20(S)-原人参二醇对肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的研究20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤生长抑制作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法观察20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,流式细胞术测定20(S)-原人参二醇对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响,并在裸小鼠人肺癌模型上观察20(S)-原人参二醇对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的抑制作用。结果20(S)-原人参二醇对A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,并且流式细胞仪检测时均出现典型凋亡峰,24小时凋亡率分别为32.47%、32.75%、33.51%。荷瘤裸小鼠动物实验表明,20(S)-原人参二醇对裸小鼠的肿瘤生长也具有明显的抑制作用,抑瘤率分别为18.78%、34.37%、50.02%。结论20(S)-原人参二醇对A549细胞的增殖和荷瘤裸小鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用。

20(S)-原人参二醇对人胚肾293细胞生长的抑制作用

目的:研究20(S)-原人参二醇(PPD)对人胚肾293细胞(HEK-293细胞)生长抑制作用。方法:采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果:PPD可明显降低HEK-293细胞存活率和细胞活性,半数抑制浓度(IC50)为21.8μmol/L。PPD处理后HEK-293细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNALadder条带。结论:PPD对HEK-293细胞生长有明显的抑制作用并有剂量依赖关系。

20(S)-原人参二醇磷脂复合物羟基磷灰石组装体的制备

目的:考察20(S)-原人参二醇(20(S)-PPD)磷脂复合物的羟基磷灰石(HAP)组装体的制备方法。方法:以药物载体HAP对20(S)-PPD磷脂复合物进行组装,考察HAP种类、磷脂复合物浓度、HAP与组装药液比例对组装量的影响,确定20(S)-PPD磷脂复合物HAP组装体的制备工艺。结果:按确定组装工艺制备的20(S)-PPD磷脂复合物HAP组装体中组装的磷脂复合物平均质量为136.26 mg/g,平均组装率为5.3%;FT-IR图谱显示HAP组装体已吸附20(S)-PPD磷脂复合物,氢键效应是HAP组装体吸附20(S)-PPD磷脂复合物组装药物的主要机制;组装体在p H为7.4的磷酸缓冲液中的累积释放率也表明HAP组装体具有缓释效果。结论:该磷脂复合物组装体制备工艺简单,具有明显的缓释作用,可为20(S)-PPD缓释制剂的研究开发提供初步研究基础。

20(S)-原人参二醇抑制小细胞肺癌A549细胞增殖的研究

采用台盼蓝和MTT法测定20(S)-原人参二醇(Ppd)对肺癌A549细胞增殖的抑制作用,Hochest 33258染色和DNA Ladder方法观察Ppd对小细胞肺癌A549细胞凋亡及周期的影响。结果表明,Ppd对肺癌A549细胞具有明显的抑制作用并有剂量时间依赖关系,可明显降低肺癌A549细胞的存活率和活性(IC50为20.7μmol/L);染色后肺癌A549细胞核出现典型的凋亡形态学变化,与DNA Ladder电泳条带弥散情况一致。因此,Ppd对肺癌A549细胞的增殖有明显的抑制作用。

20(S)⁃原人参二醇止血作用及其机制

目的通过体内和体外实验研究20(S)⁃原人参二醇对小鼠凝血系统的作用和对人/鼠血小板的活化作用,探讨原人参二醇的止血作用及相关的作用机制。方法小鼠断尾和肝划痕法观察小鼠出血时间;自动血液分析仪检测大鼠血常规;自动凝血分析仪检测大鼠凝血四项指标;酶联免疫吸附法检测血小板中环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)水平;Cytation 5多功能酶标仪检测洗涤人血小板内钙离子的浓度([Ca^(2+)]i);比色法观察血小板的聚集率;流式细胞术检测洗涤人血小板中CD62P和PAC⁃1相关表达。结果原人参二醇能缩短小鼠的出血时间;增加红细胞参数中的红细胞数量(RBC)和红细胞压积(HCT),提高血小板参数中血小板数量(PLT)和血小板压积(PCT);缩短大鼠活化部分凝血活酶时间(APTT),中剂量和高剂量组可增加纤维蛋白原的表达。同时,原人参二醇能提高大鼠洗涤血小板cAMP水平、血小板内[Ca^(2+)]i和血小板聚集度;增加洗涤人血小板CD62P释放和PAC⁃1表达。结论原人参二醇具有一定的止血作用,一方面通过激活大鼠的内源性凝血系统,影响体内血小板和红细胞参数,促进血浆中纤维蛋白原生成;另一方面通过影响钙离子和cAMP信号通路,增加血小板Ca^(2+)内流、CD62P释放和促进PAC⁃1的表达,最终诱导血小板聚集,形成血栓,发挥止血作用。

20(S)-原人参二醇复合微球的制备及体外释药初步研究

目的:考察20(S)-原人参二醇(20(S)-PPD)复合微球的体外长期和加速释药规律。方法:采用溶剂乳化挥发法制备药物复合微球,采用残余法测定药物在复合微球中的体外长期和加速释放度,评价两种体外释放之间的相关性,对体外长期释放模型进行拟合,研究微球体外长期释药机制。结果:复合微球的体外长期释放数据显示,药物无明显突释,释放至33d时,累积释放率达50.87%,具有明显缓释效果;体外长期释放曲线符合Higuchi方程,表明其体外长期释放以扩散机制为主;复合微球在37℃体外长期释放的累积释放率(Q37,%)与50℃下加速释放的累积释放率(Q50,%)的相关性拟合方程为ln(100-Q50)=2.1378ln(100-Q37)-5.1832,(r=0.9744),体外长期和加速释放的相关性良好。结论:20(S)-PPD复合微球的体外长期释放表明,微球具有良好的缓释效果,可用体外加速释放评价法来指导微球的后续处方与工艺优化,为研发20(S)-PPD微球制剂提供了参考依据。

20(S)-原人参二醇4种剂型在体透皮实验的初步研究

目的研究20(S)-原人参二醇(PPD)4种剂型的制备及大鼠在体PPD透皮吸收情况。方法用薄膜超声法制备PPD药质体和醇质体,用超声法制备环糊精包合物,用增溶法制备PPD溶液;建立在体透皮试验中PPD的HPLC测定方法;利用皮肤剩余量法计算PPD4种剂型透皮18h后残留在皮肤内的药量。色谱条件:COSMO-SIL5C18-MS-Ⅱ色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-水(90∶10);体积流量1.0mL/min;检测波长203nm;柱温25℃;进样量50μL。结果豆磷脂、羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)空白皮肤洗液和试剂对药物的测定无干扰,PPD质量浓度在0.1～0.5mg/mL与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),回收率均在96.93%～104.78%,日内及日间RSD均小于1.54%(n=3)。PPD药质体、PPD醇质体、PPDβ-环糊精包合物、PPD原药液的皮肤剩余量分别为69.6%、86.36%、100%、73.55%。结论RP-HPLC法能很好地测定PPD的量,且回归方程线性均较好,表明建立的在体透皮试验方法准确、稳定,适用于PPD经皮给药系统制剂的在体透皮试验研究。

20(S)-原人参二醇片含量测定及体外评价方法的研究

目的:制备20(S)-原人参二醇[20(S)-PPD]片,建立其含量测定及溶出度考察方法。方法:采用高效液相色谱法,C18色谱柱,乙腈-水(88∶12)为流动相,检测波长203 nm,流速1.0 mL.min-1,对样品中的20(S)-原人参二醇含量进行测定;并参照《中国药典》2010年版二部溶出度测定法第二法,以0.5%十二烷基硫酸钠水溶液为溶出介质,转速为100 r.min-1,对其进行体外溶出度考察,采用SAS软件非线性回归NLIN程序包中的Levenberg-Marquardt法进行迭代计算药物溶出度Weibull分布参数和特征溶出参数。结果:20(S)-原人参二醇的含量测定线性范围为20.4～1 020.0 mg.L-1(r=0.999 9),平均回收率为97.0%,RSD为1.99%;溶出度方法学考察,含量测定线性范围为10.0～80.0 mg.L-1(r=0.999 9),平均回收率为99.9%,RSD为2.13%,20 min即溶出完全;Weibull分布参数α位置参数为0.5 266,m形状参数为0.602 1,β尺度参数为2.387 2;特征参数Td为4.766 8 min,T50为2.834 7 min。结论:所建立的20(S)-原人参二醇片剂的含量测定和体外溶出度测定方法简便、准确、可靠,采用SAS系统可以简单快速的求解药物溶出度Weibull分布参数和特征参数。

碱水解条件对4种稀有人参皂苷含量的影响

目的探讨不同碱水解条件对4种稀有人参皂苷20(S)-Rh_1、20(S)-Rh_2、20(S)-PPt、20(S)-PPd含量的影响。方法应用高效液相色谱-质谱联用方法(HPLC-MS)初步推断人参茎叶总皂苷碱水解生成的人参皂苷结构,用高效液相色谱法(HPLC)测定不同碱水解反应时间、反应温度、氢氧化钠(NaOH)加入量对人参皂苷20(S)-Rh_1、20(S)-Rh_2、20(S)-PPt、20(S)-PPd含量的影响。结果碱水解40 min、反应温度分别为200℃和220℃、加入NaOH 2.0 g,有利于获得人参皂苷20(S)-Rh1和20(S)-Rh2;碱水解6 h、反应温度设置为240℃、加入NaOH 2.0 g,有利于获得人参皂苷20(S)-PPt和20(S)-PPd。结论人参皂苷20(S)-Rh_1、20(S)-Rh_2和人参皂苷20(S)-PPt、20(S)-PPd的含量受碱水解反应温度、NaOH加入量的影响趋势基本相同,但受碱水解反应时间的影响趋势不同。