人参皂甙20(R)-Rg3对人胶质瘤U87侵袭的影响

目的探讨人参皂甙20(R)-Rg3体外对人胶质瘤系U87细胞侵袭的影响及可能机制。方法采用MTT法检测Rg3对U87细胞黏附纤维连接蛋白能力的影响。采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测Rg3对U87细胞侵袭能力的影响。采用明胶酶活性方法检测Rg3对U87细胞MMP-9和MMP-2蛋白表达的影响。结果 Rg3(12.5、25、50 ng/L)作用24 h后,U87细胞黏附纤维连接蛋白能力逐渐降低,呈显著的浓度依赖性(P<0.05)。体外侵袭实验显示不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞侵袭能力逐渐降低。明胶酶活性检测表明增殖,不同浓度Rg3作用24 h后,U87细胞中基质金属蛋白酶MMP-2蛋白酶原及其活性片段的表达逐渐减少,呈显著的浓度依赖性。结论 Rg3能显著抑制U87细胞的黏附和侵袭能力,可能与Rg3降低MMP-2蛋白酶原及其活性片段表达减少有关。

人参皂甙20(R)-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡的影响

目的探讨人参皂甙20(R)-Rg3对人胶质瘤U87细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法及流式细胞术观察不同浓度的Rg3对U87细胞凋亡的影响,采用细胞吖啶橙/溴乙锭荧光观察凋亡形态学改变,采用Western Blot技术检测细胞Bcl-2、Bax、p-Akt及t-Akt蛋白表达。结果 Rg3显著抑制U87细胞增殖,Rg3呈剂量依赖性诱导肿瘤细胞凋亡。不同浓度Rg3作用U87细胞24h,U87细胞中Bax表达逐渐增高,Bcl-2表达降低,Bax/Bcl-2呈浓度依赖性升高,细胞p-Akt蛋白表达降低,而t-Akt蛋白未见改变。结论 Rg3通过抑制PI3K/Akt信号转导通路中的Akt磷酸化,影响胶质瘤U87细胞系Bcl-2蛋白表达降低,促凋亡Bax蛋白表达增加,调控胶质瘤细胞的凋亡。

人参皂苷20（R）-Rg3抑制肿瘤细胞的迁移与AQP1水通道的可能关系

目的：观察人参皂苷20（R）-Rg3对高转移前列腺癌PC3M细胞迁移能力及细胞内水通道AQP1表达的影响。方法：采用MTT法和划痕实验观察不同浓度Rg3对PC3M细胞活力及迁移的影响；采用免疫荧光法鉴定PC3M细胞中AQP1蛋白的表达；应用免疫印迹法检测不同浓度Rg3对细胞中AQP1表达的影响，蛋白酶体抑制剂MG132和lactacystin对AQP1表达的调节作用，及Rg3对ERK1／2磷酸化的影响及与AQP1表达的关系；

天然柠檬汁催化人参须根粉制备20(S,R)-Rg3和Rg5工艺研究

利用多功能改进型索氏提取器,研究天然柠檬汁催化人参须根粉转化制备稀有人参皂苷20(S,R)-Rg3、Rg5的方法。以乙醇浓度、提取时间和提取筒温度为影响因素,人参皂苷20(S,R)-Rg3、Rg5总得率为指标进行正交试验,对提取工艺进行优化。结果表明,最佳提取条件为提取时间4 h、乙醇浓度30%、提取筒温度75℃。在此条件下,人参皂苷20(S,R)-Rg3、Rg5总得率为3.68%。多功能改进型索氏提取器的梯度提取制备工艺可显著缩短人参皂苷的提取时间,简化提取过程,并有效提高人参皂苷20(S,R)-Rg3、Rg5的总得率。

20(R)-人参皂苷Rg3人体药代动力学研究

目的 研究 2 0 (R) 人参皂苷Rg3(GRg3)人体药代动力学。 方法 高效液相色谱 -紫外检测法。结果8名健康志愿者单剂量口服 3 2mg·kg-1GRg3 ,其药时曲线符合口服吸收有滞后时间的二房室模型 ,Tmax为 (0 6 6± 0 10 )h ,Cmax为 (16± 6 )ng·mL-1,T1/ 2α为 (0 46± 0 12 )h ,T1/ 2 β为 (4 9± 1 1)h ,T1/ 2 (Ka) 为 (0 2 8± 0 0 4)h ,AUC0 -∞ 为 (77± 2 6 )ng·mL-1·h ;6名健康志愿者单剂量口服 0 8mg·kg-1GRg3 ,由于血药浓度低 ,可测数据点少 ,未进行模型模拟 ;两组给药剂量与相应Cmax实测值比较 ,二者成正比关系。结论 本品口服吸收快 ,消除也较快 ,但血药浓度很低。在所试剂量范围内 ,GRg3属一级动力学吸收、消除过程。

20(R)-人参皂甙Rg3对大鼠肝癌细胞的作用

目的 探讨人参皂甙 Rg3对大鼠诱发性肝癌的作用及其机制。方法 建立 SD大鼠诱发性肝癌模型 ,经肿瘤供血动脉灌注不同剂量的 2 0 (R) -人参皂甙 Rg3(0 .375、1.5、6 .0 mg/ kg) ,磁共振成像 (MRI)技术测量治疗前、后肿瘤的体积变化 ,流式细胞仪 (FCM)和免疫组织化学方法检测肿瘤细胞的凋亡、增殖及坏死情况。结果 高剂量组对肿瘤体积的影响与对照组比较 ,其差异具有显著性 (P<0 .0 5 ) ;低、中、高三个治疗组诱导大鼠肝癌细胞的平均凋亡率 (% )分别为 11.0 8± 3.78、13.5 7± 3.34和 2 7.35± 16 .0 4 ,高剂量组较其它组差异显著 ;用药后测得 S期细胞的平均比率 (% )分别为 2 3.98± 9.4 4、19.73± 6 .6 2和 14 .0 9± 3.4 8,治疗组与对照组相比均有显著性差异 ,且药物剂量与其对肿瘤细胞的抑制作用呈正相关。高剂量组中增殖细胞核抗原 (PCNA)与肿瘤坏死因子 (TNF)的表达与对照组相比差异有显著性 ;治疗组组间 PCNA与 TNF的表达差异不显著。结论 经肿瘤供血动脉灌注人参皂甙 Rg3能明显的抑制肿瘤细胞增殖、有效的诱导肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤组织坏死 ,并有剂量依赖性。

20(R)-人参皂苷Rg_3对肿瘤坏死因子-α诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨20(R)-人参皂苷Rg3对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的保护作用及其机制。方法用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导HUVEC损伤,采用噻唑蓝(MTT)法观察20(R)-人参皂苷Rg3对HUVEC活性的影响;Fura-2/AM荧光探针负载细胞,用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定培养的细胞上清液中组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,t-PA)、1型纤溶酶原激活物抑制物(type-1plasminogen activator inhibitor,PAI-1)浓度的变化。结果 (1)TNF-α损伤HUVEC的条件为:TNF-α的质量浓度为20μg/L,损伤时间为24h。(2)20μg/L TNF-α可显著降低HUVEC的吸光度A值,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);而10～80μmol/L的20(R)-人参皂苷Rg3处理后再加入TNF-α的各组细胞吸光度A值与模型组比较,均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。(3)HUVEC受到TNF-α的刺激后细胞内游离钙浓度明显升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);用10～80μmol/L的20(R)-人参皂苷Rg3预处理,则TNF-α诱导的内皮细胞细胞内游离钙浓度升高的幅度均显著降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其半数抑制浓度为67.2μmol/L。(4)TNF-α20μg/L刺激内皮细胞24h后,与对照组比较,培养上清t-PA浓度显著降低,PAI-1浓度明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);20～80μmol/L的20(R)-人参皂苷Rg3预处理后,细胞培养上清中t-PA浓度明显升高,同时可降低PAI-1的分泌,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其抑制PAI-1浓度的半数抑制浓度为36.9μmol/L。结论 20(R)-人参皂苷Rg3对TNF-α诱导的HUVEC损伤具有保护作用,其机理可能与降低细胞内钙离子浓度、抑制PAI-1产生和提高t-PA水平密切相关。

20(R)-人参皂苷Rg_3抗血小板活化因子诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨20(R)-人参皂苷Rg3抗血小板活化因子(PAF)损伤人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法采用MTT法测定PAF诱导HUVEC活性;用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度;用ELISA法测定培养的细胞上清液中t-PA、PAI-1含量.结果 1μmol/LPAF刺激HUVEC 2 h后,可明显降低HUVEC的吸光度值,细胞内钙离子浓度升高,上清液中PAI-1含量明显升高,而t-PA含量无明显变化;20～80μmo/L 20(R)-人参皂苷Rg3可升高HUVEC吸光度值,并呈浓度依赖性显著降低HUVEC内游离钙浓度;20(R)-人参皂苷Rg3降低上清液中PAI-1含量,对t-PA含量无明显影响.结论 20(R)-人参皂苷Rg3对PAF诱导损伤的HUVEC具有抗损伤保护作用,其机理可能与降低细胞内钙离子浓度,抑制PAI-1产生和调节t-PA/PAI-1平衡作用有关.

20(R)-人参皂苷Rg3抗角膜瘢痕机制研究

目的:研究不同浓度的20(R)-人参皂苷Rg3(GRg3)对兔角膜成纤维细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨GRg3抑制角膜瘢痕增生的机制。方法:直接选用大白兔获取兔角膜成纤维细胞后进行原代培养,采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法观察不同浓度(10 mg·L^(-1),20 mg·L^(-1),50 mg·L^(-1),100 mg·L^(-1),150 mg·L^(-1),200 mg·L^(-1))GRg3对兔角膜成纤维细胞增殖作用的影响。应用反转录-PCR(RT-PCR)技术研究不同浓度GRg3对培养的兔角膜成纤维细胞TGF-β1m RNA表达的影响。结果:MTT法检测结果:与对照组比较,当GRg3浓度达到20 mg·L^(-1)及以上时,兔角膜成纤维细胞增殖均显著受抑制。当GRg 3浓度达到50 mg·L^(-1)及以上时,GRg3对兔角膜成纤维细胞TGF-β1 mRNA表达具有抑制作用。结论:GRg3具有抑制体外培养的兔角膜成纤维细胞增殖的作用,并随着GRg3浓度的增加,其抑制作用增强。随培养时间的延长,GRg3抑制作用增强。GRg3对兔角膜成纤维细胞TGF-β1mRNA表达具有抑制作用。

GS-Rg3联合GEM对肝癌HepG2细胞株及其VEGF的影响

目的:探讨GS-Rg3、吉西他滨及GS-Rg3与吉西他滨联合对肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡情况的影响,研究GS-Rg3作用Hep G2细胞后VEGF表达的变化。方法:采用MTT法及流式细胞技术检测Hep G2细胞对GS-Rg3、吉西他滨及GS-Rg3联合吉西他滨的药物敏感性差异。免疫细胞化学法检测Hep G2细胞中VEGF的表达。结果:GS-Rg3和吉西他滨单药或联合用药对Hep G2细胞的增殖呈抑制作用且呈现时间与浓度的依赖性,并能诱导Hep G2细胞凋亡,联合组凋亡诱导作用强于单药组(P<0.05)。GS-Rg3能下调Hep G2细胞中VEGF的表达。结论:GS-Rg3与吉西他滨联合对肝癌Hep G2细胞具有协同抑制作用,可能通过抑制VEGF的表达发挥抗癌作用。

人参皂苷活性单体-20(R)-人参皂苷Rg3药理作用及其机制的研究进展

20(R)-人参皂苷Rg3是人参皂苷的主要活性单体之一,主要用于抗肿瘤治疗。近年来,20(R)-人参皂苷Rg3的药理作用不断取得进展,其中保护心脑血管、增强免疫功能、抗增生性瘢痕、抗疲劳的药理作用尤为值得关注。本文整理近年来国内外与20(R)-人参皂苷Rg3相关文献,论述其主要药理作用及其作用机制,为进一步开发20(R)-人参皂苷Rg3提供了科学依据。

顺铂和20(R)-人参皂苷Rg3的HPLC分析和双载药缓释抗癌药物制备研究

采用具有优良生物相容性的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)为基底材料,通过包覆顺铂(CDDP)和20(R)-人参皂苷Rg3(Rg3),制备出新型双载药缓释抗癌药物,并建立了HPLC-UV检测方法。分别以水-甲醇和水-乙腈洗脱CDDP和Rg3,C18色谱柱分离,其中CDDP经二乙基二硫代氨基甲酸钠柱前衍生。结果表明:经优化测定CDDP和Rg3标准曲线的线性范围分别为0.1~50mg/L和0.5~50mg/L,线性关系良好(R^2>0.9990);包裹PLGA的CDDP和Rg3出现显著的缓释效果,分别在48h和24h达药物释放顶峰85.07%和78.18%。

人参皂甙R_g3联合化疗对30例非小细胞肺癌的近期疗效观察

目的进一步评价一类抗癌新药人参皂甙Rg3治疗肺癌的疗效。方法采用临床对照试验方法,观察化疗联合人参皂甙Rg3对30例中晚期肺癌的疗效及其毒副作用,对照组单纯化疗,试验组在化疗的同时加用20(R)-Rg3,疗程6-8周。结果化疗联合人参皂甙Rg3能显著提高化疗疗效,试验组有效率(PR+CR)为36.6%,对照组为16.7%(P<0.05);对不同组织学类型肺癌之间的疗效无显著性差异(P>0.05)。结论人参皂甙Rg3与化疗合用能显著提高肺癌患者的治疗效果。

人参皂苷Rg3对人鼻咽癌CNE-2细胞血管生成拟态及迁移能力的影响

目的探讨人参皂苷Rg3对人低分化鼻咽癌细胞系CNE-2体外血管生成拟态及迁移能力的影响。方法用不同浓度(0、38、76和114μmol/L)的Rg3处理CNE-2细胞后,体外管道形成抑制实验检测Rg3对CNE-2细胞管道形成能力的影响;Transwell小室法检测Rg3对CNE-2细胞迁移能力的影响;Western blot法检测Rg3对CNE-2细胞中COX-2、HIF-1α、VEGF和Fascin1蛋白表达的影响。结果人参皂苷Rg3能抑制CNE-2细胞体外管道形成的能力,其管状结构数量与Rg3浓度呈负相关(P<0.01);Rg3浓度大于76μmol/L时可以抑制CNE-2细胞的迁移能力,与0μmol/L Rg3比较差异有统计学意义(P<0.05);且Rg3对COX-2、HIF-1α、VEGF和Fascin1蛋白表达的影响趋势分别与Rg3对血管生成拟态和迁移能力的变化趋势呈正相关(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能抑制CNE-2细胞体外血管生成拟态及迁移能力,其分子机制可能与抑制CNE-2细胞中COX-2、HIF-1α、VEGF和Fascin1蛋白的表达有关。

人参皂苷Rg3对小鼠结肠癌原发瘤切除后肝转移瘤生长的抑制作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤生长的荧光成像及血管生成的影响,阐明人参皂苷Rg3抑制原发瘤切除促进转移瘤生长的内在机制.方法:慢病毒转染建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的BALB/c小鼠结肠腺癌细胞株(BALB/c micecolon adenocarcinoma cell line,CT-26),用细胞悬液法构建结肠癌肝转移瘤模型,分为原发瘤切除组、原发瘤未切除组、人参皂苷Rg3组.采用切除原发瘤及人参皂苷Rg3治疗10d,通过小动物活体成像系统观察肝转移瘤的生长情况.应用组织切片苏木素-伊红染色法,观察肿瘤转移灶情况.SP免疫组织化学法检测转移瘤MVD及细胞增殖,TUNEL技术检测转移瘤细胞凋亡.结果:应用慢病毒转染获得稳定表达高强度绿色荧光的CT-26-GFP细胞株.结肠癌肝转移模型治疗结束后,用波长470nm的蓝光激发,通过荧光活体成像系统观察剖离肝脏转移灶发出绿色荧光.原发瘤切除后,人参皂苷Rg3组平均肝转移灶荧光值较原发瘤未切除组及原发瘤切除组有明显的下降(314.17±54.23,388.82±25.97,427.18±44.31);人参皂苷Rg3组、原发瘤未切除组和原发瘤切除组转移瘤发生率分别为40%,50%,100%;平均肝脏质量分别为2.92g±0.60g,3.80g±0.33g,3.98g±0.52g;转移瘤血管密度分别为27.10±3.41,42.60±8.42,62.40±5.08;转移瘤细胞Ki67的表达分别为34.70±6.46,54.30±8.98,65.20±3.82;转移瘤细胞凋亡指数分别为28.37±3.86,12.50±2.99,9.90±2.88.结论:稳定表达绿色荧光蛋白的CT-26-GFP细胞系及其动物模型可以为原发瘤切除研究提供理想的实验材料,应用小动物活体成像系统能够客观定量评价肿瘤在小鼠肝脏的生长情况.人参皂苷Rg3明显抑制小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤的生长,明显抑制转移瘤的血管生成及细胞增殖,促进细胞凋亡.

人参皂甙Rg3对淋巴管内皮细胞生成的影响

目的探讨人参皂甙Rg3[20(R)-Ginsenoside Rg3]对淋巴管内皮细胞迁移、增殖能力及凋亡的影响。方法用含不同浓度人参皂苷Rg3的培养液培养Hela细胞,收集培养上清并制备条件培养液(CM);取健康猪的胸导管内皮细胞进行分离、培养;Ⅷ因子、VEGFR-3抗体联合对淋巴管内皮细胞进行鉴定;通过划线刮除法和MTT法观察人参皂甙Rg3对淋巴管内皮细胞的迁移和增殖能力的影响;Hoechst33258荧光染色检测淋巴管内皮细胞凋亡。结果第Ⅷ因子和VEGFR-3抗体对培养的淋巴管细胞进行联合鉴定,为典型淋巴管内皮细胞;应用划线刮除法和MTT法对对照组与实验组进行比较显示:不同浓度的人参皂甙Rg3能够明显抑制淋巴管内皮细胞的增殖和游走,差异有统计学意义(P<0.01);Hoechst33258证实,经人参皂甙Rg3条件培养液处理后淋巴管内皮细胞,可观察到其核周围有凋亡小体。结论人参皂甙Rg3对淋巴管内皮细胞的迁移和增殖能力有明显的抑制作用,并且有剂量依赖性;人参皂甙Rg3能够诱导淋巴管细胞凋亡。

三七不同药用部位中人参皂苷Rg3的含量测定

目的建立三七中20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3的含量测定方法,评价不同药用部位及加工方式的三七提取物中,两个型的人参皂苷Rg3的含量情况。方法采用高效液相色谱法测定,色谱条件:ECOSIL 120-5-C18-SH色谱柱(4.6×250mm,5μm);流动相为乙腈-异丙醇-水(47:3:50);流速:1.0ml·min^(-1);检测波长:203nm;进样量:10μL;柱温:20℃;测定不同药用部位及加工方式的三七提取物中20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3的含量。结果20(S)-人参皂苷Rg3的含量测定线性范围14.0~279.6μg·ml^(-1),(r2=1.0000),平均加样回收率100.56%,RSD2.46%。20(R)-人参皂苷Rg3的含量测定线性范围14.1~282.0μg·ml^(-1),(R^(2)=0.9999),平均加样回收率101.51%,RSD2.99%。结论该测定方法简便、稳定、高效;三七不同药用部位中根材优于其他药用部位;熟三七中20(S)-人参皂苷Rg3含量明显升高。

人参皂苷20(S)-Rg_3,20(R)-Rg_3,Rg_5,Rk_1对照品的制备

为建立一种简单快速、高效制备人参皂苷20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5、Rk1的方法。利用大孔吸附树脂和硅胶柱层析对样品进行预处理,通过反相高效制备液相色谱,从红参的甲醇提取物中快速分离得到目标产物人参皂苷20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5、Rk1,经检测,4种化合物的纯度均>98%。色谱柱为Polaris C18(250 mm×4.6 mm,10μm),以V(乙腈)∶V(水)=46∶54为流动相,恒梯度洗脱,流速4.0 mL/min,柱温室温,检测波长为203 nm,在此色谱条件下,它们得率分别为0.012%、0.013%、0.012%、0.013%。该方法操作简便,可重复进样,适用于制备高纯度稀有人参皂苷20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rg5、Rk1。