猪的21-羟化酶基因位点限制性片段长度多态性研究

采用纯种大约克和纯种二花脸猪血样提取基因组ＤＮＡ，分别用１１种限制性内切酶消化，以非放射性狄高辛试剂盒标记４．８ｋｂ２１－羟化酶（ＣＹＰ２１）基因为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交对猪的ＣＹＰ２１基因位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）进行了研究。结果在ＢａｎⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＴａｑⅠ５种限制性内切酶位点检测出了ＲＦＬＰｓ，且ＢａｎⅠ和ＫｐｎⅠ酶切位点的多态性为首次发现；而在其他６种酶切位点（ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＳｃａⅠ、ＸｂａⅠ）没有发现ＲＦＬＰｓ。用上述５种发现ＲＦＬＰｓ的限制酶对无亲缘关系的１２头大约克和１２头二花脸猪进行ＲＦＬＰｓ分析，各限制酶产生的ＲＦＬＰｓ类型数分别为３，３，５，３，３，表明猪的ＣＹＰ２１基因位点是一个多变异位点。

多囊卵巢综合征患者中非经典型21-羟化酶基因缺陷症的基因检测筛查

目的通过基因检测法筛查按照鹿特丹标准诊断的多囊卵巢综合征（PCOS）患者中的非经典型21-羟化酶基因缺陷症（NC-21OHD）。方法按照鹿特丹标准纳入2014-2015年于第四军医大学唐都医院内分泌科就诊的98例PCOS患者,依据改良Ferriman-Gallway评分（简称m F-G评分）结果分为3组,m F-G评分0~2分为A组,3~5分为B组,≥6分为C组;另纳入30名同期在该院体检中心体检的同龄健康女性作为对照组。收集所有受试者外周血,提取DNA,设计5对特异性引物扩增CYP21A2基因,扩增产物送上海生工公司进行测序。对基因检测结果异常者,进一步测定其上午8点血皮质醇和促肾上腺皮质激素（ACTH）水平。结果 30名健康对照者无一例检测到基因缺陷,而在98例PCOS患者中检测到5例基因异常者,基因型分别为V281L/920-921ins T（P1）、V281L/I230M（P2）、V281L/Normal（P3、P4、P5）,均为杂合突变。C组21-羟化酶基因缺陷发生率为28.6%,B组为3.3%。P1基因型属于已被鉴定的NC-21OHD基因型,基因型与临床表型相符;P3、P4、P5为携带者,而在P2中,由于I230M国内外文献未见报道,因此还不能确定P2属于NC-21OHD患者还是携带者。皮质醇和ACTH的检测结果表明,仅P1的皮质醇位于正常低限、ACTH位于正常高限,其余患者均正常。结论尽管PCOS与NC-21OHD临床表现相似,但是为两种完全不同的疾病,在发病机制和治疗方法上差异显著,因此有必要在已诊断的PCOS患者,尤其是m F-G评分≥6分的多毛患者中通过基因检测筛查NC-21OHD,明确区分两种疾病,以免误诊。

建昌黑山羊类固醇21-羟化酶基因部分序列的多态性研究

本试验以建昌黑山羊母羊血液DNA为样本,采用PCR-SSCP技术研究类固醇21-羟化酶基因第八外显子在建昌黑山羊中是否具有多态性,并分析其与产羔数的关联性。试验结果显示:该基因片段的电泳图像呈现三根条带,各样本之间图像无变化。初步表明该基因外显子在建昌黑山羊中不存在多态性,与母羊的产羔数也没有直接关联。

绵羊高繁殖力候选基因类固醇21-羟化酶(CYP21)的研究

通过采取PCR-SSCP和限制性内切酶酶切的方法检测类固醇21-羟化酶(steroid 21-hydroxylase,CYP21)基因的10个外显子在高繁殖力绵羊品种(小尾寒羊)、中等繁殖力品种(湖羊)和低繁殖力品种(多赛特羊和特克塞尔羊)间的单核苷酸多态性,同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果显示,在所设计的10对引物中,仅引物P8扩增的片段存在多态性。对于P8扩增得到的片段,经HinPⅠ1酶切后,可在小尾寒羊、湖羊和多赛特羊中检测到AA和AB型,而在特克塞尔羊中只检测到AA型;经BcnⅠ酶切后,在小尾寒羊、湖羊、多赛特和特克塞尔羊中均检测到CC和CD型。测序结果显示AB型与AA型相比在2340位发生了A→G突变,但并未引起所编码的氨基酸发生改变;CD型与CC型相比在2376位发生了G→A突变,也未引起所编码氨基酸的变化。AB型小尾寒羊产羔数最小二乘均值比AA型的多0.96只(P<0.05),CC型和CD型小尾寒羊产羔数差异不显著(P>0.05)。研究结果初步表明CYP21基因的B等位基因是提高绵羊产羔数的一个候选DNA标记。

21-羟化酶基因第1外显子27insCTG(10insL)多态性研究

目的 研究 2 1-羟化酶基因 (CYP2 1)第 1外显子 2 7ins CTG(10 ins L )的发生率及其与先天性肾上腺皮质增生症 (congenital adrenal hyperplasia,CAH)不同临床分型的关系。方法 PCR扩增 ,Kpn 限制性内切酶消化验证 PCR产物为特异性扩增 ,巢式 PCR扩增和 DNA测序 ,用 10 %聚丙烯酰胺凝胶电泳筛查第 1外显子 2 7ins CTG的发生率。结果 DNA测序证实在第 1外显子 2 7位存在 2种等位基因类型 :CTG插入为 型 ;无 CTG插入为 型。等位基因 型和 型的频率 CAH患者分别为 77.8%、2 2 .2 % ;5 0名正常对照者则为 83%、17% ,两组人群中基因型与等位基因频率差异无显著性。 CAH患者中 ,12例失盐型与 15例非失盐型等位基因频率 型和 型分别为 91.7%、8.3%及 6 6 .7%、33.3% ,两组中基因频率分布差异有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 中国人 CYP2 1基因外显子 1存在 2 7ins CTG多态性 ,其基因频率在正常对照组与 CAH组中差异无显著性。

21-羟化酶缺陷症的研究进展

先天性肾上腺皮质增生症（ＣＡＨ）是一种家族性常染色体隐性遗传病，９０％的ＣＡＨ是由于２１－羟化酶缺陷（２１－ＯＨＤ）所引起。本综述着重于２１－ＯＨＤ症基因的特征、表现型的分子基础、产前诊断和新生儿筛查等方面。

女性非经典型21-羟化酶缺陷症的诊断及治疗分析

目的:探讨女性非经典型21-羟化酶缺陷症(21-OHD)的诊断及治疗方法。方法:回顾分析就诊于南京市妇幼保健院的1例女性非经典型21-OHD患者的临床资料和基因检测结果。结果:患者内分泌检查结果提示:血清雄激素水平、17-OHP和孕酮升高;血清电解质水平正常;基因诊断结果为非典型21-OHD单发突变(单纯型)。通过糖皮质激素治疗后成功妊娠并分娩。结论:女性非经典型21-OHD临床表型非特异性,易与多囊卵巢综合征(PCOS)混淆,故对高度可疑的患者应进行基因检测,以便早期诊断并给予恰当治疗。

21-羟化酶缺陷致先天性肾上腺皮质增生症产前诊断一例

孕妇 31 岁，孕 1 产 1,因“停经 18 周 ＋2 ，既往不良妊娠史”于2016年7月11日于山西省长治市妇幼保健院就诊，要求行产前诊断。2012年自然分娩一男婴，出生后1个月，男婴（先证者）于外院诊断为“先天性肾上腺皮质增生症（congenital adrenal hyperplasia，CAH）”。遂抽取先证者及其父母的外周静脉血，以多重连接探针扩增技术（multiplexligation dependent probe amplification，MLPA）检测 21-羟化酶基因（CYP21A2）的微缺失、微重复.

21-羟化酶缺乏症22例临床特征分析

目的探讨21-羟化酶缺乏症(21-OHD)的临床特点及诊治经验,提高临床医生对该病的认识及诊疗水平。方法选取新疆维吾尔自治区人民医院2014-2022年收治的21-OHD患者22例的临床资料,对不同类型21-OHD患者的临床资料进行分析,并对治疗转归进行随访。结果男女比例为7∶15,年龄13.0(4.8,23.0)岁。女性患者表现为阴蒂增大、色素沉着、月经稀发、闭经、多毛、痤疮、生长加速、不孕、呕吐;男性患者表现为性早熟、色素沉着、不育、恶心呕吐。失盐型患儿合并低血钠、高血钾、低血压、代谢性酸中毒等电解质紊乱及酸碱失衡改变。确诊患者均予以糖/盐皮质激素替代治疗,5例女性进行外生殖器矫形手术。随访10例患者中,5例女性患者月经来潮或经期逐渐恢复,但性激素水平改善不明显。结论新生儿有胃肠道症状伴电解质紊乱,女性高雄激素血症及男性儿童性早熟及成年男性不育患者,应高度警惕21-OHD,确诊后激素替代治疗能够改善预后。有条件者应尽量行基因检测,并定期随访,才能保证患者正常的青春期发育和良好的生育能力。

先天性肾上腺皮质增生症的诊治现状

先天性肾上腺皮质增生症（congenital adrenal hyperplasia,CAH）是一组因肾上腺皮质激素合成途径中酶缺陷引起的疾病,属于常染色体隐性遗传病,据不同国家及地区的新生儿CAH筛查报道,该病的发病率在1/10000～1/20000,并有明显的种族和地区的差别[1,2]。随着成功分离21-羟化酶基因,人们已经逐步了解不同类型CAH基因突变的位置及肾上腺皮质激素合成的全过程,从而对先天性肾上腺皮质增生症的诊断及治疗有了进一步的认识。