人参皂甙20（S）-protopanaxadiol的^2H、^3H标记及其在A549细胞内的浓度

分别用钠硼氘、钠硼氚还原人参皂甙Rh1的活性形式20(S)-protopanaxadiol(aPPD)的氧化前体aPPD=O,制备2H3、H标记的aPPD。标记物经薄层层析(TLC)、质谱(MS)、核磁共振(1HNMR)分析鉴定,结果与标准品的测量数据一致;氚标记的aPPD放化纯度为98%,放射性比活度为7.64×1011Bq/g。将3H-aP-PD作用于人肺腺癌A549细胞,检测不同时间细胞浆及细胞核中3H的活度,结果提示aPPD在A549细胞浆、核内均于24 h达到最高浓度,表明aPPD作为一个与甾体类激素结构相类似的药物,可以进入细胞甚至细胞核发挥药理作用。

Box-Behnken法优化20(S)原人参二醇微囊工艺研究

为优化20(S)-PPD微囊的制备工艺。本研究先通过单因素试验,确定对20(S)-PPD微囊的制备有显著影响的三个因素,分别为转速、加水体积及壁芯比,然后将三个因素分别设置不同的水平,采用Box-Behnken响应面法对制备工艺进行优化,应用Design-Expert 10软件分析试验结果。试验结果表明,20(S)-PPD微囊的最佳制备工艺为壁材比芯材为1.17,即2 g:1.72 g,加水量为74 mL,搅拌分散转速为209 r/min,优化后的制备工艺制备的微囊包封率可达51.05%,与预测值52.77%相接近,且微囊颗粒圆整,大小均匀。运用单因素实验结合Box-Behnken响应面法优化20(S)-PPD的制备工艺,经试验证明后显示结果准确可靠,可行。

20(S)-原人参二醇组皂苷的制备及其转化制取人参皂苷Rh2

目的：制取２０（Ｓ）原人参二醇组皂苷并将其转化制备抗癌活性单体２０（Ｓ）人参皂苷Ｒｈ２。方法：以国产西洋参茎叶总皂苷为原料，通过萃取法制备２０（Ｓ）原人参二醇组皂苷；将２０（Ｓ）原人参二醇组皂苷碱催化水解后，经柱层析分离纯化制备２０（Ｓ）人参皂苷Ｒｈ２。结果：２０（Ｓ）原人参二醇组皂苷收率为４１．５％，其转化成２０（Ｓ）人参皂苷Ｒｈ２的转化率为９．６４％。结论：制取方法简便，收率较高。

20(S)-原人参二醇对荷瘤裸鼠化疗的增效减毒作用

目的:研究20(S)-原人参二醇(Protopanaxadiol,PPD)对环磷酰胺(CTX)化疗人小细胞肺癌荷瘤裸鼠的增效、减毒作用及其机制。方法:建立A549人小细胞肺癌裸鼠体内移植肿瘤模型,随机分为:对照组、PPD组、CTX小剂量组、CTX大剂量组、CTX小剂量+PPD组和CTX大剂量+PPD组,于移植肿瘤模型成功建立后次日起分别腹腔注射0.5%羧甲基纤维素钠、PPD(50mg·kg-1·d-1)、CTX(10mg·kg-1·d-1)、CTX(20mg·kg-1·d-1)、CTX(10mg·kg-1·d-1)+PPD(50mg·kg-1·d-1)和CTX(20mg·kg-1·d-1)+PPD(50mg·kg-1·d-1),连续15d给药后检测小鼠体重、肿瘤重量及体积、外周血白细胞数量、骨髓有核细胞计数、脾脏及胸腺指数、T淋巴细胞转化率、NK细胞杀伤活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时检测caspase-3活性。结果:与单独化疗药物组比较,PPD(50mg.kg-1)与化疗药联合组抑瘤率升高(P<0.01),骨髓有核细胞数增加(P<0.01),脾脏及胸腺指数均增高(P<0.01),T淋巴细胞增殖能力和NK细胞杀伤活性均增强(P<0.05)。与单独化疗药物组比较,联合用药组肿瘤细胞凋亡率及caspase-3活性均明显提高(P<0.05或P<0.01),单独使用PPD组caspase-3活性增加不显著。结论:PPD对CTX化疗人小细胞肺癌荷瘤裸鼠有明显的增效、减毒作用,其机制可能与提高机体免疫力、活化caspase-3诱导肿瘤细胞凋亡有关。

20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞体内外作用的研究

目的观察不同剂量的20(S)-原人参二醇(Protopanaxadiol,PPD)在体内外对人肝癌细胞株SMMC-7721抗肿瘤作用。方法建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察20(S)-原人参二醇的肿瘤抑制作用。MTT比色法检测20(S)-原人参二醇对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用,Ho-echst33342核染色观察细胞凋亡形态学改变,采用FITC-An-nexinⅤ/PI双染流式细胞术分析凋亡情况,同时检测Caspase-3活性。结果在体内,PPD可抑制SMMC-7721细胞裸鼠异种移植瘤生长;在体外,PPD对SMMC-7721细胞的增殖具有明显的抑制及诱导其凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,Hoechst33342核染色可见凋亡小体,同时伴有Caspase-3活性的增加。结论20(S)-原人参二醇在体内外均可抑制SMMC-7721细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能通过活化Caspase-3诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。

20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。

20(s)-原人参二醇对前列腺癌RM-1细胞的生长抑制作用及其机制

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对前列腺癌RM-1细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法:建立前列腺癌RM-1细胞动物模型,将36只C57小鼠随机分为3组:模型组(橄榄油等体积灌胃每天1次、生理盐水等体积腹腔注射每周1次),紫杉醇(Taxol)组(20mg.kg-1,腹腔注射每周1次),PPD组(20mg.kg-1,灌胃每天1次),连续给药4周。每隔3d测量肿瘤体积1次,给药第4周末处死动物。观察指标:动物一般状态、肿瘤体积、瘤重、抑瘤率、死亡率,采用RT-PCR和Western blotting法检测肿瘤组织Cyclin D1蛋白表达水平。结果:PPD组小鼠一般状态明显好于模型组,表现为活泼好动、毛色光亮;而模型组小鼠步履蹒跚、行动迟缓、精神萎靡;肿瘤组织出现破溃、糜烂、出血。给药13d时,PPD组小鼠肿瘤体积明显减小(P<0.05);21d时PPD组肿瘤体积明显小于Taxol组(P<0.05)。与模型组比较,PPD组小鼠瘤质量明显降低(P<0.05),死亡率为零;与Taxol组比较,PPD组小鼠抑瘤率增高(P<0.05),死亡率降低(P<0.05)。各给药组小鼠肿瘤组织Cyclin D1基因转录、蛋白表达水平均明显低于模型组(P<0.05),与Taxol组比较,PPD组Cyclin D1基因转录明显减弱(P<0.05),而蛋白表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论:PPD有明显抑制前列腺癌RM-1细胞生长的作用,其作用机制可能与下调Cyclin D1蛋白表达有关。

20(S)-原人参二醇衍生物对HT1080细胞侵袭转移的影响

检测了所合成的20(S)-原人参二醇衍生物GY1和GY2的抗肿瘤活性.GY1对HT1080、SMMC7721、A549的增殖有显著的抑制作用,呈明显的剂量依赖关系,IC50分别为:35.2±0.9 mg/L,29.6±1.1 mg/L,24.1±1.5 mg/L;而GY2并没有表现出的明显的细胞毒作用,其IC50大于100 mg/L.5 mg/L GY1作用48 h可显著降低HT1080细胞对基底膜成分的粘附和侵袭能力,并对细胞的运动能力有一定影响;而相同浓度的GY2虽然对细胞的粘附性和侵袭性有一定影响,但对细胞的运动性却无明显的影响.

20(S)-原人参二醇油水分配系数测定和大鼠在体肠吸收的研究

目的测定20(S)-原人参二醇[20(S)-PPD]表观油水分配系数,并研究其在体肠吸收机理。方法利用高效液相色谱法测定20(S)-PPD浓度,采用摇瓶法测定其表观油水分配系数。采用大鼠在体单向肠灌流实验,按重量法计算动力学参数。结果 37℃条件下,20(S)-PPD在正辛醇饱和水相中的表观油水分配系数为(1og Papp=1.72),在不同pH磷酸盐缓冲液中的表观油水分配系数与水相中数值接近。20(S)-PPD在整个肠段都有吸收,吸收速率常数按大小依次为十二指肠、空肠、回肠、结肠,结肠段的Ka和Papp与其他肠段比较相对较小,说明20(S)-PPD的主要吸收部位在小肠。结论不同pH值的介质对20(S)-PPD表观油水分配系数影响不大;20(S)-PPD在整个肠段均有良好的吸收,小肠为主要吸收部位。在该药物开发方面,应设法延长其在小肠内的滞留时间,以提高生物利用度。

碱催化降解法制备抗癌活性化合物20(S)-原人参二醇

通过碱催化降解制备了与植物体内结构一致且具有抗癌活性的人参皂苷元20(S)原人参二醇,并对其进行分离及结构表征.将西洋参茎叶总皂苷和强碱溶于高沸点有机溶剂中,在常压和高温条件下进行降解.通过正交试验确定了制备20(S)原人参二醇的最佳降解条件,并将降解物经萃取、柱层析及重结晶等方法分离得到20(S)原人参二醇.按西洋参茎叶总皂苷计,20(S)原人参二醇产率为5.01%,纯度为98.56%.通过理化性质和光谱分析可确认该化合物为20(S)原人参二醇.所制备的20(S)原人参二醇具有产率和纯度高及成本低等特点.

20(S)-原人参二醇干混悬剂的处方及初步质量研究

目的制备20(S)-原人参二醇干混悬剂,建立该制剂定量测定方法。方法以20(S)-原人参二醇为主药,泊洛沙姆(Poloxamer)188,Avicel CL 611,尼泊金甲酯,尼泊金丁酯和甜菊素为辅料制备20(S)-原人参二醇干混悬剂,并制定产品的检测方法。结果以Avicel CL 611作为助悬剂制备的20(S)-原人参二醇干混悬剂稳定性良好,且形成的混悬液符合干混悬剂的各项质量指标。高效液相色谱法测定干混悬剂中20(S)-原人参二醇的量,标准曲线回归方程为A=11.412 6C+174.39(r=0.999 8)。结论处方合理,制备工艺可靠。采用高效液相色谱法测定时,专属性强、准确度好、灵敏度高、辅料无干扰。

20(S)-人参皂苷Rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响

目的研究20(S)-人参皂苷Rh2对人结肠癌Caco-2和HT-29细胞增殖及周期的影响。方法采用荧光微孔法测定20(S)-人参皂苷Rh2对人结肠癌Caco-2、HT-29细胞增殖的影响;利用显微镜观察给药后HT-29细胞形态变化;流式细胞术分析20(S)-人参皂苷Rh2对HT-29细胞周期分布的影响。结果 20(S)-人参皂苷Rh2对Caco-2、HT-29细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;20(S)-人参皂苷Rh2作用48 h后,对HT-29、Caco-2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为19.68、26.79μg/mL;流式细胞分析结果显示,与对照组细胞相比,20(S)-人参皂苷Rh2能显著减少HT-29细胞的G0/G1期和G2/M期细胞比例,增加S期细胞比例。结论 20(S)-人参皂苷Rh2可抑制人结肠癌细胞增殖,主要原因是阻滞细胞处于S期。

荧光光谱法研究20(S)-原人参三醇与牛血清白蛋白的相互作用

用荧光光谱和紫外-可见吸收光谱研究了20(S)-原人参三醇(PPT)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,结果表明:PPT对BSA荧光的猝灭类型为静态猝灭。在温度为298,308,318K时的结合常数分别是0.926 3×10~3,0.618 2×10~3,0.414 4×10~3 L·mol^(-1),结合位点均接近于1。PPT与BSA结合过程中主要的驱动力为氢键和范德华力。与PPT结合后,BSA分子中色氨酸残基部位的结构变得更加紧密。依据Fster的荧光共振能量转移理论得出PPT与BSA的结合距离r为2.62nm,能量转移效率E为0.32。

20(s)-原人参二醇的抗肿瘤及免疫调节作用研究

目的:探讨20(s)-原人参二醇(Protopanaxdiol,Ppd)的抗肿瘤及免疫调节作用。方法:建立小鼠肝癌H_(22)、Lewis肺癌和黑色素瘤B_(16)三种移植瘤动物模型,小鼠每日灌胃给予Ppd(25,50,100mg·kg^(-1))1次,连续12d,末次药后称取小鼠体重及肿瘤重量,同时测定H_(22)荷瘤小鼠T淋巴细胞转化率、NK细胞杀伤活性及IL-2含量。结果:Ppd 25,50,100mg·kg^(-1)剂量对小鼠肝癌H_(22)的抑瘤率分别为28.85%,43.55%,49.11%;对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率分别为23.07%,44.96%,49.61%;对小鼠黑色素瘤B_(16)的抑瘤率分别为30.21%,37.43%,43.20%。Ppd 50,100mg·kg^(-1)可明显提高肝癌H_(22)小鼠的T淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性和IL-2含量。结论:Ppd对小鼠三种移植瘤均具有明显的抗肿瘤活性并与免疫调节作用呈相关性,提示其抗肿瘤作用可能与激活体内免疫系统有关。

20(S)-人参皂苷Rg_3对脑缺血大鼠脑线粒体损伤的保护作用

目的研究20(S)-人参皂苷Rg3对脑缺血所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用,探讨20(S)-人参皂苷Rg3抗缺血性脑中风的机制。方法用栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,测定线粒体肿胀度、膜流动性、膜磷脂含量、呼吸功能、线粒体呼吸酶、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Ca2+等。结果大鼠MCAO后24 h,脑线粒体损伤明显,表现为肿胀、膜流动性降低,膜磷脂降解、呼吸功能衰减,呼吸酶、SOD活性降低,Ca2+、MDA含量升高;静脉注射20(S)-人参皂苷Rg3(5,10 mg.kg-1)能明显抑制缺血脑线粒体膜流动性的降低,膜磷脂降解,减少脑缺血引起的线粒体肿胀,抑制NADH脱氢酶、琥珀酸脱氢酶和细胞色素C氧化酶活性的降低,改善线粒体呼吸功能;同时20(S)-人参皂苷Rg3能明显降低脑缺血大鼠脑神经细胞线粒体MDA含量、升高SOD活性、抑制Ca2+过多摄入。结论20(S)-人参皂苷Rg3对缺血脑神经细胞线粒体的损伤有明显的保护作用,该作用可能与清除氧自由基、抑制脂质过氧化、拮抗Ca2+有关。

RP-HPLC法测定西洋参茎叶皂苷酸、碱降解物中20(S)-原人参二醇的含量

目的：利用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定西洋参茎叶皂苷酸、碱降解物中20（S）-原人参二醇含量。方法：RP-HPLC法具体条件为：ZoRBAX extend C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水[-90：10]，流速1．2mL·min^-1，检测波长203nm，柱温25℃。采用以上方法分别测定西洋参茎叶皂苷盐酸、醋酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇含量。结果：20（S）-原人参二醇对照品溶液的进样量在0．2～23μg范围内有良好的线性关系，回归系数r为0．9999（n=7）；测定西洋参茎叶皂苷的盐酸、醋酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇含量的准确度，以平均加样回收率表示分别为98．4％、96．7％和100．2％，RSD分别为1．24％、1．08％和0．91％；测定西洋参茎叶皂苷的盐酸、醋酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇含量的精密度，以重现性实验考察，其RSD分别为0．65％、0．79％和0．27％；经测定，醋酸、盐酸和氢氧化钠降解物中20（S）-原人参二醇的含量分别为0．93％、0．88％和25．40％。结论：RP-HPLC法测定西洋参茎叶皂苷降解物中20（S）-原人参二醇的含量，方法简便快捷，精密度高、准确度高，可为20（S）-原人参二醇的制备及质量控制提供可靠的检测方法；利用碱降解方法制备20（S）-原人参二醇的效率高于酸降解方法。

20(s)-原人参二醇诱导体外培养Siha细胞凋亡的作用

目的:观察20(s)-原人参二醇(PPD)对体外培养人宫颈癌Siha细胞凋亡的作用,阐明其抗肿瘤作用机制。方法:体外培养人宫颈癌Siha细胞,将其分为阴性对照组(乙醇)、阳性对照组(40μg.L-1顺铂)及PPD10、20和40μmol.L-1组。分别用乙醇、顺铂和PPD处理细胞48h后,利用光学显微镜观察细胞形态学改变,采用AnnexinV-EGFP/PI双染色法、TUNUL染色法检测细胞凋亡情况,分别采用RT-PCR、Westernblotting方法检测bax基因的转录及蛋白表达情况。结果:不同剂量的PPD处理后,Siha细胞变圆回缩并出现碎片,AnnexinV-EGFP/PI染色呈现不同程度的绿染和红染,TUNUL染色可见绿色荧光,bax基因的转录与蛋白表达升高。结论:PPD可诱导人宫颈癌Siha细胞出现凋亡,其作用与bax基因表达上调有关。

20(S)-原人参二醇对肝癌间质血管密度和肿瘤细胞增殖活性的影响

探讨20(S)-原人参二醇对肝癌间质微血管密度和肿瘤细胞增殖活性的影响。建立肝癌动物模型,将实验动物分为五组,每组10只,分对照组、环磷酰胺组、20(S)-原人参二醇25mg/kg、50mg/kg、100mg／kg给药组,给药二周后处死动物,称肿瘤重量及肿瘤体积,制成组织切片,以备免疫组化应用。与对照组相比,给药组肿瘤间质血管密度低,其细胞增殖活性亦低,肿瘤的重量及体积明显减少,组间有显著性差异(P<0．01)。提示20(S)-原人参二醇抑制了肝癌间质血管密度及肿瘤细胞增殖活性,从而抑制了肿瘤生长。

RP-HPLC测定西洋参叶皂苷碱降解物中20(S)-人参皂苷Rh_2的含量

目的：对西洋参叶皂苷碱降解物中20（S）-人参皂苷Rh2进行含量测定。方法：采用RP-HPLC，ZORBAX EXTEND C18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相甲醇-水（85：15），流速1．2mL·min^-1，检测波长203nm，柱温25℃。结果：20（S）-人参皂苷Rh2的进样量在0．5～25μg有良好的线性关系，r=0．9999；平均加样回收率为99．7％，RSD1．0％。结论：该方法测定20（S）-人参皂苷Rh2简便快捷，准确度高，测定结果证实该降解方法20（S），人参皂苷Rh2的转化率高。

20(s)-原人参二醇、人参皂苷Rh_2及人参皂苷Rg_3抗肿瘤作用的对比

目的对比20(s)-原人参二醇(Ppd)与人参皂苷Rh2(Rh2)及人参皂苷Rg3(Rg3)的抗肿瘤作用。方法建立小鼠肝癌H22、Lewis肺癌及黑色素瘤B16三种移植瘤动物模型,将小鼠随机分成11组,对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠,阳性药组给予环磷酰胺(CTX)30 mg/kg,Ppd、Rh2及Rg3三个剂量组均给予相应受试药25、50、100 mg/kg。阳性药组隔日腹腔注射给药1次,其余各组均每日灌胃给药1次,给药容积为20 ml/kg,连续10 d。每天记录小鼠体重,末次药后称取小鼠体重及肿瘤重量并计算肿瘤抑瘤率。结果 Ppd、Rh2及Rg3在25、50、100 mg/kg剂量下,对肝癌H22、Lewis肺癌及黑色素瘤B16均有一定的抑瘤作用,仅Ppd在50、100 mg/kg剂量下对肝癌H22、Lewis肺癌及黑色素瘤B16抑制效果明显,其抑瘤率超过40%,Rh2与Rg3的抑瘤率无明显差别。结论 Ppd、Rh2及Rg3对小鼠三种移植瘤均具有抗肿瘤活性,以Ppd的抗肿瘤作用最明显,Rh2与Rg3之间无明显差别。