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26SrDNA序列分析法鉴定酵母菌 被引量:32
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作者 赵丽丽 陈存社 郭凤莲 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第8期49-51,共3页
利用26SrDNAD1/D2区序列分析法,对从葡萄、苹果、梨、枣、黄豆酱、酸菜、荔枝、橙子、干酵母、自发粉中分离得到18株酵母菌进行形态观察,分别提取DNA、经PCR扩增后,测定其26SrDNA序列,并与基因库中基因序列进行同源性比较,经鉴定5株为... 利用26SrDNAD1/D2区序列分析法,对从葡萄、苹果、梨、枣、黄豆酱、酸菜、荔枝、橙子、干酵母、自发粉中分离得到18株酵母菌进行形态观察,分别提取DNA、经PCR扩增后,测定其26SrDNA序列,并与基因库中基因序列进行同源性比较,经鉴定5株为酿酒酵母菌、4株为季氏毕赤氏酵母菌、4株为东方伊萨酵母菌、1株为陆生伊萨酵母菌、1株为葡萄有孢汉逊酵母菌、1株为鲁氏接合酵母菌、1株为美极梅奇酵母菌、1株为发酵假丝酵母菌。结果表明,本试验方法可以实现酵母菌种级水平鉴定,与传统方法相比具有简便、快速等优点,适合实验室及工业化生产中酵母菌的鉴定。 展开更多
关键词 酵母菌 26s rdna 鉴定
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褐飞虱内共生菌的分离及其26S rDNA部分序列分析 被引量:10
2
作者 张珏锋 陈建明 +3 位作者 陈法军 郑许松 陈列忠 俞晓平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期2211-2216,共6页
【目的】类酵母菌(Yeast-Like-Symbiots,YLS)是存在于褐飞虱(Nilaparvata lugensStl)腹部的一种共生菌,分离获得该共生菌的离体菌株,并鉴定其种属,对于研究褐飞虱致害性变异具有重要意义。【方法】首次运用卵块离体培养的方法、采用... 【目的】类酵母菌(Yeast-Like-Symbiots,YLS)是存在于褐飞虱(Nilaparvata lugensStl)腹部的一种共生菌,分离获得该共生菌的离体菌株,并鉴定其种属,对于研究褐飞虱致害性变异具有重要意义。【方法】首次运用卵块离体培养的方法、采用改进后的培养基配方,从褐飞虱体内分离到两株共生菌。并运用分子生物学手段,测定离体菌株26S rDNAD1/D2区域序列,分析鉴定菌株种属。【结果】所得菌株与解脂假丝酵母(Yarrowia lipolytica)、嗜盐梗孢酵母(Sterigmatomyces halophilus)的序列相似性分别达到100%和99.8%。【结论】证明褐飞虱体内类酵母共生菌可进行离体培养,并可在人工培养基上存活。同时也验证了褐飞虱菌胞中存在不同种类的类酵母菌,类酵母共生菌为混合物的推测。 展开更多
关键词 褐飞虱 类酵母 离体培养 26s rdna 解脂假丝酵母 嗜盐梗孢酵母
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新疆地区盐湖的中度嗜盐菌的16S rDNA PCR-RFLP分析 被引量:9
3
作者 曾静 窦岳坦 杨苏声 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期327-330,共4页
对来自新疆地区艾丁湖、艾比湖和玛那斯盐湖等盐湖的28株中度嗜盐菌与9株相关的参比菌株, 进行了16S rDNA PCR-RFLP分析,这些菌株是革兰氏阴性杆菌,能在0~25%NaCl中生长。在实验中, 选用4种限制性内切... 对来自新疆地区艾丁湖、艾比湖和玛那斯盐湖等盐湖的28株中度嗜盐菌与9株相关的参比菌株, 进行了16S rDNA PCR-RFLP分析,这些菌株是革兰氏阴性杆菌,能在0~25%NaCl中生长。在实验中, 选用4种限制性内切酶AluI、HinfI、RsaI和HaeⅢ,将供试菌株的16S rDNA的PCR产物进行酶切,用3% 的琼脂糖电泳分析酶切产物。结果表明,在74%的相似性水平上分为3群。群Ⅰ包括新分离的菌株CI和  参比菌株死海色盐杆菌(Chromohalobacter marismortui)和Nesterenkonia halobia;群Ⅱ包括伸长盐单胞(Halomonas elongata)在内的7株参比菌株和8株新分离的菌株;群Ⅲ包括19林新分离的菌株。 展开更多
关键词 中度嗜盐菌 新疆地区 盐湖 16s rdna pcr-rflp
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幽门螺杆菌16SrDNA指纹图和PCR-RFLP基因分型研究 被引量:4
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作者 李倩 代敏 +2 位作者 段广才 郗园林 范清堂 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期72-75,共4页
目的 探讨我国幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)的基因多态性及其与相关疾病之间的关系。 方法 应用PCR掺入法制备 16SrRNA基因探针 ,建立 16SrDNA指纹图技术和尿素酶C(ureC)基因的PCR -RFLP法 ,并结合统计学软件进行聚类分析 ,对... 目的 探讨我国幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)的基因多态性及其与相关疾病之间的关系。 方法 应用PCR掺入法制备 16SrRNA基因探针 ,建立 16SrDNA指纹图技术和尿素酶C(ureC)基因的PCR -RFLP法 ,并结合统计学软件进行聚类分析 ,对临床分离的 14株Hp进行基因分型。结果  14株Hp的 16SrDNA指纹图谱显示 10个HaeⅢ杂交带型和 12个HindⅢ杂交带型 ;ureC基因的变异度较小 ,14株Hp中有 12株PCR -RFLP图谱完全一致。通过杂交结果示意图和SPSS10 0软件进行聚类分析 ,HaeⅢ、HindⅢ及两种酶杂交结果的综合 ,均将 14株Hp分为两型。两种方法结果综合进行聚类分析 ,14株Hp在基因水平上分为三型。结论 差异显著的DNA指纹图谱说明了不同Hp菌株间基因组结构的高度变异性。 16SrDNA指纹图谱较ureC基因的PCR -RFLP谱型更敏感地表达Hp各菌株的变异 ,可准确有效地对Hp作出基因分型。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 16s rdna 尿素酶C基因 pcr-rflp 基因分型 聚类分析
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分离自补骨脂等宿主根瘤的24株菌的数值分类和16S rDNA PCR-RFLP研究 被引量:3
5
作者 郝云婕 王孟兆 +1 位作者 刘磊 韩素贞 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期754-759,共6页
采用数值分类和16S rDNA PCR-RFLP对分离自云南省豆科植物补骨脂(Psoralea coryli-folia)、葛藤(Pueraria lobata)、杭子梢(Campylotropis macrocarpa)等宿主的24株菌及10株根瘤菌参比菌株进行了研究。数值分类结果表明,在84%相似性水平... 采用数值分类和16S rDNA PCR-RFLP对分离自云南省豆科植物补骨脂(Psoralea coryli-folia)、葛藤(Pueraria lobata)、杭子梢(Campylotropis macrocarpa)等宿主的24株菌及10株根瘤菌参比菌株进行了研究。数值分类结果表明,在84%相似性水平上,所有的菌株可分为3群:群Ⅲ为未知菌群,群Ⅰ为慢生菌群,群Ⅱ为快生和中慢生菌群。从依据16S rDNA PCR-RFLP分析建立的树状图来看,在70%相似性水平上,所有的菌株可分为5个系统发育分支:分支Ⅰ和Ⅴ没有参比菌株,为未知分支;分支Ⅱ为Agrobacterium-Sinorhizobium-Rhizobium,分支Ⅲ为Mesorhizo-bium,分支Ⅳ为Bradyrhizobium。数值分类和16S rDNA PCR-RFLP的结果部分一致,有2株菌与A.tumefaciens IAM13129T聚在一起。 展开更多
关键词 根瘤菌 数值分类 16s rdna pcr-rflp
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泽泻26S rDNA的扩增及酶切反应条件优化 被引量:3
6
作者 陈志彤 郑伟文 肖华山 《福建农业学报》 CAS 2004年第2期117-120,共4页
采用PCR-RFLP技术对采集自福建、江西、四川3个地区5个泽泻样品的26S rDNA进行扩增和酶切分 析,并对其PCR扩增及酶切反应的条件进行一系列优化,建立了最优的PCR扩增及酶切反应体系,为泽泻栽培 种的分子鉴定奠定了技术基础。
关键词 泽泻 26s rdna pcr-rflp
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16S rDNA PCR-RFLP分析鉴定开菲尔发酵剂中的乳酸菌 被引量:4
7
作者 李佳 李艳 牟德华 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第7期158-161,共4页
对传统乳制品开菲尔发酵剂通过菌种分离和纯化得到67株乳酸菌,经过传统形态学分类区分成6种形态类型。在此基础上进行16S r DNA限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,... 对传统乳制品开菲尔发酵剂通过菌种分离和纯化得到67株乳酸菌,经过传统形态学分类区分成6种形态类型。在此基础上进行16S r DNA限制性片段长度多态性聚合酶链反应(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析法鉴定为4种分子类型,分别为:乳明串株菌(L.lactis)、坚强肠球菌(E.durans)、意大利肠球菌(E.italicus)、嗜热链球菌(S.thermophilus)。其中坚强肠球菌菌数超过50%,占所分离菌株的62.7%,为优势菌。 展开更多
关键词 开菲尔发酵剂 乳酸菌 16s rdna pcr-rflp
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28S rDNA PCR-RFLP分析在侧耳属系统发育研究中的应用 被引量:31
8
作者 马富英 罗信昌 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期201-205,共5页
对侧耳属 18个种 5 2个菌株及 3个其它属的菌株的 2 8SrDNA 5’端进行PCR扩增 ,得到长度约为 1.4 6kb的片段。对该片段分别用 7种限制性内切酶AluⅠ、BamHⅠ、HaeⅢ、HhaⅠ、HinfⅠ、MspⅠ、TaqⅠ酶切 ,结果表明 ,MspⅠ酶切片段多态性最... 对侧耳属 18个种 5 2个菌株及 3个其它属的菌株的 2 8SrDNA 5’端进行PCR扩增 ,得到长度约为 1.4 6kb的片段。对该片段分别用 7种限制性内切酶AluⅠ、BamHⅠ、HaeⅢ、HhaⅠ、HinfⅠ、MspⅠ、TaqⅠ酶切 ,结果表明 ,MspⅠ酶切片段多态性最高 ,AluⅠ对侧耳属无酶切多态性。聚类分析结果表明 ,菌株间的相似系数为 0 .5 6 9~ 1.0 0 0 ,在 92 %相似水平可将侧耳分为 5大类 :Ⅰ .红平菇和桃红侧耳 ;Ⅱ .鲍鱼菇和囊盖侧耳 ;Ⅲ .具核侧耳 ;Ⅳ .金顶侧耳 ;Ⅴ . 展开更多
关键词 28s rdna pcr-rflp分析 侧耳属 系统发育 应用 食用菌 大亚基核糖体DNA 聚合酶链式反应 限制性酶切分析
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柑橘黄龙病菌亚洲种16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区的PCR-RFLP及序列分析 被引量:2
9
作者 鹿连明 姚锦爱 +3 位作者 张利平 胡秀荣 黄振东 陈国庆 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第24期226-232,共7页
为明确柑橘黄龙病菌的遗传多样性,PCR扩增了6个不同地区黄龙病菌的16SrDNA和16S-23S rDNA间隔区(intergenic spacer regions,ISR),分别通过4种内切酶对其进行了限制性片段长度多态性分析,发现不同分离物的16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区... 为明确柑橘黄龙病菌的遗传多样性,PCR扩增了6个不同地区黄龙病菌的16SrDNA和16S-23S rDNA间隔区(intergenic spacer regions,ISR),分别通过4种内切酶对其进行了限制性片段长度多态性分析,发现不同分离物的16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区各酶切产物的电泳谱带完全一致,未表现多态性。对16S-23SrDNA ISR进行了克隆和测序,经DNAman和NCBI Blast比对分析发现,6个分离物16S-23SrDNAISR序列之间不存在碱基差异,与数据库中柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus)同源性高达99.0%~100%。系统发育分析显示所有的Ca.L.asiaticus归为一个类群,而后与Ca.L.africanus、Ca.L.americanus和Ca.L.psyllaurous组成韧皮部杆菌属(Candidatus Liberibacter)一个大的类群。结果表明,同一种柑橘黄龙病菌不同分离物16S rDNA和16S-23S rDNAISR无分子变异或变异较小,不存在遗传多样性。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病菌亚洲种 16s rdna 16s-23s rdna间隔区 pcr-rflp 序列分析
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26S rDNA序列分析法鉴定开菲尔发酵液中的酵母菌 被引量:7
10
作者 范佳 武伟伟 李艳 《酿酒科技》 北大核心 2014年第11期14-17,共4页
利用26S r DNA D1/D2区序列分析法鉴定了内蒙古牧区传统开菲尔发酵液中的酵母菌,为筛选可发酵特色乳酒的酵母菌奠定基础。对所分离纯化得的酵母菌进行菌落特征和细胞显微形态区分,在形态鉴定基础上,选择代表菌进行26S r DNA D1/D2区序... 利用26S r DNA D1/D2区序列分析法鉴定了内蒙古牧区传统开菲尔发酵液中的酵母菌,为筛选可发酵特色乳酒的酵母菌奠定基础。对所分离纯化得的酵母菌进行菌落特征和细胞显微形态区分,在形态鉴定基础上,选择代表菌进行26S r DNA D1/D2区序列分子鉴定。结果表明,共分离到36株酵母菌,形态聚类为5类,经DNA提取、26S r DNA D1/D2区PCR扩增、酶切、基因序列分析和同源性比对,鉴定为5种分子类型的酵母菌,分别为胶红酵母菌(Rhodotorula mucilaginosa)、诞沫假丝酵母菌(Candida zeylanoides)、发酵毕赤酵母菌(Pichia fermentans)、酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、有孢圆酵母菌(Torulaspora delbrueckii)。传统开菲尔发酵液中分离到的酿酒酵母,具有可发酵特色乳酒的潜质。 展开更多
关键词 微生物 开菲尔 酵母菌 26s rdna序列分析 鉴定 乳酒
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野大豆等宿主根瘤菌表型及16S rDNA PCR-RFLP研究 被引量:1
11
作者 王静 刘磊 +5 位作者 梁芳 欧明丽 刘少佳 胡玉莹 杨帆 韩素贞 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期273-279,共7页
采用数值分类和16S rDNAPCR-RFLP对分离自北京部分地区野大豆(Glycine soja sieb)、大豆(Glycine max)、菜豆(Phaselous vulgaris)和长萼鸡眼草(Kummerowiae stipulacea)等宿主的60株菌及10株根瘤菌参比菌株进行了研究。数值分类结果表... 采用数值分类和16S rDNAPCR-RFLP对分离自北京部分地区野大豆(Glycine soja sieb)、大豆(Glycine max)、菜豆(Phaselous vulgaris)和长萼鸡眼草(Kummerowiae stipulacea)等宿主的60株菌及10株根瘤菌参比菌株进行了研究。数值分类结果表明,在70.5%相似性水平上,所有的菌株可分为3群:群Ⅰ为未知菌群,群Ⅱ为快生和中慢生菌,群Ⅲ为慢生菌群。依据16S rDNA PCR-RFLP分析建立的树状图,在69%的相似性水平上所有的供试菌株可以分为9个系统发育分支。分支Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ没有参比菌,数值分类中群Ⅰ的供试菌株基本上都处于这些分支。分支Ⅱ为Sinorhizobium-Mesorhizobium-Rhizobium,分支Ⅲ为Agrobacterium分支,分支Ⅳ为Bradyrhizobium分支。 展开更多
关键词 根瘤菌 数值分类 16s rdna pcr-rflp
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含羞草、山蚂蟥等几种豆科植物根瘤菌的数值分类及16S rDNA PCR-RFLP分析 被引量:1
12
作者 刘晓云 魏爽 +3 位作者 刘庆辉 王立江 郭振国 郅慧梅 《中国农学通报》 CSCD 2012年第15期135-141,共7页
为揭示云南省豆科植物根瘤菌的资源多样性,采用数值分类、16S rDNA PCR-RFLP和16S rDNA全序列分析技术对云南省8个地区含羞草、山蚂蝗等几种不同豆科植物分离的48株根瘤菌菌株进行了遗传和表型多样性研究。16S rDNA PCR产物经HinfⅠ、Ms... 为揭示云南省豆科植物根瘤菌的资源多样性,采用数值分类、16S rDNA PCR-RFLP和16S rDNA全序列分析技术对云南省8个地区含羞草、山蚂蝗等几种不同豆科植物分离的48株根瘤菌菌株进行了遗传和表型多样性研究。16S rDNA PCR产物经HinfⅠ、MspⅠ、RsaⅠ和HaeⅢ4种内切酶消化后产生22种遗传图谱类型;数据经MVSP3.0软件聚类后,所有供试菌株在70%的相似性水平上分为4个分支,经16S rDNA全序列分析,确定分支Ⅰ为伯克霍尔德属(Burkholderia)类群,含1株菌株;分支Ⅱ为贪铜菌属(Cupriavidus)类群,含5株菌株;分支Ⅳ为根瘤菌属(Rhizobium)类群,包括29株菌株;而分支Ⅲ没有和参比菌株聚在一起,经测序为狭长平胞属(Stenotrophomonas)类群。通过对菌株的抗生素抗性、耐盐性、生长温度范围、BTB产酸产碱反应以及对3-酮基乳糖利用情况共计28个表型性状测定,结果显示所有菌株耐盐性较强,多数菌株可耐受60℃的高温。实验表明,分离自云南省的这些菌株具有丰富的遗传和表型多样性。 展开更多
关键词 含羞草 山蚂蝗 根瘤菌 数值分类 16s rdna pcr-rflp分析
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西南菌种站20株酵母菌种基于26S rDNA D_1/D_2区序列分析研究 被引量:11
13
作者 张晓娟 王柱 +1 位作者 周光燕 宋萍 《四川食品与发酵》 2008年第3期1-4,共4页
利用26SrDNA基因D1/D2区序列分析法对西南菌种站保藏的20株酵母进行复核鉴定,通过序列比对分析及构建系统发育树,结果显示20株菌株与相关标准菌株的序列相似性在99%以上,表明26SrDNA基因D1/D2区序列分析方法能够应用于酿酒酵母、东方伊... 利用26SrDNA基因D1/D2区序列分析法对西南菌种站保藏的20株酵母进行复核鉴定,通过序列比对分析及构建系统发育树,结果显示20株菌株与相关标准菌株的序列相似性在99%以上,表明26SrDNA基因D1/D2区序列分析方法能够应用于酿酒酵母、东方伊萨酵母、拜尔结合酵母、杰丁毕赤酵母以及胶红酵母等菌种分子生物学鉴定。 展开更多
关键词 酵母 26s rdna D1/D2区 序列分析 系统发育树
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木本豆科植物根瘤菌16S rDNA的PCR-RFLP研究 被引量:3
14
作者 黄莉莉 张宇 +1 位作者 韩素芬 韩正敏 《林业科技开发》 2009年第4期69-72,共4页
为了研究华东地区木本豆科植物根瘤菌种质资源的遗传多样性,采用6种限制性内切酶对53株根瘤菌进行16S rDNA PCR-RFLP多态性分析,共产生35种类型的16S rDNA遗传图谱。聚类分析结果表明,在75%的相似水平上,所有供试菌株可以分为8个系统发... 为了研究华东地区木本豆科植物根瘤菌种质资源的遗传多样性,采用6种限制性内切酶对53株根瘤菌进行16S rDNA PCR-RFLP多态性分析,共产生35种类型的16S rDNA遗传图谱。聚类分析结果表明,在75%的相似水平上,所有供试菌株可以分为8个系统发育分支。其中,分支3由22个菌株组成,属于中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium);9个菌株组成分支6和7,属于快生根瘤菌属(Rhizobium);分支5包含7个菌株,属于慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium);其余19个菌株与已知菌株亲缘关系较远,可分为4个未知的系统发育分支,这4个新的分支最少有1个新的根瘤菌属存在。结果还表明木本植物根瘤菌存在着极丰富的遗传多样性。 展开更多
关键词 木本豆科植物 根瘤菌 遗传多样性 16s rdna pcr-rflp
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我国豇豆和绿豆根瘤菌的数值分类及16S rDNA PCR_RFLP研究 被引量:5
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作者 张勇法 王风芹 陈文新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期861-868,共8页
对分离自中国14个不同省(自治区)的79株豇豆和绿豆根瘤菌及12株参比菌株进行了唯一碳、氮源利用,抗生素抗性,抗逆性和酶活性等128个表型性状的测定,并用MINTS软件进行聚类分析。表型性状测定结果发现,所有菌株都有极其广泛的碳、... 对分离自中国14个不同省(自治区)的79株豇豆和绿豆根瘤菌及12株参比菌株进行了唯一碳、氮源利用,抗生素抗性,抗逆性和酶活性等128个表型性状的测定,并用MINTS软件进行聚类分析。表型性状测定结果发现,所有菌株都有极其广泛的碳、氮源利用谱,大多数菌株可在较宽的pH(pH5.0-11.0)值范围内生长,大部分菌株能在37℃高温条件下生长,个别菌株能耐受60℃高温较长时间(20-45min)的热激。聚类分析结果表明,全部供试菌株在63.5%的相似性水平上分为两大群:一个群为慢生菌群,另一群为快生和中慢生菌群;在79%的相似性水平上分为7个亚群。在数值分类的基础上,又将参比菌株增加到22株,对79株待测菌株进行了16S rDNA PCR-RFLP分析,16S rDNA PCR产物经Hae Ⅲ、HinfⅠ、MspⅠ和AluⅠ4种内切酶酶切共产生34种遗传图谱类型,经GelComparⅡ软件聚类后,在79%的相似性水平上也可划分为7个亚群,与数值分类的结果有很好的一致性。 展开更多
关键词 豇豆 绿豆 根瘤菌 数值分类 16s rdna pcr-rflp 多样性
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基于16S rDNA序列的Wolbachia的检测及分型 被引量:1
16
作者 曲哲 丛斌 +1 位作者 褚栋 董辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期582-587,共6页
Wolbachia是广泛分布于节肢动物体内的一类共生细菌。采用16S rDNA特异片段的PCR-RFLP方法对烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)不同生物型及米蛾Corcyra cephalonica(Stainton)共生菌Wolbachia进行了检测与分型分析。基于wsp基因对烟粉... Wolbachia是广泛分布于节肢动物体内的一类共生细菌。采用16S rDNA特异片段的PCR-RFLP方法对烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)不同生物型及米蛾Corcyra cephalonica(Stainton)共生菌Wolbachia进行了检测与分型分析。基于wsp基因对烟粉虱共生菌B组Wolbachia以及米蛾共生菌Wolbachia进行了系统树分析,并对相应的Wolbachia16S rDNA特异片段进行了克隆、测序以及序列比对。结果表明:16S rDNA的特异片段经NheⅠ酶切后RFLP图谱可有效检测与鉴别Wolbachia。烟粉虱共生菌Wolbachia的16S rDNA特异片段经VspⅠ酶切后可得到预期RFLP图谱,而米蛾共生菌B组Wolbachia(基于wsp序列分析为B组)则产生不同的RFLP图谱。序列分析表明,Nauru型烟粉虱体内B组Wolbachia的16S rDNA片段序列与已知B组Wolbachia对应序列(DQ278884)同源性为100%;米蛾体内B组Wolbachia16S rDNA特异片段有碱基变异,并存在于VspⅠ识别位点内,这是导致VspⅠ酶切后RFLP图谱不同的原因。结果提示,B组Wolbachia16S rDNA特异片段经VspⅠ酶切的RFLP图谱存在多态性。本研究结果可为今后Wolbachia的检测与分型提供借鉴。 展开更多
关键词 WOLBACHIA 16s rdna pcr-rflp RFLP图谱 烟粉虱 米蛾
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Analysis of the Human Oral Microbiome of Smokers and Non-Smokers Using PCR-RFLP and Ribotyping
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作者 Shreyasee Chakraborty Verneshia Persaud +2 位作者 Sonia Vanegas Gloryanne Gautier Nwadiuto Esiobu 《Advances in Microbiology》 2014年第10期681-691,共11页
Recent advances in the field of microbial and medical ecology emphasize the critical role played by oral bacteria in the delicate dynamic equilibrium of human health and disease, creating the need to define the bacter... Recent advances in the field of microbial and medical ecology emphasize the critical role played by oral bacteria in the delicate dynamic equilibrium of human health and disease, creating the need to define the bacterial communities associated with healthy and non-healthy conditions and to capture shifts in community structure germane to diagnosis. Employing PCR-RFLP of the 16S rDNA gene from metagenomes and plate-wash (cultured) bacteria of oral wash from 10 volunteers, this study evaluated the stability of oral bacteria in healthy subjects and documented community shifts in smokers. Sequence analysis of selected 16S gene amplicons cloned with the Gene Hunter PCR-Trap vector and pCR 4-TOPO cloning kits was conducted to determine the bacteria identity and diversity indices of the two groups. Ribopatterns generated by the restriction enzymes HaeIII and Sau3AI were significantly (p AluI using the GelCompare II software cluster analysis. A stable core of bacteria DNA fingerprint was detected in all healthy subjects, and remained unchanged over the study period of 3 months. Signature bands (1500 bp with HaeIII) in smokers and in non-smokers (800 bp and 700 bp with Sau3A1) were evidently suggesting the presence of potential biomarkers of healthy and non-healthy states. There was no significant difference in the DNA fingerprints of cultured and metagenomic extracts. The genera Xanthomonas, Streptococcus and phylum Candidatus occurred in large numbers in both groups, however, a major shift in composition with the dominance of gram-negative bacteria in smokers compared to healthy subjects was quite remarkable. Taxonomic diversity in smokers was quite high, including members of the genera Rothia, Synechococcus, Neisseria, Thiomargarita and Pyrobaculum. These data highlight the presence of a stable core microbiome amidst a wide diversity, identify a distinct smokers’ cluster and open the way for the search for potential biomarkers for specific diseases. 展开更多
关键词 ORAL MICROBIOME pcr-rflp 16s rdna sequence Restriction Enzymes
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金沙江干热河谷区胡枝子(Lespedeza Michx)根瘤菌多样性及其系统发育 被引量:9
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作者 彭贤超 张小平 +2 位作者 徐开未 黄昌学 K.Lindstrom 《生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期5469-5481,共13页
研究利用数值分类、BOXAIR-PCR指纹图谱、16SrDNA PCR-RFLP、16S rDNA和GSⅡ序列分析等方法,研究了分离自金沙江干热河谷区的86株胡枝子根瘤菌的多样性和系统发育,结果表明金沙江干热河谷区胡枝子根瘤菌蕴涵丰富的生物多样性。通过数值... 研究利用数值分类、BOXAIR-PCR指纹图谱、16SrDNA PCR-RFLP、16S rDNA和GSⅡ序列分析等方法,研究了分离自金沙江干热河谷区的86株胡枝子根瘤菌的多样性和系统发育,结果表明金沙江干热河谷区胡枝子根瘤菌蕴涵丰富的生物多样性。通过数值分类,供试未知菌株表现出极大的表型性状多样性,能耐高温(60℃)和低pH(4.0),在低温(10℃)或者高pH(9.0)条件下生长很差,耐盐性也很差。供试未知菌株的16S rDNA用HaeⅢ、MspⅠ、HinfⅠ和TaqⅠ酶切后具有16种遗传图谱类型,其中10株供试未知菌的16S rDNA遗传图谱类型不同于所选用的已知参比菌株。BOXAIR-PCR的分群结果分散,很多在16S rDNA PCR-RFLP中具有相同遗传类型的菌株也表现较大差异,表明了供试菌株在基因组水平上差异很大。序列分析结果表明,6株代表菌株分布于Rhizobium、Sinorhizobium、Mesorhizobium、Bradyrhizobium4个属,16S rDNA序列与GSⅡ序列分别构建的系统发育树在属水平上基本一致,但16S rDNA序列的同源性比GSⅡ高,6株代表菌株间16S rDNA序列的同源性在87.5%~99.5%之间,GSⅡ序列的同源性在79.4%~89.8%之间;而代表菌株与亲缘关系最近的参比菌株间的16S rDNA序列的同源性为99.9%~100%,GSⅡ的同源性为88.9%~99.6%。 展开更多
关键词 数值分类 BOXAIR-PCR 16s rdna pcr-rflp GsⅡ基因 序列分析
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应用PCR-RFLP技术分析橡胶林土壤真菌种群动态变化 被引量:7
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作者 宋风雅 梁鹏 +4 位作者 何其光 高青 宋洁 缪卫国 郑服丛 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期2469-2477,共9页
采用PCR-RFLP技术分析一年内不同深度橡胶林土壤真菌区系的变化。结果表明,随着时间和土壤深度的变化,真菌18S r DNA的PCR-RFLP图谱存在着一定的差异。相同时间不同取样深度的土壤样品酶切产生的强亮带略有差异,同时,随土壤深度的增加,... 采用PCR-RFLP技术分析一年内不同深度橡胶林土壤真菌区系的变化。结果表明,随着时间和土壤深度的变化,真菌18S r DNA的PCR-RFLP图谱存在着一定的差异。相同时间不同取样深度的土壤样品酶切产生的强亮带略有差异,同时,随土壤深度的增加,橡胶土样酶切条带相似性整体增大,说明自然状态下橡胶林土壤的真菌多样性受到土壤垂直分布的影响,优势真菌种群随土壤深度的变化略有差异。而对于不同时间相同取样深度的橡胶林土壤,土壤样品酶切后产生的强亮带有所变化,但3种取样深度下的变化趋势基本相同,1-12月份橡胶土样酶切条带相似性各不相同,表明在自然状态下,橡胶林土壤中真菌多样性会随着时间变化而变化。一些优势真菌类群和非优势真菌类群在不同时间会存在交替,可能和物候有着直接的联系。PCR-RFLP技术能准确反映土壤微生物的动态变化,为进一步研究橡胶林土壤微生物群落结构和分类,生物多样性和生态系统功能的影响提供基础资料。 展开更多
关键词 橡胶林 土壤 pcr-rflp分析 18s rdna
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PCR-RFLP技术分析沼气池厌氧活性污泥细菌的多样性 被引量:8
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作者 蒋建林 周权能 +2 位作者 车志群 邓珍琴 武波 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2008年第4期372-377,共6页
应用PCR-RFLP和rRNA分析法研究了户用沼气池厌氧活性污泥细菌的多样性。采用直接提取法提取了户用沼气池微生物宏基因组DNA,构建了细菌的16S rDNA克隆文库。随机挑取了144个准确含有16S rDNA的阳性克隆进行PCR-RFLP分析,聚类得到46个O... 应用PCR-RFLP和rRNA分析法研究了户用沼气池厌氧活性污泥细菌的多样性。采用直接提取法提取了户用沼气池微生物宏基因组DNA,构建了细菌的16S rDNA克隆文库。随机挑取了144个准确含有16S rDNA的阳性克隆进行PCR-RFLP分析,聚类得到46个OTUs(operational taxonomic units),其中3个OTUs是优势类群,分别占14%,10%和9%,21个OTUs只含有单个克隆。随机挑取了26个克隆进行测序,并构建了系统发育进化树。结果表明:农村户用沼气池中细菌种类较为丰富,占优势的类群分别为Firmicutes(28%)、Delta-proteobacteria(18%)和Bacteroidetes(17%),大多数16S rDNA序列与GenBank数据库中未培养细菌相似性最高(91%~99%),为进一步研究、利用沼气池能源提供了基础资料。 展开更多
关键词 沼气池 16s rdna pcr-rflp 细菌多样性
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