不育患者精子DNA碎片指数、血清25-羟化维生素D与精液常规参数的相关性分析

目的 探讨男性不育患者精子DNA碎片指数(DFI)、血清25-羟化维生素D [25(OH)VD]总量与精液常规参数的相关性。方法 回顾性分析2021年11月至2022年7月在空军军医大学第一附属医院生殖医学中心就诊的627名男性不育患者的检查数据,采用计算机辅助精子分析系统分析精液常规参数,手工法检测正常形态精子百分率,流式细胞仪分析精子DFI,液相色谱-串联质谱检测系统检测血清25(OH)VD总量,采用SPSS 25.0数据分析软件分析精子DFI与精子总数、浓度、前向运动率(PR)、总活动率、正常形态精子百分率的相关性,以及血清25(OH)VD总量与精子总数、浓度、PR、总活动率、正常形态精子百分率、精子DFI的相关性。结果 精子DFI与精子总数、浓度呈负相关,但其相关系数绝对值均<0.1,临床价值较小(r=-0.082、-0.094,P均<0.05),与精子PR、总活动率、正常形态精子百分率呈负相关(r=-0.519、-0.534、-0.327,P均<0.001),差异均具有统计学意义;血清25(OH)VD总量与精子总数、浓度、PR、总活动率无相关性(r=-0.009、-0.020、0.059、0.054,P>0.05),与正常形态精子百分率呈正相关(r=0.147,P<0.001),与精子DFI呈负相关(r=-0.294,P<0.001),差异均具有统计学意义。结论 精子DFI与精子PR、总活动率、正常形态精子百分率呈明显负相关,可以在一定程度上反映精子质量,精子DFI检测与精液常规参数可以互为补充,为全面、客观评估男性生育力提供有效信息;血清25(OH)VD总量与正常形态精子百分率呈正相关,与精子DFI呈负相关,可作为评估男性生育力的参考指标。

25-羟维生素D_3-1α-羟化酶质粒转染对角质形成细胞增殖分化和凋亡的影响

目的:研究25-羟维生素D3-1α-羟化酶(1α-羟化酶)质粒转染对角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响。方法:体外培养小鼠角质形成细胞(KC)转染1α-羟化酶后,观察细胞在形态上的变化对分化进行研究;利用Giemsa染色法和Tunel荧光素原位末端标记法对凋亡诱导作用进行观察。利用小鼠阴道上皮有丝分裂模型和小鼠尾部鳞片表皮模型对1α-羟化酶质粒转染对KC增殖和分化的影响进行研究。结果:携带1α-羟化酶的质粒转染KC可以非常显著的促进其分化,剂量与效应呈正相关;10-6mol/L的维生素D3和0.015μg/μL1α羟化酶质粒转染联合应用即可诱导KC细胞凋亡。1α-羟化酶质粒转染可以非常显著的抑制小鼠阴道上皮有丝分裂(P<0.01),显著促进小鼠尾部鳞片表皮模型中颗粒层的形成(P<0.05)。结论:1α-羟化酶质粒转染角质形成细胞可以明显抑制其增殖,促进其分化,诱导其凋亡。1α-羟化酶质粒转染为以增殖过渡分化不全为特征的皮肤病比如银屑病以及某些肿瘤的基因治疗提供了新思路。

1,25二羟维生素D3在脊柱结核治疗中的免疫调节作用

目的:观察1,25(OH)_(2)D_(3)在脊柱结核治疗中对患者免疫功能的调节作用。方法:2016年1月至2019年12月在浙江省中西医结合医院骨科就诊,诊断为脊柱结核,按照3HRZE/15HRE方案抗结核治疗的患者随机分为治疗组和对照组。对照组常规抗结核治疗,治疗组在此基础上加用1,25(OH)_(2)D_(3)软胶囊。分别观察治疗后4周、8周两组患者血清1,25(OH)_(2)D_(3)、人γ干扰素(IFN-γ)、白介素(IL)-10含量和血T淋巴细胞亚群占比的变化;分析治疗组1,25(OH)_(2)D_(3)与各指标之间相关性。结果:治疗后4周、8周,治疗组血清1,25(OH)_(2)D_(3)含量分别为(31.08±10.30)、(26.12±6.66)pg/mL,高于对照组的(26.50±8.70)、(21.29±6.82)pg/mL;治疗组血清IFN-γ含量分别为(19.85±5.12)、(22.14±6.83)pg/mL,高于对照组的(16.08±5.16)、(17.03±5.34)pg/mL;治疗后8周,治疗组血清IL-10含量为(19.18±5.46)pg/mL,低于对照组(21.92±6.03)pg/mL;治疗组血CD4+、CD4+/CD8+水平分别为(43.48±9.39)%、(1.88±0.57),高于对照组(39.05±8.71)%、(1.58±0.46);治疗组1,25(OH)_(2)D_(3)水平与CD4+、CD4+/CD8+、IFN-γ水平呈正相关,与CD8+、IL-10水平呈负相关。结论:脊柱结核患者在治疗中补充1,25(OH)_(2)D_(3)是有必要的,可以提高患者血1,25(OH)_(2)D_(3)的含量,改善免疫功能,增强抗结核的能力。

骨化三醇对脊柱结核患者维生素D代谢和骨密度影响的研究

目的探讨骨化三醇对脊柱结核患者血清25(OH)D3、1,25(OH)2D3含量和BMD的影响。方法2016年1月~2018年12月在浙江省中西医结合医院骨科就诊,诊断为脊柱结核的患者共60例随机分为治疗组和对照组,治疗组加用骨化三醇软胶囊。观察治疗后4周、8周25(OH)D3、1,25(OH)2D3含量和BMD的变化。结果治疗后4周、8周,治疗组25(OH)D3和1,25(OH)2D3含量分别为(14.05±4.60)ng/L、(16.00±4.92)ng/mL和(21.01±4.97)ng/L、(23.88±4.77)ng/L,高于对照组的(11.16±3.94)ng/L、(11.75±4.10)ng/mL和(19.34±6.09)ng/L、(18.75±6.29)ng/L,且在治疗后8周时,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后8周,治疗组腰椎和髋关节BMD分别为(0.96±0.28)g/cm2、(0.94±0.20)g/cm2,高于对照组的(0.81±0.19)g/cm2、(0.85±0.16)g/cm2,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在脊柱结核治疗过程中补充骨化三醇可以提高血清25(OH)D3、1,25(OH)2D3含量,提升BMD。

维生素D在甲状腺癌中的研究进展

甲状腺癌是世界范围内最常见的内分泌癌,近些年其发病率和死亡绝对人数不断上升,而现有辅助手术治疗的手段却相当有限。研究发现维生素D除了发挥调节钙磷平衡、骨代谢的作用外,还具有调节免疫功能、治疗甚至预防癌症等多种生物学功能。近来维生素D在甲状腺癌中的研究也正在受到人们的关注,但目前在国内的研究还很少。本文就1,25(OH)_2D_3、维生素D受体及维生素D相关代谢酶对甲状腺癌的发生、发展以及预后的潜在影响做一综述。

维生素D与肺癌

肺癌是发病率和死亡率均较高的肿瘤之一,现有的预防和治疗方法均收效甚微。维生素D的生物学特性除了通过促进机体钙的吸收进而调节多种生理功能外,其在肿瘤的预防和治疗方面也有一定的作用。肺癌的发生、发展与维生素D或其代谢物25-一羟维生素D[25(OH)D]或1,25-二羟维生素D[1,25(OH)2D]有密切的关系。在这一代谢通路中,25-羟维生素D 1-α-羟化酶和25-羟基维生素D3-24-羟化酶的活性决定了1,25(OH)2D的含量,而维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)的表达决定了1,25(OH)2D是否能有效发挥作用。本文就维生素D与肺癌的发生和预后之间的关系以及维生素D的代谢通路做一综述。

血清sRAGE、25-羟维生素-D3、NLRP3 mRNA与高血压脑出血患者发生认知功能损害的关系

目的探讨血清25-羟维生素-D3、可溶性晚期糖基化终末产物受体(sRAGE)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)mRNA与高血压脑出血(HICH)发生认知功能损害的关系。方法选取广东医科大学附属医院收治的143例HICH患者作为研究对象, 患者治疗后发生认知功能受损的患者68例(认知障碍组)、未发生认知功能障碍的患者75例(对照组);统计比较两组患者的年龄、性别、脑出血量、出血部位、血压、血糖、血脂等一般资料, 并检测两组的25-羟维生素-D3、sRAGE、NLRP3 mRNA水平, 采用多因素logistic回归分析法分析影响HICH患者发生认知功能障碍的危险因素。结果认知功能障碍组和对照组的年龄、性别、吸烟、文化程度、出血部位、糖尿病占比率、TG、TC、LDL-C、HDL-C差异均无统计学意义(P>0.05);认知功能障碍组和对照组的出血量、NIHSS评分差异具有统计学意义(P<0.05);认知功能障碍组的25-羟维生素-D3水平低于对照组(P<0.05), NLRP3 mRNA表达水平高于对照组(P<0.05), 两组患者的sRAGE差异无统计学意义(P>0.05);经logistic回归分析, 25-羟维生素-D3水平降低、出血量增大、NIHSS评分增高是HICH患者并发认知功能障碍的独立危险因素(P<0.05)。结论血清25-羟维生素-D3水平降低可能会增加HICH患者并发认知功能障碍的风险。

CYP27B1在溃疡性结肠炎肠上皮组织中的表达及其与防御素-2的关系

目的:检测人溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)患者结肠黏膜中CYP27B1和HBD-2变化,探讨维生素D在UC发病中的可能机制。方法:选择在河北医科大学第二医院消化内科诊断明确的活动期UC患者35例,应用免疫组织化学方法:、real-time PCR、western blot方法:测定正常对照、UC患者炎症和非炎症部位CYP27B1和HBD-2的表达和分布。结果:①HBD-2蛋白分布于UC炎症部位上皮细胞胞浆,炎性细胞核中也有表达。HBD-2总体表达在炎症部位较正常对照组显著升高(P<0.01);CYP27B1蛋白在正常组织、UC非炎症部位及炎症部位均表达。在上皮细胞主要位于近隐窝腺腔面细胞膜,在UC炎症部位淋巴细胞核中表达明显,炎症部位较正常对照组显著升高(P<0.05),UC炎症部位结肠上皮HBD-2和CYP27B1的表达呈正相关(r=0.710,P<0.01)。②HBD-2和CYP27B1的蛋白表达结果:显示:UC患者炎症部位二者的表达较正常黏膜均显著升高(P<0.01,P<0.05)。UC炎症部位HBD-2和CYP27B1的蛋白表达呈正相关(r=0.620,P<0.01)。③HBD-2和CYP27B1的mRNA表达结果:显示:UC患者炎症部位二者的表达较正常对照组均显著升高(P<0.01),且UC炎症部位结肠上皮HBD-2和CYP27B1的mRNA水平表达呈正相关(r=0.893,P<0.01)。结论:CYP27B1和HBD-2在病变部位显著高表达且呈正相关,CYP27B1可能参与了维生素D局部活化及调控防御素表达。

CYP27B1基因突变所致维生素D依赖性佝偻病ⅠA型患儿临床特征与基因分析

目的探讨维生素D依赖性佝偻病(VDDR)ⅠA型患儿的临床特征,以及CYP27B1基因突变情况。方法选择2019年3月至12月,于首都儿科研究所附属儿童医院内分泌科确诊为VDDRⅠA型的2例患儿(患儿1、2)为研究对象。采用回顾性研究方法,①分析其临床表现,基因检测、治疗、转归及随访结果等。②对2例患儿检出的新突变,采用MutationTaster、SIFT、PROVEAN、Polyphen-2等蛋白质功能预测软件,预测该基因新突变的致病性。按照2015年美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)制定的《ACMG遗传变异分类标准与指南》,对该基因新突变致病性进行分级。③通过比对8种灵长类及100种脊椎动物CYP27B1基因编码蛋白质序列,判断新突变位点在不同物种中的保守性。④利用Rosetta软件,对CYP27B1基因新突变后编码蛋白质建立同源3D模型,分析突变前、后蛋白质结构。本研究经首都儿科研究所伦理委员会批准(审批文号:首都儿科研究所SHERLL2020003)。结果①一般临床资料:患儿1、2均为男性患儿,年龄分别为5岁7个月和1岁8个月,分别因为"双下肢畸形3年"及"走路始步态不稳8个月",于病例收集医院住院治疗。②入院查体:身高均低于同性别、年龄健康儿童,均存在肋下缘、双膝关节外翻,双下肢呈"X"型。患儿1存在方颅畸形、"鸡胸"、肋骨"串珠"样改变。③入院时实验室及影像学检查:血钙、磷均降低,25-羟维生素D3[25(OH)-D3]稍低(患儿1)或正常(患儿2),碱性磷酸酶(ALP)、甲状旁腺素(PTH)均明显升高。腕、膝关节X射线摄片检查均可见尺、桡骨干骺端先期钙化带不规则,放射冠征、杯口征等佝偻病特征性改变。④基因检测:患儿1存在CYP27B1基因c.1358G>A与c.184C>T复合杂合突变;患儿2存在c.1325_1326insCCCACCC纯合突变,均遗传自其父母,被确诊为VDDRⅠA型。⑤治疗及随访:对2例患儿采取骨化三醇及钙剂口服治疗后分别随访15个月和22个月,佝偻病相应症状、体征好转,出现追赶生长,实验室及影像学指标恢复正常,可见干骺端光整。⑥新突变致病性及其分级:CYP27B1基因c.184C>T在人类基因突变数据库(HGMD)(http://www.hgmd.cf.ac.uk)中尚未收载,为新突变。采用MutationTaster、SIFT、PROVEAN、Polyphen-2蛋白质功能预测软件分析发现,该新突变具有致病性;根据《ACMG遗传变异分类标准与指南》,该新突变被判断为可能致病性突变。⑦新突变位点在不同物种中的保守性分析:对CYP27B1基因该新突变位点编码蛋白质序列,在8种灵长类及100种脊椎动物中的保守性分析发现,该位点高度保守。⑧新突变前、后编码蛋白质三维结构分析:采用Rosetta软件对CYP27B1基因c.184C>T突变前、后编码蛋白质同源3D模型发现,该位点突变后,第62位氨基酸由组氨酸突变成酪氨酸后,增加了与第491位苏氨酸残基的极性相互作用,可能引起编码蛋白质结构变化。结论对于血钙、磷均降低,伴有PTH升高,25(OH)-D3非明显降低患儿,需考虑VDDRⅠA型可能,应采取CYP27B1基因检测确诊。如果CYP27B1基因c.184C>T突变后续被HGMD证明是新突变,则本研究将丰富CYP27B1基因突变类型。

1α-羟化酶在重症急性胰腺炎大鼠肾脏中的表达及其意义

目的探讨1α-羟化酶在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏中的表达及意义。方法 48只Wistar大鼠随机分为假手术组(SO组)和SAP组,采用5%牛磺胆酸钠(STC)逆行胰胆管注射法建立SAP模型。分别于造模后1、3、6及12h测定血清淀粉酶、肌酐及尿素氮水平,观察胰腺和肾脏组织病理变化,并以蛋白印迹技术(Westernblot)对肾脏1α-羟化酶的表达水平和趋势进行分析。结果 SAP组大鼠术后血清淀粉酶、肌酐及尿素氮水平呈逐渐升高趋势,于1、3、6及12h明显高于SO组(P<0.05)。光镜下胰腺内出现腺体破坏、腺泡坏死、间质出血、炎性细胞浸润等病理损害,肾脏内肾小管上皮细胞出现脱落、坏死、炎性细胞浸润及管型等病理改变。SAP组大鼠肾脏组织中1α-羟化酶呈逐渐下降趋势,且自3h起明显低于SO组。结论在SAP发病过程中,随着病情的进展,肾脏1α-羟化酶的表达水平呈逐渐下降趋势,可能参与了SAP并发低钙血症的发生。

CYP27B1基因启动子多态性与溃疡性结肠炎的相关性

目的25-羟基维生素D3-1-α-羟化酶（CYP2781）是维生素D活化的关键限速酶之一，维生素D是一种重要的免疫调节因子，与溃疡性结肠炎（UC）发病有关。本研究旨在检测CYP2781基因启动子-1260位点多态性与河北地区汉族人群UC的相关性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）方法，对河北地区汉族人群UC患者138例及正常对照组141例进行CYP2781启动子-1260位点多态性的检测。结果UC组CYP2781启动子区域-1260位点CC基因型频率及C等位基因频率明显高于正常对照组（57．3％VS36．2％，χ2=12．450，P〈0．01，OR=2．363，95％CI=1．466～3．812；75．0％vs59．2％，χ2=15．715，P〈0．0l，OR=2．066，95％CI=1．4442．957），C等住基因携带者频率也高于正常对照组（92．8％VS82．3％，χ2=6．987，P=0．008，OR=2．759，95％CI—1．299-5．859）。结论CYP2781启动子区－1260位点C等位基因与河北汉族UC存在显著相关性。

早产小于胎龄儿骨代谢与胎盘瞬时受体电位通道6基因的表达特点

目的研究早产小于胎龄儿(SGA)骨代谢与瞬时受体电位通道6(TRPV6)基因在胎盘组织中的表达特点,探讨宫内生长受限对早产儿骨健康的影响。方法选取2009年2月至2010年1月在我院产科出生2 h内入住我科的新生儿,按照胎龄和出生体重分别纳入早产SGA组、早产适于胎龄儿组(早产AGA组)和足月AGA组。新生儿母亲于分娩前48 h内检测血清钙、磷、碱性磷酸酶(ALP)及25-羟维生素D_3(25-OHD_3)浓度;新生儿生后24 h内检测血清钙、磷、ALP及25-OHD_3浓度,生后72 h内定量超声仪测量左胫骨声波速度(SOS)值;实时定量PCR方法检测胎盘TPRV6 mRNA的表达。结果各组新生儿母亲分娩前血清钙、磷、ALP及25-OHD_3浓度差异均无统计学意义(P>0.05),各组新生儿血清钙、磷及ALP浓度差异无统计学意义(P>0.05);足月AGA组血清25-OHD_3水平高于早产AGA组和早产SGA组[(55.9±26.7)nmol/L比(33.7±16.3)nmol/L、(28.8±10.8)nmol/L,P<0.05],早产AGA组高于早产SGA组(P<0.05);早产SGA组骨SOS值低于早产AGA组和足月AGA组[(2 994.6±23.2)m/s比(3 085.5±205.3)m/s、(3 079.3±127.4)m/s,P<0.05],早产AGA组和足月AGA组差异无统计学意义(P>0.05);足月AGA组TRPV6 mRNA表达量高于早产AGA组及SGA组[(1.14±0.10)比(0.95±0.07)、(0.86±0.08),P<0.05],早产AGA组高于早产SGA组(P<0.05)。早产儿骨SOS值与胎龄成正相关(r=0.310,P<0.01),血清25-OHD_3水平、TRPV6基因mRNA表达量与出生体重成正相关(r=0.317、0.529,P<0.01),其他指标与胎龄和体重均无关;新生儿骨SOS值与血清钙、25-OHD_3水平成正相关(r=0.311、0.330,P=0.008、0.014),与血清磷、ALP无相关。结论早产SGA骨矿化密度及胎盘TRPV6 mRNA表达水平均较低,应加强对早产SGA骨代谢的管理及监测。