苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒fp25k基因的改造及用于稳定转化Sf9昆虫细胞系

【目的】苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)在昆虫细胞中连续传代以后,会出现从多多角体表型到少多角体表型的转变,这种转变与一个编码25 kDa蛋白的基因(few polyhedra,fp25k)突变失活有关。杆状病毒的fp25k基因突变后产生的包涵体(多角体)衍生病毒粒子变少而出芽型病毒粒子增加,会降低外源基因在杆状病毒表达系统中的表达。本研究拟改造fp25k并构建能持续表达FP25K蛋白的转基因昆虫细胞,以克服杆状病毒fp25k基因易突变导致的表达系统缺陷。【方法】本实验通过改造杆状病毒fp25k基因在细胞传代过程中容易产生突变的位点,得到mfp25k,并将mfp25k构建到pIZT/V5-His载体上,重组载体转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选逐步淘汰未成功转化的Sf9细胞。【结果】成功改造AcMNPV的fp25k基因的TTAA位点,得到pIZT-mfp25k重组载体。重组载体成功转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选后获得基因组中带有mfp25k的Sf9-mfp25k稳定的转基因细胞系。用AcMNPV的fp25k突变型病毒AcP2感染转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系与正常Sf9细胞,发现转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系表达的FP25K蛋白可弥补病毒fp25k基因突变的缺陷。【结论】建立的Sf9-mfp25k转基因昆虫细胞系通过细胞表达FP25K蛋白,可以弥补因杆状病毒fp25k基因突变产生的缺陷。研究结果为构建稳定的杆状病毒-昆虫细胞表达系统提供了新途径。

25K型提速车研制

分别介绍了２５Ｋ型提速车各车种的主要技术参数、平面布置、结构特点。

电力铁塔紧固件用SWRCH25K冷镦钢盘条的开发及应用

介绍SWRCH25K冷镦钢热轧盘条的开发过程。给出盘条生产工艺的控制要点:(1)碳含量按中限控制,硅含量按中下限控制。(2)冶炼采用高拉碳技术高碳低磷出钢,喂Fe-Ca线进行夹杂物变性处理,提高钢质纯净度。(3)连铸采用全保护浇注、严格控制过热度,保持拉速稳定,二冷采用弱冷配水及电磁搅拌技术,保证铸坯质量。(4)采用控制轧制和控制冷却技术,优化工艺及设备,加强过程控制管理。成品螺栓抗拉强度670～680 MPa,延伸率9%～12%,心部硬度为92.2～96 HRB,可满足电力铁塔用6.8级紧固件的需求,并且模具损耗大大降低。

浅谈25K型客车转向架A4级检修中值得注意的几个问题

按照铁道部对25K型客车转向架A4级检修的要求,结合现场检修的体会,对A4级检修过程中应加强注意的几个问题进行了分析。

浅析气象自动观测系统中CT25K云高仪原理及故障分析

CT25K云高仪是气象自动观测系统中用于测量云高的设备,正确预报各种云对飞行安全、农业生产、港口运输、抗洪救灾有着重要的作用。本文对CT25K云高仪技术分析,对典型故障进行了总结。

25K型客车车轮和轴承故障增多的原因分析及措施

针对25K型客车在运用检修中发现的大量车轮轮缘偏磨、踏面热龟裂、轴承滚子端面及活动挡圈过热变色、外排轴承外圈外挡边“咬伤”等故障,分析了引发故障的原因,提出了相应的措施。

25K型客车车钩钩舌厚度严重磨耗和钩耳裂纹的原因分析

对 2 5 K型客车运用中出现钩舌厚度严重磨耗和钩耳裂纹的现象进行了分析 。

25K快速客车运行中纵向冲动原因浅析

我局开行的61/62次列车于1999年8月下旬全部换为25K型快速客车。并在1999年10月全路第 二轮提速中改为K61/62次快速列车。25K型快速客车投入运行近一年来，反映较突出的问题之一就是在列车运行中纵向冲动大，对列车的运行品质和旅客乘车的舒适度产生了较大影响。为此，我们对25K快速列车运行中的纵向冲动进行了调查。 1 调查情况 (1)调查区段为K61/62次列车昆明—北京西的一个往返运行。不完全统计共发生感觉明显的 列车纵向冲动约80次，其中使用制动调速58次，列车起动、停站12次，正常牵引状态下10次 。 (2)发生纵向冲动时列车中部感觉最明显，列车后部其次，前部最轻。 (3)制动调速时发生的纵向冲动，有时只发生在制动或缓解时，而有时制动和缓解时都发生 。 (4)列车在平直区段，运行速度快时冲动发生少。列车在坡道大、弯道多、速度低的区段运 行时，冲动发生多。在正常牵引情况下也会发生瞬间冲动。

25K型全列空调列车内环境卫生学研究

目的 :为从卫生学角度全面、系统地对 2 5 K型全列空调客车内环境进行卫生学研究 ,为今后全列空调客车的技术改造和管理提供卫生学依据。方法 :根据国家有关标准、规范对国产 2 5 K型全列空调客车车厢内微小气候、物理因素、空气质量进行检测 ,测得数据采用 PEM3.0软件进行统计分析。结果 :2 5 K型全列空调客车内微小气候、人工照明符合国家卫生标准 ,但风速低 ,新风量不能完全满足空调车通风技术指标 ;噪声强度、环境振动受路况影响 ,车厢内空气质量较 2 5 G型全列空调客车差。结论 :对目前 2 5 K型国产空调客车在通风换气以及日常卫生管理。

25K型客车在A2级、A3级检修中发现的问题及对策

介绍了 2 5 K型提速客车在 A2级、A3级检修中发现的突出问题 ,提出了相应的解决措施和改进建议。

RW_(25K)型空调软卧车

简要介绍了京九／沪九空调软卧车的主要技术参数、平面布置、各部分结构特点和采用设备等。

Man-PEI_(25k)纳米复合物在微针作用下的透皮性能研究

目的:研究高分子质量聚乙烯亚胺(PEI_(25k))的甘露糖衍生物(Man-PEI_(25k))的纳米复合物在微针作用下的透皮性能。方法:以荧光染料水溶性羧基CdSe/ZnS量子点(QD)为模型药物,与PEI_(25k)、Man-PEI_(25k)溶液通过静电吸附形成PEI_(25k)/QD和不同嫁接率(1:3、1:6)的Man-PEI_(25k)/QD纳米复合物,同时以游离的QD作为对照,通过共聚焦显微镜观察微针作用下QD在皮肤活性表皮层和真皮层中的分布情况;用荧光分光光度计测定微针作用下PEI_(25k)/QD和Man-PEI_(25k)/QD纳米复合物在皮肤活性表皮层和真皮层中QD的累积滞留量。结果:微针作用于在体皮肤,Man-PEI_(25k)/QD纳米复合物在活性表皮层和真皮层的量明显高于PEI_(25k)/QD纳米复合物;Man-PEI_(25k)/QD(1:6)纳米复合物在活性表皮层和真皮层的量明显高于Man-PEI_(25k)/QD(1:3)纳米复合物。体外透皮试验显示,微针能明显提高纳米复合物在活性表皮层和真皮层中的滞留量;微针作用48 h后,Man-PEI_(25k)/QD纳米复合物在活性表皮层和真皮层的滞留量约比PEI_(25k)/QD增加了2、1.5倍,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论:微针可提高Man-PEI_(25k)/QD纳米复合物在活性表皮层的透皮性能。

CT25K型云高仪维护及典型故障排除案例

简要介绍了云高仪的基本工作原理,详细阐述了CT25K型云高仪定期例行维护和定期检查维护的方法和内容;还着重探讨了CT25K型云高仪故障高发件发射板故障的分析方法和维修处理过程。