乳腺MRI预测ER^(+)/HER2^(-)乳腺癌21基因检测复发风险评分的价值

目的:探究乳腺磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)影像学特征与21基因检测复发风险评分(recurrence score,RS)的相关性,并建立RS预测模型。方法:收集2017年4月—2019年3月在复旦大学附属肿瘤医院进行21基因检测的雌激素受体(estrogen receptor,ER)阳性、人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,HER2)阴性乳腺癌患者的资料,筛选出有术前MRI检查的患者拟入组。以RS=26分为临界值,将患者分为高危组(RS≥26)与低危组(RS<26)。根据2013版乳腺影像报告和数据系统标准评估患者图像。运用单因素检验比较MRI影像学特征在RS分组间差异,运用多元logistic回归构建RS预测模型。以7∶3比例将患者分为训练组和验证组,使用Pearson相关系数筛选法和递归特征消除法进行特征筛选,运用合成少数类过采样技术法进行重采样,使用4种不同机器学习模型算法构建模型(线性支持向量机、随机森林、决策树和K近邻)。运用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估模型效能。结果:共入组159例患者(低危组58例,高危组101例)。在临床病理学特征中,孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达状态组间差异有统计学意义(P=0.017),低危组PR表达阳性患者占比更高。在MRI影像学特征中,肿块边缘组间差异有统计学意义(P=0.008),低危组肿块多表现为边缘毛刺(64.8%),高危组肿块多表现为边缘不规则(54.7%)。将PR状态和肿块边缘纳入多因素logistic回归模型,PR阳性与PR阴性相比,PR阳性患者复发风险相对低,OR值为0.110(P=0.038);边缘毛刺的肿块与边缘不规则肿块相比,边缘毛刺的肿块复发风险相对低,OR值为0.343(P=0.004)。Logistic回归模型曲线下面积(area under curve,AUC)为0.67,且该模型校准性能良好且具有一定临床实用性。以7∶3划分后,训练组纳入111例患者(低危组34例,高危组77例),验证组纳入48例患者(低危组和高危组均为24例)。4种机器学习模型AUC为0.64~0.69,支持向量机和随机森林模型预测效能相对较高。结论:MRI在评估ER+/HER-乳腺癌患者复发风险方面具有潜在价值。

含Pm21基因的次级易位创制及鉴定

小麦-簇毛麦6VS.6AL易位携带抗白粉病基因Pm21,对我国小麦抗白粉病育种做出了重要贡献。本文对162份四川小麦品种(系)的55KSNP芯片数据分析表明,25份含6VS.6AL易位染色体,占15.4%。重组位置和单倍型分析表明,这些材料的6VS.6AL均为着丝点易位、具有单一来源。根据系谱分析, 92R178为最原始的供体材料。利用由ph1b诱导6VS/6AS部分同源重组形成的,含Pm21基因的初级易位6VS-6AS.6AL和6AS-6VS.6AL为亲本,创制了1个含Pm21基因、6VS片段大幅减小的6AS-6VS-6AS.6AL次级易位。根据中国春参考基因组,该次级易位的2个重组位点,分别位于6A染色体53.1~53.8 Mb和90.7~92.2 Mb之间,易位片段大小在36.9~39.1 Mb之间。分子细胞学鉴定表明,ph1b诱导外源易位的同时,小麦自身的内源染色体也发生了大量易位,这影响易位系的遗传稳定和育种利用。为了解决这个问题,建议将ph1b基因突变系以杂合的形式进行长期保存。同时,在利用ph1b诱导小麦-外源易位的过程中,尽量减少ph1b纯合状态下的繁殖世代,以减少小麦内源染色体易位。育种利用时,应尽快消除小麦内源易位。

乳腺MRI影像组学联合21基因检测预测乳腺癌复发风险的研究进展

乳腺癌具有高度异质性,且生物学行为差异大,不同患者的治疗方法与疗效不尽相同.在发展迅速的现代医疗水平之下,术后复发转移仍是其死亡的重要原因之一.因此如何更精准地预测乳腺癌患者术后复发风险成为当前临床工作中亟待解决的问题.21基因检测是近年来快速发展的乳腺癌复发风险预测的可靠方法,但是由于恶性肿瘤普遍存在的异质性,乳腺癌患者的基因检测不可避免会存在取样的局限性.乳腺MRI影像组学无创且高通量地提取MRI图像中的影像学特征,并结合临床特征获取更多肿瘤内在信息进而指导临床实现精准治疗,具有显著的临床应用价值.近年来已有国内外学者利用影像组学技术预测乳腺肿瘤复发风险,然而目前影像学标志物缺乏足够的生物学验证使其临床应用受限.因此联合乳腺MRI影像组学与21基因检测,寻找影像学特征与检测结果的相关性,或能通过无创的MRI影像学检查代替相应临床指标以预测乳腺癌复发风险具有重要意义.本文就以上两者的关联以及其研究进展进行综述,以期为临床诊疗提供借鉴.

鸡源IL-21基因的密码子优化、表达及生物活性分析初探

本研究旨在对鸡IL-21基因进行克隆、密码子优化、表达分析及生物活性初步研究,为进一步研究其功能奠定基础。首先利用生物信息学软件对鸡IL-21基因进行序列分析,然后,通过RT-PCR扩增鸡的IL-21基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-wt/MH,根据人偏爱密码子对鸡IL-21基因进行密码子优化,构建真核表达质粒pcDNA3.1A-IL-21-opt/MH。测序正确后转染HEK293T细胞进行表达,经His标签纯化后,通过脾脏淋巴细胞增殖实验鉴定纯化后的IL-21蛋白生物活性。结果显示,扩增的鸡IL-21序列与Genbank中的IL-21序列相对比有2个碱基发生突变(141C→141T,312C→312T),但不影响氨基酸序列;生物信息学分析表明,鸡IL-21基因含有信号肽序列可介导其分泌表达,同时含有1个潜在的N-糖基化位点;Western blot在培养基和细胞内均检测到鸡IL-21蛋白的表达;密码子优化后IL-21表达水平与野生型相比显著升高(P<0.0001);MTT法检测发现,纯化后的IL-21具有增强淋巴细胞增殖的功能。综上所述,本试验成功构建了鸡IL-21的真核表达载体,通过密码子优化提高了IL-21在真核细胞中的表达且表达的蛋白具有良好的生物活性,为进一步探索IL-21蛋白功能奠定一定的基础。

21基因复发风险评分在激素受体阳性乳腺癌患者中的应用

近10年来,随着精准医疗的发展,乳腺癌的治疗进入了一个新时代,即在不影响生存结果的前提下,趋向于治疗降级、方案个体化,在给患者带来最大获益的同时尽可能减少医源性毒性暴露。21基因复发风险评分(21-gene recurrence score, RS)能够评估乳腺癌患者复发风险和化疗获益,已被美国临床肿瘤学会、美国国家综合癌症网络及中国抗癌协会推荐用于指导激素受体阳性、人类表皮生长因子受体2阴性的早期乳腺癌患者辅助治疗,但其临床应用尚存有争议。目前的研究主要聚焦于RS的临床优化,以更加准确地识别可从辅助治疗中受益的患者,使乳腺癌患者的治疗方案更加个体化。本文主要就RS在激素受体阳性乳腺癌患者辅助治疗中的应用、RS对临床决策的影响、RS面临的争议与应用前景等方面进行综述,以期指导临床进一步扩展RS的应用范围,使乳腺癌患者的辅助治疗更加精准。

绝经后早期乳腺癌患者21基因检测结果与临床病理特征的关系分析

目的探讨激素受体(HR)阳性、人类表皮生长因子受体2(HER-2)阴性绝经后早期乳腺癌患者21基因检测结果与临床病理特征的关系。方法选取2018年8月1日至2022年8月31日嘉兴市妇幼保健院收治的行手术治疗的HR阳性、HER-2阴性的绝经后早期乳腺癌患者45例。患者乳腺癌组织石蜡标本送至专业检验中心进行21基因检测,根据21基因检测的复发风险评分(RS)分为21基因检测结果高危(RS≥26分)患者15例,低危(RS<26分)患者30例。比较高危患者与低危患者临床病理特征;分析患者21基因检测结果的影响因素;分析筛选出的独立影响因素对患者21基因检测结果的预测价值。结果高危患者与低危患者年龄、BMI、伴发慢性疾病、组织学类型、雌激素受体表达、孕激素受体表达、HER-2表达情况比较差异均无统计学意义(均P>0.05),而肿瘤直径、组织学分级、神经脉管浸润、Ki-67表达情况比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。logistic回归分析显示,Ki-67高表达是21基因检测结果高危的独立危险因素(OR=101.013,95%CI:6.478~1575.105,P<0.05)。ROC曲线分析显示,Ki-67表达情况预测患者21基因检测结果的最佳截断值为17.5%,AUC为0.928(95%CI:0.820~1.000,P<0.05),灵敏度为0.933,特异度为0.900,有较好的预测价值。结论HR阳性、HER-2阴性绝经后早期乳腺癌患者21基因检测结果高危患者Ki-67高表达概率较高。临床可筛选Ki-67高表达的患者进行21基因检测,Ki-67低表达的患者可能复发风险较低,或可避免21基因检测,仅进行内分泌治疗,进而减轻低复发风险患者的医疗负担。

鸡、鹌鹑及其杂交禽胚胎肌肉发育过程中MSTN和p21基因的表达规律

旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准孵化条件同批入孵,采集第7～17天活胚胸肌组织,应用实时荧光定量PCR技术检测MSTN和p21基因在3个物种中每一天mRNA的相对表达量。MSTN和p21基因在胚胎肌肉发育的第7～17天均有表达,这2个基因mRNA的表达在鸡胚中第9天到达第1次峰值,在鹌鹑中第7天到达第1次峰值,后都随胚胎的发育表达水平上升,并维持相对稳定的高水平表达。杂交禽的表达规律与鸡一致,也在第9天达到峰值,而p21mRNA表达极显著高于鸡和鹌鹑(P<0.01)。MSTN mRNA表达规律与成肌细胞退出细胞周期的时间规律一致;在胚胎肌肉发育过程中,MSTN基因特异性上调p21的表达。

利用Xa21基因的PCR标记进行抗白叶枯病水稻育种

pTA2 48是与抗白叶枯病基因Xa2 1紧密连锁的 1个PCR标记 ,采用多个Xa2 1基因供体和受体水稻亲本以及抗 (Xa2 1)×感组合的F1 、F2 、F3 群体 ,对利用pTA2 48标记辅助选择进行水稻抗白叶枯病育种的有关问题 ,包括抗感亲本间的遗传多态性、pTA2 48标记与Xa2 1位点的连锁关系 ,以及pTA2 48标记选择的准确性等作了探讨。结果表明 ,pTA2 48标记在亲本间具有良好的多态性 ,与Xa2 1基因位点紧密连锁 ,二者间重组率为 0 %～1.3% ,根据该标记的多态性表现可对抗 (Xa2 1)×感组合后代材料中Xa2 1基因的基因型和表现型做出较为准确的选择。

转Xa21基因不育系皖21A的白叶枯病抗性与利用

利用基因枪转化法将Xa2 1基因导入 80 4B(BT型不育系 80 4A的保持系 ) ,选育出纯合稳定的株系皖 2 1B。以80 4A与皖 2 1B连续回交转育 ,育成了高抗白叶枯病的不育系皖 2 1A ,对皖 2 1A和皖 2 1B的不同世代材料进行PCR分析和田间白叶枯病菌抗性试验 ,表明Xa2 1基因稳定遗传且抗性稳定。皖 2 1A与恢复系R 18、HP12 1、U16 0配制杂交组合具有良好的抗病性和产量潜力。

含Cry1Ab和Xa21基因抗病虫水稻选育研究及其田间表现

以稳定遗传的含Cry1Ab基因的抗虫水稻品种镇稻88和含Xa21基因的抗白叶枯病水稻品种圣稻301为亲本进行杂交,利用选择标记基因(bar基因和gus基因)和Southern杂交分析研究了转基因在杂交后代中的遗传分离规律和遗传稳定性。实验结果表明,在杂交后代中选择标记基因bar基因和gus基因分别与抗性基因Cry1Ab基因和Xa21基因紧密连锁并协同表达。Basta抗性检测和GUS活性的组织化学染色检测显示,Cry1Ab基因和Xa21基因在F2代中遵循9∶3∶3∶1的孟德尔遗传规律,F3代的部分株系中Cry1Ab基因和Xa21基因已稳定纯合;对F3代和杂交亲本的Southern杂交分析表明,Cry1Ab基因和Xa21基因可稳定地遗传。通过田间选育,获得了农艺性状优良的双抗(抗螟虫、白叶枯病)转基因水稻新品系SK-1、SK-2、SK-3,3个品系均对二化螟和白叶枯病菌表现出显著的抗性,产量高于镇稻88和圣稻301近20%,品质与镇稻88和圣稻301相近,部分指标优于这两个品种。

榄香烯抑制p21基因表达逆转肺癌化疗耐药的实验研究

目的:研究榄香烯逆转肺癌化疗耐药的作用,及其对P21基因表达的影响。方法:体内研究:榄香烯、多柔比星及两者联合预处理小鼠5 d后,检测各组小鼠血中P21基因表达情况;复制Lewis肺癌小鼠模型,观察肿瘤直径长至1 cm所耐时间;然后分别予榄香烯、多柔比星及两者联合用药10 d,称瘤重,并检测肿瘤组织中P21基因表达情况。体外研究:采用榄香烯、多柔比星及二者联合预处理的小鼠血清培养A549肺癌细胞,48 h后检测各组细胞的增殖情况。结果:榄香烯联合多柔比星预处理组小鼠血清中P21基因表达水平与二者单用预处理组及正常组无统计学差异;二者联合预处理组小鼠血清培养A549肺腺癌细胞的增殖速度小于二者单用组;榄香烯联合多柔比星的抑瘤率明显高于二者单用,且二者联用组小鼠肿瘤组织中P21基因表达水平低于多柔比星组,但高于榄香烯组。结论:榄香烯具有逆转肺癌化疗耐药的作用,这一作用的可能机理与其抑制P21基因表达相关。

Xa21基因导入水稻及转基因植株的鉴定

以水稻愈伤组织为受体、质粒 pCXK130 1为Xa2 1基因供体 ,用农杆菌EHA10 5和PDS - 10 0 0 /He基因枪转化受体 ,经Hyg浓度梯度筛选 ,获得一些转基因水稻植株 .GUS检测、PCR扩增和Southern杂交分析表明 ,报告基因(GUS)、选择标记基因 (Hygr)和抗白叶枯病基因Xa2 1都已整合入转化水稻基因组中 ,Southern杂分析显示了Xa2 1基因在转化水稻基因组中整合的拷贝数 .田间接菌鉴定表现抗白叶枯病 .图 4参

dsP21-625通过激活P21基因表达抑制前列腺癌细胞的增殖

目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625(double-stranded RNA-625,ds P21-625)对前列腺癌细胞P21基因的激活作用及对细胞增殖的影响。方法:将人工合成的ds P21-625(ds P21-625组)和ds Ctrl质粒(ds Ctrl组)分别转染至前列腺癌细胞株PC-3和DU-145。用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测转染后各组前列腺癌细胞中P21、细胞周期素E(Cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)m RNA及蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT实验和克隆形成实验分别检测细胞周期分布、细胞增殖和克隆形成能力。结果:与ds Ctrl组比较,ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21 m RNA水平升高(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 m RNA表达水平下调(均P<0.01);ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21蛋白表达上调(均P<0.01),Cyclin E和CDK2蛋白表达下调(均P<0.01);ds P21-625组细胞S期和G2/M期的细胞比例减少(均P<0.05),G0/G1期的细胞比例增加(均P<0.01);ds P21-625组细胞增殖活力降低(均P<0.05)、克隆形成数减少(均P<0.05)。结论:ds P21-625上调前列腺癌细胞中P21 m RNA及蛋白的表达,下调Cyclin E和CDK2 m RNA及蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖能力。

农杆菌介导籼稻Xa21基因的转化及其遗传研究

应用农杆菌介导转化体系 ,成功地将Xa2 1基因导入籼稻幼胚来源的愈伤组织 ,获得籼稻优良恢复系T461、优良常规品种粤香占和中 1 0 63个品种共 3 3个独立的转基因株系。PCR和Southern分析结果表明 ,Xa2 1基因已整合到转基因植株基因组中。接种分析表明 ,T0 代转基因植株的白叶枯病抗性得到不同程度的提高 ,转基因植株自交T1代白叶枯病抗性表现出分离 ,且大多为 1～ 2个整合位点的孟德尔方式遗传 ,与Southern分析结果一致。

新型基因转移系统介导p21基因治疗人脑胶质瘤的体外研究

目的：探索靶向性非病毒载体系统在人脑胶质瘤基因治疗中的应用。方法：组建了ＥＧＦ－Ｒ介导的ＧＥ７基因转移系统，分别与β－ｇａｌ报道基因和ｐ２１基因构成载体复合物，体外转染Ｕ２５１细胞，通过Ｘ－ｇａｌ染色、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析、原位末端标记、ＤＮＡ梯带检测等，观察了外源基因的导入及对肿瘤细胞的抑制作用。结果：Ｘ－ｇａｌ染色表明，外源基因的导人率可达８０％；转染ｐ２１基因后，细胞生长受到明显抑制，第７天生长抑制率约５８％。原位末端标记及 ＤＮＡ梯带检测发现，转染细胞有明显的凋亡发生。结论：ＧＥ７载体系统能高效靶向地将外源基因导入肿瘤细胞，外源基因的表达可明显抑制肿瘤细胞的生长，有效诱导其凋亡。

p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的影响

目的:探讨p21基因转染人胃癌细胞系(BGC)对化疗药物的敏感性。方法:应用MTT摄入方法测定5-氟尿嘧啶、阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙对p21基因转染人胃癌细胞增殖抑制作用,并进行72 h观察。结果:p21基因转染人胃癌细胞对5-氟尿嘧啶最敏感,72 h抑制率为77.9%;其次为阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙,其抑制率分别为62.7%、61.1%、59.3%、58.2%及45.9%。其敏感性与对照组相比差异有显著性(P<0.05),随时间延长而逐渐增加。结论:用MTT法检测p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的实验,即可以针对性指导临床对肿瘤敏感性化疗药物的选用,又可避免盲目用药而产生对机体免疫细胞的毒性作用。p21基因可提高对5-氟尿嘧啶的敏感性。

459例乳腺癌患者21基因复发风险评分的临床意义

目的探讨乳腺癌21基因复发风险评分的分布情况及其与临床病理特征的相关性,同时探讨21基因复发风险评分在辅助化疗选择中的意义。方法选取接受手术治疗的459例雌激素受体(ER)阳性、人类表皮生长因子受体2(HER2)阴性的乳腺癌患者。提取患者石蜡标本RNA,采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测21基因(16个乳腺癌相关基因和5个参考基因)的表达,计算21基因复发风险评分并以此分为低危组、中危组和高危组。比较不同21基因复发风险评分亚组与常规临床病理特征的关系以及在辅助化疗选择上的区别,采用多因素Logistic回归分析评估21基因复发风险评分的影响因素。结果 459例乳腺癌患者中低危组117例(25.5%)、中危组254例(55.3%)、高危组88例(19.2%),各组组织学分级、分子分型、孕激素受体(PR)状态及Ki67表达差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示PR状态和组织学分级是21基因复发风险评分危险度分组的影响因素。低危组、中危组和高危组接受化疗的比例有明显差异(P<0.01)。结论 21基因复发风险评分能有效整合一些重要的常规临床病理指标,并提供更多的信息,可以为辅助化疗的选择提供支持。

抗血小板膜糖蛋白单克隆抗体SZ-21基因克隆及单链抗体的构建和表达

目的将能与血小板膜糖蛋白 a特异结合的单克隆抗体 SZ- 2 1构建成单链抗体 ,为其临床应用奠定基础。方法通过逆转录及多聚酶链反应 ,扩增并克隆 SZ- 2 1的可变区基因 VH、VL ,经测序后构建 SZ- 2 1单链抗体 (SZ- 2 1Sc Fv) ,在大肠杆菌中进行表达。EL ISA和 Western印迹检测其与血小板的结合特性。结果 VH、VL 可变区基因符合小鼠抗体可变区特征 ,SZ- 2 1Sc Fv基因拼接正确。表达产物除少量为分泌型外 ,主要以包涵体形式存在 ,表达量占菌体蛋白的 2 1%。经过变性和复性后 ,该单链抗体保留了与血小板特异结合的能力。结论成功表达了 SZ- 2 1单链抗体 ,该小分子抗体具有特异结合血小板的能力 ,有望用于抗血栓治疗。

小麦-簇毛麦易位系 6VS/6AL中6VS的遗传传递及其所携Pm21基因的遗传稳定性分析

以簇毛麦(Haynaldiavillosa(L.)Schur)物种专化重复序列探针pHv62及小麦(TriticumaestivumL.)第六部分同源群短臂专化RFLP探针Psr113对扬94_138(“扬麦158”的改良品系)与易位系92R149配制的F2群体进行分析,观察到易位系中的6V短臂在杂交后代中的传递率为69.5%,接近75%的理论值。对来自同一个F1的另外147株F2群体以6个白粉菌菌株进行苗期抗病性测定,检测结果表明6VS上所携Pm21基因在向“扬麦158”小麦基因型转移时,按显性单基因遗传,并能很好地表达。

利用Bt基因和Xa21基因转化获得抗螟虫、白叶枯病的转基因水稻

利用水稻的愈伤组织作受体 ,采用 PIG基因枪法 ,首先成功地将 Bt基因 [cry IA(b) ]连同抗除草剂 bar基因导入栽培水稻品种中国 91,选育出纯合稳定的株系 T91系。然后将 T91系与黄淮区主栽品种豫粳 6号杂交 ,并辅以标记基因选择 ,选育出纯合稳定、综合性状优良的转 Bt基因株系 C48。利用农杆菌介导的转化系统将 X a2 1基因转入 C48,根据标记基因测定 ,转基因植株的 PCR和 Southern分析 ,田间抗病虫性鉴定 ,获得了双抗 (螟虫、白叶枯病 )