达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇对胃癌细胞增殖的抑制作用

目的前期研究发现中药连翘醇提物具有明显体外抑制肿瘤细胞的作用,文章进一步探讨从中药连翘提取的化合物达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇(Dammar-24-ene-3β-acetate-20S-ol,DM)体外抗肿瘤作用及其机制。方法采用MTT法检测DM对胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823和MKN-45体外抑制作用。实验分为MKN-45对照组及其低、高剂量组,BGC-823对照组及其低、高剂量组,SGC-7901对照组及其低、高剂量组,对照组均为新鲜培养基,低剂量DM为10、50μg/m L,流式细胞仪检测凋亡细胞比例。应用Cell Quest软件分析结果,记录细胞不同周期的比例。采用DCFH-DA探针检测ROS水平,实验分为空白对照组,多西紫杉醇组和DM组。配置微管聚集实验反应体系,其中多西紫杉醇10μmol/L,DM终浓度选择50或100μmol/L,空白对照组不加药物,采用微管聚集实验和微管蛋白免疫荧光染色研究DM对于微管系统的影响。结果 50μg/m L对于3株胃癌细胞抑制率均在80%以上,IC50分别为:MKN-45(11.72±1.35)μg/m L;BGC-823(17.19±0.82)μg/m L;SGC-7901(7.55±0.79)μg/m L。2μg/m L DM处理48 h后再以低密度培养8 d,细胞克隆较对照组明显减少。与MKN-45对照组凋亡细胞[(21.1±2.5)%]相比,MKN-45低剂量组和高剂量组凋亡细胞比率[(25.1±1.3)%和(55.2±2.3)%]均有明显升高(P<0.01)。BGC-823对照组凋亡细胞百分率(13.2±2.4)%比较,BGC-823低、高剂量组凋亡细胞百分率[(18.2±2.1)%、(41.8±2.8)%]明显升高(P<0.01)。与SGC-7901对照组凋亡细胞率[(10.5±1.8)%]比较,SGC-7901高剂量DM组凋亡细胞率[(21.1±1.9)%]升高(P<0.05),而与SGC-7901低剂量DM组[(12.3±1.6)%]差异无统计学意义(P>0.05)。与MKN-45对照组比较,MKN-45低剂量组S期细胞百分率降低[(14.5±2.7)%vs(12.3±3.3)%,P>0.05]。与BGC-823对照组比较,BGC-823低剂量组细胞S期百分率增加[(12.2±5.4)%vs(20.2±2.1)%,P<0.05]。与SGC-7901对照组比较,SGC-7901低剂量组S期细胞百分率增加[(21.5±3.8)%vs(31.3±2.6%),P<0.05]。检测DM处理后细胞内活性氧水平研究发现,10、50μg/m L DM处理48 h 3株细胞均可见剂量依赖性ROS水平上升。微管蛋白免疫荧光染色可见采用IC50浓度的多西紫杉醇和10μg/m L DM处理48 h后,MKN-45荧光信号均表现为局部浓聚、紊乱。结论达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇能够将胃癌细胞周期阻滞于S期,诱导细胞凋亡,从而抑制细胞增殖作用。

24-亚甲基胆甾-4-烯-3β,6α-二醇的结构表征

对采用硼氢化钾 -乙醇还原 4 烯 3,6 二酮类型的甾酮化合物所获得产物的结构进行了分析 ,提出了与文献不同的观点 .并通过IR ,1HNMR ,13 CNMR等谱图数据对 2 4 亚甲基胆甾 4 烯 3β ,6α

24-亚甲基胆甾-4-烯-3β,6β-二醇的合成

从豆甾醇出发,先合成了胆甾＿5＿烯＿24＿酮＿3β＿乙酸酯(2);再用过甲酸将2的5,6位双键氧化为环氧化物,后者在碱性条件下立体专一地开环得胆甾＿3β,5α,6β＿三羟基＿24＿酮(3),用醋酐将化合物3的C3＿βOH和C6＿βOH乙酰化保护后用亚硫酰氯脱水得胆甾＿4＿烯＿24＿酮基＿3β,6β＿二乙酸酯(4),4在碱性条件下脱去乙酰基得胆甾＿4＿烯＿3β,6β＿二羟基＿24＿酮(5);化合物5通过Wittig反应将C＿24羰基亚甲基化得到目标化合物24＿亚甲基胆甾＿4＿烯＿3β,6β＿二醇1,总产率为26%。合成化合物1的光谱数据与分离得到的天然物完全一致。

24-亚甲基胆甾-5-烯-3β,19-二醇的合成

从豆甾醇出发 ,通过 1 0步反应 ,合成得到具有显著细胞毒活性的 2 4-亚甲基胆甾 -5 -烯 -3β,1 9-二醇( 1 ) ,总产率为 1 6% .目标产物 1的熔点、 [α]值和波谱数据与天然产物一致 .化合物 1的合成是首次报道 ,它对人体鼻咽癌 ( CN2 )和胃癌 ( Mgc80 3 )细胞有显著抑制活性 .

(22E,24R)-3α-5-环-5α-麦角甾-7,22-二烯-6-酮的合成方法改进

改进了(22E,24R) 3α 5 环 5α 麦角甾 7,22 二烯 6 酮的合成方法,使之更加有利于工业化的条件.

转化植物甾醇产22-羟基-23,24-双降甾-1,4-二烯-3-酮(HPD)工程菌株的构建及发酵培养基优化

22-羟基-23,24-双降甾-1,4-二烯-3-酮(HPD)作为一种重要的甾体药物中间体,是合成很多皮脂类药物的原材料。通过在分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum DSM 1381)体内过表达3-甾酮-Δ^(1)脱氢酶(KstD)基因,Mycobacterium neoaurum DSM 1381Z菌株发酵液中HPD的产量由71%提高到84%。在单因素选择的基础上,以产物HPD的产量作为衡量指标,利用响应面方法优化发酵培养基,建立各个因素之间变化的二次回归方程。结果表明,最合适的发酵培养基组成条件是玉米浆9 g/L、硝酸钠1.8 g/L、葡萄糖6 g/L、磷酸氢二钾2 g/L。此条件下5 g/L的植物甾醇,HPD的产量可达3.73 g/L,HPD的产量比原始菌株提高了大约2.7倍,具备潜在的工业化应用价值。

(22E,24S)-2α,3α-二羟基-5α-豆甾烷-22-烯-6-酮的环氧化及其立体异构体的分离

用过氧乙酸把(22E,24S)-2α,3α-二羟基-5α-豆甾烷-22-烯-6-酮转化成相应的环氧化物,用液相色谱分离两种立体异构体并用核磁共振数据确定了结构,比较了3种过氧酸的反应性能.

珠子参皂苷合成途径3个关键酶基因CAS、DS和β-AS时空表达分析

旨在明确环阿屯醇合成酶(CAS)、达玛烯二醇合成酶(DS)和β-香树酯合成酶(β-AS)基因在珠子参中的时空表达情况及其与总皂苷含量的关系。以珠子参叶、茎、花和根状茎为材料,采用实时荧光定量技术检测了3个酶基因在不同时期的表达情况,并分析了基因表达与总皂苷含量之间的关系。CAS、DS和β-AS均在珠子参地上部分高表达,在根状茎中低表达;5—9月间CAS在根状茎中的表达呈现出"高—低—高"的趋势,而DS和β-AS则表现出相反的趋势;珠子参总皂苷含量变化呈"S"型曲线,其前期含量与DS和β-AS的表达呈正相关关系。推测珠子参皂苷最初和主要的合成部位为叶,根状茎可能是后期部分皂苷合成的场所。

连翘三萜类化合物对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制及放疗敏感性的实验研究

目的探讨连翘三萜类化合物达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇(DM)对人前列腺癌PC-3细胞的增殖抑制及放疗增敏作用。方法采用流式细胞术检测不同浓度DM液对PC-3细胞周期、凋亡的影响;PC-3细胞接受6-mVX线照射,用克隆形成法检测细胞存活分数、计算放疗增敏比;端粒重复序列扩增法检测DM对PC-3细胞端粒酶活性的抑制作用;实时定量PCR测定DM对PC-3细胞周期相关基因表达的影响。结果 DM可诱导PC-3细胞凋亡,其作用6 h后肿瘤细胞端粒酶活性降低,48 h后渐恢复至正常。DM可使细胞周期相关基因p21、TGF-β、Smad3表达增加,Cyclin D1、CDC25A表达降低(P均<0.05)。DM有放疗增敏作用,其放疗增敏比为1.80。结论 DM可诱导PC-3细胞凋亡,抑制其细胞端粒酶活性,调节细胞周期相关基因表达,对前列腺癌PC-3细胞有放疗增敏作用。

抑制齐墩果烷型人参皂苷合成支路对达玛烷型人参皂苷生产能力的影响

表达反义βAS的5个人参发根系在液体培养条件下生长30天后,齐墩果烷型人参皂苷R0含量比对照实验组均有所降低,幅度分别达13%～40%;达玛烷型人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf和Rg1含量在5个发根系中均有所增加,其中发根系A19的上述单体皂苷含量总和比对照实验组提高了30%;培养过程中达玛烷型人参皂苷含量呈逐渐增加趋势。5个发根系的βAS酶活性比对照实验组均有所下降,最多下降30%,DAS酶活性被上调,尤其发根系A19的酶活性比对照实验组提高了20%;化学分析结果显示,5个发根系人参皂苷前体物2,3-氧化角鲨烯的含量比对照实验组均有所提高。

连翘三萜类化合物对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡诱导机制的研究

目的:观察连翘中分离所得两种三萜类化合物:达玛-24-烯-3β-乙酰氧基-20s-醇[20(s)-dammar-24-ene-3β,20-diol-3β-acetate,DM]和五环齐墩果烷型三萜类化合物安博立酸(ambrolicacid,AA)对5种人消化道肿瘤细胞的抑制作用,以及AA对人胃癌细胞株SGC-7901的凋亡诱导作用。方法:MTT法观察AA和DM对5株人消化道肿瘤细胞株MKN-45、MKN-28、SGC-7901、PNAC-1、HepG-2的生长抑制作用,Annex-in-V/PI染色流式细胞术测定SGC-7901细胞的凋亡率,Western blotting检测相关凋亡蛋白表达。结果:两种三萜类化合物对人消化道肿瘤细胞有较好的抑制作用,其作用呈剂量依赖性;AA作用细胞72h后可以明显诱导细胞凋亡,而DM对细胞未有凋亡诱导作用;AA可下调pro-caspase3、6、8、9蛋白和Bcl-2蛋白表达水平,同时可上调Bax蛋白水平。结论:AA和DM对5株人消化道肿瘤细胞有明显抑制作用,AA诱导SGC-7901细胞凋亡的主要途径可能为调节凋亡相关蛋白的表达。

人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶在酿酒酵母中的表达、定位及功能研究

为了研究人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶(dammarenediol-Ⅱ synthase,DS)在酿酒酵母中的重组表达和定位,本研究克隆了人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds,并将其与绿色荧光蛋白基因gfp融合,构建了相应的重组表达质粒pESC-HIS-DS和pESC-HIS-DS-GFP,转化酿酒酵母INVSc1,获得了重组菌INVSc1-DS和INVSc1-DS-GFP。通过差速离心法制备重组菌微粒体,荧光显微镜下观察达玛烯二醇-Ⅱ合酶的表达及亚细胞定位,并通过酶促反应对该酶进行了功能鉴定,结果表明,DS为膜结合型蛋白,在体外能催化2,3-氧化鲨烯生成达玛烯二醇-Ⅱ。对重组菌发酵产物进行分析,结果表明,重组菌中产生了达玛烯二醇-Ⅱ,且通过将ds与gfp融合,重组菌中的达玛烯二醇-Ⅱ产量由7.53 mg·g^(-1)提高到12.24 mg·g^(-1),该结果为优化在酿酒酵母中构建的人参皂苷代谢途径提供了新思路。

金点口蘑子实体提取物(22E,24R)-麦角-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1的刺激作用

对39种日本秋田县产蘑菇的提取物诱导小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞的分化活性进行筛选，以期寻找抗骨质疏松的化合物。

The blood-brain barrier permeability of 20(S) and 20(R)-protopanaxatriol epimers and dammar-20(22)E,24-diene-3β,6α,12β-triol in MDCK-pHa MDR cell monolayer model

The blood-brain barrier permeability of 20（S） and 20（R）-protopanaxatriol epimers and dammar-20（22）E,24-diene- 313,6α,12β-triol were investigated using the MDCK-pHaMDR cell monolayer model. The bidirectional permeability tests were carried out, and the apparent permeability coefficients （Papp） were calculated. The two protopanaxatriol epimers showed good permeability with Papp values of-10^-5 cm/s, whereas dammar-20（22）E,24-diene-3β,6α, 12β-triol showed poor permeability with Papp of 〈1 × 10^-7 cm/s. The three compounds showed differences in intracellular accumulations due to their different structures. Inhibition of P-gp with verapamil showed that the transport mechanisms in MDCK-pHaMDR cell monolayer for compounds 1 and 2 epimers were not only simple passive diffusion but also involving an effiux way mediated by P-gp. These findings provided new basis for the further study of compounds 1 and 2 acting on the brain.

西洋参茎叶总皂苷碱降解成分

目的研究西洋参茎叶总皂苷碱降解成分。方法采用硅胶柱色谱并结合HPLC进行分离纯化,通过波谱分析鉴定化合物的结构。结果从西洋参茎叶总皂苷碱降解产物中分离得到9种成分,分别鉴定为:20(S)-原人参二醇(I),20(S)-达玛-25(26)-烯-3,β12,β20-三醇(II),24(R)-ocotillol(III),20(S)-原人参三醇(IV),20(S)-达玛-25(26)-烯-3,β6,α12,β20-四醇(V),达玛-20(21),24-二烯-3,β12β-二醇(V I),达玛-20(21),24-二烯-3,β6,α12β-三醇(V II),20(S),24(S)-达玛-25(26)-烯-3,β6,α12,β20,24-五醇(V III),20(S)-达玛-23-烯-25-过氧羟基-3,β6α,12,β20-四醇(IX)。结论碱降解20位S构型未改变。V,V II,V III,IX为4个新化合物,并利用2D-NMR技术对新化合物的氢和碳的化学位移进行了归属。其中I对HCT-8人结肠癌细胞具有较强的细胞毒活性。

文冠果果壳中两种甾醇成分的结构研究

目的 首次研究文冠果果壳的化学成分。方法 采用柱色谱和光谱方法。结果 从文冠果果壳中分得 2种甾醇 ,经鉴定为 :(3β,5α,2 0 R,2 4S) -豆甾 - 7,反 - 2 2 -二烯 - 3-醇和 (3β,5α,2 0 R,2 4R) -豆甾 - 7-烯 - 3-醇。结论

白车轴草化学成分的分离与鉴定

目的为白车轴草(Trifolium repensL.)的药效物质基础提供依据。方法利用制备薄层、反复硅胶、Sephadex LH-20、开放ODS柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质及波谱分析对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果分离得到10个化合物,分别鉴定为伞形花内酯(umbelliferon,1)、芒柄花素(formononetin,2)、水杨酸(salicylic acid,3)、双白瑞香素(daphnoretin,4)、4′-methoxy-coumestrol(5)、trifoliol(6)、美迪紫檀素(medicarpin,7)、环阿尔廷-25-烯-3β,24ξ-二醇(cycloart-25-en-3β,24ξ-diol,8)、3β-hydroxy-7α-methoxy-24β-ethyl-cholest-5-ene(9)、soyasapogenol B(10)。结论化合物8、9为首次从车轴草属植物中分离得到,化合物1、3、4为首次从白车轴草中分离得到。

人参花醇提物中的皂苷类化学成分

目的：研究人参Panax ginseng C.A.Meyer（Araliaceae）花中的皂苷类成分。方法：采用多种色谱技术对人参花的醇提物进行分离纯化,并根据理化性质和波谱学数据对化合物进行结构鉴定。结果：从人参花70%乙醇水溶液提取物中分离得到11个化合物,分别鉴定为人参皂苷Re（1）、20（R）-人参皂苷Rg1（2）、20（S）-人参皂苷Rh1（3）、20（R）-人参皂苷Rh1（4）、人参皂苷Rd（5）、人参皂苷F1（6）、人参皂苷F5（7）、人参皂苷F3（8）、20（S）-原人参三醇（9）、达玛-20（21）,24-二烯-3β,6α,12β-三醇（10）和达玛-（E）-20（22）,24-二烯-3β,6α,12β-三醇（11）。结论：化合物3、9~11为首次从人参花中分离得到。

人参茎叶总皂苷碱水解产物中的新人参皂苷20(R)-人参皂苷Rh(19)

目的研究人参Panax ginseng茎叶总皂苷碱水解产物的化学成分。方法采用硅胶柱色谱及半制备高效液相色谱等方法进行分离、纯化,通过NMR、MS等谱学方法进行化学结构鉴定。结果从人参茎叶总皂苷的碱水解产物中共分离鉴定了30个化合物,报道其中的1个新化合物和27个已知化合物,分别为20（S）-原人参二醇（1）、20（R）-原人参二醇（2）、达玛-20（21）,24-二烯-3β,6α,12β-三醇（3）、达玛-20（22）E,24-二烯-3β,6α,12β-三醇（4）、20（S）-原人参三醇（5）、20（R）-原人参三醇（6）、20（S）-人参皂苷Rh_2（7）、20（R）-人参皂苷Rh_2（8）、人参皂苷Rh_16（9）、异人参皂苷Rh_3（10）、20（S）-达玛-3β,6α,12β,20,25-五醇（11）、20（R）-达玛-3β,6α,12β,20,25-五醇（12）、人参皂苷Rk_3（13）、20（S）-人参皂苷Rh_1（14）、20（R）-人参皂苷Rh_1（15）、人参皂苷F_1（16）、人参皂苷Rh_19（17）、20（R）-人参皂苷Rh_19（18）、达玛-20（22）E-烯-3β,6α,12β,25-四醇（19）、三七皂苷T_2（20）、人参皂苷Rg_6（21）、20（22）E-人参皂苷F_4（22）、人参皂苷Rk_1（23）、20（S）-人参皂苷Rg_3（24）、20（R）-人参皂苷Rg_3（25）、20（S）-人参皂苷Rg_2（26）、20（R）-人参皂苷Rg_2（27）和3β,6α,12β,25-四羟基-达玛-20（22）E-烯-6-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷（28）。结论化合物18为1个新的化合物;3、4、11、12和19是稀有达玛烷型三萜;7~10、13~18和20~28是稀有人参皂苷。

羟基胆烷酸类和羟基胆甾烷类化合物的体内抗癌活性研究

目的 考察3β,5α,6β-三羟基胆烷-4-酸甲酯(LS01)、胆甾烷-3β,5α,6β-三醇(LS19)和胆-4-烯-3β,6β-二醇(LS20)的体内抗癌活性和急性毒性.方法 体内抗癌活性实验按<抗肿瘤药药效学技术要求>的规定进行.急性毒性实验按常规方法进行.结果 灌服和腹腔注射LS20对小鼠S180无明显的抑制作用;灌服和腹腔注射LS19与LS01对小鼠S180皆有明显的抑制作用,且LS19较好.灌服和腹腔注射LS01的最大耐受量分别为8000,658 mg·kg-1;灌服LS19的最大耐受量为5 000 mg·kg-1, 腹腔注射LS19的LD50及其95%置信限分别为169 mg·kg-1、152～186 mg·kg-1.结论 LS19和LS01具有一定的体内抗癌活性.