SLC20A2相关性特发性基底节钙化1例报道

该文报道1例特发性基底节钙化病例,临床主要表现为进行加重性运动障碍,头颅CT扫描提示双侧基底节、丘脑、小脑、大脑半球广泛性对称性钙化病灶,二代基因测序示SLC20A2基因突变。特发性基底节钙化是一种罕见的对称性基底节或其他部位钙化的遗传性神经疾病,临床表现多样,越来越多的致病基因被认识,不同致病基因临床特征不一。此病例同一家族谱系2位家属与患者钙化灶类似而临床症状表现各不相同。分析其临床特点、病程演变过程及影像学特点,以提高临床医师对罕见病的诊断。

miR-20a-5p调控NFKBIB对人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤增殖的影响

目的探讨miR-20a-5p对人肾母细胞瘤细胞系WiT49裸鼠移植瘤的影响及作用机制。方法从GEO数据库下载基因表达芯片,应用GEO2R获得差异基因miR-20a-5p;通过cBioPortal数据库获得与miR-20a-5p表达具有正相关关系的NF-κB基因;通过targetscan数据库预测miR-20a-5p靶基因可能为NF-κB转录因子抑制蛋白家族的NFKBIB,并使用双荧光素酶实验进行验证;体外培养肾母细胞瘤细胞系WiT49,采用miR-20a-5p模拟物及其抑制基因构建慢病毒载体分别转染至WiT49细胞;将12只裸鼠随机分为3组,WiT49模型组、WiT49-miR-20a-5p过表达组、WiT49-miR-20a-5p敲低组;裸鼠成瘤实验检测各组瘤块质量及体积;应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组瘤块中miR-20a-5p、NFKBIB及NF-κB表达情况;通过CCK-8细胞增殖实验验证各组瘤细胞增殖情况。结果miR-20a-5p在肾母细胞瘤中高表达,且与NF-κB表达呈正相关,miR-20a-5p与NFKBIB具有相互结合位点且存在结合作用;裸鼠成瘤实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组瘤块体积及质量较WiT49模型组均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR实验中,WiT49-miR-20a-5p过表达组中miR-20a-5p及NF-κB表达均高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p过表达组中NFKBIB表达低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8细胞增殖实验中WiT49-miR-20a-5p过表达组细胞24及48 h吸光度高于WiT49模型组,WiT49-miR-20a-5p敲低组细胞24、48及72 h吸光度均低于WiT49模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-20a-5p可能是通过调控NFKBIB激活NF-κB通路促进人肾母细胞瘤细胞WiT49裸鼠移植瘤生长。

miR-20a在妇科常见恶性肿瘤中的作用机制

宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌作为妇科最常见的三大恶性肿瘤,其发病率近年来在各年龄段中呈上升趋势,已严重威胁我国女性健康。尽管多种靶向药物的应用已使该类患者的生存期明显延长,但其仍是一类无法被精准诊断和治疗的疾病。miR-17-92基因簇作为最早被确定为癌基因的微小RNA(micro RNA,miRNA)家族,其作用机制一直被广泛关注。miR-20a是miR-17-92基因簇中的一员,可通过降低或上调表达的方式发挥转录后调控功能,进而影响下游基因通路,调控恶性肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移,并最终实现恶性肿瘤的发生及进展。根据目前研究进展,miR-20a在宫颈癌、子宫内膜癌及卵巢癌中表达特异性升高通常与疾病的恶性进展有关,综述miR-20a在妇科常见三大恶性肿瘤发病机制中作用的最新研究。

KIF20A在肿瘤中的作用及调控机制研究

驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)是驱动蛋白家族的一员,在有丝分裂过程中负责运输染色体,在细胞分裂中发挥重要作用。现有研究已经证明,KIF20A在多种肿瘤中呈过表达,因此被视为一种极具潜力的肿瘤治疗靶点。KIF20A的高表达与较差的总生存期密切相关。本文首先概述了KIF20A的结构和功能,随后总结了KIF20A在肿瘤中的表达情况及其调控肿瘤的相关机制,最后介绍近年来与KIF20A相关的临床试验结果。这些发现对于肿瘤的临床诊疗具有重要的启示意义。

miR-20a调控压力超负荷型心肌肥大

背景:心肌肥大是心脏对压力超负荷等生理和病理刺激所做出的适应性反应,早期具有代偿意义,若刺激持续进行可引起心肌病变导致心力衰竭。micro RNAs参与调控了心肌肥大的发生发展,然而mi R-20a在压力超负荷所致心肌肥大中的作用尚未见报道。目的:探究mi R-20a在压力超负荷所致心肌肥大中的作用及其机制。方法:横向主动脉缩窄术诱导心肌肥大小鼠模型,使用血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大H9c2细胞模型。体内实验在小鼠心脏原位注射mi R-20a过表达腺病毒,体外实验将mi R-20a mimic转染至H9c2细胞。通过检测心质量/体质量比值、细胞表面积、心肌纤维化等指标评估心肌肥大,实时荧光定量PCR法检测心房利钠肽、脑利钠肽、β-肌球蛋白重链和mi R-20a的表达水平,Mito Tracker法检测线粒体分裂情况,RNAhybrid软件预测miR-20a的下游靶基因。结果与结论:(1)在心肌肥大细胞模型和动物模型中,mi R-20a的表达水平均显著降低(P<0.05);(2)在动物水平,过表达miR-20a显著抑制了横向主动脉缩窄手术诱导的心肌肥大,包括抑制了肥大标志基因表达水平的升高(P<0.05),抑制了心脏体积的增大,抑制了心质量/体质量比值的升高(P<0.01),抑制了心肌横截面积的增大(P<0.05)以及减轻了心肌纤维化程度(P<0.01);(3)在细胞水平,过表达mi R-20a显著抑制了血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,包括抑制了心房利钠肽(P<0.05)、脑钠肽(P<0.01)、β-肌球蛋白重链(P<0.05)等肥大标志基因表达水平的升高,抑制了蛋白质/DNA比值的升高(P<0.01),抑制了细胞表面积的增大(P<0.05);(4)过表达mi R-20a显著抑制了血管紧张素Ⅱ诱导的线粒体分裂(P<0.05);(5)RNAhybrid软件分析结果显示mi R-20a与蛋白质活化酶抑制剂αm RNA的3’非翻译区可以很好地互补配对,且预测的结合位点具有高度保守性;(6)结果表明,在压力超负荷心肌肥大模型中mi R-20a表达水平显著下调,过表达mi R-20a可在细胞水平和动物水平抑制心肌肥大表型,并减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞线粒体分裂。

红景天苷调控miR-20a-5p/TIMP2轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和迁移的影响

目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系。结果与对照组比较,TNF-α组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD_(450))值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05)。miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系。结论红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应。

皮肤鳞状细胞癌组织miR-20a、miR-196a表达水平与临床病理特征和预后的关系

目的探讨皮肤鳞状细胞癌(CSCC)组织微小RNA(miR)-20a、miR-196a表达水平与临床病理特征和预后的关系。方法选取2014年1月至2018年1月在该院行手术切除并随访成功的CSCC患者316例作为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测术中留取CSCC患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织>3 cm)中miR-20a、miR-196a表达水平。分析miR-20a、miR-196a表达水平与CSCC临床病理特征的关系。采用多因素Logistic回归分析影响CSCC患者预后不良的因素。根据CSCC患者癌组织中miR-20a、miR-196a表达水平的均值分为miR-20a高表达组、miR-20a低表达组和miR-196a高表达组、miR-196a低表达组。绘制Kaplan-Meier曲线分析miR-20a高表达组、miR-20a低表达组和miR-196a高表达组、miR-196a低表达组患者的5年生存差异。结果与癌旁组织比较,CSCC患者癌组织中miR-20a表达水平降低,miR-196a表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同分化程度、TNM分期及是否发生淋巴结转移CSCC患者的miR-20a、miR-196a表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访5年,58例CSCC患者死亡(死亡组),258例生存(存活组),5年总生存率为81.65%(258/316)。死亡组低分化患者比例、TNMⅢ期患者比例、有淋巴结转移患者比例及癌组织中miR-196a表达水平高于存活组,而癌组织中miR-20a表达水平低于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,低分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、miR-196a>0.94为影响CSCC患者预后不良的独立危险因素(P<0.05),而miR-20a>0.80为独立保护因素(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,癌组织中miR-20a高表达组患者的生存曲线高于miR-20a低表达组患者(Log-rankχ^(2)=4.152,P=0.042),癌组织中miR-196a高表达组患者的生存曲线低于miR-196a低表达组患者(Log-rankχ^(2)=4.879,P=0.027)。结论CSCC患者癌组织中miR-20a低表达、miR-196a高表达与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和不良预后有关,故miR-20a、miR-196a可能成为预测CSCC患者预后不良的新型生物标志物。

基于生物信息学探究ASPM和KIF20A在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨ASPM、KIF20A在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及临床意义。方法基于GEO数据库筛选核心基因并预测其在ESCC中的表达水平;KEGG通路富集分析ASPM、KIF20A参与的潜在信号通路;TIMER数据库分析ASPM、KIF20A的表达与免疫细胞浸润的相关性;选取95例ESCC组织与30例癌旁正常组织标本,采用免疫组化检测ESCC和癌旁正常组织中ASPM和KIF20A蛋白质表达情况,分析其表达与临床病理参数及预后的相关性。结果共筛选出核心基因16个,包括ASPM、KIF20A等。GEPIA结果显示,ASPM、KIF20A在ESCC组织中均呈高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。KEGG通路富集分析显示两者均与细胞周期相关。TIMER结果显示,ASPM的表达与树突状细胞呈负相关,KIF20A的表达与CD8^(+)T细胞呈负相关。免疫组化结果显示,ESCC组织中ASPM、KIF20A的表达水平显著高于癌旁正常组织(P<0.001)。ASPM的表达与ESCC患者的临床分期(P=0.004)、N分期(P=0.024)具有相关性;KIF20A的表达与ESCC患者的肿块直径(P=0.015)、N分期(P=0.002)相关。Spearman相关性分析显示,ASPM的表达与KIF20A的表达呈正相关(r=0.367,P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,ASPM、KIF20A高表达组患者的生存率低于低表达组患者(均P<0.05)。多因素分析显示,ASPM、KIF20A的表达及N分期均是影响ESCC患者预后的独立因素。结论ASPM、KIF20A高表达与ESCC的进展和预后密切相关,可能是ESCC的重要预后标记物和潜在治疗靶点。

铁死亡抑制因子KIF20A对食管癌细胞生物学行为及铁死亡的影响

目的探讨驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及对Eca109细胞生物学行为和铁死亡的影响。方法通过生物信息学分析预测KIF20A在ESCC中的表达。构建KIF20A敲低/过表达Eca109细胞系,实验分组:对照组,KIF20A敲低组,KIF20A过表达组。通过CCK-8法,Transwell侵袭实验,细胞划痕实验检测KIF20A对Eca109细胞增殖,迁移能力的影响。采用RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导建立铁死亡应激模型,检测谷胱甘肽(glutathione,GSH),丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果和对照组比较,KIF20A敲低组细胞增殖活力降低(P<0.05),KIF20A过表达组细胞增殖活力增加(P<0.05)。与对照组比较,KIF20A敲低组细胞侵袭及迁移能力降低(P<0.05),KIF20过表达组细胞侵袭及迁移能力增加(P<0.05)。RSL3诱导处理后,KIF20A敲低组细胞裂解液中GSH含量低于对照组(P<0.05),MDA含量高于对照组(P<0.05);KIF20A过表达组细胞结果与之相反。结论KIF20A在ESCC中高表达,其在Eca109细胞中发挥着促进增殖、侵袭、迁移及抑制铁死亡的作用。

贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响研究

背景与目的:二线化疗方案治疗胃癌疗效欠佳,贝伐珠单抗属于抗血管生成分子靶向抗癌药物,信迪利单抗是一种国产的程序性死亡蛋白-1(programmed death-1,PD-1)抑制剂,两者结合是临床治疗胃癌的新方向。本研究旨在探究贝伐珠单抗辅助PD-1抑制剂治疗胃癌对血清miR-20a-5p和miR-515-3p的影响。方法:选取2019年1月—2021年7月于南京医科大学第四附属医院就诊的84例胃癌患者进行回顾性研究,根据治疗方案的不同将其分为观察组和对照组(每组各42例),对照组给予二线化疗方案治疗,观察组在对照组基础上给予贝伐珠单抗联合PD-1抑制剂(信迪利单抗)治疗,比较两组的客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、血清肿瘤标志物、免疫功能指标、血清miR-20a-5p、miR-515-3p及不良反应总发生率。本研究已通过南京医科大学第四附属医院伦理委员会的伦理审批(批件号:20230531--K061)。结果:观察组的ORR(69.05%)和DCR(85.71%)均高于对照组(40.48%、64.29%)。观察组治疗后的血清糖类抗原12-5(carbohydrate antigen 12-5,CA12-5)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)及细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokerantin-19-fragment antigen 21-1,CYFRA21-1)水平均低于对照组。观察组治疗后的CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值均高于对照组,CD8^(+)T淋巴细胞低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的血清miR-20a-5p、miR-515-3p水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组(28.57%)的不良反应总发生率与对照组(38.10%)相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:贝伐珠单抗辅助信迪利单抗可有效地提高胃癌治疗效率,改善免疫功能,降低血清miR-20a-5p、miR-515-3p及肿瘤标志物表达量,且不会增加不良反应,效果显著。

肺炎支原体肺炎患儿外周血miR-106a、miR-20a表达与胸部X线表现及炎症的相关性

目的:探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿外周血微小RNA(miR)-106a、miR-20a表达与胸部X线(CXR)表现及炎症的相关性。方法:选取2020年1月至2021年12月本院收治的393例MPP患儿作为研究对象。采用全自动血细胞分析仪检测白细胞计数、红细胞计数、血小板计数、中性分叶核白细胞等,免疫透射比浊法检测C反应蛋白(CRP)水平。采用实时定量聚合酶链反应法检测外周血miR-106a和miR-20a表达。所有患儿均在入组后接受CXR检查。结果:MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a的表达水平分别为1.00(0.61,2.11)、1.06(0.73,1.67)。根据中位值分组,与miR-106a和miR-20a低表达组相比,高表达组患儿CRP水平和肺实变患儿比例明显更高(P<0.05);miR-20a高表达组患儿胸腔积液患儿比例也显著高于低表达组(P<0.05)。MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a与CRP呈显著正相关(r值分别为0.212、0.230,均P<0.001)。肺实变组外周血miR-106a和miR-20a表达水平均显著高于非肺实变组(P<0.05)。经ROC曲线分析,外周血miR-106a和miR-20a预测MPP肺实变的曲线下面积(AUC)为0.811(95%CI:0.767~0.855)、0.807(95%CI:0.762~0.852),灵敏度分别为75.3%和77.4%,特异度分别为76.5%和76.4%,对应的截断值为1.20和1.18。Logistic回归分析显示,外周血miR-106a和miR-20a高表达是MPP肺实变的独立影响因素(P<0.05)。结论:MPP患儿外周血miR-106a和miR-20a过表达与CXR严重表现和炎症加重有关,两者可作为指示MPP严重程度和炎症进展的标志物。

卵巢型子宫内膜异位症患者外周血ROS、PON-1水平和miR-20a表达水平及与病情的关系

目的探究卵巢型子宫内膜异位症(EMs)患者外周血氧自由基(ROS)、氧磷酶-1(PON-1)水平和miR-20a表达水平及与病情的关系。方法回顾性选取2020年3月至2023年3月在江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)进行治疗的113例卵巢型EMs患者纳入研究组,并根据美国生育协会分期标准对其进行分组:62例Ⅰ~Ⅱ期患者纳入轻度组,51例Ⅲ~Ⅳ期患者纳入重度组。另选30例在本院进行治疗的盆腔炎且子宫内膜正常患者纳入对照组。比较研究组与对照组患者、轻度组与重度组患者的ROS、PON-1水平和miR-20a相对表达水平,比较轻度组与重度组的血清炎症因子[白细胞介素(IL)-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平,并探究其与患者病情严重程度的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ROS、PON-1水平和miR-20a表达水平对重度卵巢型EMs的诊断价值。结果研究组患者的ROS水平和miR-20a相对表达水平分别为(485.55±32.12)pg/mL、2.48±0.33,均高于对照组患者[(326.26±28.12)pg/mL、1.03±0.24],PON-1水平为(152.23±8.78)pg/mL,低于对照组患者[(212.26±8.23)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患者的ROS水平和miR-20a相对表达水平分别为(498.22±18.45)pg/mL、2.64±0.37,均高于轻度组患者[(433.28±23.16)pg/mL、1.97±0.21],PON-1水平为(142.04±5.99)pg/mL,低于轻度组患者[(164.56±5.48)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组患者的血清IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α水平分别为(33.26±2.45)、(29.55±3.16)、(39.45±2.78)、(29.88±2.64)pg/mL,均高于轻度组患者[(17.22±2.23)、(23.66±3.15)、(32.45±2.54)、(21.02±2.37)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。ROS水平,miR-20a相对表达水平,IL-6、IL-8、MCP-1、TNF-α水平与患者的临床分期呈正相关(r=0.847、0.751、0.862、0.685、0.830、0.859,P<0.05),PON-1水平与患者的临床分期呈负相关(r=-0.856,P<0.05)。ROS、PON-1水平,miR-20a相对表达水平诊断重度卵巢型子宫内膜异位的ROC曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.991、0.997、0.936,具有较好诊断价值(P<0.05)。结论ROS水平、miR-20a相对表达水平在卵巢型EMs患者中升高,PON-1水平表达下调,且对其病情严重程度具有一定诊断价值,可用于临床辅助诊断。

FOXM1通过调节KIF20A介导巨噬细胞M2极化对食管鳞状细胞癌细胞的作用

目的 探究叉头转录因子(FOX)M1和驱动蛋白家族(KIF)20A对食管鳞状细胞癌细胞的作用及其可能的作用机制。方法 体外培养正常食管上皮细胞(Het-1A)、人食管鳞状细胞癌细胞(KYSE70)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)。佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞产生M0巨噬细胞。将M0巨噬细胞与KYSE70细胞共培养以获得肿瘤相关巨噬细胞(TAM),收集共培养上清液处理KYSE70细胞,分为空白对照组(不进行转染)、si-NC组(转染si-NC)、si-FOXM1组(转染si-FOXM1)、si-NC+oe-NC组(转染si-NC和oe-NC)、si-FOXM1+oe-NC组(转染si-FOXM1和oe-NC)、si-NC+oe-KIF20A组(转染si-NC和oe-KIF20A)、si-FOXM1+oe-KIF20A组(转染si-FOXM1和oe-KIF20A),荧光素酶报告实验和染色质免疫沉淀(ChIP)-PCR实验检测FOXM1对KIF20A的转录调控作用;实时荧光定量(qRT)-PCR和Western印迹检测FOXM1、KIF20A、精氨酸(Arg)-1、白细胞介素(IL)-10、E-钙黏蛋白(cadherin)和N-cadherin表达;流式细胞术检测TAM细胞中CD68^(+)/CD206^(+)细胞率;EdU实验检测细胞增殖;CCK-8检测细胞活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果 与Het-1A组相比,KYSE70组细胞中FOXM1和KIF20A表达明显升高(P<0.001)。FOXM1通过靶向结合KIF20A启动子区域调节KIF20A表达。与si-NC+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-NC组TAM细胞中CD68^(+)/CD206^(+)细胞率、Arg-1和IL-10蛋白表达明显降低(P<0.05),si-NC+oe-KIF20A组变化明显升高(P<0.05);与si-FOXM1+oe-NC组相比,si-FOXM1+oe-KIF20A组TAM细胞中CD68^(+)/CD206^(+)细胞率、Arg-1和IL-10蛋白表达明显升高(P<0.05)。用共培养上清液处理KYSE70细胞,与空白对照组相比,TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力受到明显促进(P<0.05);与si-NC+oe-NC+TAM组相比,si-FOXM1+oe-NC+TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力明显抑制,而si-NC+oe-KIF20A+TAM组明显促进(P<0.05);与si-FOXM1+oe-NC+TAM组相比,si-FOXM1+oe-KIF20A+TAM组KYSE70细胞活力、增殖、迁移、侵袭和EMT能力受到明显促进(P<0.05)。结论 FOXM1通过上调KIF20A表达促进巨噬细胞M2极化从而促进KYSE70细胞增殖和转移。

高强度间歇训练对冠心病PCI术后病人心肌修复的影响及其与miR-20a的关联性

目的:观察高强度间歇训练(HIIT)对冠心病经皮冠状动脉介入(PCI)术后病人心肌修复的影响,并探讨心肌修复指标与血清miR-20a的相关性。方法:选取2019年1月—2022年6月在郑州市中心医院因冠心病就诊且行PCI术,并出现术后相关心肌损伤病人100例,采用随机数表法将病人分为训练组与对照组,各50例,所有病人均进行为期8周的运动训练。比较两组左室舒张末期内径(LVEDD)和左室射血分数(LVEF);采用实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测病人外周血清miR-20a表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达;分析上述指标与miR-20a的相关性。结果:干预后,训练组LVEDD低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组LVEF比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预后,训练组miR-20a表达水平高于对照组,训练组血清CK、CK-MB浓度和血清炎性因子IL-6和TNF-α水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。冠心病PCI术后心肌损伤病人血清CK、CK-MB含量、IL-6、TNF-α含量与miR-20a呈负相关(P<0.05)。结论:HIIT可改善冠心病PCI术后相关心肌损伤病人的心肌重构、心肌损伤程度及炎症反应,其作用机制可能与miR-20a表达增强有关。

基于生物信息学方法分析FAM20A在甲状腺癌中的诊断价值

目的采用多种生物信息学分析工具和免疫组织化学染色,明确序列相似性20家族成员A(Family with sequence similarity 20 member A,FAM20A)在甲状腺癌(Thyroid carcinoma,TC)中的表达及临床诊断意义。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取甲状腺癌相关数据,分析FAM20A在甲状腺癌组织和正常组织之间的表达差异,绘制ROC曲线计算AUC值,评估FAM20A对甲状腺癌的诊断效能。利用GEO数据库下载GSE205733甲状腺癌数据集,分析FAM20A基因在甲状腺癌组织中的表达水平,并进行基因富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA);利用在线数据库STRING分析FAM20A的蛋白相互作用网络。同时收集2022年3月—2023年2月期间于首都医科大学附属北京潞河医院甲状腺外科行甲状腺结节手术的29例患者病理组织样本,进行病理组织石蜡切片和免疫组织化学染色,验证比较甲状腺癌及良性甲状腺结节样本中FAM20A的表达水平。结果TCGA数据库结果表明,与正常甲状腺组织相比,FAM20A在甲状腺癌组织中的表达显著升高(P<0.001)。FAM20A表达水平与甲状腺癌临床TNM分期和病理分型相关(P<0.05)。FAM20A对于甲状腺癌的诊断效能显著(AUC=0.828)。GSE205733数据分析显示与正常组织相比,FAM20A在甲状腺癌组织中表达显著增加(P<0.001)。GSEA富集分析结果显示FAM20A主要与P53和白介素等信号传导通路相关。STRING数据库分析显示与FAM20A相互作用的蛋白主要有PEAK,FAM20C和ENAM等。免疫组织化学染色结果显示FAM20A在甲状腺癌组织中表达显著增加(P<0.05)。结论FAM20A基因在甲状腺癌组织中高表达,与患者临床TNM分期和病理分型相关,可作为诊断甲状腺癌的潜在分子标记物,且与P53和白介素等信号传导通路相关,为研究甲状腺癌进展分子机制及靶向药物的开发提供理论依据。

驱动蛋白家族成员20A对结直肠癌恶性增殖和化疗耐受的影响

目的:探讨驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)对结直肠癌(CRC)恶性行为和化疗耐受的影响及其机制。方法:12例CRC及配对正常肠黏膜组织样本获自南方医科大学南方医院病理科。免疫组化、Western blot和RT-qPCR分析CRC组织和癌旁组织中KIF20A表达水平。KIF20A短发夹RNA(sh-KIF20A)转染或KIF20A过表达慢病毒(LV-KIF20A)感染CRC细胞。将RKO或LOVO细胞分为MOCK组(未转染的RKO或LOVO细胞)、LV-NC组(对照慢病毒感染RKO或LOVO细胞)和LV-KIF20A组(LV-KIF20A感染RKO或LOVO细胞);将HCT-116细胞分为MOCK组(未转染的HCT-116细胞)、sh-NC组(对照shRNA转染HCT-116细胞)和sh-KIF20A组(sh-KIF20A转染HCT-116细胞)。CCK-8和集落形成实验检测细胞活力和集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达。免疫组化检测化疗敏感的CRC组织和化疗不敏感CRC组织中KIF20A和p-STAT3蛋白水平。将LV-NC或LV-KIF20A感染的RKO细胞接种于BALB/c裸鼠右侧皮下(每组5只),检测KIF20A对肿瘤体内生长的影响。结果:KIF20A在CRC组织及细胞中显著上调(P<0.05)。敲减KIF20A抑制CRC细胞的活力和集落形成能力,而过表达KIF20A则促进CRC细胞活力和集落形成能力。在5-氟尿嘧啶处理下,敲减KIF20A促进cleaved caspase-3和Bax表达,抑制Bcl-2表达,促进细胞凋亡;而过表达KIF20A会抑制cleaved caspase-3和Bax表达,促进Bcl-2表达,抑制细胞凋亡。机制研究表明,过表达KIF20A可上调p-JAK2和p-STAT3水平并激活JAK2/STAT3通路,KIF20A沉默可下调p-JAK2和p-STAT3水平。沉默STAT3可逆转由KIF20A过表达引起的细胞增殖能力提高和凋亡减少。与化疗敏感的CRC组织相比,KIF20A和pSTAT3在化疗不敏感的CRC组织中表达水平更高。体内实验表明,KIF20A过表达促进CRC肿瘤生长(P<0.05)。结论:KIF20A通过激活JAK2/STAT3信号通路调节CRC的恶性增殖及化疗耐受。

LncRNA HOTAIR通过靶基因miR-20a-5p调控淋巴瘤细胞增殖、侵袭、迁移的分子机制研究

目的:探讨lnc RNA HOTAIR通过靶基因mi R-20a-5p对淋巴瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制研究。方法:合成HOTAIR si RNA和si RNA NC质粒后,分别转染淋巴瘤Raji细胞,RT-q PCR检测HOTAIR的m RNA表达,分别通过CCK-8实验、Transwell和细胞划痕愈合实验检测Raji细胞的增殖、侵袭和迁移情况。mi Rcode软件预测lnc RNA HOTAIR的靶基因,并通过双荧光素酶实验分析HOTAIR与靶基因的关系。合成mi R-20a-5p inhibitor和inhibitor NC后,瞬时转染Raji细胞,RT-q PCR检测mi R-20a-5p表达,分析下调mi R-20a-5p对Raji细胞的增殖、侵袭和迁移的影响。用lnc RNA HOTAIR过表达质粒和mi R-20a-5p模拟物同时转染Raji细胞,分析Raji细胞的增殖、侵袭和迁移能力。过表达或下调mi R-20a-5p后,分析JAK/STAT3信号通路相关蛋白的表达。结果:转染HOTAIR si RNA后Raji细胞中HOTAIR表达降低(P<0.01),转染mi R-20a-5p inhibitor后Raji细胞中mi R-20a-5p表达降低(P<0.01);HOTAIR与mi R-20a-5p存在靶向及负调控关系(r=-0.826);沉默HOTAIR促进mi R-20a-5p表达,抑制Raji细胞增殖、侵袭和迁移;下调mi R-20a-5p表达促进Raji细胞增殖、侵袭和迁移。上调mi R-20a-5p可逆转过表达HOTAIR对Raji细胞增殖、侵袭和迁移的促进作用。下调mi R-20a-5p表达激活了细胞内JAK/STAT3信号通路。结论:HOTAIR通过靶向mi R-20a-5p影响淋巴瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与JAK/STAT3信号通路激活有关。

膀胱癌组织miR-20a-5p、NR4A3表达及其与患者临床病理特征、预后的关系

目的分析膀胱癌(BC)组织miR-20a-5p、核受体亚家族4成员3(NR4A3)表达及其与患者临床病理特征、预后的关系。方法选取2016年12月—2019年1月曲靖市第一人民医院泌尿外科行手术治疗BC患者30例,收集其膀胱癌组织及相应的癌旁组织。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BC癌组织中miR-20a-5p、NR4A3的表达水平,并分析miR-20a-5p、NR4A3表达与BC临床病理特征的关系;Kaplan-Meier曲线分析miR-20a-5p、NR4A3与BC患者预后的关系;Cox风险比例回归模型评估BC患者预后的影响因素。结果与癌旁组织比较,BC癌组织中miR-20a-5p表达上升(t/P=7.013/<0.001),NR4A3表达下降(t/P=9.658/<0.001)。TargetScan网站显示,miR-20a-5p与NR4A3存在靶向关系,且Pearson相关性分析显示,BC癌组织中miR-20a-5p与NR4A3表达呈负相关(r/P=-0.599/<0.001)。病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者miR-20a-5p高于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者(t/P=2.159/0.040、2.157/0.040、2.403/0.023),病理Ⅲ级、TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移BC患者NR4A3表达显著低于病理Ⅰ~Ⅱ级、TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(t/P=3.421/0.002、5.445/<0.001、2.849/0.008)。BC患者3年总生存率为63.33%,miR-20a-5p高表达组3年生存率低于低表达组(χ^(2)/P=4.474/0.034),而NR4A3低表达组低于高表达组(χ^(2)/P=9.853/0.002);miR-20a-5p高表达是影响BC患者预后的独立危险因素[OR(95%CI)=2.028(1.764~2.895)]。结论BC癌组织中miR-20a-5p表达上升,NR4A3表达下降,与BC病理分级、淋巴结转移、TNM分期及预后有关,且miR-20a-5p高表达为BC患者预后的独立危险因素。

弓形虫新的表面抗原SRS20A的鉴定及特征化

克隆弓形虫上海SHR株SRS20A基因,构建原核表达体系,通过诱导表达和蛋白纯化,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,对蛋白进行特征化鉴定。采用PCR技术扩增弓形虫SRS20A基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,转化大肠埃希菌(E.coli),IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,使用弓形虫阳性血清检测SRS20A蛋白的反应原性,应用纯化的rSRS20A蛋白通过ELISA方法对猪临床样品进行检测,利用Western blot技术检测多克隆抗体与弓形虫天然蛋白的反应性,通过间接免疫荧光观察SRS20A蛋白在虫体内的定位情况。成功从弓形虫基因组中扩增出SRS20A目的基因,构建了pET-30a-SRS20A重组质粒,利用小鼠感染弓形虫的阳性血清可以特异性识别重组蛋白rSRS20A,ELISA试验表明rSRS20A可以与猪临床血清特异性反应,证明SRS20A具有良好的反应原性。制备并获得了抗SRS20A重组蛋白的多克隆抗体,通过Western blot可检测出弓形虫天然蛋白SRS20A的特异性条带。通过间接免疫荧光方法鉴定SRS20A蛋白定位在弓形虫速殖子表面。通过分子生物学方法鉴定及特征化了一个新的弓形虫速殖子表面抗原SRS20A,为进一步深入研究弓形虫SRS20A功能奠定基础。

头颈部鳞状细胞癌临床预后模型中SERPINE1及SLC20A1的作用

目的构建一个TGF-β基因相关通路的风险评分模型,探讨该模型对头颈部鳞状细胞癌(HNSC)患者预后的预测价值。方法从美国癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载TCGA-HNSC队列作为训练组,GEO数据库中下载GSE41613作为测试组,筛选出训练组中肿瘤组织与正常组织间的差异表达基因,随后采用单因素和多因素Cox回归分析确定影响HNSC患者生存的TGF-β通路相关基因(TRGs),并构建预后风险模型。通过风险生存曲线、受试者工作特征(ROC)曲线及生存状态图对模型进行评价,并对风险评分进行独立预后分析。整合风险评分及其他临床预测指标绘制列线图以评估患者预后。利用R软件对训练组中高、低风险组患者进行基因突变频率分析及免疫微环境特征分析。结果从训练组中初步筛选出6个差异表达的TRGs,通过Cox回归分析筛选出2个与预后相关的基因:纤溶酶原激活物抑制因子-1(SERPINE1)及磷酸盐转运蛋白-1(SLC20A1)。在训练组和测试组中高低风险组生存差异均有统计学意义(均P<0.05),ROC曲线显示该风险评分可靠,可作为独立预后因子。高风险组和低风险组HNSC具有完全不同的集群特征、基因突变频率及免疫细胞浸润。结论基于SERPINE1和SLC20A1构建的模型可较好地预测HNSC患者的预后,高风险组的HNSC在生物学表型、基因突变频率及肿瘤免疫浸润等方面均与低风险组有差异。