23F型肺炎球菌多糖与CRM197蛋白结合物制备及特性研究

目的采用改良胺化还原法,白喉无毒突变体CRM197蛋白作为载体,制备23F型肺炎球菌多糖蛋白结合物。方法在还原胺法的基础上,以1,6-己二酰肼(ADH)为分子臂,在碳二亚胺(EDAC)作用下衍化CRM197蛋白,衍化后蛋白再与多糖上的醛基反应,形成共轭结合;采用高效液相色谱技术(HPLC)、免疫扩散等方法分析结合物,并将获得的结合物免疫NIH小鼠,用ELISA方法检测多糖IgG水平。结果 HPLC图谱和免疫扩散检测结果证明了结合物的获得;动物免疫产生了较多糖高的抗23F肺炎多糖抗体,并有免疫记忆发生。结论采用改良还原氨化法可以制备出动物免疫原性良好的23F型多糖蛋白结合物。

23F型肺炎球菌家兔免疫血清的制备及其在免疫学方法中的特异性研究

目的:制备23F型肺炎球菌家兔免疫血清,进行型特异性和相关方法专属性分析后,用于23F型肺炎球菌结合物制备过程多糖抗原性分析及结合疫苗质控。方法:以已确定的免疫程序用自制菌液耳缘静脉免疫青紫兰家兔,采血后分离血清,免疫血清以免疫双扩散法和ELISA与商品诊断血清比较;以ELISA和速率比浊法分析型特异性和相应方法专属性。结果:建立家兔免疫血清制备方法并制备合格家兔免疫血清,其效价高于商品诊断血清;建立分析型特异性和相应方法专属性的ELISA和速率比浊法;合格免疫血清可用于对23F型肺炎球菌结合物及结合疫苗质控。结论:自制家兔免疫血清优于商品诊断血清,可达到ELISA和速率比浊法型特异性和相应方法专属性要求,可用于对23F型肺炎球菌结合物制备过程的多糖抗原性分析及结合疫苗质控。