p53半剂量缺失纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松

目的:探索p53半剂量缺失杂合子小鼠能否通过增强抗氧化能力纠正活性维生素D(1,25(OH)_(2)D_(3))缺乏引起的骨质疏松。方法:取10周龄高钙高磷饮食喂养的同窝野生型(wild type,WT)小鼠、p53半剂量缺失杂合子(p53^(+/-))小鼠、1α-羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)]小鼠及p53半剂量缺失的1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)]小鼠的长骨,利用X线、micro-CT、组织病理学和分子生物学等方法,比较各组小鼠血清学、长骨骨矿化、骨形成、骨吸收以及氧化应激等表达变化。结果:与WT小鼠相比,p53^(+/-)小鼠血清钙、磷、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)和1,25(OH)_(2)D_(3)水平差异无统计学意义,骨密度、总胶原(total collagen,T-col)阳性面积、成骨细胞数量、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col-Ⅰ)阳性面积均有所增加,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。与1α(OH)ase^(-/-)小鼠相比,1α(OH)ase^(-/-)p53^(+/-)小鼠血清钙、磷和PTH差异无统计学意义,血清中检测不到1,25(OH)_(2)D_(3),骨密度、T-col阳性面积、成骨细胞数量、ALP和Col-Ⅰ阳性面积均明显增加,破骨细胞数量减少,活性氧水平降低,抗氧化酶SOD1表达增加。结论:p53半剂量缺失可通过增强抗氧化能力纠正1,25(OH)_(2)D_(3)缺乏小鼠的骨质疏松。

1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞内质网应激的抑制作用

目的探讨1,25(OH)_(2)VD_(3)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞内质网应激的影响,为临床上应用骨化三醇治疗足细胞损伤产生的蛋白尿提供理论依据。方法体外培养小鼠足细胞系(MPC5),随机分为对照组、AngⅡ组(10^(-6)mol/L的AngⅡ)、1,25(OH)_(2)VD_(3)组[10^(-6)mmol/L的AngⅡ+10^(-8)mol/L的1,25(OH)_(2)VD_(3)]。各组均在给药处理6、12、18、24 h后收集细胞,分别应用实时定量PCR、免疫荧光技术检测不同时间点各组样本中葡萄糖调节蛋白(GRP78)及蛋白激酶样内质网激酶(PERK)的mRNA表达量和蛋白表达情况。结果与对照组比较,AngⅡ组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著增加(P<0.01)。与AngⅡ组比较,1,25(OH)_(2)VD_(3)组GRP78、PERK mRNA表达量在各个时间点均显著降低(P<0.01或<0.05),相应的GRP78、PERK蛋白表达均较低。AngⅡ组给药处理12 h后GRP78、PERK mRNA表达量较6 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01);AngⅡ组给药处理18 h后GRP78、PERK mRNA表达量较12 h mRNA表达量均显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论AngⅡ可以诱导足细胞发生内质网应激,其发生强度与药物作用时间有关,而1,25(OH)_(2)VD_(3)能通过抑制AngⅡ诱导的足细胞内质网应激,起到保护足细胞的作用。

1,25(OH)_(2)D_(3)及VDR敲除对山羊附睾头上皮细胞β防御素家族表达的影响

旨在研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过VDR途径调节山羊附睾头上皮细胞β防御素基因表达。本试验选取3只6月龄太行黑山羊,分别采集附睾头组织。采用差速贴壁法分离山羊附睾头上皮细胞,用细胞免疫荧光鉴定上皮细胞纯度。添加100 nmol·L^(-1)1,25(OH)_(2)D_(3)处理附睾头上皮细胞以及筛选出敲除效率最高的pCas9/gRNA1质粒载体进行细胞转染,同时设置阴性对照组和空白对照组,每组3个重复孔。附睾头上皮细胞经1,25(OH)_(2)D_(3)处理以及VDR基因敲除后,分别用qRT-PCR检测VDR和17种β防御素基因的表达,用Western blot检测VDR蛋白和3种β防御素蛋白的表达。结果表明,1,25(OH)_(2)D_(3)能极显著提高VDR、gBD124、gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.01),同时极显著提高gBD104、gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD113、gBD116、gBD120、gBD 121以及gBD 123基因的表达(P<0.01),显著提高gBD106、gBD127、gBD 129以及gBD 134基因的表达(P<0.05),而对gBD 110like和gBD 128基因没有显著影响(P>0.05);3个基因敲除载体进行细胞转染后,pCas9-VDR-V1组VDR蛋白表达极显著降低(P<0.01)。VDR基因敲除极显著降低gBD124的mRNA和蛋白表达(P<0.01),显著降低gBD126和gBD104a的mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时VDR基因敲除组gBD 109tr1、gBD 109tr2、gBD116、gBD123、gBD127、gBD 128以及gBD 134基因的表达极显著低于其他组(P<0.01),VDR基因敲除组gBD104、gBD106、gBD 120以及gBD 129基因的表达显著低于其他组(P<0.05),而对gBD121、gBD 110like以及gBD 113的相对表达则无显著影响(P>0.05)。综上所述,1,25(OH)_(2)D_(3)可以上调VDR和部分β防御素表达;VDR基因敲除后降低部分β防御素表达,结果表明1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调VD/VDR信号通路关键基因VDR的表达调控山羊附睾头上皮细胞部分β防御素表达。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解胶原诱导的关节炎

目的 探讨1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25-dihydroxy vitamin D3,1,25(OH)_(2)D_(3)]对胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠关节滑膜炎症和骨破坏的抑制作用及机制。方法 30只DBA/1J小鼠被均分为3组:对照组(CON)、模型组(CIA)和模型干预组(VD)。CIA组和VD组小鼠建立CIA模型,用1,25(OH)_(2)D_(3)对VD组CIA模型进行治疗。用游标卡尺测量小鼠后足爪的肿胀程度。用Micro-CT测量小鼠后足爪的骨密度。酶联免疫吸附剂测定法检测小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)和炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的水平。流式细胞术检测小鼠脾脏Th17细胞和Treg细胞的比例。采用苏木精-伊红染色观察膝关节的病理特征。Western blot检测小鼠踝关节的蛋白OPG、RANKL、NF-κB和VDR的表达水平。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)并没有降低CIA模型的发病率,但却明显缓解了关节炎症。VD组的脚掌厚度、关节炎评分以及膝关节HSS评分均较CIA组明显降低(P均<0.05)。CIA组的骨破坏程度更加明显,BMD及BV/TV明显低于VD组(P均<0.05)。VD组的IL-1β、IL-6、TNF-α水平和Th17/Treg细胞比例明显低于CIA组(P均<0.05)。与CIA组相比,VD组踝关节的VDR和OPG蛋白水平明显增加(P均<0.05),NF-κB和RANKL蛋白水平明显低于CIA组(P均<0.05),RANKL/OPG的比例也明显低于CIA组(P<0.05)。结论 1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过调节Th17/Treg比值和RANKL/OPG轴缓解CIA模型小鼠的关节滑膜炎症并抑制骨破坏。

血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平动态监测在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值

目的:探讨血清移动抑制因子(MIF)、25-羟维生素D_(3)(25-(OH)D_(3))、Toll样受体2(TLR2)mRNA水平动态监测在活动性肺结核患者疾病转归评估中的应用价值。方法:选取我院2019年3月-2021年5月收治且完成随访的118例活动性肺结核患者为研究对象,治疗6个月后随访6个月,根据疾病复发情况将患者分为复发组(17例)和未复发组(101例)。比较两组治疗前、治疗2、4、6个月后血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平,分析血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平与疾病转归相关性,偏回归分析影响肺结核患者疾病转归的危险因素,比较不同高低水平复发风险度。结果:复发组治疗2、4、6个月后血清MIF、TLR2mRNA水平高于未复发组,25-(OH)D_(3)水平低于未复发组(P<0.05);Spearman分析,治疗2、4、6个月后血清MIF、TLR2mRNA水平与疾病复发呈正相关,血清25-(OH)D_(3)水平与疾病复发呈负相关(P<0.05);Logistic分析显示,血清MIF、TLR2 mRNA、25-(OH)D_(3)水平为活动性肺结核患者疾病复发的独立危险因素(P<0.05);治疗后血清MIF、TLR2 mRNA高水平、血清25-(OH)D_(3)低水平的复发风险较高(P<0.05)。结论:动态监测血清MIF、25-(OH)D_(3)、TLR2mRNA水平变化对预测活动性肺结核患者疾病转归的状况存在指导效果。

25-羟基维生素D_(3)对产蛋后期蛋鸡的蛋品质和输卵管炎症的影响

试验旨在比较蛋鸡产蛋后期日粮中添加高水平(125μg/kg)维生素D_(3)(VD_(3))、25-羟基维生素D_(3)(25-OH-D_(3))与普通水平(62.5μg/kg)VD_(3)对蛋品质、血清免疫球蛋白水平、输卵管黏膜形态和炎性细胞因子基因表达量的影响。采用单因素试验设计,将60周龄产蛋后期的罗曼灰蛋鸡1512只随机分为3个日粮处理组,每个处理12个重复,每个重复42只鸡。试验持续12周。对照组为基础日粮中添加普通水平(62.5μg/kg)的VD_(3),试验组分别为在基础日粮中添加高水平(125μg/kg)的VD_(3)或25-OH-D_(3)。结果表明:与对照组相比,第12周时蛋鸡25-OH-D_(3)组鸡蛋的蛋白高度、哈夫单位和粗蛋白含量都显著提高(P<0.05),25-OH-D_(3)组蛋鸡血清免疫球蛋白A、免疫球蛋白M和免疫球蛋白G含量显著提高(P<0.05),25-OH-D_(3)组输卵管黏膜的褶皱宽度、褶皱高度和上皮层厚度显著提高(P<0.05),VD_(3)组和25-OH-D_(3)组输卵管黏膜炎性细胞因子白介素1β、白介素8、肿瘤坏死因子的m RNA表达量显著降低(P<0.05)。综上所述,在日粮中添加125μg/kg 25-OH-D_(3)能提高产蛋后期蛋鸡的蛋品质、机体免疫功能,减缓输卵管炎症。

1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染的高糖条件下HMC细胞TGF-β1/Smad3及Col-Ⅳ表达的影响

目的观察高糖环境下1,25(OH)_(2)D_(3)对miR-130b转染肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad3、Col-IV表达水平的变化,探索1,25(OH)_(2)D_(3)是否可通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。方法HMC细胞传代培养,miR-130b mimics及miR-130b inhibitor经LipofectamineTM 2000转染肾小球系膜细胞,依据分组加入1,25(OH)_(2)D_(3)1.0×10^(-8) mol/L,37℃、5%CO_(2)饱和湿度条件下继续培养48 h,共分为6组:①空白对照组;②细胞+无水乙醇组(A组);③细胞+miR-130b mimics+无水乙醇组(B组);④细胞+miR-130b mimics+1,25(OH)_(2)D_(3)组(C组);⑤细胞+miR-130b inhibitor+无水乙醇组(D组);⑥细胞+miR-130b inhibitor+1,25(OH)_(2)D_(3)组(E组)。以实时荧光定量PCR检测细胞miR-130b及TGF-β1、Smad3、Col-IVmRNA的表达水平,以Western blot方法检测细胞TGF-β1、Smad3、Col-IV蛋白的表达水平。采用多组间比较的单因素方差分析及组内两两比较采用LSD、Dunnett s T3法比较各组数据。结果空白对照组与A组细胞miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平,差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,B组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显升高(P<0.05),D组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。经1,25(OH)_(2)D_(3)治疗发现,与B组相比,C组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05),与D组相比,E组miR-130b、TGF-β1、Smad3、Col-IV表达水平明显降低(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)可降低miR-130b转染肾小球系膜细胞miR-130b及纤维化相关因子TGF-β1、Smad3、Col-IV的表达水平,1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过miR-130b改善糖尿病肾病肾脏纤维化的过程。

1,25(OH)_(2)D_(3)对实验性自身免疫性神经炎大鼠肠道菌群的影响

目的:16S rDNA高通量测序观察1,25(OH)_(2)D_(3)对实验性自身免疫性神经炎肠道菌群的影响。方法:采用人工合成P0180-199肽段与完全弗氏佐剂混合免疫Lewis大鼠建立EAN模型,1,25(OH)_(2)D_(3)末次灌胃后无菌收集粪便,采用Illumina Miseq PE300型高通量测序仪检测肠道菌群16S rDNA V3-V4可变区,分析肠道菌群结构和丰度变化。结果:1,25(OH)2D3干预可调节EAN大鼠肠道菌群Alpha、Beta多样性,提高菌群丰度、多样性指数。EAN大鼠粪便Verrucomicrobiaceae、Enterobacteriaceae显著增加,Lachnospiraceae、Ruminococcaceae显著减少,均在1,25(OH)_(2)D_(3)干预后回调。结论:1,25(OH)_(2)D_(3)对EAN大鼠肠道菌群有调节作用,肠道微生态的变化可能用于解释EAN的发病机制。

1，25-(OH)_2D_3对体外培养围产期奶牛外周血淋巴细胞转化率及γ-干扰素(IFN-γ)的影响

体外培养围产期奶牛外周血淋巴细胞,分别添加0、0.01、0.1、1、10和100nM的1,25(OH)_2D_3,研究1,25-(OH)_2D_3对奶牛外周血淋巴细胞免疫功能的影响。结果表明,1,25-(OH)_2D_3对淋巴细胞转化率没有影响,但可以通过抑制IFN-γ的分泌影响奶牛的细胞免疫功能。添加0.01～100nM的1,25-(OH)_2D_3对淋巴细胞的转化率没有显著影响,但剂量依赖性抑制了ConA和PWM诱导的淋巴细胞IFN-γ的产量。当1,25(OH)_2D_3浓度达到0.1nM、1nM时与对照组相比分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)抑制ConA诱导的淋巴细胞IFN-γ的产量。以PWM激活的细胞在培养48h、72h,1,25-(OH)_2D_3添加量在0.1～100nM范围均极显著抑制IFN-γ的产生(P<0.01)。添加0.01nM 1,25(OH)_2D_3对IFN-γ的抑制作用相对较小(P>0.05),在培养48h后并未表现出显著的抑制作用,但培养72h后也极显著的抑制了IFN-γ的产生(P<0.01)。

1,25(OH)_(2)D_(3)以双向方式影响猪前体脂肪细胞增殖分化的研究

1,25(OH)_(2)D_(3)是维生素D的主要活性形式,影响人和动物脂肪形成,为探究其在猪脂肪细胞增殖分化中的作用,试验从3~5日龄仔猪皮下脂肪组织分离培养前体脂肪细胞,并以浓度为0、0.1、1、10、100和1000 nmol/L的1,25(OH)_(2)D_(3)分别处理,在培养的0、1、2、4、6、8和10 d采用MTT比色法检测细胞增殖活性;在诱导分化后0、1、2、4、6、8和10 d,以油红O染色提取法和实时荧光定量PCR检测细胞成脂分化及分化标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂肪酸合成酶(FAS)表达。结果显示,0.1和1 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)显著促进猪前体脂肪细胞增殖(P<0.05),而浓度为10~100 nmol/L时则抑制细胞增殖(P<0.05);0.1和1 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)显著抑制猪前体脂肪细胞分化(P<0.05),降低PPARγ和FAS mRNA表达水平(P<0.05),但在浓度为10和100 nmol/L时,显著促进猪前体脂肪细胞分化(P<0.05),上调PPARγ和FAS mRNA表达(P<0.05);浓度达1000 nmol/L时,可能对细胞有毒性作用。综合以上结果,低浓度1,25(OH)_(2)D_(3)促进猪前体脂肪细胞增殖,而通过下调PPARγ表达抑制分化;高浓度1,25(OH)_(2)D_(3)抑制猪前体脂肪细胞增殖,通过上调PPARγ表达促进分化。1,25(OH)_(2)D_(3)对猪前体脂肪细胞增殖和分化具有双向作用。

1,25(OH)_(2)D_(3)联合NF-κB p65 siRNA保护肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨1,25(OH)_(2)D_(3)与核转录因子-κB(NF-κB)p65 siRNA单独或联合作用对肺炎链球菌(SP)感染的肺泡上皮细胞增殖、凋亡的影响。方法:分别使用1,25(OH)_(2)D_(3)、NF-κB p65 siRNA及二者联合处理SP感染的肺泡上皮细胞A549,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测NF-κB p65 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、Bcl2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl2)、IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p-p65蛋白表达,MTT比色法和流式细胞术分别检测细胞活力与凋亡。结果:SP明显促进A549细胞中NF-κB p65 mRNA、NF-κB p65蛋白表达、细胞凋亡率、Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p-p65表达(P<0.05),显著抑制相对细胞活力、Bcl2表达(P<0.05)。1,25(OH)_(2)D_(3)、NF-κB p65 siRNA以及1,25(OH)_(2)D_(3)联合NF-κB p65 siRNA处理均明显抑制SP感染的A549细胞中NF-κB p65 mRNA、NF-κB p65蛋白表达、细胞凋亡、Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p-p65表达(P<0.05),提高细胞活力、Bcl2表达(P<0.05),并且1,25(OH)_(2)D_(3)联合NF-κB p65 siRNA对SP损伤A549细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用更强。结论:1,25(OH)_(2)D_(3)联合NF-κB p65 siRNA对SP感染的肺泡上皮细胞损伤具有保护作用,且效果优于1,25(OH)_(2)D_(3)或NF-κB p65 siRNA单独作用,机制可能与调控炎症因子、NF-κB信号通路有关。

慢性肾衰竭血液透析患者血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平变化及与甲旁亢的相关性

目的探究慢性肾衰竭血液透析患者血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平变化及与甲状旁腺功能亢进(简称“甲旁亢”,HPT)的相关性。方法回顾性分析2018年3月至2019年6月我院收治80例慢性肾衰竭患者的临床资料,其中40例接受血液透析治疗,余40例接受常规治疗,分别为血透组、对照组,治疗3个月后比较两组血清1,25-二羟维生素D[1,25(OH)_(2)D_(3)]、甲状旁腺激素(PTH)水平及随访1年内HPT发生率,并选择Pearson法分析HPT与血清1,25(OH)_(2)D_(3)、PTH水平的相关性。结果治疗后,血透组患血清1,25(OH)_(2)D_(3)、PTH水平明显低于对照组(P<0.05),HPT发生率明显高于对照组(P<0.05);血液透析治疗患者中,发生HPT者的血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平低于无HPT者,而PTH水平高于无HPT者(P<0.05);Pearson相关性分析显示,血液透析治疗慢性肾衰竭患者HPT与PTH水平呈正相关,与血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平呈负相关(P<0.05)。结论血液透析治疗慢性肾衰竭患者可导致血清1,25(OH)_(2)D_(3)、PTH水平降低,且增加HPT发生风险,HPT与血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平密切相关。

1,25-(OH)_2D_3通过调节miR-146a表达抑制大鼠肝纤维化发生发展机制的研究

目的本研究旨在探讨1,25(OH)_2D_3是否能通过调节肝脏内miR-146a的表达阻碍肝纤维化的进展。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、药物对照组、药物治疗组,采用皮下肌注CCl_4方式建立肝纤维化模型,药物治疗组同时给予同剂量的CCl4皮下肌注及3 mL/kg的1,25(OH)_2D_3灌胃,药物对照组给予同剂量的CCl_4皮下肌注及3 mL/kg的橄榄油灌胃。于第8周处死大鼠,采用心脏取血法行肝纤维化四项的检测,留取肝脏相同部位行石蜡切片HE染色,qreal-time PCR法检测比较各组肝组织内miR-146a的表达差异。结果与正常对照组相比,模型组SD大鼠肝纤维化程度明显增加,即肝纤维化四项中ColⅣ、PⅢNP、HA、LN明显上升(P<0.05),病理切片示模型组肝组织周围血管炎症细胞浸润,肝组织中可见大量的脂滴空泡,而药物治疗组两者程度均有明显减轻。结论 1,25(OH)_2D_3可明显减轻肝损伤,可能通过调节肝组织内miR-146a的表达量从而达到改善肝功能、阻碍肝纤维化发生发展的目的。

老年2型糖尿病患者25(OH)D_(3)、Hcy、SUA水平变化及其与骨代谢、骨密度及骨质疏松的相关性

目的探讨老年2型糖尿病患者25羟基维生素D_(3)[25(OH)D_(3)]、同型半胱氨酸(Hcy)、尿酸(SUA)水平变化及其与骨代谢、骨密度及骨质疏松的相关性。方法回顾性分析2019年1月至2020年7月上海交通大学医学院附属同仁医院收治的100例老年2型糖尿病患者的临床资料,根据骨质疏松诊断标准分组,其中T值≤-2.5为骨质疏松组26例,-2.5<T值<-1.0为骨量减少组45例,T值≥1.0为骨量正常组29例。比较三组患者的血清25(OH)D_(3)、Hcy、SUA、β-胶原特殊序列(β-CTX)、甲状旁腺素(PTH)、骨钙素(OC)水平及腰椎L_(1~4)骨密度、股骨颈骨密度、全髋骨密度、均值骨密度,并采用Pearson相关系数分析血清25(OH)D_(3)、Hcy、SUA水平与骨代谢、骨密度的相关性。结果骨质疏松组患者的血清25(OH)D_(3)水平为(9.10±1.53)μg/L,明显低于骨量减少组的(14.85±1.65)μg/L和骨量正常组的(21.20±2.21)μg/L,骨量减少组患者的25(OH)D_(3)水平明显低于骨量正常组,差异均具有统计学意义(P<0.05);骨质疏松组患者的血清Hcy、SUA水平分别为(18.23±2.18)μmol/L、(365.23±31.42)μmol/L,明显高于骨量减少组的(11.52±1.67)μmol/L、(291.05±23.18)μmol/L和骨量正常组的(7.02±1.38)μmol/L、(232.82±27.04)μmol/L,骨量减少组患者的Hcy、SUA水平明显高于骨量正常组,差异均具有统计学意义(P<0.05);骨质疏松组患者的β-CTX、PTH水平分别为(0.78±0.15)ng/mL、(11.38±2.05)pmol/L,明显高于骨量减少组的(0.57±0.09)ng/mL、(6.62±1.63)pmol/L和骨量正常组的(0.40±0.06)ng/mL、(3.85±0.87)pmol/L,骨量减少组患者β-CTX、PTH水平明显高于骨量正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);骨质疏松组患者的血清OC水平及腰椎L_(1~4)骨密度、股骨颈骨密度、全髋骨密度、均值骨密度均明显低于骨量减少组、骨量正常组,且骨量减少组患者的上述各项指标明显低于骨量正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,血清25(OH)D_(3)与β-CTX、PTH均呈负相关(P<0.05),与OC、均值骨密度呈正相关(P<0.05),血清Hcy、SUA与β-CTX、PTH均呈正相关(P<0.05),与OC、均值骨密度呈负相关(P<0.05)。结论老年2型糖尿病患者25(OH)D_(3)、Hcy、SUA水平变化与骨代谢、骨密度具有明显相关性,且与骨质疏松的发生密切相关。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过抑制TLR2/NF-κB信号通路保护实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺功能研究

目的基于TLR2/NF-κB信号通路研究1,25(OH)_(2)D_(3)对实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的保护作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、硒酵母片对照组和1,25(OH)_(2)D_(3)低、中、高剂量组。除对照组外,其余大鼠采用皮下注射甲状腺球蛋白(PTg)建立自身免疫性甲状腺炎大鼠模型,1,25(OH)_(2)D_(3)低、中、高剂量组分别给予腹腔注射0.5、1.0、1.5μg/kg 1,25(OH)_(2)D_(3)注射剂,对照组和模型组注射等量蒸馏水,硒酵母片对照组注射等量硒酵母混悬液(每天1次),连续4周。观察大鼠甲状腺组织变化,检测大鼠甲状腺功能因子、血清炎性因子、甲状腺自身抗体含量及TLR2/NF-κB信号通路相关蛋白水平及基因表达量。结果与模型组大鼠比较,1,25(OH)_(2)D_(3)各组大鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)及促甲状腺激素(TSH)水平、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及甲状腺组织TLR2、MyD88、TRAF-6和NF-κB mRNA和蛋白表达均不同程度降低,而白细胞介素-10(IL-10)不同程度增加,高剂量1,25(OH)_(2)D_(3)组与模型组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)对自身免疫性甲状腺炎大鼠的甲状腺功能有一定的改善作用,并能提高自身免疫抗体水平,其机制可能与1,25(OH)_(2)D_(3)抑制TLR2/NF-κB信号通路活性,从而调控IL-6、IL-10、IL-12和TNF-α等炎症因子释放有关。

1,25(OH)_(2)D_(3)对2型糖尿病大鼠心肌损伤的改善作用

目的:探讨1,25(OH)_(2)D_(3)对2型糖尿病大鼠心肌损伤的改善作用。方法:采用高脂高糖喂养联合腹腔注射链脲佐菌素构建2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的大鼠分为2型糖尿病组及低、中、高剂量干预组,另设正常对照组,每组8只;低、中、高剂量干预组分别每日给予0.075、0.150、0.300μg/kg溶于玉米油的1,25(OH)_(2)D_(3)灌胃,正常对照组和2型糖尿病组每日给予等量玉米油灌胃,干预12周。全自动生化分析仪检测干预前后大鼠血清空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平。干预后,比色法检测血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,HE染色观察大鼠心肌组织形态学变化,酶标法检测大鼠心肌组织中丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blot法检测心肌组织中PI3K、p-Akt、Caspase-3蛋白表达水平。结果:干预前,与正常对照组相比,2型糖尿病组及各剂量干预组大鼠血清FBG、TC、TG水平升高(P<0.05)。干预12周后,2型糖尿病组大鼠心肌组织细胞肥大、排列紊乱,与正常对照组相比,血清CK和LDH水平升高,心肌组织中MDA水平上升、SOD活性下降,PI3K和p-Akt蛋白表达水平下降,Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。与2型糖尿病组相比,中剂量或高剂量干预组大鼠FBG、TC、TG、CK和LDH水平下降(P<0.05),心肌组织损伤得到改善,心肌组织中MDA水平下降、SOD活性上升,PI3K、p-Akt蛋白表达水平升高,Caspase-3蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:1,25(OH)_(2)D_(3)可能通过激活PI3K/Akt通路,改善糖脂代谢紊乱,抑制氧化应激,减少心肌细胞凋亡,从而改善2型糖尿病大鼠心肌损伤。

1,25(OH)_(2)D_(3)通过抑制IκB/NF-κB信号通路抑制破骨细胞生成

目的研究维生素D和维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)在破骨细胞分化各阶段的作用及其机制。方法从C57BL/6小鼠四肢骨骨髓中提取原代单核巨噬细胞(bone marrow derived macrophages,BMMs),使用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear kappa B ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stlimulating factor,M-CSF)将BMMs诱导成破骨细胞。同时使用不同浓度(0.1、10、1 000 nmol/L)的1,25(OH)_(2)D_(3)进行干预,激活VDR。采用TRAP和FAK染色、噬骨实验、q PCR和Western blot等实验分析1,25 (OH)2D3对破骨细胞生成的影响。结果 1,25(OH)_(2)D_(3)作为VDR的强激动剂,在1 000 nmol/L时能高效激活VDR,在mRNA和蛋白水平均抑制破骨细胞分化早期c-Fos和NFATc1的表达,以及抑制成熟期Cts K和MMP-9的表达(P<0.05)。1 000 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)显著下调IκBα的磷酸化水平(P<0.05),从而抑制p65的核转位与磷酸化。结论 1 000 nmol/L 1,25(OH)_(2)D_(3)显著上调VDR的表达,1,25(OH)_(2)D_(3)激活VDR可通过IκBα/NF-κB p65信号通路抑制破骨细胞分化、融合和骨吸收活性。

2型糖尿病患者尿白蛋白排泄率与血清P1NP、BGP、25(OH)D_(3)水平的相关性

目的探讨2型糖尿病患者尿白蛋白排泄率(UAER)与患者血清1型胶原蛋白氨基端前胶原肽(P1NP)、骨钙素(BGP)、25-羟维生素D_(3)[25(OH)D_(3)]水平的相关性。方法回顾性分析2020年1~12月安康市中医医院收治的182例2型糖尿病患者的临床资料,按UAER水平不同分为大量白蛋白尿组(UAE>300 mg/g)40例,微量白蛋白尿组(UAER 30~300 mg/g)62例和正常白蛋白尿组(UAER<30 mg/g)80例。比较三组患者的糖尿病病程、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血清P1NP、BGP、25(OH)D_(3)水平,并采用Pearson法分析UAER和各指标的相关性。结果大量白蛋白尿组患者的糖尿病病程、FBG、HbA1c、SCr、BUN水平分别为(11.58±2.74)年、(10.12±1.37)mmol/L、(10.33±1.29)%、(77.30±5.96)μmol/L、(6.86±0.81)mmol/L,明显长于/高于微量蛋白尿组的(8.32±2.22)年、(8.90±1.14)mmol/L、(8.85±1.35)%、(68.28±5.61)μmol/L、(6.01±1.05)mmol/L和正常白蛋白尿组的(6.64±1.39)年、(7.74±1.08)mmol/L、(7.48±1.26)%、(60.55±6.94)μmol/L、(5.09±0.72)mmol/L,且微量蛋白尿组患者上述指标均明显长于/高于正常白蛋白尿组,差异均有统计学意义(P<0.05);大量白蛋白尿组患者血清P1NP、BGP、25(OH)D_(3)水平分别为(40.92±4.06)ng/mL、(7.83±1.08)ng/mL、(51.47±6.84)nmol/L,明显低于微量蛋白尿组的(47.71±4.78)ng/mL、(9.30±1.69)ng/mL、(63.33±4.91)nmol/L和正常白蛋白尿组的(56.83±5.23)ng/mL、(12.46±2.11)ng/mL、(72.80±5.04)nmol/L,微量蛋白尿组患者上述指标明显低于正常白蛋白尿组,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,UAER与糖尿病病程、FBG、HbA1c、SCr、BUN均呈正相关(P<0.05),与P1NP、BGP、25(OH)D_(3)均呈负相关(P<0.05)。结论2型糖尿病患者UAER与患者血清P1NP、BGP、25(OH)D_(3)水平具有明显相关性。

益生菌及1,25(OH)_(2)D_(3)对MAFLD作用机制及治疗的研究进展

非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)是一系列肝脏疾病,包括非酒精性脂肪肝,非酒精性脂肪性肝炎(NASH),偶尔并发肝纤维化甚至肝硬化。最近,国际专家小组将NAFLD更名为代谢相关脂肪性肝病(MAFLD),重新定义以肝脏脂肪变性为基础,与超重/肥胖、T2D、代谢紊乱相关联,并提出了一系列的诊断标准。同时取消了有无脂肪性肝炎的二分类法则,用肝脏炎症活动度和纤维化程度来划分MAFLD的疾病进程[1]。目前MAFLD在亚洲的流行率约为29.6%,可能已经超过了西方。

川崎病冠脉损伤与血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平关系

目的通过测定川崎病(KD)患儿血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平,探讨其与冠脉损伤(CAL)之间的关系。方法选取在我院儿科住院的KD患儿200例,依据是否发生CAL分成CAL组(172例)和非冠脉损伤组(NCAL,28例),并分别检测静脉内丙种球蛋白(IVIG)注射前后血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平。选取35例健康儿童作为对照组,检测其血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平,并进行比较。结果IVIG输注前:CAL组和NCAL组血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平较对照组低下(P<0.05),CAL组最低(P<0.05);IVIG输注后:NCAL组血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),CAL组血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平较NCAL组和对照组低(P<0.05);IVIG输注前后比较:CAL组和NCAL组血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平在IVIG输注后均较输注前升高(P<0.001)。结论KD患儿血清1,25(OH)_(2)D_(3)水平低下,而且血清1.25(OH)_(2)D_(3)水平越低,出现CAL的几率越大。