FBXO22对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制

目的:分析FBXO22对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响,并探讨其作用机制。方法:对宫颈癌HeLa和SiHa细胞各进行siRNA-Ctrl、siRNA-FBXO22转染,采用Western blot检测转染后宫颈癌HeLa和SiHa细胞中F-box蛋白22(FBXO22)表达水平,CCK-8实验检测宫颈癌HeLa和SiHa细胞增殖情况,Transwell细胞迁移实验检测宫颈癌HeLa和SiHa细胞侵袭情况,Western blot检测细胞侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9和细胞外信号调节激酶(ERK)的表达水平。结果:siRNA-FBXO22组转染后的宫颈癌细胞FBXO22蛋白表达水平低于siRNA-Ctrl组(P<0.05);宫颈癌HeLa、SiHa细胞siRNA-FBXO22组细胞增殖率均低于siRNA-Ctrl组(P<0.05);宫颈癌HeLa、SiHa细胞siRNA-FBXO22组穿过Transwell小室的细胞数目均低于siRNA-Ctrl组(P<0.05);Western blot实验结果显示,FBXO22表达降低后,宫颈癌HeLa、SiHa细胞增殖侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9和ERK的表达量均明显下降(P<0.05)。结论:下调FBXO22表达可以抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭,其作用机制可能是通过调节MMPs/ERK信号通路实现。

微小RNA-22对妊娠糖尿病患者糖代谢的影响

目的探索微小RNA-22(miR-22)对妊娠糖尿病(GDM)患者糖代谢的影响。方法收集2018-01至2019-01在武警广东总队医院就诊的75例妊娠糖尿病孕妇组的胎盘组织作为观察组(GDM组),75例正常妊娠孕妇作为对照组(HC组)。培养人绒毛膜HTR8/Svneo细胞建立细胞模型,检测胎盘绒毛组织和细胞的miR-22表达。用人工合成的miR-22类似物和抑制物(反义寡核苷酸)转染HTR8/Svneo细胞,葡萄糖氧化酶法检测体外细胞摄取葡萄糖能力,Western blot检测细胞胰岛素信号通路上的PI3K、AKT、IRS、萄糖转运体4(GLUT4)的表达。设计构建含目的基因野生型和突变型的质粒,双荧光素酶报告基因系统分析miR-22与靶基因的关系。结果GDM胎盘组织和高糖组细胞中miR-22表达均明显低于对照组(P<0.05),miR-22表达与胰岛素抵抗指数呈负相关。GDM组织的IRS、PI3K、AKT、Glut4蛋白表达水平明显低于对照组;miR-22表达时,HTR8/Svneo细胞摄糖升高,Glut4表达升高,miR-22表达抑制时,细胞摄糖减少,GLUT4表达下降;miR-22过表达或抑制时,IRS、PI3K、AKT表达明显降低。双荧光素酶报告基因系统实验显示SLC2A4基因(编码GLUT4)是miR-22调节靶点。结论发生胰岛素耐受时,胎盘绒毛组织和细胞miR-22表达下降,miR-22过表达可以提高体外细胞摄取糖水平,miR-22可能通过调节GLUT4而参与GDM的发病机制。

血清25-羟维生素D和白细胞介素-22对急性肺炎患儿病情的诊断价值

目的探究血清25-羟维生素D[25(OH)D]和白细胞介素-22(IL-22)对急性肺炎患儿病情的诊断价值。方法选取2021年3月至2022年3月自贡市第一人民医院收治的96例急性重症肺炎患儿作为重症肺炎组,另选96例普通肺炎患儿作为普通肺炎组、96例体检健康儿童作为健康对照组。采用化学发光微粒子免疫检测法检测血清25(OH)D水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-22水平;采用Pearson法分析重症肺炎患儿血清25(OH)D、IL-22水平与急慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ评分)、序贯器官衰竭评分(SOFA评分)的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线评估25(OH)D、IL-22对重症肺炎患儿危重症的诊断价值。结果重症肺炎患儿血清25(OH)D与APACHEⅡ评分及SOFA评分呈负相关(r=-0.521、-0.484,P<0.05),血清IL-22与APACHEⅡ评分及SOFA评分呈负相关(r=-0.614、-0.419,P<0.05)。ROC曲线显示,25(OH)D对危重症诊断的曲线下面积(AUC)为0.745,IL-22对危重症诊断的AUC为0.851,二者联合对危重症诊断的AUC为0.906,高于二者单独诊断(P<0.05)。结论25(OH)D与IL-22在急性重症肺炎患儿血清中低表达,二者联合用于重症肺炎患儿病情的诊断价值较高。

DLBCL患者血Th22细胞、IL-22水平及IL-22对DLBCL细胞株增殖和侵袭的影响

目的分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者血辅助性T细胞22(Th22)细胞、白细胞介素-22(IL-22)水平及IL-22对DLBCL细胞株增殖和侵袭的影响。方法选择DLBCL患者40例(DLBCL组),按照临床分期分为不同亚组;另选同期体检健康者40例为对照组。流式细胞术检测各组Th22细胞比例,ELISA检测各组IL-22蛋白水平。MTT实验检测DLBCL细胞增殖情况,Transwell实验检测DLBCL细胞侵袭情况。结果与对照组比较,DLBCL组Th22细胞比例和IL-22水平升高;与Ⅰ~Ⅱ期比较,Ⅲ~Ⅳ期Th22细胞比例和IL-22水平升高(P<0.05)。化疗后Th22细胞比例低于化疗前,复发者Th22细胞比例高于新诊患者和对照组(P<0.05)。MTT和Transwell实验结果显示,IL-22促进DLBCL细胞的增殖和侵袭(P<0.05)。结论DLBCL患者Th22细胞比例及其细胞因子IL-22水平升高,IL-22促进DLBCL细胞增殖和侵袭,为DLBCL研究提供新策略。

平滑肌蛋白22对脓毒症大鼠急性肠损伤早期诊断价值的研究

目的探讨平滑肌蛋白22(SM22)对脓毒症大鼠急性肠损伤(AGI)早期诊断的价值意义。方法将48只大鼠随机分为假手术组(Sham)、6 h脓毒症模型组(M6)、12 h脓毒症模型组(M12)、24 h脓毒症模型组(M24),每组各12只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型,假手术组大鼠仅开腹而不行CLP。各组大鼠于造模后经尾静脉推注0.9%NaCl溶液5 mL/100 g液体复苏。6 h、12 h、24 h后取血并处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清和肠组织SM22、肠型脂肪酸结合蛋白(IFABP)、二胺氧化酶(DAO)、白介素-1β(IL-1β)、白介素17(IL-17)、肿瘤坏死因子(TNF-ɑ)。光镜下观察肠黏膜组织病理改变进行chiu’s评分,采用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肠黏膜上皮细胞凋亡指数(AI)。采用FITC-G检测肠道的通透性。结果与假手术组比较,M6、M12、M24组中血和肠组织SM22、IFABP、DAO、TNF-ɑ、IL-1β、IL-17和FITC-G表达水平逐步增高,差异有统计学意义(P<0.01),且M6、M12、M24各组相互比较差异有统计学意义(P<0.01),而M6血清IFABP、DAO表达水平增高不明显,与假手术组差异无统计学意义。HE染色和肠黏膜上皮细胞凋亡:模型组肠组织病理改变chiu’s评分评分及AI明显增高,与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.01),且各模型组之间差异有统计学意义(P<0.01)。相关性分析显示:肠管损伤评分与血清SM22、DAO、IFABP、FITC均呈正相关性(r=0.623,r=0.745,=0.784,r=0.771,P均<0.01)。诊断价值分析:IFABP、DAO、SM22诊断脓毒症AGI的ROC AUC、95%CI、最佳临界值、敏感性、特异性分别是0.843、0.730~0.955、87.60 pg/ml、66.7%、75%、(DAO)0.824、0.707~0.942、1.01 ng/mL、75%、75%、(SM22)0.972、0.934~1.01、0.76 ng/mL、91.7%、91.7%。结论SM22对脓毒症AGI早期诊断的敏感性和特异性及诊断价值高于IFABP和DAO,将成为脓毒症AGI早期诊断的新型生物标志物之一。

副干酪乳杆菌ET-22对金黄地鼠口腔溃疡的预防作用及机制

副干酪乳酸杆菌ET-22是一种具有缓解炎症、调节免疫功能的益生菌,为探究其对口腔疾病的改善作用及机制,采用甲基紫精颊膜注射法建立金黄地鼠口腔溃疡模型,在造模前,分别以灌胃的方式连续给予金黄地鼠剂量为1×10^(9)CFU·mL^(-1)·d^(-1)的ET-22活菌以及对应的ET-22灭活菌和ET-22发酵液,研究ET-22对地鼠口腔黏膜结构形态和炎性因子表达水平影响。口腔黏膜的组织病理切片观察和评分结果表明,ET-22活菌、灭活菌及其发酵液均能改善地鼠口腔黏膜的上皮完整性和炎性细胞浸润,ET-22活菌预防口腔溃疡的效果最佳,ET-22灭活菌及其发酵液的预防效果次之,但它们的预防效果均优于维生素C。机制研究发现:ET-22可通过下调N F-κB的表达抑制促炎细胞因子I L-6和I L-1β的分泌,降低基质金属蛋白酶MM P-9的表达,减轻口腔黏膜的炎症浸润与转移;ET-22可以调节口腔的菌群组成,抑制口腔疾病相关的有害菌。研究表明,ET-22可降低口腔溃疡的发病风险,对预防口腔溃疡具有积极作用。

IL-22对酒精性肝纤维化小鼠回肠紧密连接蛋白及Nrf2/HO-1抗氧化通路的影响

目的探讨白介素22(IL-22)对酒精性肝纤维化小鼠回肠紧密连接蛋白Occludin、ZO-1及核因子相关因子2(nuclear factor-E2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)抗氧化通路的影响。方法60只清洁级健康雄性C57/6j小鼠采用慢性乙醇喂养加腹腔注射CCL 4建造ALF复合模型,该实验分为正常组(N组)、对照组(C组)、模型组(M组)、IL-22组、IL-22+ML385(Nrf2抑制剂)组,每组各12只。免疫组织化学检测回肠紧密连接蛋白Occludin、ZO-1和Nrf2及其下游基因血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)Hquinone oxidoreductase 1,NQO1]的表达水平,免疫荧光检测回肠黏膜上皮Occludin、ZO-1的表达,观察肝脏及回肠病理学变化和肝纤维化程度。结果与C组相比,M组回肠组织Occludin和ZO-1阳性平均吸光度(A)值降低(0.292±0.015、0.237±0.036比0.236±0.025、0.158±0.025,P<0.05),荧光强度明显减弱;Nrf2、NQO1、HO-1阳性平均A值升高(0.141±0.011、0.196±0.019、0.166±0.033比0.172±0.042、0.223±0.011、0.215±0.044,P<0.05);肝组织胶原纤维沉积明显增加(1.723±0.415比19.759±1.319,P<0.05)。与M组相比,IL-22组回肠组织Occludin、ZO-1、Nrf2、NQO1和HO-1阳性蛋白平均A值升高(0.322±0.020、0.289±0.024、0.217±0.012、0.321±0.018、0.273±0.030,P<0.05);Occludin、ZO-1荧光强度明显增强;肝组织胶原纤维沉积减少(10.851±0.951,P>0.05)。与IL-22组相比,IL-22+ML385组Occludin、ZO-1、Nrf2、NQO1和HO-1阳性蛋白平均A值降低(0.248±0.011、0.175±0.030、0.179±0.013、0.229±0.053、0.218±0.030,P<0.05);Occludin、ZO-1荧光强度减弱;肝组织胶原纤维沉积减少(19.264±0.932,P<0.05),ML385可抑制Nrf2/HO-1通路,明显减弱IL-22对ALF小鼠回肠组织损伤的保护作用。上述结果中N组与C组均无显著差异(P>0.05)。结论ALF小鼠回肠紧密连接蛋白表达下降所致的回肠屏障功能障碍可能与氧化应激有关,而IL-22可上调回肠Nrf2/HO-1抗氧化通路,增加回肠上皮细胞间紧密连接蛋白表达,改善回肠屏障功能,进而阻断ALF的发生发展。

转基因抗虫棉GK22对棉田天敌种群消长的影响

20 0 1年在江苏棉区的南京、盐城两地种植转基因抗虫棉GK2 2 ,研究观察其对棉田捕食性天敌种群数量和动态的影响。结果表明 ,抗虫棉GK2 2对棉田捕食性天敌种类和数量没有明显不良影响。全期南京点共计15次调查 ,抗虫棉GK2 2区百株累计查到捕食性天敌总数 14 97.17头 ,比常规对照棉区的 16 0 6 .8头少 6 .82 % ;盐城点全期 19次调查 ,GK2 2区百株捕食性天敌总数累计 12 2 8头 ,比对照区的 1198头增加 2 .5 % ,均未达到显著水平。其中 ,南京和盐城点试验区捕食性蜘蛛分别比对照减少 2 .1%、5 .6 % ;捕食性瓢虫南京点试验区比对照减少11.5 2 % ,盐城点试验区比对照增加 18.6 % ;草蛉南京点减少 4 .19% ,盐城点增加 5 % ;小花蝽南京点试验区比对照增加 18.85 %。

人趋化因子CCL17和CCL22对CD4及CD8T淋巴细胞亚群的趋化能力比较研究

目的探讨具有同源受体CCR4的趋化因子CCL17和CCL22对CD4和CD8 T细胞亚群的趋化能力。方法首先利用流式细胞术检测健康人外周血中CCR4^+T细胞的比例分布,接着用Mo Flo分选流式细胞仪分选出健康人外周血中的CD4细胞和CD8细胞。利用CCL17和CCL22趋化因子蛋白分别对CD4及CD8细胞进行细胞趋化实验,计算趋化指数。利用流式细胞术检测CCL17和CCL22分别作用CD4及CD8细胞后CCR4受体内化情况,计算受体内化效率。结果外周血PBMC中,CD4细胞CCR4分子的表达水平要高于CD8细胞(P<0.05)。在相同趋化时间内,CCL22对CD4和CD8 T细胞亚群的趋化能力强于CCL17(P<0.05),CCL17和CCL22趋化CD4细胞通过Transwell板的细胞数均多于CD8细胞(P<0.05),但CCL17对2种T细胞亚群趋化能力的差异性要小于CCL22。CCR4受体内化实验证实,相同时间下CCL22比CCL17更容易促使CCR4受体发生内化(P<0.05),对于CD4和CD8 T细胞亚群,CCL22作用后受体CCR4内化程度无显著性差别(P>0.05),而CCL17对CD8细胞的内化作用要强于CD4细胞(P<0.05)。结论 CCL22对CD4和CD8细胞的趋化能力均强于CCL17,而促进受体内化方面,CCL17对CD8细胞的作用更强,CCL22对这2种细胞则无显著差别。

Hsp22对SCA3/MJD转基因果蝇的神经保护作用研究

为了探讨Hsp22在SCA3/MJD发病机制中的作用.选用GMR-GAL4和elav-GAL4驱动子,利用经典的GAL4-UAS系统,将含有78个CAG重复扩增的ataxin-3蛋白片段(MJDtr-Q78)分别在果蝇眼睛和神经系统选择性表达,构建GMR-GAL4/UAS和elav-GAL4/UAS系统SCA3/MJD转基因果蝇模型,然后利用遗传学方法和热休克反应使Hsp22在SCA3/MJD转基因果蝇眼睛和神经系统以不同水平过表达.结果表明,Hsp22过表达显著抑制了MJDtr-Q78蛋白的神经毒性,果蝇眼睛视网膜光感受神经元变性明显缓解,果蝇存活能力也显著提高.Hsp22对SCA3/MJD具有保护作用,增强Hsp22表达对SCA3/MJD可能是一种潜在的治疗方法.

IL-22对人气道细胞的作用

目的探讨IL-22对人气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞的生理学作用。方法用实时定量PCR检测气道上皮细胞、气道平滑肌细胞、气道成纤维细胞哮喘血清刺激前后IL-22R1 mRNA表达的变化。不同浓度的IL-22(10 ng/ml,100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道上皮细胞、气道平滑肌细胞和气道成纤维细胞后,用MTT法检测细胞的增殖,用流式细胞技术(FACS)检测细胞的凋亡和坏死。结果哮喘血清刺激后气道上皮细胞IL-22R1 mRNA表达降至正常对照组的9%,气道平滑肌细胞IL-22R1 mRNA表达升高至正常对照组的345倍,而气道成纤维细胞IL-22R1 mRNA表达无明显变化。高剂量(1 000 ng/ml)的IL-22刺激气道上皮细胞和气道成纤维细胞12、24 h可显著降低细胞增殖(P<0.05,P<0.01)。三种不同浓度的IL-22刺激气道上皮细胞24 h后均导致细胞凋亡显著下降(P<0.05),低浓度的IL-22(10 ng/ml)导致细胞坏死增加(P<0.01)。不同浓度的IL-22刺激气道平滑肌细胞后,细胞凋亡和坏死无显著性变化。中、高浓度IL-22(100 ng/ml,1 000 ng/ml)刺激气道成纤维细胞后,细胞坏死率显著下降(P<0.05)。结论 IL-22在支气管哮喘中对气道上皮的作用具有双重性,并与支气管哮喘的病程相关;而对气道平滑肌细胞的作用则可能与浓度及病程相关。支气管哮喘后续阶段,IL-22对气道成纤维细胞作用轻微。

尿NMP-22对诊断膀胱移行细胞癌的临床意义

目的 :探讨尿核基质蛋白 2 2 (NMP 2 2 )在诊断膀胱移行细胞癌 (BTCC)中的价值 ,并与尿脱落细胞学 (VUC)检查进行比较。 方法 :6 9例患者分为三组 ,BTCC组 30例 ,非膀胱癌 (NBC)组 2 9例 ,健康人 (对照 )组 1 0例。采用酶联免疫吸附法 (ELISA)对尿中的NMP 2 2进行测定。 结果 :BTCC组尿中NMP 2 2显著高于NBC组和对照组 (P <0 .0 1 )。ROC曲线分析表明 ,NMP 2 2检测BTCC的最佳临界值为 8.35U/ml。NMP 2 2诊断BTCC的敏感性显著高于VUC检查 (P <0 .0 5 )。而VUC的特异性则高于NMP 2 2 (P <0 .0 5 )。NMP 2 2诊断表浅性BTCC(临床Ta ,T1 期 )的敏感性显著高于VUC(P <0 .0 5 ) ,对于浸润性BTCC ,二者相比差异不显著 (P >0 .0 5 )。NMP 2 2对病理Ⅰ、Ⅱ级BTCC诊断的敏感性显著高于VUC检查 (P <0 .0 5 ) ,而二者对Ⅲ级BTCC诊断的敏感性则差异不显著 (P >0 .0 5 )。 结论 :检测尿中NMP 2 2有助于BTCC的早期诊断 ,对低期低级BTCC诊断的敏感性高于VUC。

转录因子MoOaf22对稻瘟病菌营养生长、细胞壁完整性和胁迫应答的调控

为了研究油酸激活型转录因子MoOaf22编码基因MoOAF22(MGG_03413)在稻瘟病菌生长发育及致病过程中的功能,利用基因敲除方法将其进行了缺失突变并对突变体进行了一系列的生物学表型分析。结果表明该基因缺失突变体在完全培养基(CM)上营养生长加快,但在基本培养基(MM)上生长变慢,同时该突变体原生质体释放速度变慢,对荧光增白剂(CFW)和刚果红(Congo Red)耐受性增强,对十二烷基磺酸钠(SDS)、氯化钠(Na Cl)和山梨醇(Sorbitol)敏感,但该突变体在产孢量、附着胞形成及致病性等方面较野生型没有明显变化。说明MoOaf22在稻瘟病菌的营养生长、细胞壁完整性和对外界的胁迫应答过程中具有重要的调控作用。

白细胞介素22对T细胞介导的小鼠肝损伤的治疗作用及初步机制探讨

目的研究人白介素22(IL-22)对T细胞介导的肝损伤小鼠的治疗作用。方法利用刀豆蛋白A(ConA)建立T细胞介导的肝损伤小鼠模型,检测静脉注射IL-22对肝损伤小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性的影响,同时取小鼠肝组织进行病理学检查。并采用半定量RT-PCR方法检测IL-22刺激HepG2和LO2细胞后,对c-myc及Bcl-2基因转录表达水平的影响。结果IL-22明显降低ConA致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST值的升高,减轻ConA对肝组织的病理损伤。体外检测IL-22对HepG2和LO2细胞表达c-myc及Bcl-2基因转录水平有促进作用。结论IL-22对T细胞介导的肝损伤小鼠模型具有治疗作用,该作用可能是通过IL-22促进肝细胞的抗凋亡因子的表达实现的。

IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的影响

【目的】探讨IL-22对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响。【方法】收集行关节置换术或关节镜下滑膜切除术患者的滑膜组织,组织块法培养FLS。利用荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测Bcl-2 m RNA和Bcl-XL m RNA、Western Blotting检测Bcl-2蛋白在RA、骨关节炎(OA)和创伤(Trauma)患者中FLS的表达水平。将RA-FLS以一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和/或重组人源性IL-22(rh IL-22)等处理24 h,流式细胞术分析检测凋亡。rh IL-22以不同的浓度(0、1、10、100 ng/m L)作用于RA-FLS和OA-FLS 24 h,Western Blotting检测Bcl-2蛋白表达水平的变化。【结果】RA-FLS中Bcl-2 m RNA(P<0.05)、Bcl-XL m RNA(P<0.01)和Bcl-2蛋白(P<0.01)的表达水平明显高于与OA-FLS组和Trauma-FLS组。流式细胞术结果显示:与对照组相比,rh IL-22组细胞凋亡率未见明显变化(P>0.05),SNP组RA-FLS细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与SNP组相比,SNP+rh IL-22组细胞凋亡率明显下降(P<0.01)。rh IL-22可明显上调RA-FLS和OA-FLS中Bcl-2的蛋白表达水平(P<0.05),但RA-FLS对rh IL-22的作用更敏感。【结论】IL-22可抑制由SNP诱导的RA-FLS细胞凋亡,其机制可能部分与上调RA-FLS中Bcl-2的表达有关。

泛素特异性肽酶22对肝癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)对肝癌细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法采用RT-PCR和Western blotting分别检测人正常肝Chang liver细胞和人肝癌HepG2细胞中USP22 mRNA及蛋白表达。利用脂质体转染USP22-siRNA靶向沉默USP22基因,并采用RT-PCR和Western blotting检测其沉默效果;流式细胞仪检测USP22基因沉默对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blotting检测USP22基因沉默对HepG2细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved caspase-9)、细胞周期素D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)表达的影响。结果 USP22基因在人肝癌HepG2细胞中表达明显高于人正常肝Chang liver细胞(P<0.05);siRNA干扰HepG2细胞后,与对照组相比,干预组中USP22 mRNA和蛋白的表达均显著降低(P<0.05),而阴性组差异无统计学意义(P>0.05)。靶向沉默USP22基因后,与对照组相比,干扰组中G_0/G_1期细胞所占比例显著升高,S期和G_2/M期细胞所占比例显著下降,细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);阴性组与对照组间G_0/G_1期、S期、G_2/M期细胞所占比例和细胞凋亡率相比,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,干预组中Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、Cyclin D1和CDK2蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05),阴性组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 USP22基因沉默可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与周期蛋白Cyclin D1、CDK2及凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9的表达下降有关。

miR-22对脂多糖诱导的心肌损伤的研究

目的探讨miR-22对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及可能机制。方法采用LPS刺激H9c2大鼠心肌细胞诱导心肌细胞损伤模型。采用miR-22模拟物转染心肌细胞,将细胞随机分为4组,即对照组、LPS组、miR-22+LPS组和miR-NC+LPS组。RT-PCR法检测细胞中miR-22表达;MTT法检测细胞活性;TUNEL染色检测细胞凋亡;免疫印迹法检测相关蛋白的表达;通过双荧光素酶报告基因实验证实miR-22对靶基因的调控作用。结果miR-22的表达在LPS组显著低于对照组;MTT试验结果显示LPS组细胞活性明显低于对照组,miR-22+LPS组细胞活性高于LPS组;TUNEL染色显示LPS组细胞凋亡数量明显高于对照组,miR-22+LPS组细胞凋亡数量低于LPS组。与对照组比较,LPS组Bcl-2/Bax比值显著下降;与LPS组比较,miR-22+LPS组Bcl-2/Bax比值明显升高。RT-PCR和Western blot法检测结果表明,上调miR-22表达后,HMGB1蛋白表达和mRNA水平明显降低。双荧光素酶报告实验显示miR-22靶向调控HMGB1的mRNA的3′非编码区(3′UTR)。结论miR-22可能通过负向调控HMGB1的表达减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。

IL-22对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用

目的:探究白细胞介素(IL)-22对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)功能的影响及机制。方法:组织块法培养RA-FLSs。将不同浓度(0、1、10、100μg/L)的重组人源性IL-22(rhIL-22)与RA-FLSs共培养24 h、48 h、72 h,CCK-8法检测细胞活力的改变;利用10μg/L的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h,流式细胞术检测细胞周期改变。rhIL-22和/或信号转导和转录因子3(STAT3)特异性抑制剂STA-21以不同浓度作用RA-FLSs 24h,Western blot法检测Bcl-2和p-STAT3蛋白水平的变化。结果:不同浓度的rhIL-22作用于RA-FLSs 24 h、48 h、72h后,RA-FLSs细胞活力明显增高,均显著高于对照组(P<0.05)。rhIL-22刺激RA-FLSs后,S期和G_2/M期细胞明显增多,G_0/G_1期细胞减少。Western blot法检测结果提示rhIL-22可上调RA-FLSs中Bcl-2、p-STAT3的蛋白水平,而STA-21单用或联用rhIL-22均可抑制RA-FLSs中Bcl-2及p-STAT3的表达(P<0.05)。结论:IL-22在RA-FLSs细胞活力和周期调节中起重要作用,且STAT3在IL-22促RA-FLSs细胞Bcl-2表达的过程中起关键作用,提示IL-22可能对RA-FLSs凋亡有一定的影响。

小鼠肝癌细胞H22对淋巴内皮细胞flt-4、c-fos、PCNA表达的影响

目的 :初步探讨有自发淋巴转移特性的肝癌细胞对淋巴内皮细胞增殖的影响。方法 :弗氏不完全佐剂诱导Balb/c小鼠腹腔良性淋巴管瘤 ,分离瘤体消化法体外培养淋巴内皮细胞 ;H2 2细胞接种Balb/c小鼠腹腔 ,收集腹水制成H2 2条件培养液 ,观察其对淋巴内皮细胞生长和表达flt 4、c fos、PCNA的影响。结果 :小鼠淋巴管瘤来源的淋巴内皮细胞可成单层贴壁培养 ,在内皮细胞完全培养液和H2 2条件培养液作用下可增殖达到或接近铺满状态 ,并阳性表达flt 4、c fos、PCNA ,普通培养液不能支持细胞生长 ,flt 4等染色为阴性。结论 :淋巴内皮细胞增殖可能是癌细胞淋巴路转移的必要条件。

低表达核糖体蛋白L22对人肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究抑制核糖体蛋白L22(ribosomal protein L22,RPL22)基因表达后对ET-1诱导的人肺动脉平滑肌细胞(pul-monary arterial smooth muscle cells,HPASMC)异常增殖的影响。方法:体外原代培养HPASMC,用ET-1诱导其增殖。设计siRNA-RPL22干涉片段,瞬时转染siRNA-RPL22后培养HPASMC,检测其增殖状况。采用Realtime-PCR、Western blot分别检测RPL22mRNA和RPL22蛋白的表达;PCNA、FACScan流式细胞仪检测细胞增殖。结果:HPASMC在转染siRNA-RPL22后,与对照组相比,RPL22 mRNA和RPL22蛋白的表达都显著减少(P<0.05);siRNA-RPL22组HPASMC增殖较对照组显著降低。结论:抑制RPL22表达后,可抑制ET-1诱导的HPASMC增殖,提示RPL22与HPASMC增殖有关,值得进一步深入研究。