重金属Hg^(2+)离子作用于PSII 23 kD外周蛋白的光谱学研究

23 kD蛋白是光系统II(PSII)的外周蛋白,具有增加Ca2+和C l-的结合以维持放氧活性的作用。本文借助内源荧光光谱和紫外吸收差谱考察了23 kD蛋白与Hg2+的相互作用。所得结果表明:低浓度的Hg2+离子(<10μM)引起23 kD蛋白的荧光淬灭,淬灭程度与Hg2+离子浓度相关;进一步分析显示,Hg2+离子对23 kD蛋白色氨酸荧光的淬灭属于静态淬灭。紫外吸收差谱可以检测到明显的配体向金属进行电荷转移的谱带(LMCT band)。随着Hg2+浓度的增加,LMCT带的强度逐渐增强。分析显示23 kD蛋白只存在一类Hg2+离子结合位点。

日本血吸虫23kDa膜蛋白DNA疫苗抗病免疫作用的研究

目的探讨日本血吸虫SjC23 DNA疫苗对血吸虫肝脏虫卵肉芽肿的免疫调节作用,以评价其作为抗病疫苗的潜能。方法 30头松江猪分为3组。A组(SjC23组)每头猪于两侧臀部肌注500μgpcDNA3.l-SjC23质粒 DNA;B组(SjC23+IL-12)每头猪肌注500μg pcDNA3.1-SjC23 DNA疫苗及500μgpcDNA3.1-P 35和500μg pcDNA3.1-P40质粒DNA的混和物;C组(对照组),每头猪肌注500μgpcDNA3.1质粒DNA。于第0、3、6周共免疫3次。末次免疫后30天,每头猪采用背部贴片法攻击感染600条日本血吸虫尾蚴,攻击后45天剖杀实验猪,取肝脏,于同一部位切取1.5cm^3的肝组织。按常规法制备石腊切片。切片在NYD-1000型图象分析系统下观察,测定所有肉芽肿的面积和直径,并比较。结果与对照组相比,SjC23组及SjC23+IL-12组肉芽肿内炎性细胞明显减少。肉芽肿平均面积较对照组分别减小48.57％和44.37％,肉芽肿直径分别减小27.56％和 22.78％。结论 SjC23 DNA疫苗具有下调血吸虫肝脏虫卵肉芽肿的作用,可望成为一种血吸虫病抗病疫苗候选分子。

日本血吸虫SjC23-Hsp70 DNA疫苗与IL-12对水牛保护性作用的研究

目的：研究日本血吸虫中国大陆株23 kD膜蛋白-热休克蛋白（SjC23-Hsp70）DNA疫苗联合佐剂白细胞介素12（IL-12）质粒DNA对水牛的免疫保护作用。方法：将血吸虫病非流行区8~10月龄健康水牛45头随机分为A组（SjC23-Hsp70＋IL-12）、B组（SjC23＋IL-12）和C组（pVAX＋IL-12）,每组15头。每头牛经肩部肌注免疫3次,每次间隔28 d。末次免疫后28 d,每头牛感染日本血吸虫尾蚴1000条。解剖前2天及当天分别收集粪便1次,用定量法检测虫卵和毛蚴数。攻击感染后56天解剖所有水牛,经胸主动脉灌冲法收集成虫,计数成虫数,检测每克肝组织虫卵数。结果：A,B组与C组相比,分别获得45.70%和26.61%的减雌率,44.51%和25.84%的减虫率,41.10%和31.63%的减粪卵率,48.11%和38.07%的减毛蚴率及43.39%和31.95%的减肝卵率。A组的5个率均比B组高（P〈0.05）。结论：用SjC23-Hsp70 DNA疫苗和IL-12联合免疫水牛可获得明显的免疫保护作用。

利用荧光共振能量转移方法研究Snap23和Munc 18C在CHO细胞中的相互作用

目的研究突触小体相关蛋白(snaptosome associated protein of 23 KD,Snap23)与Munc 18C蛋白的相互作用。方法从人肌肉组织中钓取人Snap23基因并克隆入pEYFP-N1载体中,构建pEYFP-Snap23质粒,瞬时转染入CHO细胞后荧光显微镜观察并拍照,免疫蛋白印迹检测EYFP-Snap23蛋白的表达。共转染pEYFP-Snap23和PECFP-Munc 18c质粒,利用荧光共振能量转移的方法检测二者是否有相互作用,同时共转染pEYFP-Snap23和pECFP-N1作为对照组。结果成功构建pEYFP-Snap23载体,荧光共振能量转移实验证明Snap23与Munc 18C蛋白有相互作用。结论突触小体相关蛋白Snap23可能与Munc 18C相互作用。

用蛋白内源荧光考察溶液pH对PSⅡ两种外周蛋白构象的影响

借助278nm和295nm激发的内源荧光光谱分析,考察不同pH值缓冲液中23kD、17kD蛋白构象变化.结果表明:295nm波长光激发时,23kD蛋白具有326nm荧光发射峰和360nm副峰;17kD蛋白具有328nm荧光发射峰和355nm副峰;278nm波长光激发时,23kD和17kD蛋白的最大荧光发射峰均在306nm处.与中性条件下相比,酸性(pH3.0～4.0)或碱性(pH8.0～9.0)缓冲液中,23kD蛋白和17kD蛋白的内源荧光光谱都发生显著变化:最大荧光峰位置和强度均不相同,340nm～360nm荧光发射副峰的强度增加.反映溶液中两种蛋白的构象易发生改变,离子键和氢键是维系23kD、17kD蛋白构象的重要因素之一.