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苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定
1
作者
孙运军
袁志明
+5 位作者
夏立秋
魏薇
付祖姣
黄璠
丁学知
胡胜标
《湖南师范大学自然科学学报》
CAS
北大核心
2007年第4期114-118,共5页
已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中...
已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段.
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关键词
苏云金芽孢杆菌
伴孢晶体
20-kb
DNAs
染色体
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职称材料
苏云金芽孢杆菌伴孢晶体20kb DNA中cry1Ac基因的克隆、高效表达和生物活性研究
被引量:
6
2
作者
胡宏源
夏立秋
+3 位作者
史红娟
孙运军
高必达
丁学知
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期656-661,共6页
已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4 0 718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 2 0kbDNA。经NdeⅠ...
已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4 0 718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 2 0kbDNA。经NdeⅠ酶切消化后亚克隆构建文库 ,通过PCR RFLP及测序筛选出含cry1Ac基因的转化子。然后设计引物PCR扩增出cry1Ac基因的ORF并与pET30a连接 ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,高效表达了 14 1kD蛋白。表达蛋白占总蛋白量的 5 0 %以上 ,且 90 %以上以包涵体形式存在。利用穿梭载体pHT30 4构建表达质粒pHTX4 2 ,电转化Bt无晶体突变株XBU0 0 1,获得重组菌株HTX4 2 ,经SDS PAGE分析 ,cry1Ac基因得到强表达 ,蛋白质定量分析显示目的蛋白量占总蛋白量的 79 2 8% ,且其在细胞中累积达细胞干重的 6 4 13% ,比文献报道的 2 5 %左右高了 1倍以上。原子力显微镜 (AtomicForceMicroscopy ,AFM)检测显示 ,目的基因在大肠杆菌 (E .coli)中表达的包涵体呈不规则形状且较小 ,而在无晶体突变株中表达的晶体呈典型菱形晶体 ,大小约为 1 2 μm× 2 0 μm。生测结果显示 ,包涵体与晶体对小菜蛾 (Plutellaxylostella)幼虫均有高效杀虫活性。本研究为构建高效杀虫工程菌及进一步阐明Bt伴孢晶体中 2 0kbDNA分?
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关键词
苏云金芽孢杆菌
伴孢晶体
20
kbDNA
CRY1AC基因
表达
小菜蛾
克隆
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职称材料
题名
苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定
1
作者
孙运军
袁志明
夏立秋
魏薇
付祖姣
黄璠
丁学知
胡胜标
机构
中国科学院武汉病毒研究所
湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室
出处
《湖南师范大学自然科学学报》
CAS
北大核心
2007年第4期114-118,共5页
基金
国家"863"项目(2006AA02Z187)
国家自然科学基金资助项目(30670052
+1 种基金
30470037)
湖南省教育厅科研资助项目(05C392)
文摘
已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段.
关键词
苏云金芽孢杆菌
伴孢晶体
20-kb
DNAs
染色体
Keywords
Bacillus thuringiensis
Parasporal crystal
20-kb
DNAs
Chromosome
分类号
TP18 [自动化与计算机技术—控制理论与控制工程]
O231.4 [理学—运筹学与控制论]
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职称材料
题名
苏云金芽孢杆菌伴孢晶体20kb DNA中cry1Ac基因的克隆、高效表达和生物活性研究
被引量:
6
2
作者
胡宏源
夏立秋
史红娟
孙运军
高必达
丁学知
机构
湖南师范大学生命科学学院微生物学系
湖南农业大学植物保护学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期656-661,共6页
基金
国家"8 63计划"(No.2 0 0 2AA2 45 0 2 1)
国家自然科学基金 (No .3 0 2 70 0 3 7)
湖南省自然科学基金 (No.0 3JJY3 0 2 5 )~~
文摘
已经证实苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)伴孢晶体结合 2 0kbDNA ,但其序列特异性及作用有待进一步研究阐明。研究了选择性溶解Bt 4 0 718菌株Cry1类原毒素所形成的菱形伴孢晶体 ,从中抽提出与其结合的 2 0kbDNA。经NdeⅠ酶切消化后亚克隆构建文库 ,通过PCR RFLP及测序筛选出含cry1Ac基因的转化子。然后设计引物PCR扩增出cry1Ac基因的ORF并与pET30a连接 ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,高效表达了 14 1kD蛋白。表达蛋白占总蛋白量的 5 0 %以上 ,且 90 %以上以包涵体形式存在。利用穿梭载体pHT30 4构建表达质粒pHTX4 2 ,电转化Bt无晶体突变株XBU0 0 1,获得重组菌株HTX4 2 ,经SDS PAGE分析 ,cry1Ac基因得到强表达 ,蛋白质定量分析显示目的蛋白量占总蛋白量的 79 2 8% ,且其在细胞中累积达细胞干重的 6 4 13% ,比文献报道的 2 5 %左右高了 1倍以上。原子力显微镜 (AtomicForceMicroscopy ,AFM)检测显示 ,目的基因在大肠杆菌 (E .coli)中表达的包涵体呈不规则形状且较小 ,而在无晶体突变株中表达的晶体呈典型菱形晶体 ,大小约为 1 2 μm× 2 0 μm。生测结果显示 ,包涵体与晶体对小菜蛾 (Plutellaxylostella)幼虫均有高效杀虫活性。本研究为构建高效杀虫工程菌及进一步阐明Bt伴孢晶体中 2 0kbDNA分?
关键词
苏云金芽孢杆菌
伴孢晶体
20
kbDNA
CRY1AC基因
表达
小菜蛾
克隆
Keywords
Bacillus thuringiensis , parasporal crystal,
20
kb DNA, cry1Ac gene, superexpression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定
孙运军
袁志明
夏立秋
魏薇
付祖姣
黄璠
丁学知
胡胜标
《湖南师范大学自然科学学报》
CAS
北大核心
2007
0
下载PDF
职称材料
2
苏云金芽孢杆菌伴孢晶体20kb DNA中cry1Ac基因的克隆、高效表达和生物活性研究
胡宏源
夏立秋
史红娟
孙运军
高必达
丁学知
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
6
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职称材料
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