紫檀芪对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响

目的探讨紫檀芪(PTE)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系增殖及凋亡的影响。方法细胞分为正常对照组、PTE组(10、20、40、80μmol/L),各组细胞分别处理24、48、72 h。MTT法检测各组细胞存活率;黏附实验测定各组细胞黏附率;TUNEL法测定各组细胞凋亡率;Caspase-Glo3/7定量试剂盒测定细胞Caspase3/7的表达情况。结果MTT结果显示PTE对MDA-MB-231细胞增殖有抑制作用(P<0.01),呈药物浓度时间依赖效应,其中80μmol/L处理72 h组抑制效果最明显。黏附实验(48 h)结果显示PTE可以减弱MDA-MB-231细胞黏附能力(P<0.01),并呈浓度依赖效应。TUNEL检测(48 h)结果显示PTE可以增加MDA-MB-231细胞的凋亡率(P<0.01)。Caspase3/7检测结果显示PTE可以使Caspase3/7活性升高(P<0.01)。结论 PTE可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡。

内质网应激诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡

目的探讨内质网应激(ERS)致雌激素受体阴性(ER-)人乳腺癌MDA-MB-231细胞系凋亡及钙激活中性蛋白酶2(calpain2)在凋亡效应中的作用。方法实验设空白对照组(DMEM)、对照组(DMEM+DMSO)和实验组,用不同浓度衣霉素(TM)诱导乳腺癌细胞不同时间,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖抑制率及凋亡率;Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达量,以GRP78表达最高点确定ERS模型建立,检测凋亡相关蛋白caspase4和CHOP表达以及calpain及其内源性抑制酶calpastatin的表达,用ERS抑制剂(4-PBA)和calpain抑制剂(calpeptin)分别预处理细胞2 h,观察对上述效应的影响。结果 9、12和18μmol/L TM诱导ERS对该细胞增殖有明显抑制效应,抑制率分别为33.88%±1.32%、51.51%±8.85%和55.77%±2.61%,细胞凋亡率分别为9μmol/L TM组16.70%±0.46%和12μmol/L TM组28.1%±1.09%,与对照组相比有明显差异(P<0.05);9μmol/L TM诱导细胞24 h的GRP78表达上调最高(P<0.01);ERS还可明显上调caspase4、CHOP和calpain表达,下调calpastatin表达(P<0.01或P<0.05),上述效应均能被4-PBA和calpeptin减弱或阻断(P<0.05)。结论 ERS可诱导MDA-MB-231细胞凋亡,calpain2参与调控凋亡发生。

体外扩增人外周血来源免疫细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤作用

目的探讨人外周血来源的细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞、树突状细胞-细胞因子诱导杀伤(DC-CIK)细胞和自然杀伤(NK)细胞对人MDA-MB-231乳腺癌细胞的体外杀伤作用。方法采用含红色荧光蛋白标签(RFP)和萤光素酶报告基因(Luc)的慢病毒感染MDA-MB-231细胞,通过荧光显微镜检测MDA-MB-231细胞感染率。分离人外周血单个核细胞(PBMC),诱导获得CIK细胞、DC-CIK细胞、NK细胞,体外扩增培养。采用流式细胞术检测免疫细胞的扩增效果及表型,并检测体外扩增的人外周血来源免疫细胞在不同效靶比下对MDA-MB-231肿瘤细胞的抑制作用。结果DC-CIK细胞、NK细胞及CIK细胞对MDA-MB-231肿瘤细胞的杀伤作用随效靶比的增加以及作用时间的延长而增强。共培养72 h后,免疫细胞对靶细胞的杀伤率均达到90%以上。结论体外扩增的CIK细胞、DC-CIK细胞、NK细胞对乳腺癌细胞具有杀伤作用。

HIC-1基因在乳腺癌的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨癌高甲基化1(hypermethylated in cancer 1,HIC-1)基因在乳腺癌组织中的表达,以及恢复HIC-1基因表达对乳腺癌细胞增殖活力和凋亡的影响。方法:应用免疫组化方法测定乳腺癌组织芯片中80例癌组织的HIC-1蛋白表达,并分析其与临床病理的关系。应用甲基化特异性PCR法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞中HIC-1基因启动子区域甲基化与基因表达的关系,5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)抑制甲基化后细胞HIC-1的表达水平变化。应用CCK-8方法和流式细胞仪测定恢复细胞HIC-1表达对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。结果:正常乳腺上皮组织HIC-1免疫组化染色呈强阳性,平均染色积分9.00±0,乳腺癌组织HIC-1染色明显降低,平均染色积分为4.58±1.22(P<0.001)。HIC-1的蛋白表达与病人年龄、发生部位以及是否出现淋巴结转移无关,但与肿瘤的组织学类型相关(P<0.05)。MDA-MB-231细胞HIC-1基因启动子区域呈完全甲基化,用5μM的5-aza-CdR处理后可抑制HIC-1基因启动子甲基化、恢复HIC-1表达,并呈现浓度依赖性。恢复HIC-1基因表达抑制MDA-MB-231细胞增殖活性,促进MDA-MB-231细胞凋亡(P<0.05)。结论:乳腺癌组织HIC蛋白表达和癌细胞HIC-1基因表达明显降低,去甲基化药物可恢复肿瘤细胞内HIC-1基因表达,从而达到抑制肿瘤细胞增殖并促进细胞凋亡的目的。

硒-甲基硒代半胱氨酸对乳腺癌细胞生物学行为及基质金属蛋白酶-2表达的影响

背景与目的:硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,MSC)是一种天然有机硒,已被证实能预防和治疗多种肿瘤,但其抗肿瘤作用的机制尚有待进一步阐明。本研究旨在通过MSC处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,研究其对细胞生物学行为和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。方法:用不同浓度的MSC处理MDA-MB-231细胞,镜下观察细胞形态的改变,细胞计数试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)、流式细胞仪及软琼脂生长实验分别检测其对肿瘤细胞增殖、周期分布和凋亡及恶性表型的影响,逆转录-多聚酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测MMP-2 mRNA和蛋白水平的表达,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养液中MMP-2蛋白浓度。结果:MSC处理的MDA-MB-231细胞增殖受到抑制,出现S期阻滞和细胞凋亡,软琼脂上细胞集落形成数明显减少。MMP-2mRNA和蛋白的表达却表现出不一致性,50μmol/LMSC处理细胞48h和72h后,MMP-2mRNA表达水平分别上调32.2%和47.1%,而MMP-2蛋白表达水平却分别下调42.4%和50.8%,培养液中的MMP-2浓度也分别下调了56.7%和75.2%;100μmol/LMSC处理细胞48和72h后,MMP-2mRNA表达水平分别上调52.6%和61.3%,而MMP-2蛋白表达水平分别下调72.9%和81.4%,培养液中的MMP-2浓度也分别下调了68.5%和80.9%。结论:MSC抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,诱导S期阻滞及细胞凋亡,降低细胞恶性程度。MSC上调该细胞MMP-2 mRNA的表达,但下调其蛋白的表达和分泌。

Ghrelin促乳腺癌细胞增殖和抑制其凋亡的作用及机制

目的:探讨Ghrelin在促MDA-MB-231细胞增殖的浓度下,对凋亡相关基因(Bcl-2、Bax)表达的影响。方法:通过细胞培养、MTT、流式细胞检测方法探究酰基化Ghrelin对MDA-MB-231细胞系的作用,运用Western blot检测酰基化Ghrelin在促增殖浓度下对MDA-MB-231细胞系凋亡相关蛋白表达的影响。结果:MTT检测得出Ghrelin浓度在0 nmol/L~≤100 nmol/L范围内促进MDA-MB-231细胞增殖,在>100nmol/L^1 000nmol/L范围内抑制MDA-MB-231细胞增殖,且在100nmol/L时促增殖作用最强。Ghrelin浓度在100nmol/L时,流式细胞检测实验组和对照组细胞系凋亡有显著统计学差异,实验组凋亡率小于对照组。Western blot检测显示,实验组与对照组相比,Bcl-2表达增加,Bax表达下降,有统计学差异。结论:Ghrelin在一定的较低浓度范围内,促MDA-MB-231细胞增殖,并伴有Bcl-2/Bax比率升高,推测Ghrelin促MDA-MB-231细胞增殖与抗线粒体凋亡因子释放有关。

三氧化二砷体外诱导雌激素受体α表达的初步研究

目的本文拟探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的雌激素受体重新表达的可能性。方法以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象,经不同浓度As2O3处理后,采用RT-PCR技术检测ER-α基因mRNA表达。结果经1.0μmol/L、2.0μmol/L和4.0μmol/L As2O3处理的MDA-MB-231细胞均能扩增出ER-α基因。结论一定浓度的As2O3可通过去甲基化作用诱导MDA-MB-231细胞系重新表达ER-α。

p53突变型乳腺癌细胞系中14-3-3σ对p73基因稳定性的影响

目的探讨在p53突变的乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,14-3-3σ对p73基因稳定性的影响。方法采用基因转染、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹检测(Western blot)和放线菌酮(CHX)蛋白抑制分析的方法研究14-3-3σ对p73基因稳定性的影响。结果 RT-PCR显示,单独转染1μgp73后,p73与GAPDH的灰度值比为0.635;转染1μgp73+1μg14-3-3σ和1μgp73+2μg14-3-3σ后,p73与GAPDH的灰度值比分别为0.643和0.631。West-ern-blot显示,单独转染1μgp73后,p73与actin的灰度值比为0.333;转染1μgp73+1μg14-3-3σ和1μgp73+2μg14-3-3σ之后,p73与actin的灰度值比分别为0.797和0.826。放线菌酮蛋白抑制分析显示:单独转染p73的对照组,放线菌酮处理0、1、2、4、6h后,p73与actin灰度比值分别为0.075、0.166、0.124、0.100和0.092;而共转染p73和14-3-3σ的实验组结果分别为0.963、0.244、0.244、0.234和0.185。结论在转录水平上,14-3-3σ不影响p73基因的稳定性;而在蛋白表达水平上,14-3-3σ可以增加p73基因的稳定性。

三氧化二砷和肼苯哒嗪体外诱导雌激素受体α表达强弱的比较

目的本文拟比较三氧化二砷和肼苯哒嗪两种去甲基化药物在最佳有效浓度时,诱导MDA-MB-231细胞株雌激素受体重新表达作用的差异。方法以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象,经2.0μmol/LAs2O3和10μmol/L肼苯哒嗪处理后,采用免疫组织化学技术检测ER-α受体的表达。结果经2.0μmol/L As2O3与10μmol/L肼苯哒嗪处理的MDA-MB-231细胞ER-α受体的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论两种去甲基化药物在各自最佳去甲基化作用浓度时,对于高甲基化失活的雌激素受体ER-α基因去甲基化作用差异无统计学意义。

CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌相关因子的研究

目的比较正常乳腺细胞HBL-100与雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231中CHD5表达水平。初步探讨CHD5基因与雌激素受体阴性乳腺癌发生发展的相互关系及分子机制。方法应用RT-PCR法检测CHD5基因在HBL-100细胞和MDA-MB-231细胞中含量的差异;设计合成靶向CHD5的小干扰序列,构建RNA干扰质粒pRNAT-U6.1/Neo-CHD5,抑制CHD5基因的表达,并检测乳腺癌相关基因HER-2的表达情况。结果CHD5基因在HBL-100中高表达,在MDA-MB-231中低表达。酶切鉴定、DNA测序证实表达质粒构建成功,无碱基突变。重组载体能干扰HBL-100细胞CHD5基因的表达。干扰后,HBL-100细胞中CHD5表达被抑制,HER-2表达升高,呈负相关性。结论 CHD5的缺失或低表达可能与雌激素受体阴性乳腺癌的发生发展有关,为CHD5基因可能成为雌激素受体阴性乳腺癌治疗的新靶点提供理论依据。