WIN55,212-2对培养的大鼠三叉神经节神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的检测WIN55,212-2对培养的大鼠三叉神经节神经元细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响并探讨其机制。方法以Fura-2/AM为钙探针,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞[Ca2+]i的变化。结果WIN55,212-2(0.01～10μmol/L)可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca2+]i,EC50为0.47μmol/L;用大麻素1型受体(CB1受体)阻断剂AM251孵育后,发现10μmol/L的AM251可明显抑制10μmol/L WIN55,212-2对三叉神经节神经元细胞内[Ca2+]i的作用(P<0.01)。结论WIN55,212-2可浓度依赖性地升高三叉神经节神经元细胞内[Ca2+]i,该作用可能是由CB1受体所介导。

基于microRNA132/212调控BDNF/Trkb-ERK1/2信号通路探讨补中益气汤+二陈汤对SCH大鼠记忆能力的影响机制

目的观察补中益气汤及补中益气+二陈汤对SCH大鼠海马microR NA132/212-BDNF/Trkb-ERK1/2信号通路的影响,探讨其对SCH脑损伤作用机制的研究及有效方剂的筛选。方法SPF级Wistar雄性大鼠40只,随机取8只做假甲状腺全切术作为空白组,其余采用甲状腺全切+LT4替代的方法造模,分为模型组、补中益气汤组、补中益气+二陈汤组、左甲状腺素组,每组8只,空白组和模型组给等量生理盐水,其他各组给予对应的干预因素,1次/d,共28 d。光镜下×400倍放大观察HE染色海马神经元形态,电镜下观察海马神经超微结构;放免法测定血清TT4免疫化学发光法检测TSH;QT-PCR法测定各组大鼠海马miR NA132、miR NA212;RT-PCR法测定各组大鼠海马BDNF及磷酸化TrK B、ERK1/2表达。结果与空白组比较,模型组TSH水平显著增高,BDNF、p-TrK b、p-ERK1、p-ERK2、miR NA132、miRNA212 mRNA积分光密度值减低;与模型组比较,各治疗组TSH水平显著降低,海马神经元结构明显恢复,BDNF、pTrkb、p-ERK1/2、miR NA132、miR NA212 mRNA积分光密度值显著增加(P<0.05,P<0.01);与补中益气汤组比较,补中益气+二陈汤组在改善BDNF、p-Trkb、p-ERK1/2、miR NA132、miR NA212 mRNA积分光密度值更优(P<0.05)。结论补中益气+二陈汤可改善SCH大鼠记忆能力,其机制可能与上调大鼠海马中miR NA132、miR NA212水平,进而调节BDNF及其受体Trkb表达,激活细胞外蛋白调节激酶ERK1/2有关。

大麻受体激动剂WIN-55,212-2对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:将细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)处理组。MTT法测定WIN对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片段,流式细胞术检测分析各组细胞凋亡率变化,Western blot分析各组细胞caspase-3和c-myc的蛋白表达,分光光度法检测caspase-3、8、9的活性。结果:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长和c-myc的蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,上述效应具有剂量依赖性。而且WIN可能通过诱导细胞caspase-3的蛋白表达和激活caspase-3、8、9活性进而诱导肝癌细胞凋亡。结论:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspases和c-myc的蛋白表达相关。

大麻素受体激动剂WIN55,212-2联合金诺芬对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

目的探讨大麻素受体激动剂WIN55,212-2(WIN)联合金诺芬(AF)对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法分别用5μmol/L WIN、0.25μmol/L AF、5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF处理Hep G2细胞24 h和48 h后,MTS法检测细胞活力;采用Annexin V-FITC和PI双染色法并通过流式细胞仪分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bip、ATF4、PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)表达的变化。分别用5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF、Z-VAD-FMK以及Z-VAD-FMK预处理1 h后再用5μmol/L WIN联合0.25μmol/L AF处理Hep G2细胞24 h,Western blot检测蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的变化。结果与两药单独使用相比,WIN联合AF明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,可以引起Bcl-2蛋白表达水平下调,内质网应激反应相关蛋白Bip、ATF4蛋白表达水平上调,以及活化Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9,引起PARP蛋白的切割。加入Caspase广谱抑制剂Z-VAD-FMK处理细胞后,能部分逆转联合用药的细胞凋亡比例。结论大麻素受体激动剂WIN联合AF能有效诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2表达下调、内质网应激反应和Caspase系统活化相关。

大麻素受体激动剂WIN55,212-2抑制脑缺血再灌后胶质瘢痕的形成

脑缺血再灌注后出现的胶质瘢痕,主要是由增殖的激活星形胶质细胞构成。研究证实胶质瘢痕不利于神经再生,由其构成的物理化学性屏障一方面会阻碍轴突再生,另一方面由激活星形胶质细胞产生的神经发育抑制因子也会阻碍中枢神经系统功能的恢复。研究表明内源性大麻素对星形胶质细胞增殖具有调控作用。为研究脑缺血再灌注损伤后外源性大麻素受体激动剂WIN55,212-2对胶质瘢痕的影响,本文使用大鼠中动脉闭塞模型,通过免疫组织化学法对样本中的激活星形胶质细胞标记物Vimentin、星形胶质细胞标记物GFAP、硫酸软骨素蛋白聚糖标记物Neurocan、以及Notch-1信号通路配体Jagged-1分子的表达进行检测。为研究药物的作用靶点,本文联合使用了大麻素Ⅰ型受体拮抗剂rimonabant。结果表明:WIN55,212-2在大麻素Ⅰ型受体的介导下,通过减少星形胶质细胞的增殖,显著降低激活星形胶质细胞上Jagged-1的表达水平,抑制了胶质瘢痕的形成。

miRNA-212在膀胱癌中的表达及其上调对癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响与机制

目的观察膀胱癌组织中微小RNA212(miR-212)的表达及上调miR-212表达对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响,探讨miR-212是否通过调控高迁移率族蛋白2(HMGA2)来实现其作用。方法取31例膀胱癌患者的膀胱癌病理组织标本及配对癌旁正常组织,采用逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测膀胱癌组织miR-212mRNA表达。选择人膀胱癌T24细胞,分为miR-212组(转染miR-212 mimics)和对照组(转染空白的miR-212NC),培养48 h后,采用MTT法检测膀胱癌细胞增殖能力,采用Transwell实验测定膀胱癌细胞迁移和侵袭能力,采用Western blotting法检测膀胱癌细胞HMGA2蛋白表达。采用荧光素酶报告实验验证HMGA2是否是miR-212的下游靶基因。结果膀胱癌组织中miR-212 mRNA表达低于癌旁正常组织(P <0. 05)。miR-212组细胞增殖、迁移和侵袭能力均低于对照组(P均<0. 05),miR-212组HMGA2蛋白表达低于对照组(P <0. 05)。在线数据库及荧光素酶报告实验预测并验证HMGA2是miR-212的下游靶基因。结论膀胱癌组织中miR-212表达降低,上调miR-212表达可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用与HMGA2密切相关。

大麻素WIN55-212-2对脑出血大鼠皮质内PKAC-β、c-Fos及BDNF表达量的影响(英文)

目的:探讨WIN55-212-2对大鼠局灶性脑出血后大脑皮质内PKAC-β、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和c-Fos mRNA和蛋白质表达的影响。方法:利用VII型胶原酶制作脑出血模型,半小时后腹腔注射WIN55-212-2。实验动物均在术后24h取出脑组织,采用半定量RT-PCR检测大鼠脑皮质内蛋白激酶A(PKAC-β)、c-Fos和BDNF mNRA表达量;采用Western blotting检测PKAC-β和BDNF的蛋白表达量;采用免疫组化方法定位PKAC-β、c-Fos和BDNF蛋白在神经细胞的表达。结果:WIN55-212-2能明显改善脑出血的神经缺失症状,并上调脑出血侧皮质内BDNF和c-Fos的表达,但是抑制PKAC-β的表达。免疫组化结果显示PKAC-β、c-Fos和BDNF蛋白分别在神经元胞膜上、神经元的细胞核上或胶质细胞的胞质中表达。结论:WIN55-212-2不仅可以通过上调转录因子c-Fos mRNA从而增加BDNF的表达量,还可能通过抑制PKA诱导BDNF的表达,发挥神经保护作用。

WIN55,212-2重复预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨大麻素受体激动剂WIN55,212-2重复预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法将50只雄性SD大鼠随机分为5组(n=10):对照组和二甲基亚砜(DMSO)组分别腹腔注射生理盐水和DMSO0.3ml,1次/d,连续5d;WIN55,212-2预处理组(包括WIN1、WIN3、WIN5组)分别腹腔注射WIN55,212-21mg/kg,1次/d,重复给予1、3、5d。各组动物均在最后1次预处理后24h采用大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)法建立短暂局灶性脑缺血模型,分别在MCAO后24、48、72h进行神经功能评分(NFS),并取脑组织切片行2,3,5-氯化三苯四唑(TTC)染色,计算脑梗死容积百分比。结果WIN55,212-2预处理组(WIN1、WIN3、WIN5组)大鼠MCAO后24、48、72h的NFS明显高于DMSO组和对照组(P<0.05),脑梗死容积百分比明显低于DMSO组和对照组(P<0.05)。WIN5组大鼠NFS明显高于脑梗死容积百分比明显低于WIN1组和WIN3组(P<0.05),而WIN1组与WIN3组的NFS和脑梗死容积百分比均无显著性差异(P>0.05)。结论随着WIN55,212-2预处理次数的增加,其脑保护作用有所增强。

WIN55，212-2在心肺复苏后对神经细胞凋亡的作用

目的：探讨WIN55，212-2药物性低温在心肺复苏后对神经细胞凋亡的作用。方法健康SD大鼠经食道直流电刺激建立心脏骤停模型。成功诱导后5 min行心肺复苏，恢复自主循环的大鼠存活30 min后，随机（随机数字法）分为3组（n＝10／组）： WIN55，212-2组（W组， WIN55，212-2，1 mg／（kg· h）、常温对照组：等体积的5％DMSO＋37℃（NT组）、 WIN55，212-2＋37℃组（W＋NT组， WIN55，212-2，1 mg／（kg· h）；用药时间维持4 h后， WIN55，212-2组复温2 h达37℃，观察ROSC后3组大鼠72h内的存活情况及神经功能评分。相同方法再次建立上述3组动物模型，分别于24 h、48 h、72 h在各组中随机选取5只大鼠，通过 HE 染色法观察脑组织形态学变化以及通过TUMEL法观察脑组织海马CA1区神经元细胞凋亡情况。结果 W组大鼠的体温在4 h内逐渐由37℃降到34℃。 W组大鼠的累积生存率明显高于W＋NT组及NT组（ P＝0.02）。 W组大鼠的神经功能评分较W＋NT组和NT组明显改善（ P＜0.05）。 W组大鼠神经细胞病理损伤以及神经细胞凋亡情况较其余两组少。 W＋NT组大鼠的病理损伤及凋亡情况介于两者之间。结论 WIN55，212-2在心肺复苏后诱导大鼠低温，延长存活时间，改善神经系统功能。其作用可能与WIN55，212-2减轻脑组织病理损伤、减少神经细胞凋亡有关。

WIN55,212 - 2 对肝癌细胞 BEL - 7402 增殖和凋亡的影响

目的探讨大麻素WIN55,212-2(WIN)对肝癌细胞BEL-7402增殖和凋亡的影响,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组和WIN处理组,处理细胞后,利用MTT法分析WIN对BEL-7402细胞增殖的影响;DAPI染色分析各组细胞中细胞核的形态学改变;流式细胞术检测各实验组的细胞凋亡率;利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测WIN处理细胞后Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测Caspase-3、-8和-9的活性。结果WIN抑制了BEL-7402细胞增殖并诱导其凋亡,两者都具有剂量依赖性;WIN处理细胞后,Caspase-3、-8和-9活性总体上呈时间依赖性升高,而且Bcl-2蛋白表达下降。结论 WIN能抑制BEL-7402细胞增殖和诱导其凋亡,WIN诱导的BEL-7402细胞凋亡可能与线粒体途径和死亡受体途径都有关。这些结果为应用WIN来治疗肝癌奠定了一个基础。

大麻素对脑出血大鼠皮质内PKAC-β、c-fos及BDNF表达量的影响

目的探讨大麻素(WIN55,212-2)对大鼠局灶性脑出血后同侧大脑皮质内PKAC-β、c-fos和BDNF mRNA及蛋白质表达量的影响。方法采用Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型,术后0.5h后腹腔注射药物,均在24h后取脑组织;采用免疫组化方法定位PKAC-β、c-fos和BDNF蛋白;采用RT-PCR检测各组大脑皮质内PKAC-β、c-fos和BDNF mRNA的表达;采用Western blot检测各组大脑皮质内PKAC-β和BD-NF蛋白质的表达。结果WIN55,212-2上调同侧大脑皮质内BDNF mRNA和蛋白质的表达,同时也上调c-fos mRNA表达量,但抑制PKAC-β mRNA和蛋白质的表达;免疫组化结果显示PKAC-β,c-fos和BDNF蛋白分别位于神经元胞膜、细胞核或胶质细胞的胞质中。结论WIN55,212-2促进大脑皮质内BDNF蛋白的合成,为其临床上治疗脑血管病提供理论依据。

miR-212/132簇生物学功能研究进展

目的:总结miR-132和miR-212对肿瘤发生发展的作用及其在神经免疫等领域的生物学功能。方法:应用PubMed及万方数据库检索系统,以"miRNA、miR-212/132、miR-212及miR-132"为检索词,检索1990-2013年相关文献。共检索到中文文献305条,英文文献228条。纳入标准:1)miRNA的作用;2)miR-212/132基因簇结构;3)miR-212/132基因簇的生物学功能。根据纳入标准符合分析的文献55篇。结果:microRNAs是一类具有转录后调控功能的非编码小RNA,参与细胞增殖、凋亡和分化。miR-132和miR-212在脊椎动物中有着相似并且高度保守的序列,位于人染色体17p13.3,在基因组中呈现串联排列,称为miR-212/132基因簇。miR-132和miR-212由miR-212/132基因簇共同转录剪切形成。miR-212/132簇不但与肿瘤的发生发展相关,而且在神经元的发育、成熟及功能中起到重要作用。它们还参与了生物钟形成并与免疫调节相关。结论:miR-212/132基因簇在肿瘤、神经及免疫等领域均发挥重要作用,因此对于miR-212/miR-132簇的深入研究必将给多种疾病的治疗带来希望。

miR-132/212对肺癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨微小RNA-132/212(microRNA-132/212,miR-132/212)对人肺癌H1299细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法建立人肺癌裸鼠皮下移植瘤模型。成瘤后的裸鼠随机数字表法分为阴性对照组、空载体组和miR-132/212组,并瘤内注射相应质粒,5d干预1次,共干预4次,干预过程中3d测量1次肿瘤体积。免疫组化检测各组Ki-67、p21和Cyclin D1的表达,并计算微血管密度(microvessel density,MVD)。结果取材时,阴性对照组肿瘤体积为(1 403.33±456.19)mm3,空载体组为(1 540.24±392.35)mm3,miR-132/212组为(779.29±276.45)mm3。miR-132/212组肿瘤生长缓慢,肿瘤体积明显小于阴性对照组(F=4.503,P=0.046)和空载体组(P=0.020);空载体组与阴性对照组的肿瘤体积差异无统计学意义,P=0.625。阴性对照组增殖指数为(58.89±8.60)%,空载体组为(60.36±13.09)%,miR-132/212组为(27.89±5.63)%。miR-132/212组肿瘤细胞增殖指数显著低于阴性对照组和空载体组,F=14.584,P=0.001。阴性对照组和空载体组p21的表达显著低于miR-132/212组,P<0.05。阴性对照组和空载体组Cyclin D1的MVD显著高于miR-132/212组,P值均<0.05。结论 miR-132/212明显抑制了人肺癌H1299裸鼠皮下移植瘤生长,可能是通过上调p21的表达,下调Cyclin D1的表达,进而抑制肿瘤组织增殖和新生血管生成,抑制肿瘤生长。

没食子酰芍药苷对白细胞介素8诱导的人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的研究没食子酰芍药苷(GPF)对白细胞介素8(IL-8)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖和迁移的影响及潜在分子机制。方法用100、200和400μmol/L GPF分别处理100μg/L IL-8诱导的HUVECs,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测HUVECs细胞中miR-212-3p、激活转录因子2(ATF2)、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达,四氮唑蓝(MTT)和Transwell实验分别测定HUVECs细胞存活率和细胞迁移,双荧光素酶报告系统验证miR-212-3p与ATF2的调控关系。结果与对照0μmol/L组相比,100μmol/L、200μmol/L和400μmol/L的GPF可抑制IL-8诱导的HUVECs增殖和迁移,促进miR-212-3p表达,抑制ATF2表达,呈剂量依赖趋势;低表达miR-212-3p可逆转400μmol/L GPF对IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移的抑制作用;miR-212-3p靶向ATF2,调控ATF2的表达;低表达ATF2可部分逆转低表达miR-212-3p对GPF处理的IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移的作用。结论GPF通过miR-212-3p/ATF2途径抑制IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移。