miR-20b-5p靶向VEGFA对深Ⅱ度烫伤创面组织的作用机制

目的:探究微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合的影响机制,以及其对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)A的表达的调控机制。方法:沸水浴烙铁术制作深Ⅱ度烫伤大鼠模型,以miR-20b-5p抑制剂(miR-20b-5p-antagomir)干预创面组织,以miR-20b-5p-antagomir+小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制VEGFA进行功能挽救;造模28 d后,检测大鼠的创面愈合率、创面组织中的胶原纤维含量以及血管新生。以miR-20b-5p-antagomir和miR-20b-5p-antagomir+siRNA-VEGFA分别转染微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMEC)-1;检测细胞的增殖及小管形成的能力;Western blot检测各组创面组织和细胞中VEGFA的表达。结果:miR-20b-5p-antagomir能明显促进创面愈合,促进HMEC-1细胞的增殖与小管形成,而siRNA-VEGFA可部分逆转这一作用,差异均具有统计意义(P均<0.05)。结论:miR-20b-5p靶向VEGFA的表达影响深Ⅱ度烫伤大鼠的创面愈合,抑制miR-20b-5p的表达能促进创面愈合,促进血管新生。

ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA-20b对头晕患者发生缺血性卒中有预测价值

目的:探讨年龄、血压、单侧肢体无力和言语障碍、持续时间、糖尿病(ABCD2)评分联合血清泛连接蛋白、微小RNA(miRNA)-20b对头晕患者发生缺血性卒中(IS)的预测价值。方法:收集148例头晕患者,根据是否发生IS分为IS组(109例)和非IS组(39例)。比较分析2组患者一般资料、ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平。多因素Logistic回归分析头晕患者发生IS影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析ABCD2评分联合血清泛连接蛋白、miR-20b水平对评估头晕患者发生IS的预测价值。结果:IS组年龄、高血压史比例、ABCD2评分、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、泛连接蛋白水平明显高于非IS组,miR-20b水平明显低于非IS组(P均<0.05)。LDL-C升高(OR=2.575,95%CI:1.497~3.353)、ABCD2评分>3分(OR=3.069,95%CI:2.242~5.408)、泛连接蛋白升高(OR=1.089,95%CI:1.018~1.187)为头晕患者发生IS独立影响因素(P均<0.05),miR-20b为独立保护因素(OR=0.351,95%CI:0.220~0.559,P<0.05)。3个指标联合预测头晕患者发生IS的曲线下面积(AUC=0.859,95%CI:0.791~0.926)明显大于ABCD2评分(AUC=0.759,95%CI:0.669~0.849)、泛连接蛋白(AUC=0.656,95%CI:0.554~0.759)、miR-20b(AUC=0.821,95%CI:0.750~0.893)单独预测(P均<0.05)。结论:ABCD2评分和血清泛连接蛋白、miR-20b水平为头晕患者发生IS独立影响因素,3个指标联合对头晕患者IS风险有预测价值。

子痫前期患者血清miR-20b、miR-4443水平及与不良妊娠结局的关系

目的检测子痫前期(PE)患者血清微小RNA-20b(miR-20b)、微小RNA-4443(miR-4443)的水平,并探讨二者对PE患者妊娠结局的预测价值。方法选取2021年2月至2023年1月在本院接受治疗的212名PE患者为研究组,根据病情严重程度分为重度PE组(n=106)和轻度PE组(n=106);另选取同期106例孕检健康的孕妇作为对照组。根据重度PE组患者的妊娠结局分为妊娠结局良好组和妊娠结局不良组。采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测所有受试者血清中miR-20b和miR-4443的表达水平;使用多因素Logistic回归分析患者妊娠结局的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-20b、miR-4443对重度PE孕妇妊娠不良结局的预测价值。结果对照组、轻度PE组、重度PE组血清miR-20b、miR-4443水平逐渐升高(F值分别为486.199和354.434,P<0.001),胎儿宫内窘迫和早产的发生率在各组之间差异显著(χ^(2)值为10.498和15.163,P<0.001)。重度PE组不良妊娠结局总发生率为48.11%,显著高于轻度PE组及对照组(χ^(2)=50.956,P<0.001)。妊娠结局不良组miR-20b水平及miR-4443水平均显著高于妊娠结局良好组(t=5.750,5.853,P<0.001)。多因素Logistic回归分析表明,miR-20b(OR=3.564,95%CI:1.546~8.214)、miR-4443(OR=2.365,95%CI:1.472~3.800)、收缩压(OR=2.869,95%CI:1.373~5.995)、尿蛋白(OR=3.837,95%CI:1.910~7.709)、甘油三酯(TG)(OR=4.236,95%CI:2.027~8.851)是患者发生不良妊娠结局的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-20b、miR-4443联合预测重度PE妊娠结局的曲线下面积(AUC)为0.945(95%CI:0.901~0.989),显著高于miR-20b及miR-4443单独预测(Z值分别为2.412和2.055,P<0.05)。结论重度PE患者血清miR-20b、miR-4443呈高表达,与不良妊娠结局的发生风险有关,二者联合使用可作为重度PE患者不良妊娠结局的预测指标。

糖尿病视网膜病变患者血清miR-20b-3p、miR-192表达与NLRP3炎症小体和预后不良的关系

目的探讨糖尿病视网膜病变(DR)患者血清微小核糖核酸(miRNA)-20b-3p、miR-192表达与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体和预后不良的关系。方法选取2021年1月至2022年3月我院收治的DR患者165例。根据临床分级标准分为增生型DR(PDR)组89例和非增生型DR(NPDR)组76例,另选取同期我院收治的100例单纯2型糖尿病(T2DM)患者纳入T2DM组及100例体检健康志愿者纳入对照组。检测并对比4组血清miR-20b-3p、miR-192和外周血单核细胞NLRP3 mRNA、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA表达、白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平。采用Pearson相关性分析DR患者血清miR-20b-3p、miR-192表达与NLRP3炎症小体相关指标的相关性。DR患者出院后随访1年,根据是否发生视力残疾分为预后不良组47例和预后良好组118例,比较预后不良组和预后良好组血清miR-20b-3p、miR-192水平。收集DR患者的临床资料,单因素和多因素Logistic回归分析影响DR患者预后不良的因素。结果对照组、T2DM组、NPDR组、PDR组血清miR-20b-3p、miR-192表达依次降低,外周血单核细胞NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA和血清IL-1β、IL-18水平依次升高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,DR患者血清miR-20b-3p、miR-192表达与NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β、IL-18水平呈负相关(P<0.05)。随访1年,165例DR患者视力残疾发生率为28.48%(47/165)。多因素Logistic回归分析显示,T2DM病程偏长、PDR占比偏高和糖化血红白蛋白(HbA1c)、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA、IL-1β、IL-18水平升高为影响DR患者预后的独立危险因素,miR-20b-3p、miR-192升高为独立保护因素(P<0.05)。结论DR患者血清miR-20b-3p、miR-192低表达,与NLRP3炎症小体激活和预后不良密切相关,可能成为DR患者病情和预后评估的指标。

利拉鲁肽调控miR-20b及TXNIP对非酒精性脂肪性肝病的影响机制研究

目的探讨利拉鲁肽(LG)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的影响机制,以及其对微小RNA20b(miR-20b)和硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)的调控机制。方法人肝细胞L02购自通派(上海)生物科技有限公司。50只雄性成年SD大鼠,鼠龄9~10周,体质量275~300 g。细胞实验部分:采用棕榈酸(PA)诱导人肝细胞L02形成脂肪变性细胞;由油红O、Rh123染色依次检测各组细胞中脂质沉积和线粒体膜电位的变化;经miRNA生物芯片分析及聚合酶链式反应(PCR)实验确定LG的作用靶点。动物实验部分:大鼠被随机分为正常对照组(Normal组)、NAFLD组(Model组)、NAFLD+LG组(LG组)、NAFLD+LG+miR-20b-antagomiR组(LG+antagomiR组)、NAFLD+LG+miR-20b-antagomiR+siRNA-TXNIP组(LG+antagomiR+si组)。高脂饲料连续喂养12周构建大鼠NAFLD模型;生化分析仪检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测大鼠肝组织中miR-20b和TXNIP的表达;JC-1染色检测大鼠肝组织细胞的线粒体膜电位的变化;油红O检测大鼠肝组织中的脂质沉积;Western blot检测各组大鼠肝组织中TXNIP、硫氧还蛋白还原酶(TRXR)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)和脂滴包被蛋白2(PLIN2)的表达。结果LG能明显降低PA诱导的L02细胞中脂滴沉积,升高其线粒体的膜电位;经miRNA生物芯片分析及PCR实验确定LG的作用靶点为miR-20b,双荧光素酶实验确定miR-20b靶向调控TXNIP的表达。LG能明显降低NAFLD大鼠血清中TC、TG的含量,升高肝组织中miR-20b、TRXR、MFN2、OPA1的表达及肝组织中的线粒体膜电位,降低肝组织中TXNIP和PLIN2表达及脂滴沉积。LG+antagomiR能部分逆转LG对肝组织的保护作用,LG+antagomiR+si能部分恢复药物这些作用,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论利拉鲁肽可以调控miR-20b的表达,靶向TXNIP的表达,改善NAFLD肝组织中线粒体的功能障碍,下调脂滴沉积。

超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足下肢血管病变的诊断价值

目的:探究超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对糖尿病足(DF)下肢血管病变(LEVD)的诊断价值。方法:选取2021年3月至2023年6月在我院就诊的90例DF患者为研究对象,根据是否合并LEVD分为LEVD组42例和非LEVD组48例。采用实时荧光定量PCR检测DF患者血清miR-106a-5p、miR-20b-5p表达水平,并对所有患者进行下肢血管超声检查。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-106a-5p、miR-20b-5p对DF患者合并LEVD的诊断价值;采用一致性Kappa检验分析超声单独及联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p与金标准的一致性。结果:超声检查结果与金标准诊断结果一致性较高,Kappa值为0.642(P<0.05)。LEVD组血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平显著高于非LEVD组(P<0.05)。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者发生LEVD的曲线下面积(AUC)分别为0.803、0.757。血清miR-106a-5p、miR-20b-5p检查结果与金标准诊断结果一致性均为中度,Kappa值分别为0.503、0.492(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p水平检查结果与金标准诊断结果一致性极高,Kappa值为0.866(P<0.05)。超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的准确度、阴性预测值显著高于三者单独诊断(P<0.05)。结论:超声联合血清miR-106a-5p、miR-20b-5p诊断DF患者LEVD的价值较高,值得推广。

血清外泌体miR-20b-5p miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用

目的探究血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平检测在非小细胞肺腺癌诊断及预后评估中的应用价值。方法选取2015年12月至2018年12月河南科技大学第一附属医院胸外科收治的124例非小细胞肺腺癌患者为观察组,另选取120例同期于本院接受体检的健康体检者为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链法(qRT-PCR)检测血清外泌体miR-20b-5p、miR-107表达水平,受试者工作特征曲线(ROC)评估miR-20b-5p、miR-107水平检测对非小细胞肺腺癌的早期诊断价值,Kaplan-Meier生存分析研究miR-20b-5p、miR-107水平与患者预后的关系。结果观察组的血清外泌体miR-20b-5p、miR-107水平高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体miR-20b-5p、miR-107检测诊断非小细胞肺腺癌的AUC值分别为0.766、0.821,最佳截断值分别为1.81、1.27。观察组患者中,117例完成随访,7例失访。随访3年后,64例患者死亡,53例患者存活。根据患者的生存状态绘制ROC曲线,确定miR-20b-5p、miR-107预测患者预后的最佳截断值分别为1.95、1.60;miR-20b-5p高表达与低表达、miR-107高表达与低表达患者的TNM分期和淋巴结转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-20b-5p、miR-107高表达患者的中位生存时间均低于低表达患者(P<0.05)。结论外泌体miR-20b-5p、miR-107在非小细胞肺腺癌患者血清中呈高表达状态,其表达水平与患者的预后相关,在疾病诊断与预测患者累计生存率方面具有一定的参考意义。

妊娠期糖尿病视网膜病变患者血清miR-200c-3p、 miR-20b-5p表达水平及检测临床意义

目的:探讨妊娠期糖尿病视网膜病变(DR)患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平变化及检测临床意义。方法:选择妊娠期糖尿病孕妇80例(GDM组)和DR孕妇75例(DR组),正常妊娠期女性95例(对照组)。采用qRT-PCR法对受试者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平进行测定,采用全自动生化分析仪对受试者低密度脂胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)进行测定,采用血糖检测仪对受试者空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)进行测定。结果:GDM组、DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于对照组(均P<0.05);DR组患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于GDM组(均P<0.05);随着病情严重程度的增加,DR组患者miR-200c-3p、miR-20b-5p水平显著升高(均P<0.05);预后不良组DR患者FPG、2 hPG、LDL-C、TG、TC、miR-200c-3p、miR-20b-5p值显著高于预后良好组(均P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高为DR患者发生预后不良的危险因素;ROC曲线结果显示,血清miR-200c-3p、miR-20b-5p、两者联合诊断DR患者不良预后曲线下面积(AUC)为0.927(95%CI:0.843~0.974)、0.848(95%CI:0.746~0.920)、0.985(95%CI:0.924~0.999)。结论:DR患者血清miR-200c-3p、miR-20b-5p水平升高,对DR不良预后具有一定的预测价值。

川芎嗪和过表达miR-20b-5p干预早期膝骨关节炎模型大鼠滑膜、软骨和软骨下骨血管新生的组织学变化

背景:血管新生参与早期膝骨关节炎进展,滑膜、软骨及软骨下骨均具有血管新生病理表现,探讨川芎嗪和过表达miR-20b-5p对这些组织病理性血管新生的抑制能力及相关作用途径,有助于开发新的早期膝骨关节炎治疗药物。目的:通过组织学观察探讨川芎嗪和过表达miR-20b-5p对早期膝骨关节炎大鼠滑膜、软骨及软骨下骨血管新生的影响及可能发挥作用的途径。方法:将25只SD大鼠进行早期膝骨关节炎造模,造模成功后分5组,每组5只:A组膝关节腔注射与灌胃给予生理盐水,B组膝关节腔注射agomir NC,C组膝关节腔注射miR-20b-5p agomir,D组灌胃给予川芎嗪+膝关节腔注射agomir NC,E组灌胃给予川芎嗪+膝关节腔注射miR-20b-5p agomir,膝关节腔注射为单次给药,灌胃给药为1次/d,连续灌胃4周。4周后处死大鼠,取完整左膝关节制作石蜡切片,进行苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色与免疫组织化学染色。结果与结论:①滑膜组织:苏木精-伊红染色与免疫组化染色显示,C、D、E组的血管密度、炎症细胞浸润程度及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达均低于A、B组(P<0.05),E组血管密度、炎症细胞浸润程度及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达低于C、D组(P<0.05);②软骨及软骨下骨组织:苏木精-伊红染色、番红O-固绿染色与免疫组织化学染色显示,C、D、E组的软骨基质流失程度及血管侵袭情况轻于A、B组,C、D、E组的骨关节炎软骨组织病理学评分及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达均低于A、B组(P<0.05),E组的骨关节炎软骨组织病理学评分及血管内皮生长因子蛋白、Notch1蛋白表达低于C、D组(P<0.05);③结果表明,在早期膝骨关节炎大鼠滑膜、软骨及软骨下骨中,川芎嗪和过表达miR-20b-5p可能通过抑制血管内皮生长因子/Notch1信号通路介导的血管新生在一定程度上改善多方面的组织学表现,抑制早期膝骨关节炎的进展。

miR-20b-5p与TGFBR2在宫颈癌组织中的表达及意义

目的通过分析miR-20b-5p、TGFBR2在宫颈癌组织中的表达水平及与临床病理特征的关系,探讨miR-20b-5p与TGFBR2在宫颈癌转移中的作用。方法选取2018年1月至2020年10月诊治的58例宫颈癌患者为宫颈癌组,选取同期32例因子宫肌瘤或子宫腺肌症行全子宫切除术患者的正常宫颈组织为对照组。RT-PCR检测2组宫颈组织中miR-20b-5p、TGFBR2 mRNA表达情况,免疫组化及Western blot检测宫颈癌组织中TGFBR2蛋白表达情况,通过在线网站预测miR-20b-5p与TGFBR2的靶向结合位点,并分析两者相关性,讨论两者其在宫颈癌组中表达差异与临床病理特征的关系。结果宫颈癌组中miR-20b-5p表达量显著高于对照组(P<0.01),而宫颈癌组中TGFBR2 mRNA表达量显著低于对照组(P<0.01)。免疫组化及Western blot结果进一步证实TGFBR2在宫颈癌组中表达水平显著低于对照组(P<0.01)。miR-20b-5p表达水平与TGFBR2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.7366,P<0.01)。且miR-20b-5p表达水平与宫颈癌患者的FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理类型、分化程度、肿瘤大小无相关性(P>0.05);TGFBR2表达与宫颈癌患者的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理类型、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论miR-20b-5p与TGFBR2的异常表达可能参与了宫颈癌的发生发展,且两者存在密切联系,可能作为宫颈癌淋巴转移和预后的标志物。

miR-20b抑制哮喘小鼠的气道炎症

目的探讨miR-20b对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、哮喘+miR-20b模拟物处理组、哮喘+miR-20b模拟物对照处理组。卵清白蛋白(OVA)致敏和激发构建哮喘模型小鼠,miR-20b模拟物及其对照采用鼻滴的方式给药干预。实验流程的第49天检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞总数和分类计数,肺组织进行HE染色观察病理学变化,ELISA检测BALF中血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。结果哮喘小鼠经miR-20b模拟物处理后,BALF中细胞总数及中性粒细胞、嗜酸性粒细胞的分类计数明显降低(P<0.01),并且气道黏膜增厚减轻,气道腔内粘液分泌及支气管周围炎性细胞的浸润减少。与哮喘组BALF中VEGF的含量28.55±3.42 pg/m L相比,哮喘+miR-20b模拟物处理组的含量18.19±3.67 pg/m L明显降低(P<0.01)。结论 miR-20b对哮喘小鼠气道炎症产生抑制作用,这一效应可能是通过降低VEGF的表达来介导。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-20b、微小RNA-199a水平与神经功能缺损程度及侧支循环形成的关系

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA(miRNA)-20b、miRNA-199a水平与神经功能缺损程度及侧支循环形成的关系。方法选择126例AIS患者为观察组,根据脑侧支循环形成情况进一步分为一级侧支循环组(45例)、二级侧支循环组(41例)、三级侧支循环组(40例),另选取126例健康体检者为对照组。采用实时定量PCR法检测两组研究对象血清miRNA-20b、miRNA-199a的相对表达水平,采用酶联免疫吸附试验检测3组AIS患者血清缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,采用中国卒中量表(CSS)评估患者入院时神经功能缺损程度。比较观察组和对照组的血清miRNA-20b、miRNA-199a水平,3组AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a、HIF-1α、VEGF水平及CSS评分,分析AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a水平与CSS评分、HIF-1α、VEGF水平的相关性。结果观察组血清miRNA-20b、miRNA-199a的相对表达水平均高于对照组(均P<0.05)。随着侧支循环级数增加,AIS患者的CSS评分、血清miRNA-20b、miRNA-199a水平降低,血清HIF-1α、VEGF水平升高(P<0.05)。AIS患者的血清miRNA-20b水平与miRNA-199a水平呈正相关,且血清miRNA-20b水平、miRNA-199a水平均分别与CSS评分呈正相关,与血清HIF-1α、VEGF水平呈负相关(均P<0.05)。结论AIS患者血清miRNA-20b、miRNA-199a水平呈高表达,两者与AIS患者神经功能缺损程度呈正相关,并可能通过降低HIF-1α、VEGF表达水平,减少侧支循环的形成。

川芎嗪干预早期膝骨关节炎大鼠软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因与血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达

背景:课题组前期研究发现川芎嗪能明显降低骨关节炎关节液中NO、前列腺素E2水平,对减轻骨性关节炎的炎症有一定作用,但具体机制还不清楚。目的:观察川芎嗪治疗膝骨关节炎模型关节软骨中Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA及miR20b表达水平,并探讨川芎嗪治疗早期膝骨关节炎大鼠的作用机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、川芎嗪高剂量组、川芎嗪低剂量组、阳性对照组,后4组通过木瓜蛋白酶关节腔注射制作早期膝骨关节炎大鼠模型。造模后川芎嗪高、低剂量组分别灌胃川芎嗪100 mg/kg和50 mg/kg,阳性对照组灌服塞来昔布24 mg/kg;正常组、模型组灌服等量生理盐水。干预6周后取材,分别行鼠软骨大体组织学评分、qR T-PCR检测软骨Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA及miR20b的表达水平。结果与结论:(1)软骨Mankin评分:川芎嗪高、低剂量组和阳性对照组均较正常组高(P<0.05),较模型组低(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;(2)川芎嗪各剂量组和阳性对照组的Ⅱ型胶原纤维α1基因、血管内皮生长因子mRNA表达较正常组上调(P<0.05),较模型组下调(P<0.05),且川芎嗪高剂量组<阳性对照组<川芎嗪低剂量组;(3)川芎嗪各剂量组、阳性对照组及正常组的miR20b表达均较模型组上调(P<0.05),其中川芎嗪低剂量组<阳性对照组<川芎嗪高剂量组;(4)提示:川芎嗪对早期膝骨关节炎大鼠治疗具有积极作用,可能通过上调软骨中miR20b从而抑制血管内皮生长因子mRNA的表达,促进软骨的修复。

子宫内膜异位症患者内膜中miR-20b-5p、miR-106a-5p的表达及机制探讨

目的检测miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA在正常子宫内膜(N)、子宫内膜异位症(endometriosis,EM)患者在位内膜(eutopic endometrial,Eu)、子宫内膜异位症患者异位内膜(ectopic endometrial,Ec)组织中的表达,并探讨miR-20b-5p、miR-106a-5p对子宫内膜异位症细胞增殖与凋亡的影响。方法选择2017年5月-2018年5月在本院妇产科行腹腔镜手术及术后病理检查确诊的EM患者30例,年龄(32.4±6.2)岁,对照组选择同期行腹腔镜子宫肌瘤剔除术的患者30例,年龄(36.35±5.89)岁。采用qRT-PCR法检测Eu(n=30)、Ec(n=37)以及N(n=30)组织中miR-20b-5p、miR-106a-5p、PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的表达,并用Pearson相关检验分析miR-20b-5p、miR-106a-5p与PTEN mRNA、CCNE1 mRNA的相关性。结果 Ec与Eu相比,miR-20b-5p、miR-106a-5p表达下降(P <0.001),PTEN mRNA的表达上升(P <0.001),CCNE1 mRNA的表达下降(P=0.005);Eu与N相比,miR-20b-5p表达上升(P=0.038),PTEN表达下降(P=0.049),miR-106a-5p及CCNE1的表达未见明显差异(P> 0.05);miR-20b-5p与PTEN mRNA在Eu及Ec中的表达呈负相关(r=-0.63,P <0.001;r=-0.42,P=0.01);mi R-106a-5p与PTEN mRNA的表达在Eu(r=-0.14,P=0.465)及Ec(r=-0.25,P=0.142)中不存在相关性。结论 miR-20b-5p可能通过PTEN上调细胞增殖,促进EM的发病。

MicroRNA-20b在卵巢癌细胞中的表达及对增殖和凋亡的影响

目的探讨micro RNA-20b(miR-20b)在卵巢癌细胞系中的表达及对增殖和凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)测定miR-20b在卵巢癌细胞系A431、SKOV3及正常卵巢上皮细胞系Hose中的相对表达量,将SKOV3细胞系分成未转染对照、阴性对照及miR-20b模拟物组,用Lipofectamine2000分别不转染、转染miR-20b scramble和miR-20b mimics,CCK8实验测定3组细胞增殖能力,流式细胞术测定3组细胞凋亡,Western blot测定张力蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶(PTEN)、裂解型聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的相对表达量。结果 q RT-PCR示A431、SKOV3细胞系miR-20b相对表达量较Hose细胞系低;miR-20b模拟物组在0、24、48、72及96 h的OD45 nm值低于未转染对照组和阴性对照组;miR-20b模拟物组凋亡率高于阴性对照组和未转染对照组;miR-20b模拟物组PTEN相对表达量低于阴性对照组,裂解型PARP蛋白相对表达量高于阴性对照组。结论 miR-20b抑制卵巢癌细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与下调PTEN和上调PARP蛋白表达有关。

血浆miR-20a和miR-20b对Ⅱ型糖尿病肾病的诊断价值

目的:探讨血浆miR-20a和miR-20b对Ⅱ型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的诊断价值。方法:选取2017年01月~2019年06月在我院就诊的327名Ⅱ型糖尿病(typeⅡdiabetes mellitus,T2DM)患者,根据Mogenson分期标准,327例T2DM患者中,213例被分到T2DM组,114例被分为Ⅱ型DN组。同时选取同时期在我院体检中心参加体检的健康人120例作为正常对照组(normal control,NC)。应用定量实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法测定miR-20a和miR-20b的相对表达量。采用Pearson相关分析比较miRNA和临床指标的相关性。采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析miR-20a和miR-20b对Ⅱ型DN的诊断价值。采用Logistic回归分析影响Ⅱ型DN的因素。结果:miR-20a和miR-20b在DN患者中的表达量显著高于T2DM组和NC组患者(P均<0.05)。Pearson相关分析显示,miR-20a和miR-20b均与UAER呈正相关,与e GFR呈负相关(P均<0.05)。ROC分析显示miR-20a和miR-20b诊断Ⅱ型DN的ROC曲线下面积(areas under the ROC curve,AUC)分别为0.823和0.870。多因素Logistic回归分析显示较高水平的BMI、TG、TC、FPG、Hb A1C以及miR-20a和miR-20b高表达均是Ⅱ型DN的独立危险因素(P <0.05)。结论:血浆miR-20a和miR-20b在Ⅱ型DN中高表达,是诊断Ⅱ型DN潜在的生物标志物。

靶向抑制miR-20b降低肝癌HuH-7细胞增殖、迁移和侵袭能力

目的探讨miR-20b对肝癌HuH-7细胞增殖、迁移、侵袭的影响和机制。方法在肝癌HuH-7细胞中转染miR-20b inhibitor,分别采用Real-time PCR评估下调效果,MTT法评估细胞增殖变化,Transwell小室评估细胞侵袭能力,Western blot法评估细胞中MMP-2、E-cadherin、MMP-9和vimentin蛋白水平。应用生物信息学软件预测TCF21可能是miR-20b的靶基因,以双荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌HuH-7细胞中共转染TCF21 siRNA和miR-20b inhibitor,评估细胞增殖、侵袭、迁移与细胞中MMP-2、E-cadherin、MMP-9、vimentin蛋白的表达水平。结果转染miR-20b inhibitor后HuH-7细胞中miR-20b表达水平降低[(1.02±0.11)vs(0.43±0.05)];细胞增殖[(0.57±0.06)vs(0.34±0.02)]、迁移[(125.64±13.65)vs(92.14±6.94)]和侵袭[(88.15±9.32)vs(63.48±6.2)]能力下降;MMP-2、vimentin、MMP-9蛋白表达水平降低;E-cadherin蛋白表达水平升高。miR-20b靶向负调控TCF21表达。共转染TCF21 siRNA和miR-20b inhibitor可以显著提高HuH-7细胞增殖[(0.40±0.05)vs(0.56±0.06)]、迁移[(89.62±9.25)vs(115.26±10.84)]和侵袭[(68.25±4.15)vs (95.21±6.51)]能力;提高细胞中MMP-2、vimentin、MMP-9蛋白表达水平,降低E-cadherin蛋白水平;与共转染siRNA control和miR-20b inhibitor的细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调miR-20b表达,可通过靶向TCF21抑制肝癌HuH-7细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化。

miR-20b对小鼠RAW264.7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h，ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h，Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞，用TNF-α（100ng／mL）刺激24h，ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF，50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度；50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h，VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍，而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明，小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后，TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01），但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。

miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响

目的探讨miR-20b过表达对P19细胞增殖和细胞分化的影响。方法将包含鼠miR-20b成熟序列的慢病毒载体及空载体分别感染P19细胞,通过嘌呤霉素筛选2周,建立稳定过表达鼠mR-20b的P19细胞系。用Real-time PCR的方法验证稳定细胞表达株。用CCK-8方法检测稳定感染miR-20b过表达慢病毒和空载体的P19细胞间细胞增殖的差别。将稳定感染的两组细胞以无血清培养液37℃孵育24小时使细胞停留于G0期,而后恢复血清培养,取不同时间点的细胞,使用流式细胞仪检测两组间细胞周期的差别,从而间接验证CCK-8的结果。以1%二甲基亚砜(DMSO)将两组稳定感染的P19细胞诱导分化为心肌细胞,Real-time PCR检测心肌分化相关标志基因的表达,并用光镜观察分化过程中的形态变化。结果建立了稳定表达miR-20b的P19细胞系,与空载体组相比,miR-20b过表达可抑制P19细胞的增殖,促进心肌分化相关标志基因的表达(P<0.05,P<0.01或P<0.001)。结论 miR-20b过表达可显著抑制P19细胞的增殖,并具有促进P19细胞向心肌细胞分化的作用。