人工合成抗菌肽D2A21基因的克隆和表达

为了获得高效表达的抗菌肽D2A21,本研究根据抗菌肽D2A21的氨基酸序列及大肠杆菌偏爱的密码子,设计并人工合成D2A21基因,并将该合成基因克隆至pProEXHTb载体中,构建成含有含6个组氨酸标签的重组质粒。重组质粒转化至大肠杆菌中,经摇瓶发酵,IPTG诱导后,发酵液用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。结果表明,成功合成D2A21基因,并构建了抗菌肽D2A21表达载体。通过镍柱亲和层析纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,抗菌肽D2A21能够在大肠杆菌中稳定表达。本研究将为大规模表达纯化D2A21及其进一步的研究和利用提供一定基础。

病毒巨噬细胞炎性蛋白ⅡN-端肽对乳腺癌miRNAs表达谱的影响

目的:阐明病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ(virus macrophage inflammatory protein-Ⅱ,v MIP-Ⅱ) N末端21个氨基酸的多肽(NT21MP)对乳腺癌MCF-7细胞miRNAs表达谱的调控作用。方法:收集各组细胞抽提RNA,RNA质量评估后逆转录成c DNA。采用染料法(SYBR GreenⅠ)进行相对定量分析,实验按照2-△△Ct解析法进行设计。结果:总共检测了168个miRNAs,以上调> 2倍或下调<0. 5倍筛选。相对于S组,N组升高的有9个:miR-223、miR-451a、miR-128、miR-489、miR-141、miR-320a、miR-155-3p、miR-335、miR-320e,降低的有2个:miR-15a、miR-339。结论:筛选得到NT21MP调控miRNAs差异表达谱,其为研究miRNAs在NT21MP调控中的作用机制提供依据。

抗鸡补体C3抗体的制备及其应用

选取鸡源补体C3α链的21个氨基酸残基序列,人工合成模拟C3分子的21肽[741-761],与牛血清白蛋白载体偶联结合后,制成人工合成抗原复合物。将此人工合成抗原加弗氏佐剂制成油乳剂疫苗,免疫注射家兔制备成抗21肽抗体。从抗血清中提纯IgG,用以检测不同动物血清中C3含量。结果表明,人工合成的C3分子的21肽复合抗原具有很强的免疫原性,制成的抗血清的IgG效价达29,且能与不同动物血液的C3分子发生特异性结合;用该IgG对鸡、猪、山羊、牛和豚鼠体内的C3进行了检测,其含量分别为(0.34±0.005)、(1.47±0.008)、(1.70±0.005)、(1.78±0.007)、(4.18±0.008)g/L,发现鸡体内的C3含量明显低于其他几种动物,差异极显著(P<0.01),这可能是鸡体对细菌性疫苗免疫效果不佳的主要原因。

重组肿瘤抑素血管生成抑制相关肽对裸鼠移植性卵巢癌的抑制作用

目的观察肿瘤抑素改造后所得血管生成抑制相关肽（21肽）的抗血管生成活性及对裸鼠移植卵巢癌的抑制作用。方法用亲和层析法纯化21肽。观察接种SKOV，细胞系的裸鼠经21肽治疗后的肿瘤生长情况，检测21肽对肿瘤组织的微血管密度和免疫组织化学指标的影响。结果经21d的治疗后，21肽组平均抑瘤率可达53．17％。21肽组肿瘤组织微血管密度（CD34表达）为6．324±1.643，与对照组（16．127±2．535）比较明显降低（P〈0．05）。21肽组肿瘤组织的增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）呈低表达（P〈0．01），而基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）呈高表达（P〈0．01）。结论21肽具有显著的抗血管生成活性，对卵巢癌具有较好的抑制作用，其抑制卵巢癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。

肿瘤抑素抗血管活性相关肽对宫颈癌Hela细胞生长和转移抑制作用的实验研究

目的研究改造后的血管生成抑制相关肽(21肽)抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制。方法2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后,处死动物剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率。免疫组化方法检测21肽对肿瘤组织的微血管密度(MVD)、增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果21肽组平均抑瘤率可达51.89%,肿瘤组织微血管密度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);21肽组肿瘤组织的PCNA、VEGF呈低表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论21肽具有显著的抗血管生成活性,可明显地抑制裸鼠宫颈癌细胞的生长,其抑制宫颈癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。