HPLC法测定金匮肾气丸中23-乙酰泽泻醇β的含量

目的:建立金匮肾气丸中23-乙酰泽泻醇β的含量测定方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:Waters Symmetry C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈:水(73∶27);柱温:30℃;流速:1.0 m L/min;检测波长:208 nm。进样量:10μL,理论板数按23-乙酰泽泻醇β≥4000。结果:23-乙酰泽泻醇β在0.281~1.686μg(R=0.999,9)范围内线性关系良好,平均回收率为98.3%(n=9),RSD%为1.8%。结论:该方法准确、简便、快速,可作为金匮肾气丸中23-乙酰泽泻醇β的含量测定方法和质量控制。

UPLC-MS/MS法同时测定杞菊地黄胶囊中7种有效成分

目的建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定杞菊地黄胶囊中莫诺苷、绿原酸、马钱苷、木犀草苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻醇C、23-乙酰泽泻醇B的含量。方法采用ACQUITY UPLC■HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(-1);采用电喷雾电离源(ESI)、多反应离子监测(MRM)模式对7种有效成分进行测定。结果每粒杞菊地黄胶囊样品中莫诺苷含量为0.28~0.35 mg,绿原酸含量为0.08~0.11 mg,马钱苷含量为0.30~0.48 mg,木犀草苷含量为0.21~0.48 mg,丹皮酚含量为0.62~0.76 mg,23-乙酰泽泻醇C含量为0.04~0.08 mg,23-乙酰泽泻醇B含量为0.15~0.32 mg。7种有效成分相关系数为0.9990~1.0000;平均回收率(n=6)为97.72%~99.12%,RSD为0.61%~2.01%。结论该方法专属性强、灵敏高、重复性好,适用于杞菊地黄胶囊中莫诺苷、绿原酸、马钱苷、木犀草苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻醇C和23-乙酰泽泻醇B 7种有效成分的同时测定。

多指标综合评价泽泻的炮制工艺

目的:多指标综合评价泽泻的炮制工艺。方法:采用HPLC法测定不同炮制工艺盐泽泻中23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C含量,结合外观性状、显微观察评价泽泻的炮制工艺。结果:盐泽泻的最佳炮制工艺为生泽泻片先拌盐水后炒药,盐水比2%,渗入均匀后,闷润2h, 150~160℃下炒制20min。结论:该盐炙工艺可为保障我院盐泽泻饮片的质量及制剂稳定提供参考。

HPLC梯度洗脱法同时测定金嗓散结胶囊中6种主要成分的含量

目的:建立同时测定金嗓散结胶囊中6种主要成分的HPLC梯度洗脱方法。方法:选用Venusil MP C_(18)色谱柱;流动相:乙腈(A)和0.03%磷酸溶液(B),梯度洗脱:0~9 min 15.0%A,9~16 min 15.0%→21.0%A,16~22 min21.0%→36.0%A,22~30 min 36.0%→55.0%A,30~37 min 55.0%→75.0%A,37~45 min 75.0%→15.0%A;流速:0.8mL·min^(-1);柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:210 nm(苦杏仁苷、哈巴苷)、280 nm(安格洛苷C、哈巴俄苷)和208 nm(24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B)。结果:苦杏仁苷、哈巴苷、安格洛苷C、哈巴俄苷、24-乙酰泽泻醇A和23-乙酰泽泻醇B分别在一定的线性范围内线性关系良好(r≥0.999 2);平均回收率96.77%~100.05%,RSD值0.60%~1.55%;精密度和重复性良好;室温下金嗓散结胶囊供试品溶液在12 h内稳定。结论:该方法操作简便,结果准确,可用于金嗓散结胶囊中6种主要成分含量的同时测定。

双波长HPLC-DAD法测定闽产泽泻三萜类含量

目的为评价闽产泽泻质量,建立双波长HPLC-DAD法测定闽产泽泻中三萜类含量的分析方法。方法色谱柱:Ultimate XB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙腈-水(65∶35);流速1 mL/min,检测波长:208和245 nm。结果 23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B的线性范围为2.335~23.35μg/mL、11.14~111.40μg/mL、11.13~111.30μg/mL,平均加样回收率为95.6%、96.4%、97.8%,RSD为2.46%、2.28%、1.77%。结论双波长HPLC法可简便、快捷、准确地用于泽泻中三萜类含量的定量分析。

HPLC波长切换法同时测定血脂灵片中7种成分的含量

目的:建立血脂灵片中23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚7种成分的含量测定方法,为血脂灵片的质量评价提供实验参考。方法:采用HPLC波长切换法同时测定血脂灵片中23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚7种化学成分的含量,色谱柱为Waters XBridge^(TM) C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;柱温为30℃,进样量为10μL;检测波长分别为λ1=208 nm、λ2=246 nm、λ3=284 nm。结果:23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、橙黄决明素、芦荟大黄素、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚分离度良好;分别在0.755~15.090μg/mL(r=0.9998)、0.765~15.390μg/mL(r=0.9999)、1.269~25.370μg/mL(r=0.9998)、1.268~25.360μg/mL(r=0.9999)、1.465~29.300μg/mL(r=0.9997)、1.240~24.800μg/mL(r=0.9998)、1.038~20.760μg/mL(r=0.9999)的范围内线性关系良好;平均回收率分别为99.98%(RSD=0.86%)、101.29%(RSD=0.92%)、100.88%(RSD=1.10%)、99.98%(RSD=0.92%)、101.50%(RSD=1.63%)、100.19%(RSD=0.55%)、99.95%(RSD=0.60%)(n=9)。结论:本研究同时定量分析了血脂灵片中7种指标性成分的含量,该法操作准确、重复性好,可客观、全面地对血脂灵片的内在质量进行有效评价。

高效液相色谱法同时测定胃特安片中4种成分含量

目的建立同时测定胃特安片中辛弗林、橙皮苷、23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Shimadzu Intersil ODS-3柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-含0.1%庚烷磺酸钠及0.1%冰醋酸的磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长分别为275 nm(辛弗林)、283 nm(橙皮苷)、208 nm(23-乙酰泽泻醇B)和246 nm(23-乙酰泽泻醇C),柱温为室温,进样量为20μL。结果辛弗林、橙皮苷、23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C的质量浓度分别在4.142~66.272μg/mL、4.584~73.352μg/mL、3.602~57.632μg/mL、2.208~35.328μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9996,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于4.50%(n=6);平均加样回收率分别为100.55%,99.18%,98.91%,99.14%,RSD分别为2.82%,2.02%,1.64%,2.24%(n=6)。每片胃特安片分别含辛弗林、橙皮苷、23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C 0.1683,0.1733,0.1547,0.0774 mg(n=3)。结论该方法操作简便、结果准确、重复性好,可用于胃特安片中多种成分含量的同时测定。

高效液相色谱-电喷雾-质谱法分析泽泻中的活性成分

目的:建立泽泻中活性成分的高效液相色谱-电喷雾-质谱分析方法。方法:采用Zorbax SB-C18色谱柱;乙腈-水二元梯度洗脱;Agilent电喷雾离子阱多级质谱仪;正离子检出模式。结果:在正离子检出模式下,泽泻的总离子流色谱图特征性很强,通过质谱中的主要碎片对泽泻醇B、泽泻醇B-23-乙酸酯、泽泻醇C-23-乙酸酯、泽泻醇C、16-氧化泽泻醇A、11-去氧泽泻醇C6种主要成分进行了结构解析。结论:泽泻的总离子流色谱图比紫外色谱图具有更强的特征性,在该试验条件下能够同时分析泽泻中的多种活性成分,是一种较好的泽泻药材的质量控制方法。

不同炮制方法盐泽泻饮片的等级评价

目的:建立盐泽泻饮片的等级评价方法。方法:分别按照《中华人民共和国药典》2020年版和《江西省中药饮片炮制规范》2008年版制备盐泽泻和樟帮特色盐泽泻饮片各15批,在前期研究基础上,采用质量常数评价方法对两者进行等级评价,评价指标涉及饮片大小、饮片厚度和指标成分含量3个方面。结果:15批盐泽泻饮片的质量常数为1.50~3.62;一等盐泽泻质量常数≥2.90,二等盐泽泻质量常数≥1.81且<2.90,三等泽泻质量常数<1.81;15批樟帮特色盐泽泻饮片的质量常数为1.61~3.61,一等特色盐泽泻饮片质量常数≥2.89,二等特色盐泽泻饮片质量常数≥1.81且<2.89,三等特色盐泽泻饮片质量常数<1.81。结论:建立的评价方法具有一定的可行性,可为盐泽泻饮片的市场流通提供参考。

知柏地黄丸研究进展及质量标志物预测

知柏地黄丸为滋阴清热之名方,具有降血糖、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等药理作用,临床常用于治疗更年期综合征疾病和儿童性早熟等。从草本考证、化学成分、药理作用、临床应用等对知柏地黄丸的研究进展进行综述,并根据复方中药质量标志物(quality marker, Q-marker)“五原则”,从质量传递与溯源、成分特有性、成分有效性、复方配伍环境以及成分可测性等方面对知柏地黄丸Q-marker进行挖掘,初步确定芒果苷、知母皂苷BⅡ、地黄苷D、毛蕊花糖苷、盐酸小檗碱、黄柏碱、莫诺苷、马钱苷、丹皮酚、23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C为知柏地黄丸的Q-marker。研究可以为复方中药质量标志物筛选及质量控制提供研究思路。

RP-HPLC-DAD同时测定泽泻中11个三萜类成分

目的建立同时测定泽泻中泽泻醇C、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B和11-去氧泽泻醇B 11个三萜类成分的RP-HPLC-DAD分析方法。方法采用Ultimate XB-C18色谱柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相乙腈（A）-水（B）进行梯度洗脱,体积流量1 m L/min,检测波长为208、245 nm,柱温30℃。比较25批泽泻中11个三萜类成分的量。结果泽泻醇C、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇G、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、11-去氧泽泻醇B 11个成分的线性范围分别为0.313-17.210μg/m L（r=0.999 9）、0.504-11.880μg/m L（r=0.999 9）、0.284-9.369μg/m L（r=0.999 9）、0.146-2.680μg/m L（r=0.999 9）、0.254-5.596μg/m L（r=0.999 8）、2.500-66.000μg/m L（r=0.999 8）、0.463-10.190μg/m L（r=0.999 9）、1.575-20.475μg/m L（r=0.999 9）、1.525-57.268μg/m L（r=0.999 6）、3.035-118.362μg/m L（r=0.999 9）、0.816-16.880μg/m L（r=0.999 8）。平均加样回收率分别为98.76%、100.24%、97.97%、100.14%、99.88%、96.54%、97.27%、98.85%、99.45%、98.85%和98.13%。结论该法准确、可靠、分离效果良好,为泽泻药材质量评价提供了可靠的方法。

HPLC-PDA联合Box-Behnken响应面法优选五苓散低极性部位提取工艺

目的 应用HPLC-PDA联合响应曲面法,筛选五苓散低极性部位乙醇提取最佳工艺。方法 采用多波长切换定量测定,以23-乙酰泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、麦角甾醇、茯苓酸、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ、肉桂酸、桂皮醛9种有效成分为评价指标,采用Box-Behnken响应曲面法考察提取乙醇体积分数、料液比、提取时间对提取工艺的影响,确定最佳工艺。结果 色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C18柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm),体积流量为0.8 mL/min,柱温为40℃。流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱:0~10 min,37%~60%乙腈;10~20 min,60%乙腈;20~23 min,60%~95%乙腈;23~36 min,95%乙腈;36~37 min,95%~37%乙腈;37~42 min,37%乙腈。检测波长为280、247、220、208 nm多波长切换。最佳提取工艺为10倍量75%乙醇提取2次,每次1.5 h。结论 建立的HPLC-PDA法稳定可行,适合多种成分同时测定。响应曲面法所建模型准确,可以较好地预测9种成分含量综合评分;优选的提取工艺方法重现性良好,稳定可行,为五苓散临床应用、药效物质基础研究和新药开发提供技术参考。

基于内质网自噬系统探究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎的防治作用

目的研究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎(hyperlipidemia acute pancreatitis,HLAP)的防治作用及机制。方法雄性C57BL/6J小鼠以高脂饮食喂养,ig泽泻汤干预8周后,ip雨蛙素(50μg/kg)制备HLAP模型。采用试剂盒检测小鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平及淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶(lipase,LPS)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;采用油红O染色观察肝脏组织脂质蓄积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏、胰腺组织病理学变化;采用Western blotting检测胰腺组织中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子E2相关基因(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、免疫球蛋白重链结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)、真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、p-eIF2α、Bcl-2相互作用蛋白(Bcl-2 interacting coiled-coil protein-1,Beclin-1)、自噬蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、自噬蛋白12(autophagy-related protein 12,ATG12)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,LC3-Ⅱ/Ⅰ)及溶酶体相关膜蛋白1(lysosomal associated membrane protein 1,LAMP-1)表达。采用棕榈酸(200 mmol/L)和雨蛙素(10 nmol/L)处理胰腺腺泡AR42J细胞构建HLAP细胞模型,给予泽泻汤干预后,采用试剂盒检测细胞培养上清液中LPS、T-SOD活性;采用DCFH-DA荧光探针、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及MMP水平;采用透射电镜观察细胞超微结构及自噬变化;采用Western blotting检测细胞中HO-1、Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ和LAMP-1表达。结果与模型组比较,泽泻汤能够降低小鼠血清中TC、TG水平及AMY、LPS活性(P<0.05、0.01、0.001),抑制肝脏组织中的脂滴蓄积,减轻肝脏及胰腺组织病理损伤,同时上调血清及胰腺腺泡细胞中SOD、CAT活性(P<0.05、0.01),下调ROS水平(P<0.001),上调胰腺组织及细胞中HO-1、Nrf2、LAMP1表达(P<0.05、0.01、0.001),下调Keap1、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、ATG12及LC3-Ⅱ/Ⅰ表达(P<0.05、0.01、0.001)。结论泽泻汤可以防治HLAP,其作用机制可能与抑制内质网应激诱导的过度自噬、恢复自噬通量有关。

UPLC-MS/MS法同时测定泽泻药材中16个成分

目的:建立超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定泽泻药材中16个主要成分(16-氧代泽泻醇A、16-氧代-24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇C、泽泻醇F、23-乙酰泽泻醇C、11-去氧泽泻醇C、泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇L、泽泻醇G、泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、11-去氧泽泻醇B和11-去氧-23-乙酰泽泻醇B)的含量。方法:采用UPLC-MS/MS法,正离子多反应监测(MRM)模式进行含量测定。色谱条件:采用Cortecs C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6μm),流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.25 mL·min^(-1),柱温40℃。结果:在所设定的色谱条件下,10 min内定量分析泽泻药材中上述16个主要成分,在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r>0.998 1),回收率和RSD分别在96.0%～104.3%和2.4%～4.4%范围内,精密度、重复性、稳定性考察也符合分析要求。24批样品中上述-16个成分含量测定结果依次为0.009～0.668 mg·g^(-1)、0.001～0.009 mg·g^(-1)、0.021～0.229 mg·g^(-1)、0.004～0.094 mg·g^(-1)、10.100～0.342 mg·g^(-1)、0.016～0.048 mg·g^(-1)、0.009～0.044 mg·g^(-1)、0.002～0.090 mg·g^(-1)、0.023～1.133 mg·g^(-1)、0.012～0.596 mg·g^(-1)、0.003～0.023 mg·g^(-1)、0～0.018 mg·g^(-1)、0.489～2.313 mg·g^(-1)、0.833～2.138 mg·g^(-1)、0.043～0.341 mg·g^(-1)、0.037～0.186 mg·g^(-1)。结论:本研究所建立的同时测定泽泻药材中16个成分的UPLC-MS/MS定量分析方法简便、快捷、准确,为泽泻药材质量控制提供新的技术手段。

关于《中国药典》2020年版泽泻质量标准修订的建议

完善泽泻药材和饮片的质量标准,为《中国药典》2020年版泽泻药材和饮片质量标准的修订提供参考和建议。参照《中国药典》2015年版四部通则,对泽泻药材和饮片的水分、总灰分、重金属及有害元素、农药残留及醇溶性浸出物进行测定;以硅胶GF254板为薄层板,以二氯甲烷-甲醇(15∶1)为展开剂,建立了以23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C及泽泻对照药材为对照的薄层鉴别方法;采用HPLC,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,在208 nm和246 nm波长下分别对23-乙酰泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇C进行定量分析。采用建立的方法,对37批泽泻药材、30批泽泻饮片和19批盐泽泻的质量进行评价,根据实验结果,建立了泽泻药材和饮片的质量标准。该标准具有很好的专属性和重复性,可用于泽泻药材与饮片的质量控制。建议《中国药典》2020年版对泽泻的【来源】、【鉴别】(薄层)、【浸出物】(盐泽泻)、【含量测定】项进行相应的修订。