miR-216a和CAPN6基因过表达人宫颈癌细胞系HeLa增殖迁移侵袭变化及靶向关系

目的观察微小RNA-216a(miR-216a)和钙蛋白酶6(CAPN6)基因过表达的人宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移、侵袭变化及靶向关系,探讨miR-216a对HeLa细胞增殖迁移侵袭影响的作用机制。方法取对数生长期HeLa细胞,分为一、二、三、四、五组,一组转染miR-216a mimic,二组转染pcDNA3.1-CAPN6质粒,三组顺序转染miR-216a mimic、pcDNA3.1-CAPN6,四组转染pcDNA3.1,五组转染miR-216a mimic NC,培养48 h时分别采用CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell试验观察各组细胞的增殖迁移侵袭情况,培养24 h时采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-216a、采用WesternBlotting法检测各组细胞CAPN6及信号转导子与激活子3(STAT3)蛋白。取对数生长期HeLa细胞分为四组:A组细胞顺序转染miR-216a mimic、pGL3-CAPN6-WT质粒,B组细胞顺序转染miR-216a mimic、pGL3-CAPN6-MUT质粒,C组细胞顺序转染miR-216amimicNC、pGL3-CAPN6-WT,D组细胞顺序转染miR-216amimicNC、pGL3-CAPN6-MUT,培养36 h时收集各组细胞,采用双荧光素酶报告基因检测试剂盒测算各组细胞相对荧光素酶活性。结果与五组相比,培养48 h时一组细胞增殖活性及划痕前缘迁移距离百分比低、侵袭细胞数少(P均<0.01);与四组相比,二组细胞增殖活性及划痕前缘迁移距离百分比高、侵袭细胞数多(P均<0.01);与一组相比,三组细胞增殖活性及划痕前缘迁移距离百分比高、侵袭细胞数多(P均<0.01);与二组相比,三组细胞增殖活性及划痕前缘迁移距离百分比低、侵袭细胞数少(P均<0.01)。与五组相比,一组细胞miR-216a相对表达量高(P<0.01)。与四组相比,培养24 h时二组细胞CAPN6蛋白、p-STAT3/STAT3相对表达量高,三组细胞表达CAPN6蛋白、p-STAT3/STAT3相对表达量低;与五组相比,一组细胞CAPN6蛋白、p-STAT3/STAT3相对表达量低;与一组相比,三组细胞CAPN6蛋白、p-STAT3/STAT3相对表达量高。与B组相比,A组细胞荧光素酶活性低(P<0.05)。结论miR-216a过表达可抑制HeLa细胞的增殖侵袭和迁移。HeLa细胞中miR-216a与CAPN6基因存在靶向关系。miR-216a可能通过调控CAPN6基因表达,抑制HeLa的增殖、迁移及侵袭。

前癃通胶囊介导miR-216a-5p/TPT1/mTORC1通路调控良性前列腺增生的实验研究

目的通过细胞实验探讨前癃通胶囊(qian long tong capsule,QLTC)能否通过调控miR-216a-5p/肿瘤蛋白翻译控制1/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(miR-216a-5p/tumor protein translationally controlled 1/mammalian target of rapamycin complex 1,miR-216a-5p/TPT1/mTORC1)信号通路抑制良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)。方法将25只大鼠随机分为对照组(等体积生理盐水),QLTC低(56.25 mg/mL)、中(112.50 mg/mL)、高(225.00 mg/mL)剂量组,LBSC组(168.75 mg/mL),每组5只。每组灌胃1 mL/次,2次/d,连续5 d。各组大鼠麻醉后制备含药血清。根据实验目的不同,将CP-H022细胞分5步做实验处理,每部分实验进行独立分组。将miR-216a-5p过表达和沉默表达,及TPT1过表达进行对照研究;RT-qPCR法检测正常和BPH模型CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量,并观察不同浓度QLTC处理的BPH细胞中miR-216a-5p表达量的差异;细胞集落形成实验检测细胞增殖能力;CCK-8法检测BPH模型细胞增殖;RT-qPCR法检测miR-216a-5p、TPT1 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;生信分析、双荧光素酶实验验证miR-216a-5p与TPT1的靶向关系;过表达TPT1后,Western blot法检测BPH细胞中TPT1/mTORC1信号通路相关分子表达情况。结果与对照组1比较,模型组1的CP-H022细胞内miR-216a-5p表达量下调(P<0.05);不同浓度的QLTC均能上调miR-216a-5p表达量(P<0.05);根据本实验结果,本研究将选用QLTC(高剂量)组CP-H022细胞进行后续实验。与模型组2比较,QLTC组2细胞增殖减少、凋亡增加(P<0.05),B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达降低(P<0.05),Bcl-2关联X蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody to Bcl-2 associated X protein,Bax)、cleaved Caspase-3表达升高(P<0.05)。敲低miR-216a-5p后,与模型组4比较,QLTC组4细胞增殖增强、凋亡减少(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Caspase-3表达降低(P<0.05)。与mimic-NC组比较,miR-216a-5p mimic组TPT1表达量降低(P<0.05);QLTC处理后,细胞TPT1、p-mTORC1表达均降低(P<0.05);过表达TPT1后BPH细胞增殖功能增强(P<0.05),凋亡减少(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax、cleaved Caspase-3表达下降(P<0.05)。结论QLTC可通过介导miR-216a-5p下调TPT1/mTORC1通路,进而抑制BPH。

miR-216a通过下调CAPN6抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡的研究

目的探讨微小RNA-216a(miR-216a)对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法收集2019年5月至2021年5月于河北北方学院附属第一医院行手术治疗的82例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)法检测组织中miR-216a和钙激活中性蛋白酶6(CAPN6)表达。转染miR-216a模拟物(miR-216a mimic)、CAPN6小干扰RNA(si-CAPN6)或共转染miR-216a mimic与CAPN6过表达质粒(pcDNA-CAPN6)至宫颈癌HeLa细胞。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测CAPN6、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的蛋白表达情况,并进行统计分析。结果宫颈癌组织中miR-216a mRNA相对表达量明显低于癌旁正常组织(t=52.968,P<0.05),而CAPN6 mRNA和CAPN6蛋白相对表达量均明显高于癌旁正常组织(t值分别为26.622、45.036,P<0.05)。过表达miR-216a降低了HeLa细胞24、48、72h的增殖活力及Bcl-2蛋白相对表达量,提高了细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax蛋白相对表达量(F=11.885~90.813,P<0.05)。过表达miR-216a降低了HeLa细胞中CAPN6 mRNA和CAPN6蛋白相对表达量(F值分别为58.990、156.82,P<0.05)。下调CAPN6降低了HeLa细胞24、48、72h的增殖活力及Bcl-2蛋白相对表达量,提高了细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax蛋白相对表达量(F=42.390~241.912,P<0.05)。过表达CAPN6可逆转过表达miR-216a对HeLa细胞增殖、凋亡及凋亡蛋白的影响。结论miR-216a在宫颈癌组织中低表达,过表达miR-216a可抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其可能是通过靶向下调CAPN6表达发挥作用。

地黄多糖上调miR-216a表达对缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞氧化应激和细胞凋亡的影响

目的探讨地黄多糖对缺氧/复氧(H/R)诱导的人肾小管上皮细胞氧化应激和细胞凋亡的影响及可能机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用不同剂量(10、20、40μg·mL^(-1))地黄多糖干预HK-2细胞24 h后,建立H/R模型(缺氧6 h,复氧12 h),试剂盒检测细胞中MDA含量及GSH-PX和SOD活性,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测cleaved-caspase3和cleaved-caspase9蛋白表达,qRT-PCR检测细胞中miR-216a表达。转染miR-216a模拟物或抑制剂至HK-2细胞后,建立H/R模型,上述相同方法检测细胞氧化应激水平和凋亡情况。结果与H/R组比较,地黄多糖降低H/R诱导的HK-2细胞中MDA含量、凋亡率、蛋白(cleaved-caspase3、cleaved-caspase9)表达(P<0.05),而提高GSH-PX和SOD活性(P<0.05)。同时,地黄多糖促进了H/R诱导的HK-2细胞中miR-216a的表达(P<0.05)。上调miR-216a降低H/R诱导的HK-2细胞中MDA含量、凋亡率、蛋白(cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9)表达(P<0.05),而提高GSH-PX和SOD活性(P<0.05)。下调miR-216a逆转地黄多糖对H/R诱导的HK-2细胞氧化应激和凋亡的影响。结论地黄多糖可能通过上调miR-216a抑制H/R诱导的HK-2细胞氧化应激和凋亡。

miR-216a对重症急性胰腺炎腺泡损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1 通路的影响

目的探索miR-216a对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)腺泡细胞损伤及P2X7-NLRP3/caspase-1通路的影响.方法将大鼠胰腺腺泡细胞AR42J分为Con组、SAP组、anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组.Con组不做任何处理,其余各组采用雨蛙肽(10 nmol/L)联合脂多糖(lipo poly saccharide,LPS)(10 mg/L)处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建SAP细胞模型,anti-miR-NC组、anti-miR-216a组、Sch+miR-NC组、Sch+miR-216a组分别转染anti-miR-NC、anti-miR-216a、miR-NC、miR-216a mimics.酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定各组细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)浓度;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组细胞中miR-216a及P2X7、NLRP3、caspase-1 mRNA相对表达量;Western blot法检测各组细胞中P2X7、NLRP3、Caspase-1、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(B-cellymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved cysteinyl aspartate specific protease-3,Cleaved caspase-3)蛋白表达情况.结果各组细胞中IL-6、TNF-α含量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞凋亡率和Bax蛋白、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量比较,Con组<Sch+miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<anti-miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05);各组细胞Bcl-2蛋白相对表达量比较,anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组<Con组,差异有统计学意义(P<0.05).各组细胞中miR-216a和P2X7、NLRP3、Caspase-1 mRNA及其蛋白相对表达量比较,Con组<anti-miR-216a组<SAP组/anti-miR-NC组/Sch+miR-NC组<Sch+miR-216a组,差异有统计学意义(P<0.05).结论miR-216a可通过抑制P2X7-NLRP3/caspase-1信号通路减轻SAP腺泡细胞炎症,并诱导细胞凋亡,从而减轻SAP腺泡损伤.

宫颈癌及宫颈癌前病变组织中DEPDC1、miR-216a-5p的表达及其与高危型HPV感染的相关性

目的探究DEP结构域蛋白1(DEPDC1)、miR-216a-5p在宫颈癌及宫颈癌前病变组织中的表达及其与高危人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染的相关性。方法选取2020年12月至2022年4月汉中市中心医院妇科收治的94例宫颈病变患者为研究对象,其中62例宫颈癌前病变患者的宫颈病变组织作为癌前病变组,32例宫颈癌患者的癌组织作为宫颈癌组。同期选择因患子宫肌瘤行子宫全切患者的30例正常宫颈组织作为对照组。采用q RT-PCR检测DEPDC1、miR-216a-5p的表达水平;采用免疫组化法测定DEPDC1蛋白的表达水平;采用Pearson法分析宫颈组织中DEPDC1与miR-216a-5p表达水平的相关性,以及DEPDC1、miR-216a-5p表达水平与癌前病变组和宫颈癌组HR-HPV感染的相关性。结果与对照组比较,癌前病变组、宫颈癌组DEPDC1的阳性表达率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。其阳性表达率分别为36.67%、40.32%、100.00%。随着宫颈病变程度的增加,DEPDC1的水平显著升高(1.02±0.21、1.42±0.23、1.78±0.25),miR-216a-5p水平显著降低(1.01±0.11、0.85±0.12、0.68±0.13),HR-HPV感染率显著增加(6.67%、91.94%、100.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关性分析结果显示,癌前病变组、宫颈癌组患者宫颈组织中DEPDC1与miR-216a-5p表达水平呈负相关(r=-0.442,P<0.001)。宫颈组织中DEPDC1表达水平与癌前病变组、宫颈癌组患者HR-HPV感染呈正相关(r=0.296,P=0.004),miR-216a-5p表达水平与癌前病变组、宫颈癌组患者HR-HPV感染呈负相关(r=-0.252,P=0.014)。结论癌前病变和宫颈癌患者宫颈组织中DEPDC的表达水平显著升高,miR-216a-5p水平显著降低,两者与HR-HPV感染有关。

LncRNA-MEG3竞争性结合miR-216a调控KLF9介导血管通透性减缓重症急性胰腺炎肾脏损伤的机制

目的研究LncRNA-MEG3竞争性结合miR-216a调控Kruppel样转录因子(KLF)9介导血管通透性减缓重症急性胰腺炎肾脏损伤的机制。方法选取SD大鼠20只,鼠龄8~12 w,体质量225~312 g,随机分为假手术组与模型组,每组10只。肾上皮细胞实验分为肾损伤组(未转染MEG3)、对照组(转染不相关序列)、转染组(转染MEG3)。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾组织病理形态;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织及肾上皮细胞中LncRNA-MEG3、miR-216a、KLF9水平;流式细胞仪检测肾上皮细胞凋亡情况;Western印迹法检测肾上皮细胞中核因子(NF)-κB、肿瘤坏死因子(TNF)-α蛋白水平;双荧光素酶报告检测LncRNA-MEG3与miR-216a相关性。结果假手术组肾小球结构完整,无明显炎症浸润,模型组肾小球有所损伤,有炎性细胞浸润,可见重症急性胰腺炎肾损伤大鼠模型建立成功。与假手术组肾脏血管通透性(151.22±23.14)μg/g相比,模型组肾血管通透性(376.27±43.14)μg/g明显升高(t=14.54,P<0.001)。与假手术组相比,模型组LncRNA-MEG3、KLF9表达明显升高,miR-216a表达明显降低(P<0.05)。肾损伤组与对照组LncRNA-MEG3、KLF9、miR-216a水平无明显统计学差异(P>0.05),在经过转染LncRNA-MEG3后LncRNA-MEG3、KLF9水平较肾损伤组和对照组明显下降,miR-216a水平明显上升(P<0.05),表明转染成功。肾损伤组上皮细胞凋亡率[(61.34±5.22)%]与对照组[(60.13±5.42)%]无统计学差异(t=0.39,P=0.70),转染组上皮细胞凋亡率[(29.67±2.11)%]明显低于对照组(t=12.83,P<0.05)。肾损伤组与对照组上皮细胞中NF-κB、TNF-α蛋白水平无统计学差异(P<0.05),转染组上皮细胞中NF-κB、TNF-α蛋白水平较对照组明显降低(P<0.05)。转染MEG3后野生型上皮细胞中miR-216a活性明显增加(P<0.05),突变型上皮细胞中miR-216a活性无明显变化(P>0.05),表明miR-216a是MEG3的靶基因。结论LncRNA-MEG3通过调控mir-216a的表达,抑制KLF9活性,降低炎症因子的水平及肾上皮细胞的凋亡,对肾保护作用。

miR-216a-5p通过下调MMP16表达抑制肺癌细胞的侵袭

背景与目的：微小RNA（microRNA，miRNA）是一类存在于真核生物体内只有19~39 bp大小的内源性非编码RNA，它能在转录和翻译水平调控基因的表达，在细胞的增殖分化、新陈代谢、免疫调控和凋亡等方面起着重要的作用。本研究检测miR-216a-5p在肺癌组织和肺癌细胞系的表达并探讨其对肺癌细胞侵袭能力的影响及其调控机制。方法：使用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测55例肺癌患者的肺癌组织和7种肺癌细胞系中miR-216a-5p的表达情况；miR-216a-5p瞬时转染A549、95D和H4603种肺癌细胞系，使用Transwell侵袭实验检测miR-216a-5p对肺癌细胞系侵袭能力的影响；预测并构建miR-216a-5p的候选靶基因基质金属蛋白酶16（matrix metalloproteinase 16，MMP16）基因的双荧光素酶报告基因表达质粒，使用qRT-PCR和蛋白[质]印迹法（Western blot）检测miR-216a-5p对靶基因MMP16的mRNA和蛋白表达的影响；小干扰RNA（siRNA）干扰MMP16与上调miR-216a-5p对比检测其对肺癌细胞侵袭能力的影响。结果：90.91%（50/55）的肺癌患者肿瘤组织中miR-216a-5p表达明显低于对应的癌旁组织（P〈0.05）。7种肺癌细胞系中miR-216a-5p的表达量仅为对照组的7.00%~32.00%（P〈0.05）。上调miR-216a-5p的表达能够抑制肺癌细胞的侵袭；siRNA干扰MMP16与转染上调miR-216a-5p都能够抑制肺癌细胞中MMP16的表达，并抑制肺癌细胞侵袭。结论：miR-216a-5p可以作为临床肺癌诊断的候选标志物之一，并且其能够通过下调MMP16的表达从而抑制肺癌细胞的侵袭。

miR-216a在胰腺癌组织中的表达及临床意义

目的分析20例胰腺癌及胰腺良性病变组织中miR-216a的表达差异,探讨miR-216a在胰腺癌中表达的临床意义及潜在应用价值。方法收集14例胰腺癌患者手术标本的癌组织,6例胰腺良性病变组织作为对照。采用Agilent人microRNA寡核苷酸基因芯片(V12.0)在基因组范围内检测20例组织标本的miR-216a表达,并分析其与胰腺癌临床病理参数的关系。结果胰腺癌组织中miR-216a的表达显著低于胰腺良性病变组织(P=0.000),miR-216a在胰腺癌组织中的表达与患者年龄、性别、吸烟、临床分期、局部淋巴结转移,远处转移、CA19-9浓度、肿瘤分化程度、神经束膜侵犯、脉管侵犯均无相关性(P>0.05),而与肿瘤T分期具有显著统计学意义(P=0.002)。结论 miR-216a在胰腺癌的发生、发展过程可能发挥重要作用,检测miR-216a有望成为胰腺癌新的肿瘤标记物或预后因子。

miR-216a在急性胰腺炎患者外周血的表达及临床意义

目的探讨急性胰腺炎患者外周血细胞微小RNA-216a(miR-216a)的表达及其临床意义。方法对60例患者急性胰腺炎患者、20例伴有血淀粉酶升高的非急性胰腺炎病例及60例正常对照的血标本进行血浆RNA抽提,并通过RT-PCR进行miR-216a的检测分析,评估血浆miR-216a对急性胰腺炎的诊断效能。结果胰腺炎患者的外周血细胞miR-216a表达显著高于健康对照者,差异有统计学意义(P<0.01)。而血淀粉酶的升高的非急性胰腺炎病例miR-216a与正常对照比,没有显著性差异(P>0.05)。结论性胰腺炎患者外周血细胞miR-216a表达水平增高,作为重要生物标志物有可能为急性胰腺炎的断提供一定的依据。

miR-216a通过靶向调控蛋白激酶Cα抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭

背景与目的：MicroRNAs是一类19～25bp内源非编码的小分子RNA，其通过靶向抑制基因的转录和翻译水平。本研究旨在明确miR-216a是否通过靶向调控蛋白激酶Ca（PRKCA）表达而抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭能力，从而进一步揭示miR-216a的抑瘤分子机制。方法：首先构建PRKCA3’UTR-荧光素酶报告载体，通过双荧光素酶报告检测观察miR-216a对PRKCA3’UTR-荧光素酶活性的影响；将miR-216amimics转染胶质瘤细胞U251，采用Westernblot检测PRKCA蛋白表达水平；将PRKCAsiRNA转染U251细胞，通过MTS细胞增殖活性检测和transwell侵袭实验观察PRKCA下调对U251细胞增殖和侵袭的影响。结果：双荧光素酶报告检测显示，miR-216a能特异性地与PRKCAmRNA的3’UTR结合，抑制其荧光素酶活性，下调41％。过表达miR-216a的U251细胞PRKCA蛋白表达水平降低。siRNA干扰PRKCA表达能抑制U251细胞的增殖和侵袭，它能部分模拟miR-216a的抑瘤功能。结论：miR-216a通过靶向PRKCAmRNA3’UTR而抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭。

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨微小RNA-216a-5p(miR-216a-5p)靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白(WASL)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法:收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物(miR-216a-5p)、模拟物阴性对照(miR-con)、沉默对照(si-con)、沉默WASL的小干扰RNA(si-WASL)、抑制物阴性对照(anti-miR-con)、miR-216a-5p抑制物(anti-miR-216a-5p)、miR-216a-5p及空载质粒(pcDNA)和miR-216a-5p及WASL过表达质粒(pcDNA-WASL)分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR(Real-time RT-qPCR)和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果:与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低(P<0.05),WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),两者呈负相关关系(r=-0.317,P<0.01)。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平(P<0.01)和细胞增殖活性均明显降低(P<0.05),迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。

miR-216a通过靶向调控PKCα促进胃癌细胞凋亡的研究

目的本文旨在明确miR-216a是否通过靶向调控PKCα表达而抑制胃癌细胞增殖和促进其凋亡,从而进一步揭示miR-216a的抑瘤分子机制。方法首先构建PKCα3′UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-216a对PKCα3′UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-216a模拟物转染胃癌细胞MGC-803,采用Western blot检测PKCα蛋白表达水平;将PKCαsiRNA转染MGC-803,通过MTS细胞增殖活性检测和Annexin V-FITC/PI凋亡实验考察PKCα下调对MGC-803增殖和凋亡的影响。结果荧光素酶报告检测显示,miR-216a能特异性地与PKCα3′UTR结合,抑制其荧光素酶活性,下调36%。过表达miR-216a的MGC-803PKCα蛋白表达水平降低。siRNA干扰PKCα表达能抑制MGC-803的增殖和侵袭能力,它能部分模拟miR-216a的抑瘤功能。结论 miR-216a通过靶向PKCαmRNA 3′UTR而抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力。

miR-216a-5p靶向作用于PAK2对膀胱癌细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的探讨miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中表达及调控p21活化蛋白激酶2(PAK2)基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-216a-5p在正常膀胱细胞系SV-HUC-1及膀胱癌细胞系5637、J82、T24和EJ中的表达,选取其中两种表达miR-216a-5p最少的5637和J82为对象,实验分两组:对照组(转染miR-NC)、实验组(转染miR-216a-5p)。利用qRT-PCR法检测PAK2 mRNA的表达。Western blot法检测PAK2、p-Akt和p-ERK蛋白的表达。Cell Counting Kit-8(CCK-8)实验和克隆形成实验检测膀胱癌细胞活力和增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-216a-5p在膀胱癌细胞系中的表达量均低。实验组PAK2基因mRNA及其蛋自的表达明显降低,PAK2 mRNA在5637细胞中对照组和实验组表达量分别为1.01±0.15和0.40±0.11(P<0.01),在J82细胞中对照组和实验组表达量分别为1.00±0.09和0.56±0.14(P<0.01)。p-Akt和p-ERK蛋白表达显著降低。实验组细胞活力明显被抑制,增殖能力明显降低。实验组细胞凋亡显著增加(P<0.01)。结论 miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中呈低表达,可在体外靶向抑制PAK2基因,抑制膀胱癌细胞系5637和J82的增殖能力,促进细胞凋亡,可能成为具有膀胱癌生物治疗意义的靶标分子。

血清miR-216a、ANGPTL4水平与新生儿急性呼吸窘迫综合征病情严重程度和预后的关系

目的分析血清微小RNA-216a(miR-216a)、血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)水平与新生儿急性呼吸窘迫综合征(ARDS)病情严重程度和预后的关系。方法选取2019年7月—2022年3月亳州市人民医院新生儿重症监护室收治的ARDS新生儿160例为ARDS组,根据氧指数(OI)分为轻度亚组62例、中度亚组53例、重度亚组45例,根据预后情况分为预后良好亚组103例和预后不良亚组57例,另选取同期医院健康新生儿36例作为健康对照组。比较各组血清miR-216a、ANGPTL4水平,Spearman相关系数分析ARDS新生儿血清miR-216a、ANGPTL4水平与OI的相关性,多因素Logistic回归分析ARDS新生儿预后不良的影响因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-216a、ANGPTL4水平对ARDS新生儿预后不良的预测价值。结果ARDS组血清miR-216a水平低于健康对照组,而ANGPTL4水平高于健康对照组(t/U=21.964、9.242,P均<0.001)。轻度亚组、中度亚组、重度亚组血清miR-216a水平依次降低,ANGPTL4水平依次升高(F/H=55.257、85.768,P均<0.001)。Spearman相关系数分析显示,ARDS新生儿血清miR-216a水平与OI呈负相关,ANGPTL4水平与OI呈正相关(r_(s)=-0.635、0.693,P均<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,胎龄延长、Apgar评分增加及血清miR-216a升高为ARDS新生儿预后不良的独立保护因素[OR(95%CI)=0.855(0.761-0.960)、0.685(0.495-0.947)、0.864(0.784-0.952)],机械通气时间延长、OI升高及血清ANGPTL4升高为其独立危险因素[OR(95%CI)=1.289(1.063-1.562)、1.891(1.190-3.004)、1.314(1.152-1.498)]。ROC曲线分析显示,血清miR-216a、ANGPTL4及二者联合预测ARDS新生儿预后不良的曲线下面积分别为0.796、0.792、0.902,二者联合预测价值高于各自单独预测(Z/P=3.818/<0.001、3.484/0.001)。结论ARDS新生儿血清miR-216a水平降低、ANGPTL4水平升高,且与病情加重和预后不良密切相关,可作为ARDS新生儿预后不良的辅助预测指标。

miR-216a-5p调节胰腺癌中PAK1的表达并增强吉西他滨的抗肿瘤作用

目的了解miR-216-5p在胰腺导管腺癌中的表达和意义。方法实时定量聚合酶链反应检测10例新鲜胰腺导管腺癌组织标本及对应的癌旁组织标本中miR-216和PAK1的表达。同时检测miR-216和PAK1在胰腺癌细胞系和正常胰腺导管上皮细胞中的表达。胰腺癌细胞系转染相应miRNA合成物后使用定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹检测PAK1表达水平的变化。细胞增殖实验检测miR-216介导的PAK1表达对吉西他滨对胰腺癌细胞增殖的影响。结果PAK1和Has-miR216-5p在胰腺癌病人术后标本中的表达:胰腺癌肿瘤组织中PAK1的相对表达量为(2.263±0.748),明显高于胰腺癌癌旁正常组织的(1.094±0.302),差异具有统计学意义(P<0.01)。且胰腺癌肿瘤组织中miR216-5p的相对表达量为(0.243±0.048),明显低于胰腺癌癌旁正常组织的(1.144±0.302),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论miR-216-5p可显著抑制PAK1的表达,且miR216-5p可通过抑制PAK1的表达来协同吉西他滨的肿瘤抑制作用。

微小核糖核酸-216a调控JAK2/STAT3信号通路对急性呼吸窘迫综合征影响机制

目的:研究miR-216a调控JAK2/STAT3通路对脓毒症诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的作用机制。方法:60只SD大鼠,随机分为对照组和ARDS组,每组各30只,各组每天灌胃1次,持续7 d。末次灌胃后1 h在尾静脉处注射0.9%氯化钠液或内毒素造模。造模后检测各组呼吸、血气等指标,比较两组大鼠呼吸频率、氧分压指标;观测两组病理学变化;采用瞬时转染的方法检测肺泡巨噬细胞中的miR-216a表达量水平;采用western blot法探究miR-216a对肺泡巨噬细胞中JAK2/STAT3通路的影响。结果:相比对照组,ARDS组大鼠呼吸频率显著加快,氧分压明显降低,病理评分明显更高;转染后,肺部巨噬细胞内的miR-216a水平明显增加,相比于阴性对照组转染后的miR-216a表达量增加30-250倍,差异性具有统计学意义(P<0.05)。miR-216a肺部巨噬细胞中MMP2蛋白、p-JAK2蛋白、p-STAT蛋白的表达量均高于对照组,差异性有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-216a对JAK2/STAT3通路的作用是正向调控促进脓毒症诱导的ARDS的发展进程。

miRNA-216a与胰腺癌的研究进展

miRNA-216a是近年来新发现的非编码小分子RNA,在转录水平通过对mRNA的调控影响基因的表达。越来越多的实验证明miRNA-216a在胰腺癌中表达下调,并且通过抑制靶基因表达或者上调自身的表达,进而抑制胰腺癌的发展、侵袭、转移,促进胰腺癌细胞凋亡,miRNA-216a有望成为胰腺癌基因治疗的新靶点,我们就miRNA-216a在胰腺癌中的研究进展作一综述。

miR-216a-5p通过JAK2靶向抑制肝癌细胞的增殖和侵袭

目的明确miR-216a-5p在调控肝细胞癌(HCC)中的生物学作用及其可能机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测92例HCC患者的肿瘤组织及对应癌旁组织中miR-216a-5p的表达情况。并采用CCK8和Transwell试验检测miR-216a-5p对HCC细胞增殖和侵袭能力的影响。采用荧光素酶、蛋白质印迹和qRT-PCR检测肝细胞癌中miR-216a-5p的表达与JAK2表达的相关性。结果发现miR-216a-5p在HCC中的表达显著降低,并与多种临床病理特征(肿瘤多样性、组织学分化、巴塞罗那分期)相关。低表达miR-216a-5p的HCC患者预后不良。双荧光素报告系统分析证实JAK2是miR-216a-5p的直接下游靶基因。并且过表达JAK2抵消了miR-216a-5p对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制能力。结论 miR-216a-5p可能是一种新的潜在的肝癌治疗靶点。

MiR-216a-5p靶向TRIP4对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及机制研究

目的:研究miR-216a-5p对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响及其作用机制。方法:培养正常乳腺上皮细胞MCF10A和乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、SK-BR-3,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-216a-5p和甲状腺激素受体相互作用蛋白4(TRIP4)的表达;将乳腺癌细胞MCF7分为Control组(未做任何处理)、si-con组(转染TRIP4干扰载体阴性对照质粒)、si-TRIP4组(转染TRIP4干扰载体质粒)、miR-con组(转染miR-216a-5p模拟物阴性对照)、miR-216a-5p组(转染miR-216a-5p模拟物)、si-TRIP4+anti-miR-con组(共转染TRIP4干扰载体质粒和miR-216a-5p抑制剂阴性对照)、si-TRIP4+anti-miR-216a-5p组(共转染TRIP4干扰载体质粒和miR-216a-5p抑制剂);用Western blotting检测蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;分别用0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy和8 Gy剂量的射线照射Control组、si-con组、si-TRIP4组、miR-con组、miR-216a-5p组、si-TRIP4+anti-miR-con组、si-TRIP4+anti-miR-216a-5p组细胞,用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性;将TRIP4野生型(TRIP4-WT)和突变型(TRIP4-MT)荧光素酶表达载体分别与miR-con和miR-216a-5p共转染至MCF7细胞中,用双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果:与正常乳腺上皮细胞MCF10A相比,乳腺癌细胞MCF7、MDA-MB-231、SKBR-3中TRIP4 mRNA和蛋白表达水平升高,miR-216a-5p表达水平降低(P<0.05)。沉默TRIP4和过表达miR-216a-5p后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平降低,半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达水平升高,细胞增殖抑制率显著升高,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),射线照射后细胞存活分数降低(P<0.05)。miR-216a-5p与TRIP4-WT共转染的细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),而miR-216a-5p与TRIP4-MT共转染的细胞荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。沉默TRIP4逆转了抑制miR-216a-5p表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡和放射敏感性的作用。结论:过表达miR-216a-5p可能通过下调TRIP4抑制乳腺癌细胞增殖、促细胞凋亡,从而增加了细胞的放射敏感性。