雷公藤甾醇C-24甲基转移酶(TwSMT2)的cDNA克隆及表达分析

24-烷基甾醇具有构成膜结构和调节植物生长发育的作用,本研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据,克隆得到雷公藤甾醇生物合成途径上的一个重要限速酶:甾醇C-24甲基转移酶(SMT),其c DNA全长1 631 bp,开放阅读框1 080 bp,编码359个氨基酸。在线预测所编码蛋白的理论等电点为6.43,分子质量为40.0 k Da。生物信息学分析结果将此SMT基因归为SMT2家族。进一步构建p MAL-c2X-Tw SMT2重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3),茉莉酸甲酯诱导表达分析结果显示:相比于对照组,经诱导后的Tw SMT2基因在24 h处有显著提高。SDS-PAGE及Western blot检测蛋白表达结果显示,IPTG可诱导表达出Tw SMT2蛋白。本研究首次克隆得到Tw SMT2基因,并获得重组蛋白,为进一步阐述雷公藤甾醇生物合成途径奠定基础。