沉默PrxⅡ基因促进巨噬细胞对肝癌细胞的杀伤作用

为探究PrxⅡ对RAW264.7(小鼠单核巨噬细胞系)细胞杀伤HepG2(人肝癌细胞系)细胞的影响,阐明PrxⅡ基因调控RAW264.7细胞分泌细胞因子杀伤HepG2细胞的作用,利用慢病毒干扰技术制备PrxⅡ基因沉默的RAW264.7细胞系、MTT assay测定HepG2细胞存活情况、ELISA法测定RAW264.7细胞分泌炎性因子情况、蛋白质免疫印迹法检测NF-κB信号通路相关蛋白质表达水平。结果表明:已成功制备PrxⅡ基因沉默的RAW264.7细胞系;MTT检测发现RAW264.7细胞上清液处理HepG2细胞后,shPrxⅡ组HepG2细胞存活率明显低于mock组,且呈时间依赖性;ELISA结果表明shPrxⅡ组RAW264.7细胞分泌的TNF-α含量明显高于mock组,IL-6和IL-1β含量明显低于mock组;蛋白质免疫印迹结果与mock组相比,PrxⅡ基因沉默的RAW264.7细胞中NF-κB信号通路明显被激活。由此得出结论,PrxⅡ基因能调控RAW264.7细胞分泌细胞因子,杀伤HepG2细胞,导致HepG2细胞死亡水平上升,研究结果可为以巨噬细胞为靶点的免疫疗法提供理论基础,为肝癌患者的免疫治疗提供新思路。

牛磺鹅去氧胆酸对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞凋亡的影响

为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松(DEX)诱导的RAW264.7细胞系凋亡(P<0.01)。1μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用(P<0.05);10μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有显著的促进作用(P<0.05)。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有极显著的促进作用(P<0.01),但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。

M-CSF对RAW264.7细胞抗氧化系统的影响

目的：探讨巨噬细胞集落刺激因子（Macrophagecolony-stimulatingfactor，M－CSF）抗单核／巨噬细胞氧化损伤的作用机理，揭示M－CSF对小鼠巨噬细胞系RAW264．7细胞抗氧化系统影响。方法：以L929细胞条件培养液为M-CSF来源，采用酶活性测定等生化测定方法，考察M-CSF细胞内还原型谷胱甘肽含量、脂质过氧化物含量、过氧化氢酶活性、谷胜甘肽还原酶活性等检测指标的影响。结果：M-CSF处理可提高RAW264．7细胞内的过氧化氢酶活性及还原型谷胱甘肽含量，降低脂质过氧化物含量，且使细胞在tbOOH攻击下保持较高的抗氧化水平。结论：M-CSF可能通过改善单核巨噬细胞的氧化还原代谢而减轻细胞的过氧化损伤。

氧化剂对RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达的影响

为揭示氧化应激对巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达的影响 ,采用逆转录多聚酶链反应技术 ,观察氧化剂叔丁基氢过氧化物对RAW 2 64.7细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响。结果发现 ,1.5× 10 -4mol/L叔丁基氢过氧化物能够诱导RAW 2 64.7细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA表达 ,放线菌素D、环己酰亚胺及acetovanilone均可减弱叔丁基氢过氧化物对RAW2 64.7细胞诱导型一氧化氮合酶表达的诱导。另外 ,叔丁基氢过氧化物对RAW 2 64.7细胞诱导型一氧化氮合酶表达的诱导作用还可被核因子 κB抑制剂PDTC减弱。可见 ,氧化剂可诱导RAW 2 4.7细胞诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达 ,且作用在转录水平 ,该过程中有新的蛋白质合成及内源性活性氧产生的参与 ,转录因子核因子

M-CSF对RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用

目的揭示巨噬细胞集落刺激因子 (M- CSF)是否能保护单核巨噬细胞免受过氧化损伤。方法以 L 92 9细胞条件培养液 (L92 9- CM)作为 M- CSF来源 ,以细胞显微形态、细胞活力等指标 ,观察了 M- CSF对叔丁基氢过氧化物 (tb OOH)诱导的巨噬细胞系 RAW2 6 4.7细胞氧化损伤的影响。结果 tb OOH可以引起 RAW2 6 4.7细胞的损伤 ,表现为细胞皱缩、伪足消失、细胞活力降低 ,且损伤随 tb OOH作用浓度的增加而明显 ;而 M- CSF可以减轻 tb OOH诱发的 RAW2 6 4.7细胞氧化损伤。结论 M-CSF对单核巨噬细胞的氧化损伤具有保护作用。

M-CSF诱导MnSOD表达减轻RA W264.7细胞氧化损伤

为探讨巨噬细胞集落刺激因子 (M -CSF)对单核巨噬细胞氧化损伤的保护作用 ,以富含M -CSF的小鼠L92 9细胞条件培养液 (L92 9-CM)作为M -CSF来源 ,以小鼠巨噬细胞系RAW2 6 4.7为模型 ,从形态学上观察了M -CSF对叔丁基氢过氧化物 (tbOOH)引起的RAW 2 6 4.7细胞氧化损伤的保护作用 ;并采用酶活性测定、TR -PCR等方法 ,研究了M -CSF对RAW 2 6 4.7细胞超氧化物歧化酶 (SOD)活性及基因表达的影响。结果发现 ,M -CSF可以减轻tbOOH对RAW 2 6 4.7细胞的氧化损伤 ;M -CSF可以提高细胞总SOD活性 ;M -CSF还可增强RAW 2 6 4.7细胞MnSODmRNA的表达 ,且这一诱导作用可被放线菌素D(actinomycinD)阻断。提示M -CSF可通过诱导细胞MnSOD表达而减轻RAW 2 6 4.7细胞的氧化损伤。

M-CSF基因转染对RAW264.7细胞氧化损伤的影响

目的 揭示巨噬细胞集落刺激因 子(M-CSF)对单核/巨噬细胞氧化损伤的影响。方法采用真核细胞基因导入 的脂质体转染方法,建立了两株M-CSF基因过表达的RAW264.7细胞系,并观察 了氧化剂叔丁基氢过氧化物(tbOOH)对该RAW264.7细胞的氧化损伤作用。结果用M-CSF基因转染的RAW264.7细胞具 有较强的分泌有活性M-CSF的能力,而与正常RAW264.7细胞相比,M-CSF 过表达的RAW264.7细胞更易受到氧化剂的损伤。结论在一定条件下,M-CSF可促进巨噬细胞的氧化损伤。

大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对RAW264.7细胞的免疫调节作用

目的:研究大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节作用。方法:将小鼠RAW264.7细胞分为空白组、脂多糖组和样品组(大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物及共价结合物),分别测定并比较各组细胞的巨噬细胞活力、中性红吞噬活性、一氧化氮释放量、细胞因子分泌及其mRNA表达水平。结果:当质量浓度在0~50μg/mL范围时,大豆分离蛋白、杏鲍菇多糖、大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物和大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物组4种样品对细胞活力没有显著影响(P>0.05)。当大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物的质量浓度达到100μg/mL时,能够显著提高细胞的中性红吞噬活性、一氧化氮释放量以及肿瘤坏死因子-α、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和IL-6的含量及这3种细胞因子的mRNA表达水平(P<0.05),表明大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖共价结合物能显著提升小鼠巨噬细胞系RAW264.7的免疫调节能力,且存在剂量依赖效应。结论:本研究可对大豆分离蛋白进行糖基化改性,为谷物蛋白的深加工和开发利用提供一定的理论依据。

ZD制剂对RAW264.7细胞分泌TNF-α水平及TNF-α诱导L929细胞死亡的影响

[目的]研究ZD制剂对炎症模型细胞中TNF-α含量及对TNF-α诱导小鼠成纤维细胞L929死亡的影响。[方法]通过脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7细胞系来构建炎症细胞模型,使用5种不同浓度(100、10、1、0.1、0.01μg/m L)的ZD制剂进行试验,并用ELISA法检测ZD制剂干预前后细胞上清液中TNF-α浓度。通过TNF-α刺激小鼠成纤维细胞L929细胞系来构建细胞毒性模型,采用MTT法检测ZD制剂干预前后L929细胞活力。[结果]ZD制剂浓度为100、10、1、0.1μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异极显著(P<0.01);ZD制剂浓度为0.01μg/m L时,TNF-α浓度与LPS模型组相比,差异显著(P<0.05)。经100、10μg/m L ZD制剂干预后的小鼠成纤维细胞L929细胞活力与TNF-α组相比显著提高。[结论]ZD制剂可以通过降低TNF-α的分泌量和降低TNF-α的生物学活性来达到抗炎的目的。

球毛壳菌素F对Poly(I∶C)诱导的RAW264.7细胞TNF-α水平的影响

该实验主要研究球毛壳菌素F对聚肌苷酸胞苷酸Poly(I∶C)诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7 TNF-α表达水平的影响.采用不同浓度的Poly(I∶C)(50μg.mL-1、100μg.mL-1和200μg.mL-1)和球毛壳菌素F(2μg.mL-1)对RAW264.7进行处理,运用流式细胞术检测细胞内TNF-α的表达水平.结果表明,各浓度的Poly(I∶C)与对照组相比均能极显著提高RAW264.7的TNF-α水平(P<0.001),并且具有浓度依赖性;球毛壳菌素F能够极显著地降低Poly(I∶C)诱导的细胞TNF-α水平(P<0.01).结论,球毛壳菌素F可能是通过降低炎症因子TNF-α的分泌而达到抗炎作用的.

甘丙肽体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究

目的探讨甘丙肽对小鼠RAW264.7巨噬细胞功能的影响。方法取小鼠RAW264.7巨噬细胞体外培养,分为对照组、脂多糖(LPS)处理组和LPS联合甘丙肽处理组。给予后两组细胞LPS(1μg/ml)刺激2h,使细胞激活,其中一组再加入甘丙肽1000nmol/L继续处理24h,镜下观察各组细胞形态变化;采用荧光定量PCR法检测培养上清TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA水平;采用Western blot法检测细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)蛋白表达水平。结果 LPS处理组IL-6、IL-1β和TNF-αm RNA分别较对照组升高(7083±432.5)倍、(3106±104.3)倍和(108.0±47.58)倍,而甘丙肽处理组三者水平较LPS处理组下降(1.2±0.2)倍、(0.3±0.08)倍和(19±1.3)倍,差异均有统计学意义(P<0.05);LPS组iNOS蛋白较对照组升高(19.5±1.964)倍,Arg1蛋白水平较对照组降低(1.6±0.3)倍,而给予甘丙肽混合处理后,iNOS蛋白水平较LPS处理组降低(1.7±0.32)倍,而Arg1蛋白升高(2.31±0.12)倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论甘丙肽可抑制LPS诱导的小鼠Raw264.7巨噬细胞的促炎反应。

草木犀正丁醇提取物对小鼠巨噬细胞促炎介质的影响

目的研究草木犀正丁醇提取物在体外的抗炎作用。方法通过LPS干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,使用1、5和10mg/L3种浓度的草木犀正丁醇提取物对其进行干预。ELISA法检测药物干预前后上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌量,Griess反应测定NO水平;实时荧光定量RT-PCR检测TNF-α、iNOS和COX-2的mRNA表达;Western blot法检测COX-2的蛋白表达水平。结果草木犀正丁醇提取物干预后,上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和NO含量与模型组相比均显著降低(P<0.01),并存在剂量依赖关系;干预后细胞TNF-α,iNOS和COX-2的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),也存在剂量依赖关系;草木犀正丁醇提取物及DM干预后COX-2蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论草木犀正丁醇提取物可以下调TNF-α、IL-1β、IL-6、NO和COX-2等炎症介质的表达,该药物体外抗炎作用可能通过抑制这些炎症介质而产生。

β-葡聚糖对巨噬细胞增殖胞内游离钙及cAMP浓度的影响

目的：探讨β-葡聚糖对RAW264.7细胞增生、胞内游离钙及cAMP浓度的影响。方法：中性红比色法检测细胞生长,酚试剂法检测细胞蛋白质合成,动态检测β-葡聚糖对胞内游离钙和cAMP浓度的影响。结果：微量β-葡聚糖可促进细胞生长及蛋白质合成;β-葡聚糖作用后3-5 min使胞内游离钙浓度升高,作用1 min后使cAMP浓度升高,并保持较高水平。结论：胞内游离钙及cAMP是β-葡聚糖对RAW264.7细胞作用过程中重要的信使分子。

羊布鲁氏菌强毒株16M感染小鼠巨噬细胞模型的建立

巨噬细胞是机体抗吞噬能力最强的细胞,但布鲁氏菌不但不能被巨噬细胞杀死,反而能在胞内大量繁殖,因此,本研究建立其感染模型,为下一步继续研究布鲁氏菌与其宿主细胞表面相关膜蛋白之间的作用和胞内寄生机制奠定基础。用羊布鲁氏菌强毒株16M感染巨噬细胞系264.7(细胞和细菌比例为1∶500),感染时间为4 h,建立布鲁氏菌感染巨噬细胞模型,做间接免疫荧光试验和透射电镜试验。间接免疫荧光试验中一抗与二抗最佳稀释度分别为1∶80和1∶80,电镜下观察到细菌侵入细胞时膜凹陷,形态发生变化,形成内吞小体。本试验减少感染过程所涉及的环境因素,优化了间接免疫荧光试验所需的一抗和二抗浓度比,成功建立感染模型。

川芎中抑制脂多糖诱导的RAW264.7和BV2细胞系NO生成的新的丁苯酞衍生物--川芎螺内酯

目的研究川芎95%乙醇提取物的化学成分及其抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7和小鼠小胶质细胞BV2一氧化氮(NO)生成的生物学活性。方法采用硅胶、高效液相色谱等柱色谱方法进行分离纯化,通过化合物的谱学数据鉴定其结构。采用LPS离体诱导RAW264.7和BV2细胞系NO生成模型,研究化合物对NO生成的抑制活性。结果从川芎95%乙醇提取物中分离出3个丁苯酞衍生物,分别鉴定为Z-3′,8′,3′a,7′a-四氢-6,3′,7,7′a–二聚藁本内酯-8′-酮(1)、Z,Z′-3.3′a,7.7′a-二聚藁本内酯(2)和川芎螺内酯(3)。对LPS诱导的细胞NO生成抑制作用,在RAW264.7细胞模型,化合物1~3和阳性对照药吲哚美辛的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(31.60±2.62)、(21.20±0.61)、(30.12±2.90)、(54.62±7.53)μmol/L;在BV2细胞模型,化合物1~3和阳性对照药姜黄素的IC_(50)分别为(21.99±4.40)、(15.43±1.34)、(12.20±3.40)、(10.58±1.41)μmol/L。结论化合物3为新化合物,命名为川芎螺内酯。生物活性实验结果提示化合物1~3可能具有潜在的抗炎作用。

蛇莓乙醇提取物的体外抗炎机制研究

目的研究蛇莓乙醇提取物在体外的抗炎作用,初步探讨其抗炎机制。方法通过脂多糖(LPS)干预RAW264.7巨噬细胞系建立炎症细胞模型,ELISA法检测上清液中TNF-α、NO的分泌量,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、i NOS、血红素氧合酶-1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量,免疫细胞化学法检验核因子-κB(NF-κB)的表达及分布变化。结果蛇莓提取物干预后细胞所分泌的炎症介质(TNF-α和NO)与炎症模型组相比均显著降低(均P<0.01),并存在剂量依赖关系;实时荧光定量RT-PCR结果显示蛇莓提取物干预后细胞TNF-α、i N-OS的mRNA表达水平显著降低,HO-1的mRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义,也存在剂量依赖关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平明显升高(P<0.01);免疫细胞化学法结果显示仅有LPS干预时,NF-κB表达增强且集中分布在细胞核,而药物干预时,NF-κB多分布在胞质。结论蛇莓提取物通过抑制NF-κB的激活,下调巨噬细胞表达炎症介质,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。

鸡眼草乙醇提取物抗炎作用研究

目的采用体外炎症模型研究鸡眼草乙醇提取物抗炎作用。方法建立脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞系RAW264.7细胞体外炎症模型,使用1,5和10μg/ml三种浓度的鸡眼草乙醇提取物对其进行干预;ELISA法检测药物干预前后上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌量,Griess反应测定NO水平;实时荧光定量RT-PCR检测TNF-α、iNOS和COX-2的mRNA表达;Western blot法检测COX-2和HO-1的蛋白表达水平。结果鸡眼草乙醇提取物干预后,上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和NO含量与模型组相比均显著降低(P<0.01),并存在剂量依赖关系;干预后细胞TNF-α,iN-OS和COX-2的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),也存在剂量依赖关系;鸡眼草乙醇提取物及地塞米松DM干预后COX-2蛋白水平明显降低(P<0.01),HO-1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),亦存在剂量依赖关系。结论鸡眼草乙醇提取物可以下调TNF-α、IL-1β、IL-6、NO和COX-2等炎症介质的表达,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。

草木犀石油醚提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响

目的:探讨草木犀的石油醚提取物在炎症中的作用。方法:通过LPS干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化,实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量。结果:免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色,NF-κB多分布在胞质未被激活;仅有LPS干预时,胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核表达增强。药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高,且呈剂量依赖型关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高。结论:草木犀的石油醚提取物通过抑制NF-κB的激活,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。

含M-CSF条件培养液对RAW264.7细胞产生NO的影响

巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF )是一种单核吞噬细胞特异性的生长因子。近年来的研究表明 ,M CSF可以增强巨噬细胞杀伤细菌等病原体及肿瘤细胞的能力 ,对抗感染及抗肿瘤具有重要意义。一氧化氮 (NO )是可由单核吞噬细胞产生的一种自由基 ,对病原体及肿瘤细胞同样具有杀伤作用。为探讨M CSF的抗感染、肿瘤作用是否与其刺激单核吞噬细胞产生NO有关 ,我们以L92 9细胞条件培养液 (L92 9 CM )作为M CSF来源 ,观察了M CSF对巨噬细胞系RAW2 64 7细胞NO产生的影响。结果发现 ,L92 9 CM可以刺激RAW2 64 7细胞NO的产生 ;且RT PCR显示L92 9 CM处理使RAW2 64 7细胞诱导型NO合酶 (iNOS )表达增加。

草木犀正丁醇提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响

目的:探讨草木犀的正丁醇提取物在炎症中的作用。方法:通过LPS干预RAW264.7细胞系建立炎症细胞模型,免疫细胞化学法检验NF-κB的表达及分布变化,实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量。结果:免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色,NF-κB多分布在胞质未被激活;仅有LPS干预时,胞核被染为棕色,NF-κB集中分布在细胞核表达增强。药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高,且呈剂量依赖型关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高。结论:草木犀的正丁醇提取物通过抑制NF-κB的激活,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。