玉米雄性不育突变体ms20s2的表型鉴定与基因定位

玉米突变体male-sterile 20s2(ms20s2)是在玉米自交系KWS49中发现的一个无花粉型雄性不育突变体。与野生型相比,ms20s2突变体花药细小且颜色偏浅,花药内未观察到花粉。扫描电镜观察表明,与野生型相比,9叶期突变体ms20s2的花药中未观察到正在减数分裂的花粉母细胞;抽雄后突变体花药壁外部角质层形成异常,内部未观察到乌式体结构。观察不同发育阶段花药的石蜡切片发现,在S6-S7时期,与野生型相比,ms20s2突变体花药部分中间层和绒毡层细胞发生异常分裂,导致花药壁萎缩,花粉母细胞无法正常进行减数分裂,最终造成花粉母细胞死亡,产生雄性不育表型。遗传分析表明,突变体ms20s2的雄性不育表型受单个隐性核基因控制。利用玉米10K SNP芯片对F2定位群体进行基因型分析,初步将该突变位点定位在玉米2号染色体长臂上6.21 Mb区段内。进一步精细定位将该区间缩小到了590 kb,区间包含一个已知的蛋白编码基因MS32(Zm00001eb106620)。对MS32基因进行测序分析,在突变体MS32基因4号外显子上发现了一段3166 bp的大片段插入,可能影响了MS32蛋白功能,造成ms20s2的花药发育异常和雄性不育的表型。等位测验结果表明,突变体ms20s2是雄性不育基因MS32的新等位突变体。组织表达分析发现该基因在玉米花药中特异表达,且仅在花药发育的S6和S7时期表达量较高,进一步验证了该基因在玉米花药绒毡层和中间层细胞发育过程中的重要作用。

东方蜜蜂微孢子虫20sPS基因的分子克隆与生物信息学分析

为解析东方蜜蜂微孢子虫Nosemaceranae的20s蛋白酶体亚基(20sproteinsomesubmit,20sPS)基因20s PS的分子特性,鉴定东方蜜蜂微孢子虫和其他物种的20sPS蛋白的保守基序和结构域并进行系统进化分析,通过常规PCR扩增20sPS的CDS区并进行TA克隆。通过Expasy网站上的相关软件预测和分析20sPS的理化性质、跨膜螺旋域、信号肽、磷酸化位点、二级结构和三级结构。采用MEME软件预测东方蜜蜂微孢子虫和其他物种20s PS的保守基序。利用TBtools软件预测东方蜜蜂微孢子虫和其他物种20sPS的结构域。使用Mega11.0软件构建东方蜜蜂微孢子虫和其他物种的20s PS的系统进化树。成功克隆到东方蜜蜂微孢子虫20s PS的CDS区,20s PS在孢子中真实表达。20sPS基因含有618个核苷酸,可编码205个氨基酸;20sPS蛋白的分子式为C_(1022)H_(1582)N_(26)0_(O316)S_(12),分子量约为22.95 kDa,脂溶系数为78.93,等电点为5.00,平均亲水系数为-0.157;不含跨膜螺旋域和典型信号肽;包含14个丝氨酸酸化位点,5个络氨酸酸化位点及6个苏氨酸磷酸化位点;包含73个α-螺旋,46个延长链,21个β-转角和65个无规-则卷曲;可同时定位于细胞质、细胞核和线粒体;与模板5mp9.1.J之间的同源性为37.75%。东方蜜蜂微孢子虫、蚱蜢脑炎微孢子虫Encephalitozoon romaleae和肠脑炎微胞子虫Encephalitozoon intestinalis等7个物种的20s PS中均含有5个相同的保守基序(motif1,motif2,motif3,motif4和motif5)。东方蜜蜂微孢子虫、蜜蜂微孢子虫Nosema apis、杀线虫spNematocidasp、泛孢虫Pancytosporaphilotis和毕氏肠微孢子虫Pancytosporaphilotis的20sPS中均包含Ntn_hydrolase superfamily结构域。东方蜜蜂微孢子虫20sPS(XP_024330780.1)与蜜蜂微孢子虫20sPS(EQB61106.1)聚为一支,进化距离最近。研究结果丰富了东方蜜蜂微孢子虫20sPS的信息,并揭示20sPS可能是亲水性蛋白、胞内蛋白和非跨膜蛋白,东方蜜蜂微孢子虫与蜜蜂微孢子虫的20sPS之间的亲缘关系最近,20sPS在东方蜜蜂微孢子虫和其他微孢子虫中具有较高的保守性,为深入开展相关功能研究提供依据。

慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌组织20s蛋白酶体C_2亚基的基因及蛋白表达的研究

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌组织内蛋白降解的信号分子——泛素-蛋白酶体系统中20s蛋白酶体C2亚基的基因和蛋白表达水平及意义。方法采用单纯熏香烟法复制COPD大鼠动物模型。反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测伸趾长肌内20s蛋白酶体C2亚基的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹(Westernblot)法测定大鼠伸趾长肌内20s蛋白酶体C2亚基的蛋白表达。结果 RT-PCR结果显示,伸趾长肌组织中20s蛋白酶体C2亚基的mRNA表达(IOD值)较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.01);Westernblot结果显示,伸趾长肌组织中20s蛋白酶体C2亚基的蛋白表达较对照组增强,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 COPD大鼠骨骼肌泛素-蛋白酶体系统中20s蛋白酶体C2亚基的基因和蛋白表达均显著增强,提示骨骼肌内泛素-蛋白酶体途径活性上调,是蛋白降解增强的原因之一。

慢性氧化应激诱导兔动脉粥样硬化对蛋白酶体26S及20S活性影响的实验研究

目的探讨慢性氧化应激诱导动脉粥样硬化(AS)对蛋白酶体26S及20S活性的影响,以及与泛素/泛素蛋白结合物(Ub/UPC)表达之间的关系。方法新西兰雄性兔30只,随机分为正常饮食组(N)和高胆固醇饮食组(H),共饲养12周。检测26S及20S的活性,观察腹主动脉的病理变化、Ub/UPC的表达及氧化应激等指标。结果成功诱导了AS模型,H组的20S的活性比N组明显增高(P<0.01),而26S的活性两组间差异无统计学意义(P>0.05),Ub/UPC在H组的表达比N组明显增强。结论慢性氧化应激状态下,20S的活性明显增强,Ub/UPC大量聚集,可能在AS的病理变化过程中起着重要的作用。

烟酸补充对单次非力竭离心运动大鼠骨骼肌SIRT1、p65及20S蛋白水解酶的影响

目的:观察补充烟酸对大鼠运动性骨骼肌损伤(EIMD)的影响。方法:成年大鼠90只随机等分为对照组(Cs)和烟酸组(Es),各组又分安静对照组、运动后即刻组、运动后24h、运动后48 h及运动后72 h组。运动方式:18 m/min,-16°,120 min。烟酸灌胃(10 mg/kg)每日1次至动物宰杀。腹主动脉血测肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,比目鱼肌观察形态学变化及组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)、p65和20 S蛋白水解酶蛋白表达。结果:烟酸补充可减轻大鼠EIMD各时相点骨骼肌大量炎症灶的百分率,升高运动后即刻SIRT1水平及降低p65表达,对各时相点20 S蛋白水解酶及血清CK和LDH影响不明显。结论:烟酸通过上调骨骼肌SIRT1及降低p65表达,改善非力竭性EIMD炎症过程,但不影响20 S蛋白水解酶表达及血清CK和LDH水平。

老年白内障患者晶状体中20s Proteasome的表达

目的探讨老年性白内障患者晶状体中20s Proteasome表达及酶活性的变化及其与白内障发病的关系。方法分别应用Western印迹法及荧光标记蛋白质底物法检测老年性白内障患者晶状体中20s Proteasome的表达及酶活性变化。结果随着晶状体混浊程度及核硬度的增加,20s Proteasome的表达及酶活性均呈下降趋势。结论在老年性白内障发病过程中,20s Proteasome与晶状体混浊程度相关。

武汉汉族人群D20S85和D6S477基因座遗传多态性调查

目的对武汉地区280名汉族无关个体的D20S85和D6S477位点遗传多态性进行调查,研究其在法医学检验中的应用价值。方法应用PCR和PAGE技术进行分型检验。结果分别检出10个、9个等位基因,获得各等位基因在该地区汉族人群分布频率,基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。两位点的DP值分别为0.9085、0.9127。结论D20S85和D6S477是法医学中重要的遗传标记。

斑茅20S蛋白酶体α亚基5基因的克隆与序列分析

进行了甘蔗属近缘野生种——斑茅抗逆性基因克隆的研究。以斑茅为材料,用RACE技术克隆了斑茅的20S蛋白酶体α亚基5基因,其编码区为711 bp,编码237个氨基酸,并于genbank分析其核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性,用Clustalx version 1.8软件分析其系统进化关系。结果表明,物种间蛋白酶体进化保守,其核苷酸序列与水稻、大豆、剑叶藓属植物的相应基因同源性分别为91％、81％、80％;其氨基酸序列与水稻、大豆、剑叶藓属植物的同源性分别达97％、95％、86％,与人的同源性也高达69％。

20S蛋白酶体表达与类风湿关节炎的关系探讨

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者20S蛋白酶体表达水平的变化及其与RA疾病活动性的关系。方法测定RA患者及正常对照外周血单个核细胞20S蛋白酶体蛋白表达水平。结果与正常对照相比,RA患者20S蛋白酶体表达升高[(2.92±1.41VS(0.65±0.42),P<0.01]。20S蛋白酶体表达水平与DAS28、CRP、ERS之间无显著相关性。结论 RA患者PBMC中20S蛋白酶体表达升高,其水平与疾病活动无显著相关性。

D20S161和D8S384两个基因座在法医学中的应用

评估D2 0S16 1和D8S384两个基因座在法医学中的应用价值。用自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒 ,对人血、人精液、人唾液、动物血、人血与动物血的混合检材和人血痕、人精液斑、人唾液斑、动物血痕、人血与动物血的混合斑痕检材 ,以及陈旧血痕检材进行检测分型 ,并用这两个基因座PCR引物序列与DNA数据库进行联网对比分析。自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血、人精液、人唾液、人血与动物血的混合检材分型 ,而动物血没有PCR产物 ;自制的D2 0S16 1和D8S384两个DNA分型试剂盒能对人血痕、人精斑、人唾液斑和人血与动物血的混合斑痕检材正确分型 ,而动物血痕没有PCR产物 ;斑痕检材分型结果与对应体液检材分型结果无差异 ;5 0份陈旧血痕检材全部获得阳性分型结果。DNA数据库联网比较提示 ,D2 0S16 1和D8S384基因座引物除了能与各自的模板序列发生特异性扩增外 ,理论上不能与DNA数据库中 6 0 6 36 4种已知序列产生PCR产物。D2 0S16 1和D8S384两个基因座具有高度的种属特异性 ,抗污染能力强 ,不易受降解的影响 。

人肝癌细胞氧化应激模型中热休克蛋白90α对20S蛋白酶体功能的影响

目的观察人肝癌细胞氧化应激模型中细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达的变化以及Hsp90α表达下调后对20S蛋白酶体功能的影响;明确热休克蛋白90α对20s蛋白酶体功能的影响。方法以500μMH2O2建立氧化应激HepG2细胞模型;通过ROS探针法观察细胞在不同氧化应激条件下ROS的分布和含量,通过MTT比色法观察氧化应激对细胞存活的影响;以免疫印迹方法检测氧化应激对细胞内Hsp90α及20S蛋白酶体的合成的影响;以pSilencer2.1-U6neo载体,用电穿孔法建立稳定的Hsp90α抑制表达细胞株,通过检测糜蛋白酶活性观察氧化应激和降低Hsp90α表达对蛋白酶体活性的影响。结果氧化应激后细胞内ROS的含量增多,且分布从胞浆向胞核转移;随着作用时间延长,H2O2对HepG2细胞增殖的抑制程度增强;氧化应激导致胞内Hsp90α表达量先增加后降低,20S蛋白酶体表达量明显降低;siRNA干扰组蛋白酶体活性显著下降。结论氧化应激可影响细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达并改变其细胞内分布;氧化应激及降低Hsp90α的表达均可影响蛋白酶体的活性;Hsp90α对蛋白酶体功能维持起保护性的作用。

慢性阻塞性肺疾病患者血清泛素、20S蛋白酶体的变化及意义

目的:检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清泛素(Ub)、20S蛋白酶体(20SPSM)的变化,并探讨其与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的相关性。方法:采用酶联免疫吸附测定法检测30例COPD急性加重期患者(COPDⅠ组)、30例COPD缓解期患者(COPDⅡ组)及30例健康体检者(正常对照组)血清Ub、20SPSM、TNF-α水平,并进行分析。结果:与正常对照组及COPDⅡ组比较,COPDⅠ组血清Ub、20SPSM、TNF-α均显著增加(P<0.01)。与正常对照组比较,COPDⅡ组血清Ub、TNF-α显著增加(P<0.01),20SPSM增加不显著(P>0.05)。COPD患者血清Ub、20SPSM水平分别与TNF-α具有相关性(r=0.559,r=0.859,均P<0.01)。结论:Ub、20SPSM在COPD患者血清中含量增加,可能与COPD患者体内蛋白质高分解代谢相关,并且其水平增加与COPD全身炎症反应因子TNF-α激活相关。

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-20S细胞增殖和周期的影响

目的探讨薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-20S细胞的作用机制。方法采用四氮唑盐还原法观察薯蓣皂苷元对U-20S细胞体外生长的作用,流式细胞技术检测细胞周期DNA分布。结果薯蓣皂苷元对U-20S细胞的生长具有明显抑制作用,半抑制率为87μmol/L;用药后细胞周期阻滞于G1期。结论薯蓣皂苷元能使U-20S细胞阻滞于G1期,明显抑制U-20S细胞生长,对骨肉瘤的治疗有一定价值。

薯蓣皂苷配基对人骨肉瘤U-20S细胞的生长抑制作用

长期以来,手术、放疗和化疗已成为恶性肿瘤治疗的主要方法,传统的化疗对肿瘤治疗起着重要作用,但由于毒副反应大、选择性差,使其临床应用受到很大限制,因此探索新的化疗药已成为全球众多科学工作者追求的目标,本实验就薯蓣皂苷配基(diosgenin)对人骨肉瘤U-20S细胞的生长抑制作用进行探索,现报告如下.

大鼠脾脏20S蛋白酶体的分离纯化及电镜观察

目的 分离纯化正常大鼠脾脏 2 0S蛋白酶体 ,并观察其形态特征。方法 采用分级盐析、离子交换层析及凝胶过滤方法 ,分离纯化了正常大鼠脾脏 2 0S蛋白酶体 ,并进行透射电镜观察。结果 所制备的2 0S蛋白酶体纯度较高 ,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示 1条带 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)显示 8条带 ,分子量为 ( 19.8～ 31.7)× 10 3;电镜观察显示 ,脾脏 2 0S蛋白酶体呈现典型的圆筒状 ,具有同其它细胞 2 0S蛋白酶体一样的形态特征。结论 这为进一研究 2 0S蛋白酶体结构与功能的关系奠定了基础。

温州汉族人群D18S1364和D20S478基因座遗传多态性

本文应用PCR—PAGE技术．对温州地区420例汉族无关个体进行D18S1364和D20S478基因座的遗传学多态性调查，获得了该位点的遗传多态性参数．现报道如下。

沉默piRNA-651抑制骨肉瘤细胞系U20S增殖和转移的影响

目的研究非编码小RNA piRNA-651对骨肉瘤U20S细胞增殖、侵袭与转移的影响。方法通过RNA干扰技术沉默U20S细胞中的piRNA-651,并应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测骨肉瘤U20S细胞中piRNA-651的表达情况;流式细胞术检测细胞周期的变化,MTT实验检测沉默piRNA-651表达对细胞增殖的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化,细胞划痕实验检测细胞转移能力的变化。结果 piRNA-651-siRNA可有效沉默piRNA-651在骨肉瘤细胞U20S的表达,敲低U20S细胞中piRNA-651的表达可以明显阻滞骨肉瘤细胞的细胞周期,抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭与转移能力。结论 piRNA-651在骨肉瘤的发生发展及侵袭转移中发挥着重要作用。

中国5个群体D20S85基因座的遗传多态性

目的 了解中国5个群体D20S85基因座的群体遗传学数据,比较它们之间的遗传学差异,探讨其在法医学应用中的意义。方法 分别收集5个群体622名无关个体的血样,Chelex-100快速抽提法或饱和酚/氯仿法抽提DNA;扩增后经PAGE垂直板电泳、银染,进行D20S85基因座分型。结果 在5个群体622名无关个体中,共检出9个等位基因,并首次在广东汉族和广西壮族群体中检出等位基因14;每个群体基因频率大于0.05的均为6个,D20S85*6为最常见等位基因。5个群体共观察到35种基因型,群体内基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg氏平衡,各群体间基因型构成比无显著性差异。观察140次减数分裂未发现突变。各群体的期望杂合度为0.7720～0.7912;非父排除率,在三联体为0.7538～0.7594,二联体为0.3988～0.4297;个人识别率为0.9175～0,9272;多态信息含量为0.7442～0.7656。应用于亲子鉴定和个人识别案例,效果满意。结论 D20S85基因座是法医学应用价值较高的遗传标记系统。

利福平对U20S细胞增殖和代谢的影响

目的:观察利福平对U20S细胞增殖和代谢的影响。方法:常规培养人U20S细胞株,分别加入不同浓度的利福平(50、250、500、750、1000μg/mL),分别采用四唑盐(MTT)法测定24h、48h细胞增殖率,测定24h细胞外液LD含量、LDH活性,ELISA法测定细胞5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)摄取量。结果:利福平可以剂量依赖性地抑制细胞增殖(P<0.01),增加细胞外液LD含量和LDH活性(P<0.05,P<0.01),降低细胞DNA合成量。结论:高浓度利福平明显抑制U20S细胞的增殖和DNA合成,并影响细胞的代谢能力,提示在骨关节结核局部用药时需注意控制药物浓度。

中籼型水稻光(温)敏核不育系佳丰20S的选育及初步利用

指出了籼型水稻光温敏核不育系佳丰20S是利用8077S与丰两优1号杂交,然后再与蜀恢527和扬稻6号复交选育而成。它属于无花粉类型,不育期间败育彻底,不育性稳定,其不育株率、花粉不育度和自交套袋不实率均为100%。在12.5h短日下,不育临界温度低于23.0℃。开花习性和稻米品质性状较好,配合力强,容易繁殖制种。利用该不育系育成的苗头组合正在参加各级区试。