20β-羟基黄体酮的制备及孕激素样作用研究

目的制备20β-羟基黄体酮(20β-Hydroxyprogesterone,20β-DHP),以大鼠子宫内膜基质细胞(Rat endometrial stromal cells,RESC)为研究载体,研究其孕激素样作用。方法化学合成20-羟基黄体酮(20-Hydroxyprogesterone,20-DHP),经半制备高效液相色谱分离制备20β-DHP,并对其进行含量测定。从雌性SD大鼠体内原代分离培养RESC,采用免疫荧光法对其进行鉴定、纯度检测,绘制生长曲线。RESC培养后分为空白组、阳性对照(黄体酮,Progesterone,P4)组、20β-DHP组、20α-DHP组,采用MTT法观察20β-DHP及其同分异构体20α-DHP对RESC增殖的影响,采用RT-qPCR法检测3种药物对孕酮受体(Progesterone receptor,PR)和增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)基因表达的影响。结果分离得20β-DHP单体,纯度为96.27%。原代分离培养的RESC的免疫荧光结果显示标志蛋白Vimentin阳性,纯度在90%以上,活力良好。MTT结果显示20β-DHP及其同分异构体20α-DHP均可促进RESC增殖,且呈剂量依赖性,与P4作用类似;RT-qPCR结果显示20β-DHP及其同分异构体20α-DHP均可上调PCNA基因表达,下调PR基因表达(P<0.05),20β-DHP仅在12 h内对PR表达具有下调作用。结论20β-DHP及其同分异构体20α-DHP对RESC具有类似P4的孕激素作用,但20β-DHP对PR的下调作用受时间影响。