏发育过程中最早表达的转录因子,该基因突变影响心脏发育,导致CHD。检测Csx/Nkx2.5基因突变可作为产前CHD诊断的一项指标。

Nkx2.5基因与先天性心脏病的关系

先天性心脏病(以下称先心病)是一类严重危害婴幼儿健康的先天畸形。心脏发育过程中控制发育的基因突变是先心病的常见原因。大量研究表明Nkx2.5作为与发育相关的同源盒基因的一种,在心脏发育过程中起重要的作用,该基因的突变或多态性将影响心脏发育导致先心病。本文系统地阐述了Nkx2.5基因的结构?功能及其与先心病的关系,进而在分子水平上对心脏的发生和先心病发病有更深入的了解。

NKX 2.5基因突变与广西壮族人群先天性房间隔缺损的关系研究

目的探讨NKX 2.5基因突变与广西壮族人群先天性心脏病(CHD)房间隔缺损的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)及DNA测序技术,对30例广西壮族CHD房间隔缺损患者(CHD组)以及30例非CHD患者(对照组)的NKX 2.5基因的全部外显子和侧翼序列进行突变检测,并对单核苷酸多态性位点进行基因分型,分析单个位点的基因型、等位基因频率与CHD房间隔缺损的关系。结果所有CHD房间隔缺损患者NKX 2.5基因均未发现突变,而在基因第二外显子区域发现1个SNP位点,位于上游606位碱基c.606G>C,属于同义突变。两组基因型频率、等位基因频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NKX 2.5基因突变与广西壮族CHD房间隔缺损患者之间无明显相关性,该基因上的606G>C的SNP与先天性心脏病房间隔缺损之间无明显相关性。

NKX2.5基因多态性与成人心血管疾病的相关性

目的研究NKX2.5基因(同源盒转录因子)多位点单核苷酸多态性与成人心血管疾病发病风险的相关性。方法实验采用病例对照研究,纳入心血管疾病患者108例,对照组105例(同期体检的健康人)。采用聚合酶链反应(PCR)结合DNA测序技术对NKX2.5基因rs3729753、rs2277923的多态性位点进行序列扩增、检测和基因分型分布。采用卡方检验对两个多态性位点与成人心血管疾病的风险进行关联分析。结果 rs3729753位点,纯合突变型(CC),突变杂合子(GC)与野生型纯合子(GG)在两组中分布差异无统计学意义(P=0.200)。突变型等位基因C和野生型等位基因G在两组中的分布差异无统计学意义(P=0.213)。rs2277923位点,携带突变等位基因A个体的患病风险是携带野生型等位基因G个体的2.36倍(95%CI 1.50~3.70,P=0.000)。与野生型纯合子(GG)比较,杂合子(GA)个体患病的风险显著增高(OR=2.18,95%CI 1.24~3.85,P=0.007);纯合子(AA)个体患病的风险显著增高(OR=16.62,95%CI 2.07~133.25,P=0.001)。rs2277923位点亚组分析中,冠心病组携带突变等位基因A相对于野生型等位基因G个体的患病风险显著增加(χ~2=8.523,P=0.004)。与野生型纯合子(GG)比较,突变纯合子(AA)个体患病风险显著增高(χ~2=11.396,P=0.001)。原发性高血压组并未发现rs2277923位点突变与疾病存在相关性。冠心病合并原高组携带突变等位基因A相对于携带野生型等位基因G个体的患病风险显著增加(χ~2=13.23,P=0.000)。与野生型纯合子(GG)比较,杂合子(GA)个体患病风险显著增加(χ~2=6.957,P=0.008);纯合子(AA)个体患病风险显著增加(χ~2=13.679,P=0.000)。结论NKX2.5基因rs2277923位点突变是成人心血管疾病的风险因素。

房间隔缺损患者Nkx2.5基因编码区突变检测及意义

为初步探讨心脏正常发育相关基因(Nkx2.5)突变或异常表达导致房间隔缺损(ASD)的发生机制,通过聚合酶链反应-单链构象多态性分析,结合DNA测序和限制性酶切分析方法检测106例ASD患者Nkx2.5基因全部编码区的单核苷酸多态性(SNP)或突变位点。结果表明,在Nkx2.5基因的外显子1中发现G264A位点基因改变,导致氨基酸由丙氨酸转变为苏氨酸(A30T),并对新发现的基因改变位点采用限制性酶切分析方法进一步证实其存在,而对110例正常人该位点的限制性酶切分析未发现存在其位点的改变,证实其位点改变为突变位点。结论:新位点A30T基因改变进一步导致的转录蛋白改变可能是ASD发病的重要的遗传基础。

NKX2.5基因和TBX5基因在先天性心脏病试管婴儿中的突变检测

目的探讨患先天性心脏病的试管婴儿与自然受孕儿间是否存在NKX2.5基因和TBX5基因突变差异。方法应用聚合酶链反应结合DNA测序技术,对68例试管婴儿先天性心脏病患儿和98例自然受孕先天性心脏病患儿的NKX2.5基因编码区1、2和TBX5基因编码区4、5、8进行突变检测。结果在患先天性心脏病的试管婴儿与自然受孕儿中,均发现NKX2.5基因编码区1中第63位碱基发生突变(c.63A>G),该位点基因型及等位基因频率的分布在两组间差异无统计学意义。NKX2.5基因编码区2和TBX5基因编码区4、5、8未检测到突变。结论先天性心脏病的试管婴儿与自然受孕儿间NKX2.5基因和TBX5基因突变无差异,推测辅助生殖技术并未引起NKX2.5基因和TBX5基因突变。

法乐四联症患儿NKX2.5、TBX5、GATA4基因的表达研究

目的:探讨NKX2.5、TBX5、GATA4基因与法乐四联症的发病关系及法乐四联症形成的分子机制。方法:10例法乐四联症患儿(法乐四联症组),为我院2005-06至2005-12心脏中心住院患儿。年龄4个月～8岁,平均3.5岁。6例非先天性心脏病(先心病)意外死亡患儿作为对照(对照组),均没有先心病病史和遗传病家族史。年龄4个月～9岁,平均年龄3.8岁。留取各病例右心室流出道心肌组织,提取心肌组织总RNA,逆转录为与RNA链互补的单链DNA(cDNA)。按照引物设计原则进行引物设计,用来扩增心肌组织NKX2.5、TBX5、GATA4、GAPDH mRNA目的片段。引物长度18bp～22bp,扩增片段长度163bp、206bp、237bp、203bp。应用双标准曲线、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法比较NKX2.5、TBX5、GATA4基因的mRNA含量在对照组和法乐四联症组之间的统计学差异。结果:法乐四联症组的NKX2.5mRNA含量较对照组显著降低,差异有统计学意义。TBX5mRNA和GATA4mRNA含量在法乐四联症组与对照组的差异无统计学意义。结论:人心肌组织中有心脏发育相关基因NKX2.5、TBX5和GATA4mRNA的表达;法乐四联症可能与心肌组织中NKX2.5mRNA含量降低相关。

中国南方单纯性先天性心脏病患者NKX2.5基因突变的研究

目的对中国南方地区单纯性先天性心脏病患者进行NKX2.5基因胚系突变的筛查,探讨其在单纯性先天性心脏病发生中的作用及基因型与表型的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)结合DNA测序技术,对我国南方地区224例单纯性先心病患者和121例健康个体进行NKX2.5基因(包括基因的编码区,5′和3′非翻译区以及外显子与内含子的连接区域)进行突变分析。结果 NKX2.5基因中未检测到致病突变,仅发现三种已报道的SNPs:rs2277963(c.63A>G,GAA>GAG,p.Glu21Glu),rs3729753(c.606G>C,CTG>CTC p.Leu202Leu)和rs703752(c.975-61 G>T),基因型频率及等位基因频率与NCBI数据库中已报道的中国人群携带率无显著性差异。结论中国南方地区单纯性先心病患者中NKX2.5基因致病突变极少发生,其致病突变的发现可能限于某些家系或者有特殊表型的先心病患者中。NKX2.5基因在我国南方地区单纯性先天性心脏病中的致病作用有待进一步研究。

先天性室间隔缺损与NKX2.5基因突变的关系

目的 探讨NKX2.5同源蛋白(NKX2.5)基因突变与广西壮族人群先天性心脏病室间隔缺损的关系。方法 采用聚合酶链反应(PCR)与DNA检测技术,进行30例室间隔缺损患者(VSD)与30例对照组患者的NKX2.5基因全部外显子和侧翼序列的基因突变对比检测,对单核酸多态位性(SNP)位点进行基因分型,分析单个位点的基因型与等位基因频率与VSD的关系。结果 所有VSD患者NKX2.5基因均未见突变,在NKX2.5基因第二外显子区域发现1个SNP位点,位于上游碱基第606位c.606G>C,属于同义突变,CHD组与对照组之间差异无统计学意义(基因型频率比较,χ2=0.640,P>0.05;等位基因频率比较,χ2=0.034,P>0.05)。结论 NKX2.5基因突变与广西壮族人群VSD无明显相关性。

NKX2.5 基因c.63 A>G多态性与先天性心脏病关联性的荟萃分析

目的系统评价NKX2.5基因c.63 A>G多态性与先天性心脏病(CHD)发病风险的相关性。方法计算机检索PubMed、Web of Science、中国知网、万方等数据库,检索时限截至2019年5月31日,获取有关NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD关联性的病例-对照研究,采用Stata 12.0软件进行荟萃(meta)分析。选择优势比(OR)和95%置信区间(CI)分析NKX2.5基因多态性与CHD的潜在发病风险,根据异质性检验结果选择固定或随机效应模型进行数据合并,并采用漏斗图和Egger′s检验评价发表偏倚。结果共纳入18篇文献,研究对象共计4 987例。Meta分析结果显示,NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD发病风险无关联(GG vs AA:OR=1.13,95%CI:0.79~1.61,POR=0.494;GA vs AA:OR=1.05,95%CI:0.75~1.49,POR=0.77;G vs A:OR=1.09,95%CI:0.88~1.35,POR=0.415)。按照国别进行亚组分析结果显示,NKX2.5基因c.63 A>G多态性与CHD易感性在中国及非中国人群中均无相关性;而按照CHD疾病分型进行亚组分析显示,GA基因型的人群ASD发病风险低于AA基因型。结论 NKX2.5基因c.63 A>G多态性可能与ASD的发病有关,但仍需更大样本高质量的病例-对照研究进一步验证。

Nkx2.5、GATA4和TBX5基因在先天性心脏病中表达的研究

探究Nkx2.5、GATA4及TBX5基因在先天性心脏病患儿中的表达情况。方法:本院于2018年9月~2020年9月纳入16例先天性心脏患儿(甲组)开展研究。另抽取意外死亡的15例非先天性心脏小儿心肌组织标本(乙组)作为对照;对患儿心肌组织内RNA进行提取,比较两组患儿Nkx2.5、GATA4及TBX5基因表达情况。结果:甲组患儿心肌组织内Nkx2.5、GATA4及TBX5基因表达情况与乙组相比存在显著差异(P<0.05)。结论:先天性心脏病患儿存在Nkx2.5、GATA4及TBX5基因异常表达情况,通过对这些基因表达情况进行测定一定程度上可用于临床疾病诊断。