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散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E和OC43感染致小鼠肺炎的作用机制研究
1
作者 张敬升 高双荣 +7 位作者 庞博 刘莉娜 徐英莉 曹姗 陈梦苹 张宇 赵荣华 崔晓兰 《中国药物警戒》 2024年第1期51-54,88,共5页
目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂... 目的考察散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43毒株感染小鼠致肺炎模型的作用机制。方法根据不同毒株将实验分批进行,每批实验动物按体重随机分成7组:正常组、病毒感染组、磷酸氯喹片组、连花清瘟颗粒组、散寒化湿颗粒(给药组)3个剂量组,高剂量为11 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药52.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量为5.5 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药26.4 g·kg^(-1)·d^(-1))、低剂量为2.75 g·kg^(-1)·d^(-1)(相当于生药13.2 g·kg^(-1)·d^(-1))。使用人冠状病毒229E和OC43感染小鼠,建立肺炎模型。通过检测肺指数和肺部病理变化等指标评价散寒化湿颗粒对冠状病毒肺炎小鼠的药理作用。结果散寒化湿颗粒在高、中、低3个剂量组均能有效降低小鼠的肺指数,并减轻肺组织的病理损伤。结论散寒化湿颗粒对人冠状病毒229E毒株和OC43感染致小鼠肺炎均具有治疗作用。 展开更多
关键词 散寒化湿颗粒 人冠状病毒229e 人冠状病毒OC43 小鼠 肺炎 肺指数 病理变化
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人冠状病毒229E湿热疫毒袭肺病证结合小鼠模型的建立及评价 被引量:2
2
作者 庞博 张敬升 +8 位作者 郭姗姗 孙静 包蕾 徐英莉 曹姗 陈梦苹 王雅欣 赵荣华 崔晓兰 《中国药物警戒》 2023年第1期40-45,共6页
目的在采用外部湿热因素造成中医湿毒袭肺小鼠模型的基础上,同时采用人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染小鼠造成肺炎模型,建立湿热疫毒袭肺病症结合小鼠模型。方法对湿热感染不同天数的小鼠中医证候表征、肺指数和肺部病毒载量、肺部病理... 目的在采用外部湿热因素造成中医湿毒袭肺小鼠模型的基础上,同时采用人冠状病毒229E(HCoV-229E)感染小鼠造成肺炎模型,建立湿热疫毒袭肺病症结合小鼠模型。方法对湿热感染不同天数的小鼠中医证候表征、肺指数和肺部病毒载量、肺部病理结构与影像学、小鼠血清胃泌素(Gas)、下丘脑前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(c AMP)及肌糖原评价湿毒疫动物模型。结果人冠状病毒肺炎湿热疫毒袭肺证小鼠病证结合模型小鼠饮食量下降和饮水量增加,毛发枯燥发黄,行动迟缓爱扎堆,大便便溏。肺指数增加(P<0.01),肺部病毒核酸呈阳性表达,肺组织可见病理结构变化及斑点状阴影。小鼠体内肌糖原含量、血清胃泌素含量、下丘脑c AMP、PGE2的含量在感染后均有显著升高(P<0.05)。结论本研究建立的HCoV-229E湿热疫毒袭肺证病证结合小鼠模型与临床疾病表征具有一致性,可为诊断及治疗具有该证候的病毒性肺炎与开发相关药物研究提供一种可靠的评价动物模型。 展开更多
关键词 人冠状病毒229e 湿热疫毒袭肺 病毒性肺炎 中医证候 动物模型
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蛋白激酶D在人类冠状病毒229E复制中的作用及机制研究
3
作者 韩慧娟 刘欢 赵志军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1044-1052,共9页
目的探究蛋白激酶D(PKD)在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)复制中的作用及潜在分子机制。方法以MRC-5细胞作为模型,采用qPCR和Western blot检测PKD家族基因和蛋白的表达水平;通过siRNA敲除Prkd3及PKD抑制剂(CRT0066101)抑制PKD活性,检测HCo... 目的探究蛋白激酶D(PKD)在人类冠状病毒229E(HCoV-229E)复制中的作用及潜在分子机制。方法以MRC-5细胞作为模型,采用qPCR和Western blot检测PKD家族基因和蛋白的表达水平;通过siRNA敲除Prkd3及PKD抑制剂(CRT0066101)抑制PKD活性,检测HCoV-229E感染细胞后的复制水平;通过CCK8检测细胞活性,TCID_(50)测定病毒滴度,免疫荧光染色检测HCoV-229E的表达和反式高尔基体网络(TGN)的结构;通过检测磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PI(4,5)P2)的水平反映磷脂酰肌醇4-激酶IIIβ(PI4KIIIβ)活性;采用PI4KIIIβ抑制剂(BQR695)抑制PI4KIIIβ活性,检测HCoV-229E感染细胞后的TGN的结构变化和HCoV-229E复制水平;采用CRT0066101抑制Vero-E6细胞的PKD活性,检测HCoV-229E感染后的的复制水平。结果PKD家族基因和蛋白表达水平在HCoV-229E感染过程中明显增加,包括Prkd1、Prkd2和Prkd3;与对照组相比,敲低PKD3显著抑制HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=8.999,P<0.001;t=6.920,P<0.001),过表达PKD3则增加了HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=6.630,P<0.001;t=5.794,P<0.001);CRT0066101也显著抑制HCoV-229E的mRNA水平和滴度(t=6.931,P<0.001;t=4.055,P<0.01),免疫荧光染色结果表明,CRT0066101抑制HCoV-229E感染导致的TGN裂变;抑制PI4KIIIβ活性显著降低PI(4,5)P2水平,且BQR695挽救了PKD过表达导致的PI(4,5)P2水平升高(t=6.671,P<0.01),BQR695降低了HCoV-229E感染细胞的TGN裂变,HCoV-229E mRNA水平和滴度(t=5.151,P<0.001;t=7.744,P<0.001);CRT0066101抑制HCoV-229E在Vero-E6细胞中的mRNA水平和滴度(t=7.480,P<0.001;t=7.228,P<0.01)。结论本研究揭示了PKD通过调控PI4KIIIβ影响TGN的裂变参与HCoV-229E复制,并证明PKD抑制剂和PI4KIIIβ抑制剂对降低HCoV-229E的复制具有显著作用,这些发现为今后研究冠状病毒感染的治疗提供重要的参考依据。 展开更多
关键词 人类冠状病毒229e(HCoV-229e) 冠状病毒 蛋白激酶D 反式高尔基体网络 CRT0066101
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云南松松塔抗HIV活性提取物对人冠状病毒229E抑制活性的研究 被引量:1
4
作者 李亚飞 尚方建 +2 位作者 罗春雨 石哲芳 刘奇 《大理大学学报》 2023年第10期21-26,共6页
目的:评价云南松松塔抗HIV活性提取物(以下简称“松塔提取物”)对人冠状病毒(HCoV)-229E的抑制活性,初步明确其作用靶点。方法:构建HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合模型及假病毒模型,检测松塔提取物对HCoV-229E的抑制活性;利用时间... 目的:评价云南松松塔抗HIV活性提取物(以下简称“松塔提取物”)对人冠状病毒(HCoV)-229E的抑制活性,初步明确其作用靶点。方法:构建HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合模型及假病毒模型,检测松塔提取物对HCoV-229E的抑制活性;利用时间-移除实验明确作用靶点,时间-添加实验确定其作用时间。结果:松塔提取物能够抑制HCoV-229E S蛋白介导的细胞-细胞融合现象发生,半抑制浓度(IC50)为(0.136±0.010)mg/mL;能有效抑制HCoV-229E假病毒感染,IC50为(0.069±0.015)mg/mL;时间-移除实验以及时间-添加实验显示松塔提取物靶向于HCoV-229E S蛋白,作用在感染早期(1 h前);不同浓度松塔提取物对293T及Huh-7细胞无明显毒性作用。结论:松塔提取物能靶向HCoV-229E S蛋白,在感染早期抑制HCoV-229E的感染,是一种安全性高的候选药物。 展开更多
关键词 云南松 松塔提取物 HCoV-229e 抑制活性
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Prevalence and Seroprevalence of Non-SARS Human Coronaviruses 229E and OC43 in East Tyrol/Austria
5
作者 Sonnleitner Stefanie Sonnleitner Sissy +1 位作者 Eva Hinterbichler Gernot Walder 《Journal of Biosciences and Medicines》 2023年第7期125-139,共15页
The recent SARS-CoV-2 pandemic renewed interest in other previously discovered human coronaviruses—the non-severe acute respiratory syndrome human coronavirus (non-SARS hCoVs) and this study is a starting point for a... The recent SARS-CoV-2 pandemic renewed interest in other previously discovered human coronaviruses—the non-severe acute respiratory syndrome human coronavirus (non-SARS hCoVs) and this study is a starting point for a closer investigation of those. With the pandemic behind us we believe it to be important to also examine the current and past respiratory pathogen landscape in the patient population in our care. Therefore, 954 nasopharyngeal swabs of patients with respiratory diseases collected between October 2018 and March 2020 were tested against the pathogens Mycoplasma pneumoniae, Bordetella pertussis, Influenza A and virus, Human metapneumovirus, respiratory syncytial virus, Parainfluenza virus, human Adenovirus and Polyoma virus BK/JC. Swabs negative against these pathogens were further tested for OC43 and 229E by RT-qPCR. Human coronaviruses 229E and OC43 were proven as the causative agents in a considerable number of cases, confirmed by PCR. Overall, our results show that those two non-SARS hCoVs were responsible for 13.9% (11 of 79) of infections with flu-like symptoms of unknown etiology in the study area. In the subsequent seroprevalence study, it was shown that the seroprevalence rate of IgG antibodies against 229E and OC43 was over 50%, indicating that a big part of the population in our study area has been in contact with these non-SARS-CoVs and has built the specific humoral immune response accordingly. 展开更多
关键词 NonSARS Human Coronavirus hCoV hCoV OC43 hCoV 229e Respiratory Pathogens
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SARS-CoV N蛋白与人冠状病毒HCoV-OC43和HCoV-229E的交叉反应表位及特异表位的确定 被引量:1
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作者 闫克夏 谭文杰 +5 位作者 张相民 王慧娟 张陵林 周为民 夏宁邵 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期248-255,共8页
为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位,对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒,并制备了相应的小鼠免疫血清。用... 为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位,对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒,并制备了相应的小鼠免疫血清。用间接免疫荧光方法,检测了3种N蛋白的表达及其与3种冠状病毒免疫动物血清和SARS病人恢复期血清之间的反应。与此同时,用Western blot方法分析了原核表达的39个不同区段的SARS-CoVN蛋白与3种冠状病毒动物免疫血清和SARS病人恢复期血清之间的交叉反应性。免疫荧光检测结果表明,SARS-CoV、HCov-OC43和HCoV-229E3种病毒的N蛋白在重组痘苗病毒感染的HeLa细胞中均可以特异表达;3种N蛋白之间存在明显交叉免疫反应。Western blot结果显示,SARS-CoV N蛋白的表位主要位于30~60aa、170~184aa、301~320aa和360~422aa;与HCoV-OC43的交叉反应表位主要位于30~60aa、90~120aa、204~214aa和320~360aa;与HCoV-229E的交叉反应表位主要位于30~60aa、150~160aa和301~360aa。含SARS-CoVN蛋白特异表位的重组肽N155b(60~214aa)和N185(30~214aa)只与SARS病人恢复期血清和灭活SARS-CoV免疫小鼠的血清反应,而不与灭活HCoV-OC43和HCoV-229E免疫的山羊血清产生交叉反应。上述结果为使用SARS-CoVN蛋白抗原进行特异诊断试剂的研究,提供了重要的实验依据。 展开更多
关键词 SARS-COV HCoV-OCA3 HCoV-229e N蛋白 抗原表位
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冠状病毒HcoV-229E S1蛋白的原核表达及鉴定 被引量:1
7
作者 马淑霞 黄列 +7 位作者 徐锡 王春敏 代月 任继秋 杨春佳 崔刚 李丽秋 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期207-209,共3页
目的克隆表达冠状病毒HcoV-229E S1基因片段,表达S1蛋白。方法合成冠状病毒HcoV-229ES1蛋白特异性基因片段并克隆入pET21a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG高效诱导表达得到重组蛋白,用金属螯合亲和层析纯化,并通过Western blot对... 目的克隆表达冠状病毒HcoV-229E S1基因片段,表达S1蛋白。方法合成冠状病毒HcoV-229ES1蛋白特异性基因片段并克隆入pET21a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG高效诱导表达得到重组蛋白,用金属螯合亲和层析纯化,并通过Western blot对表达的重组蛋白进行鉴定。结果获得了主要以包涵体形式存在的目的蛋白,Western blot鉴定其为S1基因片段蛋白。结论成功构建了HcoV-229E S1蛋白的表达载体,并在BL21(DE3)中得到了高效表达,为下一步表达蛋白免疫原性及疫苗抗病毒保护性测定打下了基础。 展开更多
关键词 冠状病毒HeoV-229e S1蛋白 原核表达
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感冒229E病毒3CL蛋白酶抑制剂金丝桃苷衍生物的合成及其构效关系研究 被引量:3
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作者 贾琦 李剑 +3 位作者 陈莉莉 刘晓峰 谭红胜 朱维良 《中国药物化学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期288-294,共7页
目的寻找作为感冒229E抗原型冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的新化学结构。方法运用分子对接方法在ACD化合物库中发现天然产物金丝桃苷是潜在的新型抑制剂,借助分子模拟的方法进行结构改造,设计并合成了5个金丝桃苷衍生物,采用表面等离子共振(... 目的寻找作为感冒229E抗原型冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂的新化学结构。方法运用分子对接方法在ACD化合物库中发现天然产物金丝桃苷是潜在的新型抑制剂,借助分子模拟的方法进行结构改造,设计并合成了5个金丝桃苷衍生物,采用表面等离子共振(SPR)法测试这些化合物与该蛋白酶的结合能力。结果与结论衍生物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ与蛋白酶的结合能力比原天然产物Ⅰ提高了3倍以上,它们的结合构象也明显不同于Ⅰ与SARS病毒3CL蛋白酶的结合构象。这些结合模式的差异为设计选择性更好的感冒病毒3CL蛋白酶抑制剂提供了有益的参考信息。将计算机辅助药物分子设计、有机合成和生物活性测试有机地结合起来,是发现和设计感冒229E型病毒3CL蛋白酶新型选择性抑制剂的有效途径。 展开更多
关键词 金丝桃苷 感冒病毒229e抗原型 3CL蛋白酶抑制剂 构效关系(SAR) 表面等离子共振(SPR)
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用RT-PCR法鉴定人冠状病毒SARS、229E和OC43
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作者 邹丽容 李晖 +1 位作者 柯昌文 黄平 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第5期513-515,553,共4页
目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物... 目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43。方法:用DNA Star和Prem ier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物,然后通过对扩增片断测序、限制性酶切方法和根据扩增片断的长度进行鉴定。结果:两种方法均能扩增到与预期目标一致的片断,特异性和灵敏度高,能快速区分3种病毒。结论:这些方法将为了解冠状病毒在呼吸道感染中的作用提供一个有利的工具。 展开更多
关键词 SAILS冠状病毒 冠状病毒229e 冠状病毒OCA3 逆转录聚合酶链式反应
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人冠状病毒229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型的建立及评价 被引量:8
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作者 耿子涵 包蕾 +6 位作者 郭姗姗 时宇静 鲍岩岩 赵荣华 孙静 高英杰 崔晓兰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第1期3-12,67,共11页
目的建立人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型,观察其中医证候、疾病表现与病毒性肺炎典型临床表现的一致性,验证该模型在药效评价中的可靠性。方法将BALB/c幼龄小鼠置于具有寒湿环境的人工气候箱中,并叠加hCoV-2... 目的建立人冠状病毒229E(hCoV-229E)寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型,观察其中医证候、疾病表现与病毒性肺炎典型临床表现的一致性,验证该模型在药效评价中的可靠性。方法将BALB/c幼龄小鼠置于具有寒湿环境的人工气候箱中,并叠加hCoV-229E滴鼻感染的方法建立小鼠模型,以仅进行感染、仅置于寒湿环境、正常饲养的小鼠分别作为对照。评价模型小鼠的中医证候相关外观行为表征,以及肺指数、肺组织中的病毒载量及活病毒存在情况、肺部组织病理学及影像学改变、血清胃肠激素水平、淋巴细胞的百分比和肺组织中的炎性细胞因子水平变化,并使用能够治疗寒湿疫毒袭肺证的复方中药"寒湿疫方",评价该模型在药效评价中的可靠性。结果与正常小鼠相比,模型小鼠表现出与寒湿证以及与病毒性肺炎疾病相一致的外观和行为,包括摄食和饮水量减少、活跃程度下降、便溏、毛发油腻(P<0.05或P<0.01),以及肺部病毒核酸阳性、肺指数增加(P<0.01)、肺及支气管组织病理学评分显著增加(P<0.05或P<0.01)、胃动素水平上升(P<0.01)、胃泌素水平降低(P<0.01)、外周血淋巴细胞百分比降低(P<0.01)、炎性细胞因子水平升高(P<0.01)。给予复方中药后,各指标有不同程度的缓解(P<0.05或P<0.01)。结论本研究建立的hCoV-229E寒湿疫毒袭肺证病证结合小鼠模型与临床疾病表现具有一致性,为治疗该证候肺炎的药物筛选提供了一种潜在的方法。 展开更多
关键词 人冠状病毒229e 病毒性肺炎 中医药 病证结合模型 寒湿疫毒袭肺证
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银翘解毒软胶囊体外抑制人冠状病毒229E及其介导的炎症的研究 被引量:3
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作者 刘振海 杨春光 +4 位作者 雷标 王周琅 谢玉琪 杨子峰 谢斌 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期64-68,共5页
目的探究银翘解毒软胶囊(YQ)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)的体外抑制作用。方法通过经典的体外细胞模型分析银翘解毒软胶囊的体外毒性及对HCoV-229E的抑制作用;通过空斑实验验证银翘解毒软胶囊对HCoV-229E的抑制作用;应用实时定量PCR法... 目的探究银翘解毒软胶囊(YQ)对人冠状病毒229E(HCoV-229E)的体外抑制作用。方法通过经典的体外细胞模型分析银翘解毒软胶囊的体外毒性及对HCoV-229E的抑制作用;通过空斑实验验证银翘解毒软胶囊对HCoV-229E的抑制作用;应用实时定量PCR法分析银翘解毒软胶囊对HCoV-229E介异的炎症因子表达水平的影响。结果银翘解毒软胶囊对人肝癌细胞的50%毒性浓度为(3 315±131)μg·mL^(-1),对HCoV-229E的50%抑制浓度为(361.9±36)μg·mL^(-1),选择指数为9.16。空斑实验表明银翘解毒软胶囊2 mg·mL^(-1)几乎可完全抑制病毒复制(P<0.001)。银翘解毒软胶囊在2 mg·mL^(-1)浓度作用下,可明显抑制由冠状病毒HCoV-229E感染介导的炎症因子如趋化因子(C-C基元)配体5(CCL-5,P<0.001)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1,P<0.001)、白细胞介素6(IL-6,P<0.001)、白细胞介素8(IL-8,P<0.001)和肿瘤坏死因子α(TNF-α,P<0.001)核酸的升高。结论体外实验显示银翘解毒软胶囊可抑制人冠状病毒HCoV-229E的复制及其介导的炎症反应,具有作为抗冠状病毒药物的开发价值。 展开更多
关键词 银翘解毒软胶囊 人冠状病毒229e(HCoV-229e) 炎症因子 人肝癌细胞Huh7
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普通冠状病毒229E株的分子流行病学分析 被引量:2
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作者 马淑霞 李金梁 +1 位作者 谷鸿喜 杨景云 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2005年第1期29-31,共3页
目的明确哈尔滨地区普通冠状病毒229E(HumanCoronavirus229E,HcoV229E)株的流行和变异情况及其与SARSCoV的异同,为进一步掌握该地区常见上呼吸道病毒的流行规律及预防,乃至疫苗的制备打下基础。方法利用RTPCR法对2003年上半年采集的部... 目的明确哈尔滨地区普通冠状病毒229E(HumanCoronavirus229E,HcoV229E)株的流行和变异情况及其与SARSCoV的异同,为进一步掌握该地区常见上呼吸道病毒的流行规律及预防,乃至疫苗的制备打下基础。方法利用RTPCR法对2003年上半年采集的部分发热病人血清及血细胞进行筛选,同时采用基因测序、序列分析等手段对扩增的HcoV229ENgene片断进行蛋白和基因分析。结果55例标本中HcoV229ERNA阳性病例5例,占909%;测序结果看出哈尔滨地区检出229E株N基因的序列与已公布的HcoV229ENgene(295802)序列完全相同,所测片断为HcoV229ENgene的部分序列。该基因与猪流行性腹泻病毒、犬冠状病毒、TGEV及猫感染性腹膜炎病毒有一定同源性;但与已公布的SARSCoVNgene序列比较,相似性小于1%。结论(1)该地区发热病人普通冠状病毒229E株阳性率为909%;(2)哈尔滨地区流行的HcoVN基因无变异发生;(3)HcoV229E与猪流行性腹泻病毒、犬冠状病毒、TGEV和猫感染性腹膜炎病毒有一定的同源性;(4)哈尔滨地区HcoV229ENgene与SARSCoVNgene相似性小于1%。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 SARS-CoV 发热病人 腹膜炎 分子流行病学 哈尔滨地区 N基因 TGEV 猪流行性腹泻病毒 同源性
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小柴胡颗粒抗人冠状病毒229E的活性研究及成分群筛选
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作者 余祥翠 刘宏 +6 位作者 郑如文 马蓉 林爱华 蒋研风羊 杜海泳 刘奕明 毕聪 《中南药学》 CAS 2022年第12期2781-2785,共5页
目的筛选小柴胡颗粒抗人冠状病毒229E(HCoV-229E)的活性成分群并验证。方法构建体外HCoV-229E感染Huh-7细胞模型,计算TC50、IC50,并采用RT-qPCR考察炎症因子mRNA表达水平。利用Autodock技术模拟小柴胡颗粒66个化学成分与HCoV-229E关键蛋... 目的筛选小柴胡颗粒抗人冠状病毒229E(HCoV-229E)的活性成分群并验证。方法构建体外HCoV-229E感染Huh-7细胞模型,计算TC50、IC50,并采用RT-qPCR考察炎症因子mRNA表达水平。利用Autodock技术模拟小柴胡颗粒66个化学成分与HCoV-229E关键蛋白S-protein、3CL水解酶、NSP15、NSP3、NSP9的分子结合能力。结果小柴胡颗粒在HCoV-229E感染Huh-7细胞所致细胞病变具有抑制作用,且可显著抑制炎症因子IL-6、IL-8、MCP-1和TNF-α的mRNA过表达;小柴胡颗粒中的甘草黄酮类、甘草皂苷类、柴胡皂苷类、黄芩苷和汉黄芩苷等黄酮类成分等与HCoV-229E的关键蛋白有较好的结合能力,小柴胡颗粒可能通过上述活性成分群抑制HCoV-229E的复制、入侵、转录等。结论本研究初步揭示了小柴胡颗粒抗HCoV-229E的药效作用机制及潜在活性成分,为其临床应用提供依据。 展开更多
关键词 小柴胡颗粒 人冠状病毒229e 分子对接
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急性呼吸道感染病例中人冠状病毒229E感染情况及病毒基因特征分析
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作者 李丰辰 蒋豪然 +14 位作者 夏百成 马洪滨 朱汝南 许晶 黄艳智 郜振国 胡孔新 李岩 向星宇 吴巨龙 许红梅 张凤 王文慧 张燕 崔爱利 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期13-26,共14页
为阐明我国全人群急性呼吸道感染(Acute respiratory infection,ARI)病例中人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCoV-229E)感染情况及病毒基因特征,本研究对2009-2021年间中国十一省份15,335例ARI监测病例中HCoV-229E核酸阳性病例... 为阐明我国全人群急性呼吸道感染(Acute respiratory infection,ARI)病例中人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCoV-229E)感染情况及病毒基因特征,本研究对2009-2021年间中国十一省份15,335例ARI监测病例中HCoV-229E核酸阳性病例进行描述性流行病学分析,同时对HCoV-229E阳性病例的临床标本进行S基因扩增和测序,阳性序列用于病毒系统发育和进化分析。本研究中共检测出316例HCoV阳性病例,其中38例为HCoV-229E阳性。HCoV-229E检出率在不同季节中差异无统计学意义(χ^(2)=2.345,P=0.504);男性检出率高于女性(χ^(2)=4.546,P<0.05);不同年龄组中,除了5~17岁青少年组未检测到HCoV-229E,其他年龄组间HCoV-229E检出率差异无统计学意义(χ^(2)=1.927,P=0.588)。在38例HCoV-229E阳性病例中有23例(60.53%)为混合感染病例,和HCoV-229E单一感染病例相比,包括肺炎病例在内的下呼吸道感染病例在混合感染病例中比例增高。本研究共获得9条2019-2021年HCoV-229E刺突蛋白(Spike protein,S)基因序列,结合从GenBank中下载的90条HCoV-229E S基因代表性序列共同构建系统发育树。结果表明,全球HCoV-229E序列可划分为Genogroup1~6共6个组,具有明显的时间聚集性。Genogroup 6是目前全球流行的主要优势谱系,位于HCoV-229E系统发育树的末端。本研究所获得的9条HCoV-229E序列均隶属于Genogroup 6,但位于不同分支。S基因分子进化速率约为7.32×10^(-4)替换/位点/年,S蛋白处于负向选择压力下(ω<1),但仍有个别正向选择位点存在,S蛋白多个位点上发生氨基酸突变和N-糖基化位点突变,其中部分突变发生在S蛋白受体结合结构域的3个受体结合环中。本研究通过开展中国内地部分地区ARI病例中HCoV-229E感染情况和病毒基因特征分析,阐述了我国HCoV-229E流行病学特征和病毒分子进化特点,为我国HCoV-229E感染的控制与预防提供基线数据。 展开更多
关键词 人冠状病毒229e 流行特征 系统发育分析 分子进化
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一叶抗流感胶囊对人冠状病毒229E湿热疫毒袭肺小鼠药理作用研究
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作者 张敬升 赵荣华 +8 位作者 张薇 冀祖恩 庞博 徐英莉 曹姗 孙静 郭姗姗 彭一峰 崔晓兰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期233-240,共8页
了解一叶抗流感胶囊对人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCo V-229E)湿热疫毒袭肺小鼠的药理作用,为扩展其临床应用提供参考。使用HCo V-229E滴鼻感染和湿热环境造模小鼠,考察一叶抗流感胶囊高、中、低不同剂量组[0.704g/(kg·... 了解一叶抗流感胶囊对人冠状病毒229E(Human coronavirus 229E,HCo V-229E)湿热疫毒袭肺小鼠的药理作用,为扩展其临床应用提供参考。使用HCo V-229E滴鼻感染和湿热环境造模小鼠,考察一叶抗流感胶囊高、中、低不同剂量组[0.704g/(kg·d)、0.352g/(kg·d)、0.176g/(kg·d)三个剂量]对小鼠的肺指数、病毒载量和小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α含量及下丘脑中PGE2、cAMP含量,同时检测小鼠外周血中T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞比例,并设西药磷酸氯喹和中成药连花清瘟颗粒作为阳性对照药。一叶抗流感胶囊三个剂量组均可降低小鼠肺指数,高剂量组和中剂量组可降低肺炎模型小鼠的病毒载量,三个剂量组肺组织中TNF-α、IL-6及IL-10含量与模型组比较均下降,下丘脑中c AMP、PGE2含量与模型组比较均降低,且差异具有统计学意义;高、中剂量组外周血CD4+、CD8+T百分比与模型组比较升高,差异有统计学意义;高、中剂量组外周血B细胞百分比与模型组比较均下降,但差异无统计学意义。表明一叶抗流感胶囊对HCo V-229E湿热疫毒袭肺小鼠模型具有治疗作用。 展开更多
关键词 一叶抗流感胶囊 人冠状病毒229e 肺指数 病毒载量 肺组织 下丘脑 外周血
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豨莶草水洗脱部位对人冠状病毒hCoV-229E致染小鼠的药效作用
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作者 樊凯芳 王欢 +2 位作者 王腾岳 赵铭岳 陈媛 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2879-2882,共4页
目的:观察豨莶草水洗脱部位(SWES)以延迟给药方式经口灌胃给药后的体内抗人冠状病毒hCoV-229E的药效作用。方法:以BALB/c小鼠为研究对象,随机分为空白对照组、模型对照组、连花清瘟胶囊组、阿比多尔片组、SWES组(0.24 g/kg),每组10只。... 目的:观察豨莶草水洗脱部位(SWES)以延迟给药方式经口灌胃给药后的体内抗人冠状病毒hCoV-229E的药效作用。方法:以BALB/c小鼠为研究对象,随机分为空白对照组、模型对照组、连花清瘟胶囊组、阿比多尔片组、SWES组(0.24 g/kg),每组10只。各组经腹腔注射环磷酰胺进行免疫抑制后,空白对照组经鼻滴入0.9%氯化钠注射液,其余各组均经鼻滴入等体积的hCoV-229E冠状病毒液进行呼吸道感染,感染2次后24 h各组连续给予相应药物7 d。检测小鼠体质重,采用ELISA法检测小鼠肺脏中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,采用鸡血凝集抑制试验检测肺组织中病毒滴度,并对肺脏组织进行病理学检查。结果:与模型对照组比较,SWES(0.24 g/kg)能明显抑制hCoV-229E感染小鼠体质量减轻(P<0.01),并能显著降低感染小鼠肺脏中炎性因子的含量(P<0.05),降低感染小鼠肺脏中hCoV-229E病毒的血凝效价,明显减轻小鼠感染冠状病毒后的肺组织病理学改变。结论:采用延迟给药方式经口灌服SWES具有明显抗人冠状病毒hCoV-229E体内药效作用,该作用与连花清瘟胶囊药效作用大致相当。 展开更多
关键词 豨莶草水洗脱部位 抗人冠状病毒 hCoV-229e 药效作用 连花清瘟胶囊
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HCoV-229E细胞-细胞融合模型构建
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作者 杨曼清 单静 +1 位作者 尚方建 刘奇 《生物技术》 CAS 2023年第6期702-707,726,共7页
[目的]构建一种HCoV-229E侵染靶细胞的可视化细胞-细胞融合模型。[方法]构建真核表达质粒pAAV-IRSE-GFP-229E S。转染293T细胞后,该细胞可以模拟病毒与靶细胞Huh-7发生融合。在此基础上使用冠状病毒广谱抑制剂EK1检测抑制效果。[结果]... [目的]构建一种HCoV-229E侵染靶细胞的可视化细胞-细胞融合模型。[方法]构建真核表达质粒pAAV-IRSE-GFP-229E S。转染293T细胞后,该细胞可以模拟病毒与靶细胞Huh-7发生融合。在此基础上使用冠状病毒广谱抑制剂EK1检测抑制效果。[结果]成功构建pAAV-GFP-229E S重组质粒。转染293T后可表达绿色荧光蛋白GFP,与Huh-7混合培养2 h后可在荧光显微镜下观察到融合现象(形态增大、荧光强度减弱、呈现不规则状);48 h后形成更大面积的融合。EK1以浓度依赖的方式抑制HCoV-229E S介导的细胞-细胞融合,IC50为(3265.948±719.116)nmol/L。[结论]成功构建了HCoV-229E侵染靶细胞的细胞-细胞融合模型,用于体外靶向HCoV-229E S蛋白的药物筛选。 展开更多
关键词 中医药 冠状病毒 HCoV-229e 细胞-细胞融合 靶向S蛋白 进入抑制剂 抗病毒药物 药物筛选
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人冠状病毒229E、OC43与SARS-CoV血清学相关性的研究 被引量:4
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作者 王压娣 丘立文 +2 位作者 廖志勇 梅亚波 车小燕 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期747-751,共5页
目的检测正常人和SARS患者血清中3种人冠状病毒(229E、OC43和SARS-CoV)特异性抗体,分析3种冠状病毒血清学相关性。方法采用免疫印迹、免疫荧光和ELISA方法检测100例健康献血员、34例SARS患者恢复期以及11例SARS患者双份血清中229E、OC43... 目的检测正常人和SARS患者血清中3种人冠状病毒(229E、OC43和SARS-CoV)特异性抗体,分析3种冠状病毒血清学相关性。方法采用免疫印迹、免疫荧光和ELISA方法检测100例健康献血员、34例SARS患者恢复期以及11例SARS患者双份血清中229E、OC43和SARS-CoV 3种冠状病毒核衣壳(N)蛋白抗体。结果用免疫荧光方法检测100例健康献血员血清中229E、OCA3和SARS-CoV IgG阳性率分别为98%、100%和1%,34例SARS患者恢复期血清中3种冠状病毒IgG的阳性率均为100%;免疫印迹检测100例健康献血员血清中229E、OC43和SARS-CoV N蛋白IgG阳性率分别97%、99%和2%,34例SARS患者恢复期血清中229E、OC43和SARS-CoV N蛋白IgG阳性率分别97%、100%和100%;11例SARS患者的急性期和恢复期双份血清中,免疫荧光检测有5例出现229E IgG滴度4倍或以上升高,10例出现OC43 IgG滴度4倍或以上升高,ELISA检测2例出现229E N蛋白IgG滴度4倍以上升高,没有一例出现OCA3 N蛋白抗体滴度升高。结论正常人群中普遍存在229E和OC43两种人冠状病毒抗体,SARS-CoV感染者存在对人冠状病毒229E和OC43血清学交叉反应,提示核衣壳蛋白不是引起血清学交叉反应的主要抗原,结果对研究SARS溯源有重要意义。 展开更多
关键词 冠状病毒 229e 0C43 SARS-COV 血清学
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SARS-CoV、HCoV-229E和OC43核衣壳蛋白的克隆表达及抗原相关性分析 被引量:4
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作者 车小燕 廖志勇 +7 位作者 王压娣 丘立文 温坤 潘玉先 徐华 梅亚波 郝卫 丁彦青 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期711-715,共5页
目的克隆表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)和人冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43)核衣壳(N)蛋白,并对其重组蛋白的抗原相关性进行探讨。方法RT-PCR扩增SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的N基因全长序列,克隆到原核表达载体pQE30,IPTG诱导表达重... 目的克隆表达SARS冠状病毒(SARS-CoV)和人冠状病毒(HCoV-229E、HCoV-OC43)核衣壳(N)蛋白,并对其重组蛋白的抗原相关性进行探讨。方法RT-PCR扩增SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的N基因全长序列,克隆到原核表达载体pQE30,IPTG诱导表达重组蛋白,用Westernblot和免疫荧光鉴定。结果获得SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43His-N融合蛋白的相对分子质量(Mr)分别约为47×103、44×103、50×103,与相应预测值相符,Westernblot和免疫荧光证实,3种融合蛋白仅与相应的免疫血清特异性结合,3种蛋白的抗原性相互间无交叉反应。结论获得具有免疫原性的SARS-CoV、HCoV-229E和HCoV-OC43的核衣壳融合蛋白,其3种N蛋白抗原性在免疫动物血清中不存在交叉反应。 展开更多
关键词 冠状病毒 核衣壳蛋白 抗原性 冠状病毒(SARS-CoV) HCoV-229e 核衣壳蛋白 抗原相关性 克隆表达 相关性分析 OC43 Western RT-PCR扩增
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2007年秋冬季北京地区成人发热就诊患者中人冠状病毒229E感染状况分析 被引量:4
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作者 陆柔剑 张陵林 +4 位作者 谭文杰 周为民 王仲 彭堃 阮力 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期367-370,共4页
目的了解北京地区成人发热就诊患者中人冠状病毒HCoV-229E感染病原学、临床表现和流行病学特点。方法2007年10月至12月从北京地区发热且有呼吸道症状的就诊成人中采集158份鼻咽拭子标本,利用荧光定量RT—PCR法进行HCoV-229E筛查;利用... 目的了解北京地区成人发热就诊患者中人冠状病毒HCoV-229E感染病原学、临床表现和流行病学特点。方法2007年10月至12月从北京地区发热且有呼吸道症状的就诊成人中采集158份鼻咽拭子标本,利用荧光定量RT—PCR法进行HCoV-229E筛查;利用常规PCR方法扩增HCoV-229E基因片段测序;对感染阳性患者进行HCoV-NL63、HCoV-HKU1及HMPV的共感染筛查、临床表现描述和流行病学特点分析。结果158份鼻咽拭子标本中荧光定量RT—PCR检测出103(65.2%)例HCoV-229E阳性;其中26例存在与HCoV—NL63(3例)、HCoV—HKU1(3例)及HMPV(20例)的混合感染;HCoV-229E阳性标本的临床表现以头痛(70.9%)、咽红(70.9%)、咽痛(69%)、寒颤(68%)、咳嗽(33%)、有痰(21.3%)、流涕(21.4%)和鼻塞(16.5%)为主,少量可见呕吐(6.8%)、呼吸困难(3.9%)和腹泻(1.9%);统计学分析表明其感染与性别、年龄无关。结论人冠状病毒HCoV-229E感染在秋冬季成人发热就诊患者中为常见病原,可合并感染其他病毒。其临床表现呈上呼吸道感染特征。2007年秋冬季在北京地区成人中可能存在HCoV-229E局部流行。 展开更多
关键词 冠状病毒229e 逆转录聚合酶链反应
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