电离辐射对人乳腺癌MCF7细胞系hR24L基因表达的影响

目的 :研究电离辐射对人类DNA修复基因hR2 4L表达的影响。方法 :通过RT -PCR从人乳腺癌MCF7细胞总RNA中扩增hR2 4L的开放阅读框 (ORF) ,经测序无突变后用γ射线照射细胞。照射后不同时间收集细胞 ,提取总RNA ,用Northern印迹杂交分析hR2 4L表达变化。结果 :hR2 4L基因的转录在电离辐射后 1h后开始上升 ,2h达高峰 ,3h恢复正常。结论 :该基因的表达具有损伤诱导性特点 ,对γ射线损伤有修复作用。

HeLa细胞中hR24L基因的表达、DNA损伤修复、G_2/M阻滞与电离辐射之间的关系(简报)

DNA是生命活动中最重要的遗传物质,保持其分子结构的完整性对于细胞至关重要,因此研究DNA损伤修复是生命科学的重要课题之一.基因组比较简单,易于操作的单细胞真核生物酵母遂成为研究DNA损伤修复的重要材料.对紫外线或电离辐射敏感的酵母突变株称为rad突变株.酵母细胞的基因组中有近30个遗传位点与辐射抗性有关.根据单突变和双突变的敏感特征所得出的上位关系可将其分为3个上位显性组[1,2]:RAD3组,该组成员参与核苷酸的切除修复,其突变株对紫外线敏感;RAD6组,参与复制后修复,其突变株对化学诱变剂敏感;RAD52组,参与重组修复(包括链断裂修复),其突变株对电离辐射敏感.RAD24基因属于RAD3组,兼有其他组的某些特性.

HR24L基因过表达抑制细胞凋亡

目的 :研究人类DNA损伤修复基因HR2 4L与细胞凋亡的关系。方法 :PCR方法扩增HR2 4L基因开放阅读框序列 ,克隆入逆转录病毒载体pDOR neo ,转染HeLa细胞 ,筛选阳性克隆 ;Southern印迹验证HR2 4L基因的整合状况。Northern印迹检查HR2 4LmRNA的细胞内表达水平。过氧化氢、丁酸钠及血清饥饿诱导凋亡 ,流式细胞计数仪检测凋亡比例 ,电泳观察DNALadder,Western印迹检测凋亡相关蛋白质的表达。结果 :获得转染有HR2 4L基因的HeLa细胞。与HeLa细胞相比 ,HeLa HR2 4L细胞HR2 4LmRNA表达明显上升。HR2 4L基因过表达导致Bcl 2的表达升高 ,抑制caspase 3和Bax的表达 ,而对p53却无明显的影响。HR2 4L基因过表达抑制过氧化氢和血清饥饿诱导的细胞凋亡 ,但对丁酸钠诱导的细胞凋亡却无抑制作用。结论 :HR2 4L基因过表达抑制细胞凋亡。

HR24L基因编码的蛋白质定位于细胞核内并参与细胞周期的调节

目的:研究HR24L基因编码的蛋白质在细胞内的定位及其对细胞周期的影响。方法PCR方法扩增HR24L开放阅读框序列,克隆入绿色荧光蛋白载体pEGFPC2和逆转录病毒载体pDORneo,分别经脂质体介导转染入HeLa细胞。荧光显微镜观察HeLaGFPHR24Ls细胞,Southern印迹杂交分析外源性HR24LcDNA的整合状况。去血清处理细胞,观察HR24L基因对细胞周期的影响。Western印迹分析HR24L基因对p53表达的影响。结果转染获得了HeLaGFPHR24L、HeLaHR24Ls和HeLaHR24La细胞。荧光显微镜观察证实HR24L编码的蛋白质位于核内。Southern印迹分析证实HeLaHR24Ls和HeLaHR24La细胞中外源性HR24LcDNA已整合入基因组。与对照和空载体细胞相比,HeLaHR24Ls细胞中HR24LmRNA表达升高,HeLaHR24La细胞中HR24LmRNA表达降低。经过24h去血清培养后,HeLaHR24Ls细胞中G2/M期细胞明显较其他细胞增多(P<0.05),其他3种细胞则无明显差别。重新加入血清培养后24h这种差别消失。Western印迹分析表明,HR24L基因对p53的表达无明显影响。结论HR24L基因编码的蛋白质位于细胞核内且参与细胞周期的调节。

hR24L基因转染对MCF7细胞周期的影响

目的 通过观察人类DNA损伤修复基因hR2 4L转染对MCF7细胞增殖周期的影响 ,进一步了解其功能及作用机制。方法 分别用正义和反义hR2 4L逆转录病毒表达载体(pDor-neo)重组体转染MCF7细胞 ,观察细胞生长速度 ,用Northern印迹杂交检测hR2 4L基因的表达情况 ,并用流式细胞仪检测细胞周期。结果 与转染空载体的细胞相比 ,转染正义hR2 4L重组体的细胞生长较慢 ,其hR2 4LmRNA的表达增加 ;而转染反义hR2 4L重组体的细胞生长较快 ,其hR2 4LmRNA的表达则降低 ;转染后 6h流式细胞仪检测表明 ,转染正义hR2 4L重组体的细胞G2 +M期的比例 (18% )明显高于其它 3种细胞 (6 % )。结论 hR2 4L基因的表达抑制了细胞生长 ,其机制是引起细胞周期阻滞 ,参与细胞周期调控。

hR24L基因的克隆及逆转录病毒重组体的构建

目的 克隆人类DNA损伤修复基因hR2 4L ,并构建逆转录病毒表达载体重组体 ,为进一步研究该基因的功能及作用机制奠定基础。方法 用PCR法扩增hR2 4L基因的开放阅读框 (ORF) ,然后连接到 pEGM -T载体中 ,经测序验证无突变后 ,再重组到逆转录病毒表达载体 (pDor -neo)中 ,得到正义和反义重组体。 结果 建立了一种有效的基因克隆方法 ,成功地克隆了hR2 4L基因 ,获得了含有重组体的稳定遗传的细胞株。结论 PCR法是克隆hR2 4L基因的有效方法 。

24 h膳食回顾法应用与发展现状

目的:研究24 h膳食回顾法的应用和发展现状。方法:对于24 h回顾法在营养学研究中的应用情况、质量控制方法、信效度研究、调查方式和工具发展进行综述。结果:24 h回顾法调查适用于食物消费量调查、营养流行病学研究、营养关联因素研究和临床研究等。在方法学层面,根据调查实际情况定制合适的方法和工具,通过与食物频率法、称重法等方法结合获取更全面的膳食营养信息。在实际应用中,采取严格的质量控制保证调查结果的可信,通过人员培训、工具使用和方法统一等策略减少偏倚。信效度研究可以评估膳食调查问卷的质量及结论的可信度。新型调查方式和工具的开发,也为24 h回顾法的发展和应用提供了新的方向。结论:24 h回顾法是获取中国人群营养数据的重要工具,在营养学研究中有广泛且重要的应用,也将因新型调查方式和工具的开发获得新的发展和应用。

基于动脉张力法和STM32L的24h动态血压计设计

本文介绍了一种基于高灵敏度压力传感器和STM32L芯片的低功耗、高性能的24h连续动态血压监测系统,阐述了系统的工作原理、流程及其软硬件设计。系统通过压力传感器对腕部脉搏波进行实时监测,利用动脉张力法预估血压值,实现了24h连续动态血压监测的效果。该系统具有自动进入低功耗状态、5min自动唤醒、按键中断唤醒、血压异常报警等功能,克服了传统血压计无法进行24h连续动态血压监测、受偶然因素影响大、实时性差等缺点。

hR24L基因转染对MCF7细胞凋亡的影响

为研究人类DNA损伤修复基因hR2 4L与细胞凋亡的关系 ,首先用PCR方法扩增了hR2 4L基因的开放阅读框(ORF) ,成功地构建了正义和反义hR2 4L基因的逆转录病毒表达载体重组体。然后用这两种重组质粒转染MCF7细胞 ,筛选出的阳性克隆再分别用过氧化氢、丁酸钠和去血清饥饿诱导凋亡 ,用Northern印迹杂交分析hR2 4L基因表达情况 ,用流式细胞仪和电泳检测细胞凋亡。结果发现转染正义hR2 4L重组载体的细胞的hR2 4LmRNA表达水平升高 ,其凋亡面积所占比例 (2 1 2 1± 2 42 )比对照细胞 (46 16± 4 38)明显降低 ;而转染反义hR2 4L重组载体的细胞的hR2 4LmRNA表达水平则下降 ,但其凋亡峰面积所占比例 (31 0 5± 3 0 2 )比对照细胞也明显降低 ,表明两者均抑制过氧化氢和去血清饥饿诱导的凋亡 ,但它们对丁酸钠诱导的凋亡均无抑制作用。可见hR2

称重法和24h膳食回顾法用于评估住院病人一日膳食的比较

目的:评价我院日常开展的24h膳食回顾在评估住院病人膳食摄入状况的准确性。方法:选取我院40名普通饭住院病人,分别用称重法、24h膳食回顾法对其进行一日膳食调查。将24h膳食回顾法获得的食物消费量和营养素摄入量,与称重法获得的相应数据进行比较,计算两者差值占称重法数据的比例,以此判断24h膳食回顾法数据的准确性。结果:在食物消费量方面,除牛肉和鸡蛋外,其余7种食物的2种方法的差值均有显著差异;但相关分析显示2种方法的数据无相关性。在能量和营养素摄入量方面,2种方法调查结果均有差异;2种方法获得的脂肪、总维生素E、钠、钙和膳食纤维摄入量数据呈一定程度的正相关,能量和其它营养素摄入量则未见相关性。结论:缺少必要辅助工具时,一般专业人员实施的24h膳食回顾调查,往往难以获得良好的质量控制,不能获得理想的评估数据。

应用24h变量相关系数检验数值预报产品

气象要素的变量可反应天气系统的变化趋势,所以,在数值预报产品释用业务中,气象要素场及一些物理量的24 h变量经常作为重要的预报因子,因此,有必要以24 h变量相关系数为指标,对数值预报产品进行检验。利用国家气象中心T213 L31数值预报产品,对东亚范围内2006～2011年对流层各等压面的高度场、温度场、风场、垂直速度场和水汽场的预报,以24 h变量相关系数为指标,进行了检验。结果表明:1)高度场预报,通过相关显著性水平α=0.001检验的时效为10 d,高可信度(24 h变量相关系数>0.4)的时效,对流层中上部6～7 d,对流层中下部5 d;2)温度场预报,通过α=0.001水平相关显著性检验的时效为9 d,高可信度的时效,对流层中上部4 d,对流层中下部5 d;3)风场预报,通过α=0.001水平相关显著性检验的时效为8 d,高可信度的时效,对流层上部、中部和下部分别为5 d、4 d和3 d;4)垂直速度场预报,通过α=0.001水平相关显著性检验的时效为5 d,高可信度的时效仅为1～2 d;5)水汽场预报,通过α=0.001水平相关显著性检验的时效为6 d,高可信度的时效,对流层中部2 d,下部3～4 d。这些将为T213 L31数值预报产品的合理有效利用提供参考依据。

HPLC检测白血病细胞系CYP3A5活性方法的建立与应用

目的建立白血病(AL)细胞系CYP3A5活性检测方法,研究化疗药对其活性的调控。方法HPLC法检测药物干预后AL细胞系CYP3A5活性。结果以1×106细胞、氢化考的松终浓度100μmol/L、孵育24h为AL细胞体外培养条件下氢化考的松6β-羟化活性检测的孵育条件。K562细胞CYP3A5活性显著高于HL-60、NB4和Jurkat细胞。柔红霉素作用24h后K562细胞CYP3A5活性增高,48h后活性显著增高;而NB4与Jurkat细胞在其作用后活性无改变。地塞米松作用24h后Jurkat细胞CYP3A5活性显著增高,48h后活性又显著增高。全反式维甲酸作用24h后NB4细胞CYP3A5活性显著增高,72h后活性又显著增高。结论HPLC检测AL细胞体外培养条件下氢化考的松6β-羟化活性方法的建立可用于研究AL细胞CYP3A5活性。柔红霉素、地塞米松、全反式维甲酸的应用可诱导某些AL细胞株CYP3A5活性。

慢性肾脏病患者的膳食评估

慢性肾脏病(CKD)常用的膳食评估方法包括24 h膳食回顾(24-h DR)/3 d膳食回顾(3DDR)、食物频率问卷(FFQ)、饮食记录及基于氮动态平衡估计膳食蛋白摄入量。由于亚洲人群CKD患者较多,且对其采用FFQ方法进行的相关研究很少,因此,建立适合中国CKD人群的FFQ十分重要。本文针对CKD膳食评估方法的优缺点和研究现状,以及建立FFQ的内容和步骤进行综述,旨在为改良中国CKD患者的FFQ提供参考。

反流性食管炎患者食管测压及pH监测值

为探讨反流性食管炎发病机制及其与胃食管反流的关系。 采用食管测压法和24h食管pH监测对68例反流性食管炎患者和30例健康志愿者进行了食管功能检测。结果显示食管炎患者食管下括约肌压力(LESP)减低(P＜0.05)、食管蠕动波幅(PA)减低(P＜0.01) 、食管蠕动波传导速度(PV)减慢(P＜0.05) ;24h食管pH＜4的百分比 、酸反流次数和＞5 min的酸反流次数明显增加(均P＜0.01), Ⅰ期与Ⅱ期食管炎相比食管动力参数无差异, 而在24h食管 pH监测方面显示Ⅱ期食管炎患者在酸反流次数及＞min反流次数、最长反流时间、pH＜4时间百分比方面均较Ⅰ期食管炎患者有明显增加。提示反流性食管炎发病机制与胃食管反流明显相关。

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.

异丙酚对缺氧复氧鼠脑神经元NOS活性和HSP70家族表达的影响

目的：通过观察不同浓度异丙酚对原代培养胎鼠大脑神经元缺氧复氧过程的影响，探讨异丙酚的部分脑保护机制。方法：培养12天的胎鼠大脑神经元，随机分为四组：Ⅰ组正常对照组；Ⅱ组缺氧复氧组；Ⅲ组14μmol／L异丙酚组；Ⅳ组56μmol／L异丙酚组。Ⅲ组和Ⅳ组于缺氧前分别换入含有14μmol/L和56μmol／L异丙酚的培养液，随后缺氧30min。四组于缺氧后1h、2h、4h、6h和24h用分光光度法分别比较各组神经元NOS(一氧化氮合成酶)活性，同时四组于缺氧后1h、3h、6h、8h、24h、48h和72h分别用原位杂交法和免疫组化法观察Hsp70(热休克蛋白70)mRNA、Hsc70(热休克同源蛋白70)mRNA及Hsp70的表达。结果：①本研究的缺氧复氧过程可使神经元NOS活性增强，并可诱导Hsp70 mRNA、Hsc70mRNA和Hsp70表达，且表达高峰分别为24h、24h和48h；②在14μmol／L和56μmol／L异丙酚组，缺氧复氧鼠脑神经元NOS活性在复氧后4h内降低；③14μmol／L和56μmol／L异丙酚组的缺氧复氧鼠脑神经元Hsp70mRNA和Hsc70mRNA的表达高峰分别提前至8h和6h，而只有56μmol／L异丙酚组的缺氧复氧鼠脑神经元Hsp70的表达高峰才提前至24h。结论：异丙酚可抑制缺氧复氧引发的神经元NOS活性增强，同时异丙酚可从转录和翻译两个水平上促进鼠脑神经元热休克蛋白70家族的表达。

TNF-α促进HepG2肝细胞脂质积聚及其机制的初步研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否能够促进肝细胞脂质积聚,并对其机制进行初步探讨。方法将HepG2肝细胞分为空白对照组、单纯TNF-α组(TNF-α2ng/mL或20ng/mL)、软脂酸组(软脂酸0.08mmol/L或0.2mmol/L)及联合组(TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L),处理24h,应用化学酶促-比色法定量检测细胞内TG含量。进一步选取TNF-α20ng/mL和软脂酸0.08mmol/L,通过油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平。结果①单纯TNF-α组TG含量[TNF-α2ng/mL组(0.344±0.093)μg/μg、TNF-α20ng/mL组(0.329±0.068)μg/μg]分别较空白对照组[(0.192±0.048)μg/μg]显著升高(P<0.05);联合组[TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(0.451±0.096)μg/μg、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(0.821±0.257)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(1.032±0.286)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(2.134±1.049)μg/μg]分别较软脂酸组[软脂酸0.08mmol/L组(0.247±0.069)μg/μg、软脂酸0.2mmol/L组(0.341±0.031)μg/μg]显著升高(P<0.05);②油红O染色进一步显示,TNF-α促进肝细胞内脂质积聚。③实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示单纯TNF-α组与空白对照组相比,HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达均增加(P<0.05);联合组与软脂酸组相比,肝细胞内SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平明显上调(P<0.05)。结论TNF-α促进HepG2肝细胞内脂质积聚,增加SREBP-1、FAS、ACCα的表达。

鱼腥草素钠对BALB/c小鼠的急性毒性及其对细胞的损伤

目的探索鱼腥草素钠(SH)急性毒性及其对腹腔细胞的损伤作用。方法观察BALB/c小鼠单次ip给予SH 50,125和200 mg.kg-1后的急性毒性反应及死亡情况,并进行病理组织学检查。检测小鼠单次ip给予SH后血浆中组胺的浓度。将SH与小鼠腹腔细胞进行体外孵育,检测乳酸脱氢酶(LDH)渗出和组胺释放。观察SH对人血红细胞的溶血作用。结果小鼠单次ip给予SH后,SH 50 mg.kg-1组没有观察到小鼠死亡,SH 200 mg.kg-1组小鼠全部死亡,死亡原因为肝充血。与正常对照组血浆中组胺浓度(45.8±9.6)μg.L-1相比,小鼠ip给予125 mg.kg-1后0.5 h血浆中组胺浓度为(66.1±3.9)μg.L-1,明显增加(P<0.05)。SH 0,32和128 mg.L-1体外处理小鼠腹腔细胞,上清中的相对含量LDH分别为1.2±1.1,19.2±3.3和30.6±3.1,组胺的浓度分别为36.5±9.0,73.3±3.8和(82.7±3.6)μg.L-1,与正常对照组相比明显增加(P<0.05)。溶血实验发现,SH能够引起小鼠及人血红细胞显著的溶血现象。结论 SH对小鼠具有一定的急性毒性,可引起小鼠腹腔细胞LDH和组胺的释放,并且SH具有溶血作用。

基于“24 h回顾法”综合性实验设计与实施

为使学生掌握24 h回顾法,在“食品营养与健康”课程实践教学环节中,以膳食调查这一章节内容为基础,结合WS/T 426.1—2013《膳食调查方法 第1部分:24小时回顾法》设计综合实验项目“在校大学生膳食调查设计实施及分析”。实验内容包含连续3 d的24 h回顾法膳食调查、膳食调查数据的计算、膳食结构分析、能量与各种营养素分析、DRIs比较评价、膳食调查报告与汇报6个部分。通过综合性实验的实施,结果显示,学生学习积极性得到提升,重点知识掌握程度加深,学生营养知识的运用能力和语言表达等综合素质获得提升。

即时性图像法应用于学龄儿童膳食评估的效果评价

目的:将即时性图像法膳食调查技术应用于学龄儿童膳食评估,并进行效果评价,为学生营养改善计划中膳食评估方法的改良提供参考。方法:在贵州省龙里县民族完全中学和铜仁市正光小学各招募20名学生,分别使用称重法、24小时回顾法、即时性图像法对其进行膳食评估,通过相关性分析及配对t检验/Wilcoxon秩和检验对即时性图像法和24小时回顾法分别与称重法的一致性进行评价。结果:相关性分析结果显示,即时性图像法与称重法的相关性更优,数据的分布更集中于线性趋势(r=0.954,P<0.01),配对t检验或秩和检验结果显示,即时性图像法与称重法数据的差异较小,四分位数间距较小(P<0.01)。24小时膳食回顾法在单个膳食或是总膳食都高估了食物摄入量(d=4.00±16.00,P<0.001),而即时性图像法对总膳食的评估则没有出现这种情况(d=0.00±8.63, P=0.852)。结论:即时性图像法应用在学龄儿童膳食摄入量评估中显示出相对有效性,有望应用于农村义务教育学生营养改善计划。