二萜化合物Rabdocoetsin B抑制蛋白酶体功能并诱导t(8;21)白血病细胞凋亡

从香茶菜属植物细锥香茶菜中分离得到的二萜类化合物Rabdocoetsin B(Rabd-B),研究其对人类t(8;21)白血病细胞凋亡的诱导作用及其对蛋白酶体19S泛素识别亚基S6’(Rpt5)的抑制作用,为Rabd-B应用于t(8;21)白血病治疗提供实验依据。以不同浓度的Rabd-B处理t(8;21)白血病Kasumi-1细胞,应用CCK-8法检测细胞活力,用Bliss法计算IC50值,通过流式细胞术检测细胞凋亡情况,并以稳定表达pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞作为蛋白酶体抑制剂筛选模型,荧光显微镜成像拍照GFP荧光。Western blotting检测不同浓度的Rabd-B处理Kasumi-1,检测Casp-3、S6’(Rpt5)、PARP、ubiqutin在该细胞内的表达变化。结果显示,Rabd-B明显抑制t(8;21)阳性的Kasumi-1细胞生长,48 h的IC50值为1.27μmol/L;同时诱导Kasumi-1细胞凋亡效果显著;荧光显微镜观察药物处理和未处理的pGC-E1-ZU1-GFP的A549细胞Ub-GFP表达,结果显示GFP平均荧光值随药物浓度增高而增强;Rabd-B处理Kasumi-1细胞24、48 h后蛋白质免疫印迹技术检测Casp-3、PARP,发现Casp-3激活,其底物PARP发生切割产生85 kD的降解带;2.5、5.0μmol/L Rabd-B处理Kasumi-1细胞24、48 h后Western blotting检测蛋白酶酶体组分,发现19S调节亚基S6’(Rpt5)降解,细胞内泛素化水平增高。以上结果说明,Rabd-B一方面通过激活Caspase级联反应,另一方面抑制蛋白酶体19S泛素识别亚基,导致细胞内泛素化积累,进而抑制t(8;21)白血病细胞生长并诱导其凋亡。

冬凌草甲素衍生物的合成及其抗t(8;21)白血病活性研究

目的设计合成冬凌草甲素衍生物,并检测其在t(8;21)白血病细胞中的活性。方法以冬凌草甲素为原料设计合成了15个冬凌草甲素衍生物。采用CCK-8(cell counting Kit-8试剂盒)法测定其对t(8;21)白血病细胞系Kasumi-1的抑制活性。结果与结论得到了3个系列共15种冬凌草甲素衍生物,其中8个化合物为未见文献报道的新化合物,15个化合物的结构经核磁共振氢谱、质谱确证。活性研究表明,化合物2b(IC50=0.18μmo.lL-1)、3b(IC50=0.23μmol.L-1)和4a(IC50=0.23μmol.L-1)等对Kasumi-1细胞的抑制活性显著强于冬凌草甲素(IC50=3.04μmol.L-1)。