酿酒酵母26S rDNA D1/D2区域序列分析及其系统发育研究

利用26SrDNAD1/D2区序列分析法对中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)保藏的22株酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和1株威尔酵母(S.willianus)进行了复核鉴定,通过序列比对及构建系统发育树分析后,结果显示:21株菌株与原名称一致,与酿酒酵母CBS1171T序列相似性在99.0%以上;CICC1313原定名为威尔酵母,此次鉴定结果为酿酒酵母,与酿酒酵母CBS1171T序列相似性为99.8%;CICC1859与异常毕赤酵母(Pichiaanomala)CBS5759T相似性为100%,鉴定为异常毕赤酵母。进一步对酿酒酵母与酵母属内其他种之间的发育关系进行了分析,通过构建酵母属内各菌种模式株的26SrDNAD1/D2区系统发育树,发现酿酒酵母与属内其他菌种间差异均大于1%,表明26SrDNAD1/D2区域序列分析方法能够应用于酿酒酵母的分子生物学鉴定。

西南菌种站20株酵母菌种基于26S rDNA D_1/D_2区序列分析研究

利用26SrDNA基因D1/D2区序列分析法对西南菌种站保藏的20株酵母进行复核鉴定,通过序列比对分析及构建系统发育树,结果显示20株菌株与相关标准菌株的序列相似性在99%以上,表明26SrDNA基因D1/D2区序列分析方法能够应用于酿酒酵母、东方伊萨酵母、拜尔结合酵母、杰丁毕赤酵母以及胶红酵母等菌种分子生物学鉴定。

拉鲁湿地土壤理化因子与酵母菌多样性及产胞外酶活性相关性分析

采用稀释倒平板法从拉鲁湿地土壤中分离酵母菌,结合经典分类法及26S rDNA D1/D2区域序列分析,对获得的83株酵母菌菌株进行系统分类,并对土壤的基本理化因子进行了测定。结果显示,拉鲁湿地土壤酵母菌分属于隐球酵母属Cryptococcus、假丝酵母属Candida、原囊菌属Protomyces、红酵母属Rho-dotorula及Cystofilobasidium 5个属16个种,其中隐球酵母属Cryptococcus包括8个种。多样性指数比较结果表明,6号样点酵母菌多样性最丰富,9号样点最低。理化因子测定结果显示,不同样点所测的6种理化因子存在一定程度的差异,其中6号样点水分含量明显高于其他样点(P<0.05),3号样点铵态氮、速效磷以及速效钾含量最高(P<0.05),9号样点则最低(P<0.05);3、4、5、6号样点有机质含量明显高于其他几个样点(P<0.05)。酵母菌多样性与理化因子相关性分析结果表明,两者之间没有显著相关性,而有机质含量与酵母菌总丰度相关性系数较高。产不同胞外酶活性菌株比例与土壤理化因子间不呈现显著相关性,果胶酶活性菌株比例与水分呈现显著负相关性(P<0.05),速效磷与产脂肪酶活性菌株比例则呈现显著正相关性(P<0.05)。

酸马奶酒中一株产抑菌物质酵母菌的分离鉴定及系统发育分析

对分离自酸马奶酒中的一株产抑菌物质的酵母菌HJ-5进行分离鉴定及系统发育分析,以更准确地判定其属种。采用细胞形态、生理学特性及其26SrDNAD1/D2序列分析,结果表明,菌株HJ-5的细胞形态及生理学特性符合酵母属特征。通过26SrDNAD1/D2序列进行系统发育分析,被鉴定为Saccharomyces cerevisiae。

葡萄果粒表皮酵母菌多样性研究

从新疆、甘肃、陕西、宁夏、山东主要酿酒葡萄产区收集葡萄果粒并分离得到酵母258株,利用26S rDNA的D1/D2区序列分析并结合形态学、生理学特征对这些菌株进行了分类学研究,探讨了这些地区葡萄果粒表皮酵母的物种多样性及其分布。共鉴定出13属26种,其中优势属为汉逊酵母属Hanseniaspora(5种),假丝酵母属Candida(4种),毕赤酵母属Pichia(4种)和伊萨酵母属Issatchenkia(2种)。对分离自不同地域的同种内不同菌株进行了D1/D2序列分析比较,以探讨不同地理起源地酵母种内序列稳定性及其变异。

甘肃河西走廊葡萄酒产区高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株筛选

以甘肃河西走廊葡萄酒产区成熟葡萄浆果自然发酵过程中分离得到的115株酵母菌株为出发菌株,采用对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物的平板初筛,摇瓶复筛,对高产β-葡萄糖苷酶酵母菌株进行WL营养培养基和赖氨酸培养基初步分类以及26S r DNA D1/D2区序列分析。结果表明:6株酵母β-葡萄糖苷酶活性与商业酵母ICV-D254酶活性相似,酶活力可达(51.40±4.74)m U/m L,其中菌株QLFE、MQFEH-1、MQFSC-3、MQFEH-2和MQFSM-3为酿酒酵母属,菌株QLFE-4为梅奇酵母属,与分子鉴定结果一致。

几株酵母菌的分子系统学鉴定

通过对酵母菌5.8S核糖体RNA的ITS区域PCR扩增及限制性酶切片段多态性(RFLP)的图谱分析以和26S rDNA D1/D2区及5.8S-ITS区的序列分析,共鉴定13株分离自新疆鄯善地区的葡萄酒相关酵母菌。5.8S-ITS区的4种内切酶(HaeⅢ、Hin6Ⅰ、HinfⅠ、AluⅠ)的酶切分析产出4种特异性图谱。根据26S rDNA D1/D2区的序列分析和BLAST比对,将供试菌株鉴定为4个属4个种,分别为Saccharomyces cerevisiae、Candida zemplinina、Hanseniaspora uvarum、Pichia kluyveri var.kluyveri;而根据5.8S-ITS-RFLP及5.8S-ITS序列分析,将供试菌种鉴定为Saccharomyces cerevisiae、Candida zemplinina、Hanseniaspora uvarum、Issatchenkia terricola 4个属4个种。3种方法对供试的10个菌株的鉴定结果一致,而对另外3株的鉴定结果不同。

宁夏御马葡萄酒厂野生酵母菌株的分离筛选及分子鉴定

利用26S rDNA D1/D2区序列分析法,对分离自宁夏御马葡萄园的22株野生酵母菌进行了鉴定,同时构建了22株供试菌株与相关模式菌株的系统发育树,分析了供试菌株与已知酵母菌的亲缘关系及其分类地位。结果表明:供试菌株被鉴定为5属7种,分别是酿酒酵母、巴氏酵母、葡萄汁有孢汉生酵母、克鲁维毕赤酵母、美极梅奇酵母和核果梅奇酵母。

树莓酒自然发酵过程中酵母菌的分离与鉴定

目的:从树莓酒自然发酵过程中分离和鉴定酵母菌,目的是筛选适宜树莓酒发酵特点的专用酵母菌株。方法:采用传统微生物分离纯化技术与和26S r DNA D1/D2区序列分析相结合的方法,从树莓酒自然发酵的不同时期分离纯化酵母菌,结合菌落和细胞显微形态特征进行区分,随机选择代表菌株进行26S r DNA D1/D2区序列分析。结果:从树莓酒自然发酵过程中共分离出323株酵母菌,形态学初步鉴定为12类,分子鉴定为分属于5个属的7种酵母菌,分别为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、东方伊萨酵母(Issatchenkia terricola)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、覆膜孢酵母属亚种(Saccharomycopsis crataegensis)、叉开假丝酵母(Candida diversa)、东方拟无枝酸菌(Candida sorboxylosa)和假丝酵母属亚种(Candida stellimalicola)。结论:传统的微生物培养形态区分与分子鉴定技术结合,对筛选树莓酒自然发酵过程中的酵母菌准确有效。

两种分子标识在酵母分子鉴定中的比较

rDNA序列同源性分析是一种通用的酵母分子鉴定方法,26S rDNA D1/D2区域和rDNA内部转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)是rDNA序列同源性分析中最为常用的两种分子标识。同时使用这两种分子标识对20株分离自水果表面的酵母菌株进行分子鉴定,结果显示19株酵母分离物的鉴定结果相一致,两种分子标识序列在认定酵母种内和种间关系时都拥有足够的差异,能将大部分酵母菌株直接鉴定到种一级水平。

拉萨扎叶巴沟瑞香狼毒根际土壤细菌的分离与鉴定

开展瑞香狼毒(Stellera chamaejasma)根际土壤微生物的研究,能够为遏制草原上瑞香狼毒的肆虐提供参考资料。釆用稀释倒平板法从瑞香狼毒根际土壤中分离、纯化细菌;采用经典分类和26S r DNA D1/D2区域序列分析相结合的技术,对纯化的菌株进行鉴定。结果显示,分离自拉萨河谷(扎叶巴沟)的瑞香狼毒土壤中的细菌55株,归属为鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas melonis)、Pseudomonas sp.、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、日本假单胞菌(Pseudomonas japonica)、芽孢杆菌(Bacillus sp.),其中又以鞘氨醇单胞菌为优势种;扎叶巴沟瑞香狼毒根际土壤细菌的种群结构间存在一定差异。其中鞘氨醇单胞菌对瑞香狼毒的抑制作用值得进一步研究。

拉萨市蔡公堂乡大棚果蔬酵母菌的分离与鉴定

蔡公堂乡为拉萨市主要果蔬生产基地,开展该地区大棚果蔬酵母菌多样性的研究,能够为青藏高原酵母菌资源的开发与利用提供理论依据。采用研磨和稀释相结合的方法,从蔡公堂大棚果蔬中分离到140株酵母菌,结合经典分类法及26S rDNA D1/D2区域序列分析,对获得的酵母菌菌株进行分类。结果显示:供试酵母菌最终被归为13个属27个种,其中,Ustilentyloma graminis、Rhodotorula babjevae以及Rhodotorula diobovata这3个种是拉萨市蔡公堂乡大棚果蔬酵母菌优势种;2个属(3个种)的酵母菌为子囊菌纲,相对丰度为2.14%,11个属(24个种)的酵母菌为担子菌纲酵母菌,相对丰度高达97.86%,供试果蔬分离的酵母菌菌株绝大多数为担子菌纲酵母菌;酵母菌种数和属数最多的为红椒,青椒中分离到的酵母菌种类则最少;酵母菌总丰度数据显示,圣女果中酵母菌数量最多;多样性指数表明,玉米、苦瓜、红椒和草莓酵母菌较为丰富和多样。总体而言,拉萨市大棚果蔬酵母菌资源较为丰富,另外不同品种果蔬间酵母菌种群分布差异较大。

3株哈密瓜酒酵母的分子生物学鉴定

通过对从哈密瓜酒生产中分离获得的3株哈密瓜酒酵母进行发酵性能分析,发现其中1株发酵异常。采用26S rDNA D1/D2区序列分析法对酵母进行分子鉴定,经序列比对及构建系统发育树分析,得出1号和3号酵母为酿酒酵母,与酿酒酵母模式菌株序列相似性在99%以上;2号酵母鉴定为高里毕赤酵母,与高里毕赤酵母(Pichia guilliermondii)相似性为99%。进一步对3株酵母的同源序列与其他种之间的发育关系进行了分析,发现有很好的相似度,表明26S rDNA D1/D2区域序列分析方法能够应用于酿酒酵母的分子生物学鉴定,并可以作为生产中酵母污染检测的工具。

拉萨市蔡公堂乡大棚果蔬丝状真菌的分离与鉴定

目的拉萨市主要大棚果蔬生产基地位于蔡公堂乡,开展该地区大棚果蔬丝状真菌多样性的研究,一方面能够为拉萨果蔬的生物防治奠定基础,另一方面能够为构建青藏地区丝状真菌资源库提供理论依据。方法采用研磨法与稀释涂布平板法相结合,从蔡公堂乡大棚果蔬中分离培养丝状真菌,结合经典分类法与26S rDNA D1/D2区域序列分析法,对获得的丝状真菌菌株进行鉴定分类。结果结果显示,从拉萨市蔡公堂乡大棚11种供试果蔬中共分离到49株丝状真菌,经鉴定后归为5属12种。Aspergillus tubingensis、Fusarium sp.与Mucor circinelloides等6个种均为拉萨市蔡公堂乡大棚果蔬中丝状真菌的优势种,其中Mucor circinelloides相对丰度为22.45%.11种供试果蔬中,草莓中分离到的丝状真菌种数与属数最多,番茄、青椒与茄子等分离到的丝状真菌种数与属数最少;圣女果中丝状真菌总丰度最高,相对而言,茄子中丝状真菌总丰度最低;3种多样性指数数据显示,草莓中丝状真菌的多样性指数最高且分布最均匀。结论拉萨市蔡公堂乡果蔬大棚中不同品种果蔬间丝状真菌的群落组成与多样性差异较大。

内蒙古西部区酸粥中酵母菌的分离鉴定及优势菌分析

从内蒙古地区采集28份酸粥样品,从中分离出40株酵母菌,并对其进行了分子生物学鉴定和生物多样性分析。26S rDNA D1/D2区域 (600bp左右)碱基序列分析结果表明,酸粥中的酵母菌有Issatchenkia orientalis、Saccharomyces cerevisiae、Geotrichum sp.、Candida pararugosa、 Candida parapsilosis、Trichosporon asahii、Trichosporon coremiiforme、Clavispora lusitaniae和Candida tropicalis。经过分析,Issatchenkia orientalis(75%,Frequency percentage)为酸粥中的优势菌。

海南热带雨林腐木上酵母菌物种多样性研究

用含木糖为唯一碳源(培养基X)和含葡萄糖及7.6%乙醇(培养基E)的两种富集培养基分别从采自海南热带雨林的56和57份腐木样品中分离到酵母菌67和75株。依据26SrDNA D1/D2区域序列分析并结合形态学特征对这些菌株进行了分类学研究,探讨了该地区腐木上的酵母菌物种多样性及其分布。从分离的142株酵母菌中鉴定出14个属63个种,其中疑似新种25个,占总种数的近40%,说明在热带雨林腐木中尚存在大量酵母菌新分类群有待被发现。从用培养基X和E分离的酵母菌中分别鉴定出7属37种和11属33种,优势属均为假丝酵母属Candida Berkhout和毕赤酵母属Pichia Hansen,但种类组成基本不同。用培养基X富集分离的菌株以Candida quercitrusa S.A.Meyer & Phaff的地理分布最广,用培养基E富集分离的菌株以异常毕赤酵母Pichiaanomala (Hansen) Kurtzman、酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae Meyenex Hansen和亚膜毕赤酵母Pichia subpelliculosa Kurtzman分布最广泛。同一样品用两种不同富集培养基分离的菌株大多数属于不同的种,在对比的23份样品中,只从2份样品中分离到了同一个种的菌株。用培养基X和E分离的菌株分别属于可利用木糖和可耐受乙醇的酵母菌,用两种培养基同时分离到的菌株属于具备利用木糖和耐受高浓度乙醇两种能力的菌株。这些酵母菌在木质纤维素物质的生物乙醇转化技术中的应用价值值得进一步研究。