酿酒酵母26S rDNA D1/D2区域序列分析及其系统发育研究

利用26SrDNAD1/D2区序列分析法对中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)保藏的22株酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和1株威尔酵母(S.willianus)进行了复核鉴定,通过序列比对及构建系统发育树分析后,结果显示:21株菌株与原名称一致,与酿酒酵母CBS1171T序列相似性在99.0%以上;CICC1313原定名为威尔酵母,此次鉴定结果为酿酒酵母,与酿酒酵母CBS1171T序列相似性为99.8%;CICC1859与异常毕赤酵母(Pichiaanomala)CBS5759T相似性为100%,鉴定为异常毕赤酵母。进一步对酿酒酵母与酵母属内其他种之间的发育关系进行了分析,通过构建酵母属内各菌种模式株的26SrDNAD1/D2区系统发育树,发现酿酒酵母与属内其他菌种间差异均大于1%,表明26SrDNAD1/D2区域序列分析方法能够应用于酿酒酵母的分子生物学鉴定。

基于26S rDNAD1/D2区序列分析的15株白地霉分子分类学研究

采用26S rRNA基因D1/D2区系统发育分析的方法对CICC(中国工业微生物菌种保藏管理中心)保藏的15株白地霉(Geotrichum candidum)菌种进行复核鉴定。系统发育分析结果表明15株白地霉属于地霉属的成员,且形成两个系统发育分支,系统发育上最接近Galactomyces geotrichum NRRLY-17569T,与其同源性为96.3%～98.3%。15株白地霉26S rRNA基因D1/D2区序列显著不同于地霉属的模式种及其它种,可能代表地霉属的两个新种,但这一结论尚需进一步的实验去证实。

西南菌种站20株酵母菌种基于26S rDNA D_1/D_2区序列分析研究

利用26SrDNA基因D1/D2区序列分析法对西南菌种站保藏的20株酵母进行复核鉴定,通过序列比对分析及构建系统发育树,结果显示20株菌株与相关标准菌株的序列相似性在99%以上,表明26SrDNA基因D1/D2区序列分析方法能够应用于酿酒酵母、东方伊萨酵母、拜尔结合酵母、杰丁毕赤酵母以及胶红酵母等菌种分子生物学鉴定。

1号染色体扩增区MEF2D基因在肝细胞癌组织中的表达

目的探讨1号染色体扩增区基因MEF2D mRNA在正常肝组织、肝癌细胞系及肝细胞癌(HCC)与癌旁组织中的表达并探讨其意义。方法利用逆转录聚合酶链反应方法对正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中MEF2D mRNA的表达情况进行初步分析。结果MEF2D mRNA在正常肝组织、13个肝癌细胞系及40例HCC癌组织与癌旁组织中均为高表达,其表达阳性率分别为100.0%(2/2)、92.3%(12/13)、95.0%(38/40)和97.5%(39/40)。MEF2D在各组的表达阳性率与-βactin相类似,差异无统计意义,均为P>0.05。结论染色体扩增区域常常存潜在的癌基因,由于染色体具有不稳定性,1号染色体扩增区MEF2D基因非HCC发生的癌基因,MEF2D mRNA高表达与HCC发生、发展无相关性。

胃裸区清扫联合D2根治术治疗T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌的临床疗效

目的对胃裸区清扫联合D 2根治术治疗T1-3N0-2M0近端胃癌的临床疗效展开对比分析。方法选取62例T1-3N0-2M0近端胃癌患者分为治疗组和对照组(n=31),比较2组患者临床治疗效果。结果 2组患者临床治疗总有效率、复发率和3年生存率分别为87.10%、9.68%、58.06%和64.52%、32.26%、35.48%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组患者治疗后生活质量指数评分显著高于对照组患者和治疗前的,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在治疗T1-3N0-2M0近端胃癌临床上胃裸区清扫联合D 2根治术效果较为理想。

D2根治术联合胃裸区清扫治疗T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌临床效果分析

目的探究T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌采用胃裸区清扫联合D2根治术治疗的临床疗效。方法选取T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌患者50例,随机数字法分为2组,各25例。对照组患者均采用D2根治术治疗,观察组患者均采用胃裸区清扫联合D2根治术治疗,观察比较2组患者治疗效果。结果观察组患者3年生存率为76.0%,复发率为20.0%;对照组患者3年生存率为40.0%,复发率为36.0%,观察组均明显优于对照组(P<0.05)。结论 T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌采用胃裸区清扫联合D2根治术治疗,可有效提高患者3年生存率,延长患者生命,并降低患者复发率,临床疗效显著,应用价值高。

D2根治术联合胃裸区清扫治疗T1-3N0-2M0近端胃癌的疗效及对患者生存率的影响

目的探讨针对T1-3N0-2M0近端胃癌患者,临床治疗中采取D2根治术+胃裸区清扫的手术治疗方式对患者疾病的治疗效果。方法选取2017年2月至2018年5月本院收治的84例患者并随机分成两组,每组42例。对照组单纯实施D2根治术治疗,实验组采取D2根治术联合胃裸区清扫治疗,比较两组治疗效果及生存率。结果实验组治疗总有效率为88.10%,高于对照组的61.91%,差异具有统计学意义(P<0.05);与术后1个月比较,两组术后3、6个月生活质量评分均明显提高,且实验组高于对照组(P<0.05);实验组2年期生存率为92.86%,明显高于对照组的76.19%(P<0.05)。结论针对T1-3N0-2M0近端胃癌,采取D2根治术联合胃裸区清扫治疗效果显著,患者远期生存率高,值得临床推广应用。

T1-3N0-2M0近端胃癌采用胃裸区清扫联合D2根治术治疗的临床分析

目的:探讨T1-3N0-2M0近端胃癌患者的治疗过程中,应用胃裸区清扫联合D2根治术治疗的临床效果。方法:选取大邑县人民医院2013年6月-2014年8月收治的80例T1-3N0-2M0近端胃癌患者作为研究对象,随机分为观察组与对照组各40例。观察组应用胃裸区清扫联合D2根治术治疗,对照组仅应用D2根治术进行治疗,观察对比两组患者临床治疗效果。结果:观察组治疗总有效率为95.0%,对照组治疗总有效率为70.0%,治疗效果明显低于观察组,组间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:T1-3N0-2M0近端胃癌患者的治疗过程中,应用胃裸区清扫联合D2根治术治疗具有较好效果。

多巴胺D_2受体激动剂和拮抗剂对缺血后海马CA1区神经元凋亡的影响

目的 :研究多巴胺D2 受体激动剂和拮抗剂对沙土鼠前脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元凋亡的影响。方法 :采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断 5min缺血再灌注模型。 2 4只沙土鼠随机分为假手术组 (Sham )、缺血组 (I -R)、D2 受体激动剂组 (I -PER)及D2 受体拮抗剂组 (I -SPI)。于再灌注第 7d行开阔法行为学检查、组织病理学检查及TUNEL法检测海马CA1区凋亡锥体细胞数。结果 :5min前脑缺血再灌注 7d可引起沙土鼠海马CA1区约 95 %的锥体细胞凋亡。行为学结果显示I -R组鼠探索活动较Sham组明显活跃 (P <0 0 1) ) ,I -PER组鼠的探索活动较I -R组明显减弱 (P <0 0 1)。组织病理学结果显示I -PER组海马CA1区存活锥体细胞计数明显多于I -R组 (P <0 0 1)。TUNEL法检测发现 ,与Sham组相比 ,其余 3组海马CA1区凋亡细胞数均增多 (P <0 0 5 )。I -PER组海马CA1区凋亡细胞数显著低于I-R组 (P <0 0 5 )。结论 :D2 受体激动剂可显著抑制沙土鼠前脑缺血再灌注损伤海马CA1区神经元凋亡 ,提高存活细胞数 ,改善行为学障碍。

胃裸区清扫联合D2根治术治疗T1～3N0～2M0近端胃癌的临床分析

目的：分析采用胃裸区清扫联合D2根治术治疗T1～3N0～2M0近端胃癌的临床效果.方法：选取汝南县人民医院收治的68例T1～3N0～2M0胃癌患者,按入院接受治疗时间平均分为A、B两组,A组患者给予D2根治术,B组患者给予胃裸区清扫联合D2根治术治疗.对患者临床治疗效果进行对比.结果：A组治疗总有效率为67.6％,B组为88.2％,两组对比,B组治疗效果更佳,差异具有统计学意义（P＜0.05）.两组患者治疗期间均未出现明显的恶心、呕吐、腹胀等不良反应,差异无统计学意义（P＞0.05）.B组患者治疗后的Spitzer生活质量指标评分均高于A组,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论：胃裸区清扫联合D2根治术可有效提高T1～3N0～2M0近端胃癌患者治疗效果,具有极高的临床应用价值.

观察胃裸区清扫联合D_2根治术治疗T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌的疗效

目的分析T1-3N0-2M0近端胃癌治疗中应用胃裸区清扫联合D2根治术的临床疗效。方法选取T1-3N0-2M0近端胃癌患者54例,随机分为两组,对照组26例行D2根治术,观察组28例行胃裸区清扫联合D2根治术,对比两组患者治疗效果与3年生活率。结果观察组治疗总有效率显著高于对照组,3年生存率显著高于对照组,复发率显著低于对照组;两组患者在术前及术后近期时Spitzer评分差异不显著,在12个月及24个月时两组Spitzer评分均显著高于治疗前,且观察组Spitzer评分显著高于对照组。结论在T1-3N0-2M0近端胃癌治疗中胃裸区清扫联合D2根治术具有显著疗效,可大幅提高患者生活质量,值得在临床中推广。

胃裸区清扫联合D_2根治术治疗T_(1~3)N_(O^2)M_0近端胃癌患者的临床疗效分析

目的探讨胃裸区清扫和D2根治术联合治疗近端胃癌的临床效果。方法随机选取70例近端胃癌患作为研究对象,随机分成对照组和观察组研究。结果观察组的各疗效指标显著优于对照组(P<0.05)。结论使用胃裸区清扫和D2根治术联合治疗近端胃癌具有显著的临床效果。

胃裸区清扫联合D2根治术对T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌的治疗价值分析

目的分析胃裸区清扫联合D2根治术对T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌的治疗价值。方法 66例T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌患者根据术式不同分为对照组和观察组,各33例。对照组患者采用D2根治术治疗,观察组患者采用胃裸区清扫联合D2根治术治疗。观察两组临床疗效。结果观察组近期缓解率93.9%高于对照组的72.7%,差异有统计学意义(P<0.05);5年生存率57.6%高于对照组的27.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论胃裸区清扫联合D2根治术治疗T_(1-3)N_(0-2)M_0近端胃癌效果理想。

复发性外阴阴道念珠菌病菌种的26S rDNA序列分析

目的探讨基于核糖体基因26SrDNA D1/D2区序列分析法在临床酵母菌菌种鉴定中的应用。方法收集来源于复发性外阴阴道念珠菌病分泌物标本93株,PCR扩增其26SrDNA D1/D2区,对扩增产物进行序列测定和分析,并与基因库中的基因序列进行同源性比对。结果所有菌株均鉴定到种,同源性达99%和100%,同属于真菌双核亚界、子囊菌门、酵母菌科的3个属,89株为candida,3株为Kodamaea,1株为Pichia。其中candida中有7个种,38株candida glabrata,23株candida albicans,16株candida parapsolisis,9株candida metapdilosis,1株candida orthop-silisis,1株candida tropicalis,1株candida nivariensis;3株Kodamaea ohmeri;1株Pichia kudriavzevii。结论复发性外阴阴道念珠菌病的病原体主要为candida属的candida glabrata、candida albicans和candida parapsolisis,非candidaalbicans占75.27%是其特征;26SrDNA D1/D2区序列分析为临床酵母菌的分子水平鉴定提供了一种准确、可行的方法。

基于26S rRNA D1/D2区序列对不同时期大曲中酵母菌的分离与鉴定

利用大曲作为糖化发酵剂是中国传统白酒主要的工艺特点之一。大曲中的微生物组成十分丰富包括各种种类的霉菌、酵母以及细菌,这些复杂的微生物体系为白酒的发酵提供了必要的微生物、酶以及风味物质。酵母菌作为所有酒类发酵生产中必不可少的微生物,在大曲的生产过程中也起到了很重要的作用。为了探究大曲中功能微生物,本文对不同时期大曲中分离的酵母菌采用26S rRNA D1/D2区序列进行分析比对,共分离鉴定了260株酵母菌,分属于22个种。主要为Wickerhamomyces anomalus,Candida orthopsilosis,Meyerozyma guilliermondii,Pichia caribbica,Saccharomycopsis fibμLigera,Cryptococcus neoformans var.grubii,Clavispora lusitaniae,Saccharomyces cerevisiae等。对序列比对的结果进行了单链构像多样性(Single Strand Conformation Polymorphism,SSCP)分析,确定了它们的种间差异,并构建了M-L系统树。根据这些分离鉴定的结果初步探究出大曲生产过程中不同时期酵母菌的组成和变化规律。这些结果为进一步研究中国传统白酒的酿造微生物奠定了一定的基础。

甘肃河西走廊葡萄酒产区高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株筛选

以甘肃河西走廊葡萄酒产区成熟葡萄浆果自然发酵过程中分离得到的115株酵母菌株为出发菌株,采用对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物的平板初筛,摇瓶复筛,对高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株进行WL营养培养基和赖氨酸培养基初步分类以及26S r DNA D1/D2区序列分析。结果表明:6株酵母β-葡萄糖苷酶活性与商业酵母ICV-D254酶活性相似,酶活力可达(51.40±4.74)m U/m L,其中菌株QLFE、MQFEH-1、MQFSC-3、MQFEH-2和MQFSM-3为酿酒酵母属,菌株QLFE-4为梅奇酵母属,与分子鉴定结果一致。

新疆伊犁牧区发酵乳制品中酵母菌的分离和多样性分析

为保护新疆民族传统工艺制作的奶酪中经几千年驯化的优良酵母菌株,从新疆伊犁牧区少数民族家中采集样品20份,分离得到33株酵母菌,并对其进行生理生化鉴定、利用26S rDNA D1/D2区域序列分析对这些菌株进行了分类鉴定和多样性分析。共鉴定出4属5种,其中唐布拉牧区和那拉提牧区的优势菌株为发酵毕赤氏酵母(Pichia fermentans),托里县和布尔津县采集的样品中的优势菌种为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae);马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是奶酪样品中的共同菌株。

西藏拉萨市城关区市售水果酵母菌的分离与鉴定

开展酵母菌多样性研究,能够为酵母菌资源的开发与利用奠定基础。2015年4～7月,在拉萨市城关区水果市场购买12种水果,用捣碎法从水果表面及果肉分离酵母菌,结合经典分类法及26S r DNA D1/D2区域序列分析,对酵母菌菌株进行系统分类。酵母菌多样性指数的计算采用EXCEL数据处理软件按对应公式进行,采用SPSS 19.0软件统计分析不同水果酵母菌总丰度差异。结果显示:分离自拉萨市城关区12种市售水果的239株酵母菌归为隐球酵母属Cryptococcus、红酵母属Rhodotorula、德巴利酵母属Debaryomyces、有孢汉逊酵母属Hanseniaspora和锁掷酵母属Sporidiobolus等5个属10个种,其中浅黄隐球酵母Cryptococcus flavescens为优势种,其在供试水果中出现频率为100%,相对丰度约47%;不同水果酵母菌物种丰富度表明,杏和西瓜中酵母菌种类最多,其次为葡萄,柠檬和芒果则仅分离到一种;酵母菌总丰度差异性分析显示,哈密瓜中酵母菌数量最多,苹果中则最少;Shannon-Wiener多样性指数(H′)、Pielou均匀度指数(J′)及Simpson多样性指数(D)显示,杏、梨和葡萄中酵母菌多样性最丰富,柠檬和芒果中最少。研究显示供试水果酵母菌群落间存在一定差异。

我国代表地区须癣毛癣菌复合体的分子鉴定与分型研究

目的对我国代表地区的须癣毛癣菌菌株进行分子再鉴定和分型研究。方法选取我国南北方8个省市地区经表型鉴定的须癣毛癣菌菌株47株,通过再培养形态观察、生理试验;PCR扩增核糖体DNA(rDNA)的内转录间隔区(ITS)和核糖体大亚基(LSU)D1-D2区,测序后利用数据库进行序列比对,对须癣毛癣菌复合体进行再鉴定;PCR扩增rDNA非转录间隔区(NTS)的三个串联重复亚单位S0、S1和S2区,进行种内分型,并比较不同部位来源菌株型别的差异性。结果我国南北方8个省市地区47株须癣毛癣菌中3株鉴定为断发毛癣菌,6株鉴定为无性型苯海姆节皮菌,其余均鉴定为万博节皮菌中的亲人型趾间毛癣菌;三对不同引物扩增38株趾间型毛癣菌和2株苯海姆节皮菌NTS区,共产生28种特征性带型。带型和菌株来源及发生部位无相关性。结论我国分离自人类须癣毛癣菌复合体的主要组成菌种为趾间毛癣菌;ITS区结合LSU D1-D2区测序有助于鉴定须癣毛癣菌复合体至种水平;NTS区的三个串联重复亚单位所产生的特征性指纹图提供了一种快速、稳定的分子生物学种内分型方法,可应用于趾间毛癣菌感染的流行病学研究。